Durale Stimulation und periorbitale von Frey-Tests bei Mäusen als präklinisches Modell von Kopfschmerzen

Welche Ereignisse treten in den Hirnhäuten auf, die ohne Gewebeverletzungen zu Kopfschmerzen beitragen? Im Gegensatz zur früheren Verwendung von Duralstimulationsmodellen bei Ratten ermöglicht es die Verwendung des umfangreichen Katalogs genetisch veränderter Mäuse. Der primäre Kampf wäre es, den Schnittpunkt der lambdoidalen und sagittalen Nähte zu lokalisieren, indem der Schädel mit dem Injektor abgetastet wird.

Erstellen Sie zunächst die Maus-Infusers, indem Sie eine handelsübliche interne Kanüle und einen Infuser mit einer verschmolzenen Silica-Kunststoffkappe modifizieren, die verstellbar ist und in eine 28-Gauge-Führungskanüle eingesetzt wird. Verwenden Sie einen Bremssattel, um die Verschlusskappe aus Quarzglas am Infuser anzupassen, ohne den Infuser zu verbiegen. Stellen Sie den Infuser auf eine Länge von 6 Millimetern ein, gemessen von der Spitze des Infusers bis zum Rand der Silica-Kunststoffkappe.

Führen Sie Pilotinjektionen für andere Mausstämme durch und passen Sie die Länge an, um sie präzise in Dura Mater zu injizieren. Befestigen Sie dann das lange Ende des Infusers an Kunststoffschläuchen von acht Zoll oder mehr, um fünf Mikroliter Volumen zu halten. Setzen Sie das Rohr ein, während Sie die vollständige Abdeckung des Metallteils und der Oberseite des Kunststoffstopfens am Infuser sicherstellen, um zu verhindern, dass sich Luftblasen in der Leitung ansammeln.

Als nächstes füllen Sie die Mikrospritze und befestigen Sie das andere Ende des Schlauches an einer 10-Mikroliter-Glasmikrospritze, um eine dichte Abdichtung über dem Metallteil der Spritze zu gewährleisten. Füllen Sie dann die Spritze mit fünf Mikrolitern PBS oder synthetischer Interstitialflüssigkeit oder anderen Fahrzeugen Ihrer Wahl ab, um die Bildung von Luftblasen zu verhindern. Falls erforderlich, überfluten Sie die Leitung mit dem Fahrzeug, um vorgeformte Blasen zu zerstreuen.

Alternativ können Sie die Spritze vorfüllen und nach dem Anschließen die Flüssigkeit durch die angeschlossene Leitung drücken. Sobald die fahrzeuggefüllte Linie effizient arbeitet, laden Sie fünf Mikroliter der Lösung in die Hamilton-Spritze. Sobald die Maus vollständig betäubt ist, tragen Sie sterile ophthalmologische Salbe auf die Augen auf und rasieren Sie den Kopf des Tieres, dann desinfizieren Sie die Haut mit Povidonjod und Ethanol.

Stabilisieren Sie den Kopf des Tieres mit einer Hand und halten Sie den Infuser mit der mit Drogen beladenen Spritze in der anderen Hand. Sondieren, lokalisieren und überprüfen Sie dann mit einem Infuser sorgfältig die Verbindung der sagittalen und lambdoidalen Nähte am Schädel der Maus. Sobald sich die Naht befindet und der Infuser an Ort und Stelle ist, wackeln Sie die In-Infuser langsam und sanft hin und her, bis die In-Infuser durch die Haut dringt und bis zum Kunststoffstopfen in die Verbindung fällt, um das Einführen der gesamten 6-Millimeter-Infuser-Spitze in die Verbindung sicherzustellen.

Drücken Sie dann langsam den Kolben der Spritze, um die fünf Mikroliter Flüssigkeit in die Dura Mater auszustoßen. Am Testtag, nach der Akklimatisierung im Raum, entfernen Sie eine Maus zusammen mit der Tasse aus der jeweiligen Kammer. Halten Sie den Becher in der horizontalen Position für ein gleichmäßig verteiltes Körpergewicht, da die ungleiche Gewichtsverteilung die Reaktion der Tiere verändern oder verhindern kann.

Stellen Sie die Tasse mit der Maus auf ein saugfähiges Pad, das auf dem Tisch unter dem Testrack aufbewahrt wird. Legen Sie dann für periorbitale von-Frey-Tests das 07-Gramm-von-Frey-Filament in der Mitte des Gesichts zwischen die Augen und üben Sie genug Druck auf das Filament aus, um das von Frey-Haar zu einer C-förmigen Formation zu biegen. Halten Sie den Filamentkontakt für etwa drei bis fünf Sekunden aufrecht oder bis die Maus das Filament mit dem Kopf oder den Pfoten wegwischt.

Um der Dixon-Up-Down-Methode zu folgen, wenden Sie das nächste Filament mit geringerem Gewicht an, wenn die Maus auf das Filament reagiert, wenden Sie andernfalls ein Filament mit höherem Gewicht an. Das Verfahren wurde verwendet, um die Auswirkungen von duralem Prolaktin auf die mechanisch evozierte Überempfindlichkeit des Gesichts zu untersuchen. Die Ergebnisse der Studie zeigten signifikant reduzierte Gesichtsentzugsschwellen bei weiblichen ICR-Mäusen als Reaktion auf fünf Mikrogramm durales Prolaktin.

Eine zehnfach niedrigere Dosis von 5 Mikrogramm Prolaktin zeigte auch reduzierte Gesichtsentzugsschwellen, ähnlich einer hohen Dosis Prolaktin. Die Prolaktininjektionen erzeugten spontane schmerzbedingte Verhaltensweisen, die über Grimassen beurteilt wurden. Dural 5 Mikrogramm Prolaktin verursachten signifikante Grimassen bei weiblichen Mäusen und zeigten weiterhin eine klare Rolle für durales Prolaktin bei weiblichen migräneähnlichen Verhaltensweisen Verhaltenstests mit von Frey-Filamenten oder Gesichtsgrimassen, um festzustellen, ob der Reiz in Abwesenheit von Verletzungen eine Kopfschmerzreaktion verursacht.

Diese Technik kann nun verwendet werden, um entzündliche Mechanismen in den Hirnhäuten zu untersuchen, ohne sich um Vorbehalte kümmern zu müssen, die durch Craniotomien und die anschließende Entzündung verursacht werden.