Name: Gehirnorganoid-Erzeugung aus induzierten pluripotenten Stammzellen in hausgemachten Mini-Bioreaktoren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: Erfahren Sie die Gehirnorganoid-Erzeugung aus induzierten pluripotenten Stammzellen in hausgemachten Mini-Bioreaktoren. Diese Methode ermöglicht die großskalige Produktion hochwertiger Organoidmodelle für Neurowissenschaften.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde durch das Stipendium 075-15-2019-1669 des Ministeriums für Wissenschaft und Hochschulbildung der Russischen Föderation (RT-PCR-Analyse) und durch das Stipendium Nr. 19-15-00425 der Russischen Wissenschaftsstiftung (für alle anderen Arbeiten) unterstützt. Die Autoren danken auch Pavel Belikov für seine Hilfe bei der Videobearbeitung. Figuren in der Handschrift wurden mit BioRender.com geschaffen.

ANMERKUNG : Verwenden Sie sterile Technik während des gesamten Protokolls, mit Ausnahme der Schritte 1.2 und 1.3. Erwärmen Sie alle Kulturmedien und Lösungen auf 37 °C, bevor Sie sie auf Zellen oder Organoide auftragen. Kultivieren Sie Zellen ineinem CO 2-Inkubator bei 37 °C bei 5%CO2 bei 80% Luftfeuchtigkeit. Das Protokollschema ist in Abbildung 1 dargestellt.
1. Petrischalen in Mini-Bioreaktoren verwandeln
<ol><li>Schneiden Sie sterile 15-ml-Zentrifugenröhrchen in Ringe von 7-8 mm Höhe; Autoklavieren Sie die Ringe.</li>
	<li>Adhäsionsarme, unbehandelte oder mikrobiologische Petrischalen in Krümel aufbrechen. Lösen Sie etwa 1 g Kunststoffkrümel über Nacht in 10 ml Chloroform auf, um flüssigen Kunststoff herzustellen. ACHTUNG: Arbeiten Sie in einem Abzug.</li>
	<li>Überprüfen Sie, ob der resultierende flüssige Kunststoff viskos genug für das Pipettieren ist; sein Tropfen behält eine kugelförmige Form bei und breitet sich nicht auf der Oberfläche aus. Wenn es sehr flüssig ist, fügen Sie weitere Plastikkrümel hinzu. Wenn es dick ist, fügen Sie Chloroform hinzu.</li>
	<li>Machen Sie einen Kunststoffknopf in der Mitte einer sterilen 6-cm-Petrischale mit extrem niedriger Haftung. Es gibt zwei gleichermaßen geeignete Wege, wie unten beschrieben.<ol>
<li>Legen Sie den autoklavierten Kunststoffring auf die Mitte und lassen Sie den flüssigen Kunststoff auf die Innenseite des Rings fallen.</li>
		<li>Lassen Sie den flüssigen Kunststoff ohne Plastikring auf die Mitte der Petrischale fallen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Lassen Sie das Geschirr für 2-3 h in einer Laminar-Flow-Haube offen, bis sie vollständig getrocknet ist. Behandeln Sie das getrocknete Geschirr mit ultravioletter Strahlung für 15-20 min.</li>
</ol>2. Induktion der neuronalen Differenzierung von iPS-Zellen
<ol><li>Kultivieren Sie iPS-Zellen im Medium für pluripotente Stammzellen bis zu 75-90% Konfluenz in 35 mm Petrischalen, die mit einer Matrix aus extrazellulären Proteinen vorbeschichtet sind.</li>
	<li>Bereiten Sie Medium A-SR vor. Weitere Informationen finden Sie in Tabelle 1. </li>
	<li>Aspirieren Sie das Kultivierungsmedium und geben Sie am Tag 0 der Differenzierung 2 ml A-SR-Medium hinzu.</li>
	<li>Medium A vorbereiten (siehe Tabelle 2).</li>
	<li>Kultivieren Sie Zellen in Medium A für zwei Wochen von Tag 2-14, erfrischendes Medium in Petrischalen jeden zweiten Tag.</li>
</ol>3. Die Bildung von Sphäroiden aus neuroepithelialen Vorläuferzellen an Tag 14
<ol><li>Stellen Sie an Tag 14 Sphäroide aus neuroepithelialen Vorläuferzellen her, indem Sie eine spezielle 24-Well-Kulturplatte verwenden, die ungefähr 1.200 Mikrobohrungen in jeder Vertiefung enthält (Abbildung 2C). Befolgen Sie das unten angegebene Verfahren. HINWEIS: In diesem Differenzierungsstadium enthält eine 35 mm Petrischale üblicherweise 3 - 3,5 x 106 neuroepitheliale Vorläuferzellen. Somit reicht eine 35 mm Petrischale mit neuroepithelialen Vorläuferzellen für 3 - 4 Vertiefungen der 24-Well-Kulturplatte mit Mikrotiterlöchern.</li>
	<li>Bereiten Sie eine 24-Well-Kulturplatte mit Mikrobohrungen vor: Zu jeder Vertiefung 1 ml Medium A. Zentrifuge kurz bei 1.300 x g für 5 min in schwingendem Eimerrotor mit Plattenhalter. Kontrollieren Sie unter dem Mikroskop, dass es keine Blasen in Mikrotrossen gibt.</li>
	<li>Bereiten Sie das Medium B vor (Tabelle 3).</li>
	<li>Entfernen Sie das Medium aus der Petrischale mit neuroepithelialen Vorläuferzellen; Waschen Sie die Zellen mit 2 ml DMEM/F12. Für die Zellablösung behandeln Sie die Zellen mit 1,5 ml 0,48 mM EDTA-Lösung, die in PBS hergestellt wird. Kontrollieren Sie die Zellablösung unter dem Mikroskop.</li>
	<li>Ernten Sie die Zellen in einem 15-ml-Röhrchen. Fügen Sie 5 ml DMEM / F12 in das Röhrchen hinzu, um die Zellen zu waschen. Zentrifuge bei 200 x g für 5 min. Entfernen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen in 2 ml Medium B.</li>
	<li>Überprüfen Sie die Zellkonzentration und Lebensfähigkeit durch Trypan Blue Färbung und ein Hämozytometer. Berechnen Sie das Volumen der Suspension, die benötigt wird, um insgesamt 1 x10 6 lebensfähige Zellen zu enthalten.</li>
	<li>Die Zellsuspension mit 1 x 106 Zellen wird in jede Vertiefung einer 24-Well-Platte mit Mikrobohrungen überführt. Geben Sie Medium B bis zu 2 ml in jede Vertiefung, pipettieren Sie die Zellen mehrmals vorsichtig nach oben und unten und zentrifugieren Sie kurz 100 x g für 1 min, um die Zellen in den Mikrobohrungen einzufangen. HINWEIS: Die Anzahl der Zellen pro Vertiefung sollte 1 x 106nicht überschreiten. Andernfalls verschmelzen Sphäroide aus benachbarten Mikrobohrungen.</li>
	<li>Überprüfen Sie unter dem Mikroskop, ob die Zellen gleichmäßig in Mikrotrinnen verteilt sind. Pipettieren und Zentrifugieren wiederholen, wenn die Zellen ungleichmäßig verteilt sind.</li>
	<li>Inkubieren Sie die Platte über Nacht, damit sich die Zellen in Sphäroiden ansammeln können.</li>
</ol>4. Gewinnung und Kultivierung von Organoiden
<ol><li>Überprüfen Sie am nächsten Morgen (Tag 15) die Qualität der Sphäroide unter dem Mikroskop. Stellen Sie sicher, dass sie transparent und glatt sind, wenn sie gesund sind (Abbildung 2A, B). Sammeln Sie die Sphäroide vorsichtig aus jeder Vertiefung in einem 15-ml-Rohr, lassen Sie die Sphäroide 2-3 min lang durch schwerkraft ausfallen und entfernen Sie dann den Überstand.</li>
	<li>Fügen Sie zu den Sphäroide 2 ml der Matrix hinzu, die während der gleichen Zeit auf Eis aufgetaut wurde. Durch Pipettieren vorsichtig mischen und bei Raumtemperatur 30 min inkubieren.</li>
	<li>Um den Überschuss der Matrix zu waschen, fügen Sie dem Röhrchen 8 ml Medium B hinzu. Vorsichtig pipettieren, dann das Röhrchen für 1 min bei 100 x gzentrifugieren. HINWEIS: Überschreiten Sie nicht die Zeit und die Geschwindigkeit der Zentrifugation, um die irreversible Aggregation von Sphäroide zu vermeiden.</li>
	<li>Entfernen Sie den Überstand. In das Röhrchen 2 mL Medium B geben, vorsichtig pipettieren. Teilen Sie die Sphäroidsuspension auf zwei Mini-Bioreaktoren auf, die jeweils 4 ml Medium B enthalten. Legen Sie die Mini-Bioreaktoren in eine 15 cm lange Petrischale, um die Verdunstung von Wasser zu verhindern und eine Kontamination zu vermeiden.</li>
	<li>Legen Sie die Petrischale mit Mini-Bioreaktoren auf einen Orbitalschüttler. Kultivieren Sie die Organoide mit einer Rotationsrate von 70-75 U / min.</li>
	<li>Bereiten Sie an Tag 16 Medium C vor (Tabelle 4).</li>
	<li>Übertragen Sie die Organoide in eine 15-ml-Röhre. Lassen Sie sie für 5 min auf den Boden fallen, aspirieren Sie den Überstand, fügen Sie 5 ml Medium C hinzu. HINWEIS: Achten Sie darauf, die Sphäroide, die transparent und kaum sichtbar sind, nicht zu verlieren.</li>
	<li>Kultivieren Sie Sphäroide in Medium C für zwei Wochen und erfrischen Sie das Medium alle zwei Tage. Lassen Sie am Ende dieser zwei Wochen etwa 100 Sphäroide pro Mini-Bioreaktor für die anschließende Kultivierung. Gefrieren Sie überschüssige Sphäroide in einem gefrierenden Medium in flüssigem Stickstoff.</li>
	<li>Bereiten Sie am Tag 30 Medium D vor (Tabelle 5).</li>
	<li>Ändern Sie das Kultivierungsmedium in Medium D, das ein Reifemedium ist. Erfrischen Sie das Kultivierungsmedium alle 2-3 Tage für drei Wochen und verwenden Sie dann medium D ohne BDNF und GDNF.</li>
</ol>

<ol><li>Marchetto, M. C., Winner, B., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+stem+cells+in+neurodegenerative+and+neurodevelopmental+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Pluripotent stem cells in neurodegenerative and neurodevelopmental diseases.</a> Human Molecular Genetics. 19, 71-76 (2010).</li>
<li>Lee, C. T., Bendriem, R. M., Wu, W. W., Shen, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+brain+Organoids+derived+from+pluripotent+stem+cells%3A+promising+experimental+models+for+brain+development+and+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Science%22%5BJournal%5D)">3D brain Organoids derived from pluripotent stem cells: promising experimental models for brain development and neurodegenerative disorders.</a> Journal of Biomedical Science. 24 (1), 1-12 (2017).</li>
<li>Kadoshima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organization+of+axial+polarity%2C+inside+out+layer+pattern%2C+and+species-specific+progenitor+dynamics+in+human+ES+cell-derived+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Self-organization of axial polarity, inside out layer pattern, and species-specific progenitor dynamics in human ES cell-derived neocortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U.S.A. 110 (50), 20284(2013).</li>
<li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501 (7467), 373-379 (2013).</li>
<li>Xiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusion+of+regionally+specified+hPSC+derived+organoids+models+human+brain+development+and+interneuron+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Fusion of regionally specified hPSC derived organoids models human brain development and interneuron migration.</a> Cell Stem Cell. 21, 383-398 (2017).</li>
<li>Muguruma, K., Nishiyama, A., Kawakami, H., Hashimoto, K., Sasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organization+of+polarized+cerebellar+tissue+in+3D+culture+of+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Self-organization of polarized cerebellar tissue in 3D culture of human pluripotent stem cells.</a> Cell Reports. 10 (4), 537-550 (2015).</li>
<li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+region+specific+organoids+using+mini+bioreactors+for+modeling+ZIKV+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Brain region specific organoids using mini bioreactors for modeling ZIKV exposure.</a> Cell. 165 (5), 1238-1254 (2016).</li>
<li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+brain+region+specific+organoids+using+a+miniaturized+spinning+bioreactor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Generation of human brain region specific organoids using a miniaturized spinning bioreactor.</a> Nature Protocols. 13 (3), 565-580 (2018).</li>
<li>Jo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Midbrain+like+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells+contain+functional+dopaminergic+and+neuro+melanin+producing+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Midbrain like organoids from human pluripotent stem cells contain functional dopaminergic and neuro melanin producing neurons.</a> Cell Stem Cell. 19 (2), 248-257 (2016).</li>
<li>Sakaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+functional+hippocampal+neurons+from+self-organizing+human+embryonic+stem+cell+derived+dorsomedial+telencephalic+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communication%22%5BJournal%5D)">Generation of functional hippocampal neurons from self-organizing human embryonic stem cell derived dorsomedial telencephalic tissue.</a> Nature Communication. 6 (1), 8896(2015).</li>
<li>Di Lullo, E., Kriegstein, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+brain+organoids+to+investigate+neural+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The use of brain organoids to investigate neural development and disease.</a> Nature Reviews Neuroscience. 18 (10), 573-584 (2017).</li>
<li>Chen, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+stem+cell+platforms+for+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pluripotent stem cell platforms for drug discovery.</a> Trends in Molecular Medicine. 24 (9), 805-820 (2018).</li>
<li>Dang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zika+virus+depletes+neural+progenitors+in+human+cerebral+organoids+through+activation+of+the+innate+immune+receptor+TLR3%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Zika virus depletes neural progenitors in human cerebral organoids through activation of the innate immune receptor TLR3.</a> Cell Stem Cell. 19 (2), 258-265 (2016).</li>
<li>Tiwari, S. K., Wang, S., Smith, D., Carlin, A. F., Rana, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revealing+tissue-specific+SARS-CoV-2+infection+and+host+responses+using+human+stem+cell-derived+lung+and+cerebral+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Revealing tissue-specific SARS-CoV-2 infection and host responses using human stem cell-derived lung and cerebral organoids.</a> Stem Cell Reports. 16 (3), 437-445 (2021).</li>
<li>Ao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-stop+microfluidic+assembly+of+human+brain+organoids+to+model+prenatal+cannabis+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">One-stop microfluidic assembly of human brain organoids to model prenatal cannabis exposure.</a> Analytical Chemistry. 92 (6), 4630-4638 (2020).</li>
<li>Di Nardo, P., Parker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+standardization%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Development%22%5BJournal%5D)">Stem cell standardization.</a> Stem Cells Development. 20 (3), 375-377 (2011).</li>
<li>Jo, J., Xiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Midbrain+like+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells+contain+functional+dopaminergic+and+neuro+melanin+producing+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Midbrain like organoids from human pluripotent stem cells contain functional dopaminergic and neuro melanin producing neurons.</a> Cell Stem Cell. 19 (2), 248-257 (2016).</li>
<li>Matsui, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Six-month+cultured+cerebral+organoids+from+human+ES+cells+contain+matured+neural+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Six-month cultured cerebral organoids from human ES cells contain matured neural cells.</a> Neuroscience Letters. 670, 75-82 (2018).</li>
<li>Trujillo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+oscillatory+waves+emerging+from+cortical+organoids+model+early+human+brain+network+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Complex oscillatory waves emerging from cortical organoids model early human brain network development.</a> Cell Stem Cell. 25 (4), 558-569 (2019).</li>
<li>Eremeev, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necessity+Is+the+mother+of+invention%E2%80%9D+or+inexpensive%2C+reliable%2C+and+reproducible+protocol+for+generating+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry+%28Moscow%29%22%5BJournal%5D)">Necessity Is the mother of invention” or inexpensive, reliable, and reproducible protocol for generating organoids.</a> Biochemistry (Moscow). 84 (3), 321-328 (2019).</li>
<li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+brain+region%E2%80%93specific+organoids+using+a+miniaturized+spinning+bioreactor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Generation of human brain region–specific organoids using a miniaturized spinning bioreactor.</a> Nature Protocols. 13, 565-580 (2018).</li>
<li>Matsui, T. K., Tsuru, Y., Hasegawa, K., Kuwako, K. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+of+human+brain+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Vascularization of human brain organoids.</a> Stem Cells. 39 (8), 1017-1024 (2021).</li>
<li>Hall, G. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterned%2C+organoid-based+cartilaginous+implants+exhibit+zone+specific+functionality+forming+osteochondral-like+tissues+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Patterned, organoid-based cartilaginous implants exhibit zone specific functionality forming osteochondral-like tissues in vivo.</a> Biomaterials. 273, 120820(2021).</li>
<li>Zachos, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+enteroids%2Fcolonoids+and+intestinal+organoids+functionally+recapitulate+normal+intestinal+physiology+and+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Human enteroids/colonoids and intestinal organoids functionally recapitulate normal intestinal physiology and pathophysiology.</a> Journal of Biological Chemistry. 291, 3759-3766 (2016).</li>
<li>Eremeev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+organoids%E2%80%94challenges+to+establish+a+brain+prototype%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Cerebral organoids—challenges to establish a brain prototype.</a> Cells. 10 (7), 1790(2021).</li>
<li>Kadoshima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organization+of+axial+polarity%2C+inside-out+layer+pattern%2C+and+species-specific+progenitor+dynamics+in+human+ES+Cell-derived+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Self-organization of axial polarity, inside-out layer pattern, and species-specific progenitor dynamics in human ES Cell-derived neocortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U. S. A. 110, 20284-20289 (2013).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preiszugeben.

Das beschriebene Protokoll besteht aus zwei entscheidenden Schritten, die die Erzeugung hochwertiger Organoide einheitlicher Größe ermöglichen. Erstens wachsen die Organoide aus Sphäroiden, die in Zellzahl und Zellreife nahezu identisch sind. Zweitens bieten die selbstgebauten Bioreaktoren jedem Organoid eine einheitliche Umgebung, in der sich Organoide nicht drängen oder zusammenkleben.
Die Zellqualität und der Zustand der Zellreifung sind für die Durchführung des Protokolls unerlässlich. Es ...

Humane iPSC-abgeleitete Modelle werden häufig in den Studien zu neurologischen Entwicklungs- und neurodegenerativen Erkrankungen verwendet1. In den letzten zehn Jahren ergänzten 3D-Hirngewebemodelle, sogenannte Hirnorganoide, im Wesentlichen traditionelle 2D-neuronale Kulturen2. Die Organoide rekapitulieren bis zu einem gewissen Grad die 3D-Architektur des embryonalen Gehirns und ermöglichen eine präzisere Modellierung. Viele Protokolle werden für die Erzeugung von Organoiden veröffentlicht, die verschiedene Gehirnregionen repräsentieren: Großhirnrinde3,4,5, Kleinhirn6, Mittelhirn, Vorderhirn, Hypothalamus7,8,9und Hippocampus10. Es gab mehrere Beispiele für die Verwendung von Organoiden zur Untersuchung von Erkrankungen des menschlichen Nervensystems11. Außerdem wurden die Organoide in Arzneimittelentdeckungen12 implementiert und in Studien zu Infektionskrankheiten verwendet, einschließlich SARS-Cov-213,14.
Die Hirnorganoide können bis zu mehreren Millimetern Durchmesser erreichen. So kann die innere Zone des Organoids an Hypoxie oder Unterernährung leiden und schließlich nekrotisch werden. Daher umfassen viele Protokolle spezielle Bioreaktoren8,Shaker oder mikrofluidische Systeme15. Diese Geräte benötigen möglicherweise große Mengen teurer Zellkulturmedien. Auch die Kosten für solche Geräte sind in der Regel hoch. Einige Bioreaktoren bestehen aus vielen mechanischen Teilen, die es schwierig machen, sie für die Wiederverwendung zu sterilisieren.
Die meisten Protokolle leiden unter dem "Batch-Effekt"16, der eine signifikante Variabilität zwischen den Organoiden erzeugt, die aus den identischen iPS-Zellen gewonnen werden. Diese Variabilität behindert Drogentests oder präklinische Studien, die Einheitlichkeit erfordern. Die hohe Ausbeute an Organoiden, die ausreicht, um Organoide von einheitlicher Größe auszuwählen, kann dieses Problem teilweise lösen.
Der Zeitfaktor ist ebenfalls ein erhebliches Problem. Matsui et al. (2018) zeigten, dass Gehirnorganoide mindestens sechs Monate benötigen, um die Reife zu erreichen17. Trujillo et al. (2019) zeigten auch, dass elektrophysiologische Aktivität in Organoiden erst nach sechsMonaten der Kultivierung auftrat18. Aufgrund der langen Organoidreifungszeit starten die Forscher oft eine neue Differenzierung, bevor sie die vorherige abschließen. Mehrere parallele Differenzierungsprozesse erfordern zusätzliche Kosten, Ausrüstung und Laborfläche.
Wir haben kürzlich einen Mini-Bioreaktor entwickelt, der hauptsächlich die oben genannten Problemelöst 19. Dieser hausgemachte Bioreaktor besteht aus einer extrem niedrigen Haftung oder einer unbehandelten Petrischale mit einem Kunststoffknopf in der Mitte. Dieser Kunststoffknopf verhindert das Überfüllen von Organoiden und deren Verklebung in der Mitte der Petrischale, die durch die Rotation des Shakers verursacht wird. Dieser Artikel beschreibt, wie dieser kostengünstige und einfache hausgemachte Mini-Bioreaktor die Erzeugung hochwertiger Gehirnorganoide in großen Mengen ermöglicht.

<table><tbody><tr><td>Advanced DMEM/F-12</td><td>Gibco</td><td>12634010</td><td>DMEM/F-12</td></tr><tr><td>AggreWell400</td><td>STEMCELL Technologies Inc</td><td>34425</td><td>24-Well-Kulturplatte mit Mikrowells</td></tr><tr><td>B-27 Supplement</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>Neuronales Supplement B</td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td>200 mM L-Alanyl-L-Glutamin</td></tr><tr><td>Humanes BDNF</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-285</td><td></td></tr><tr><td>FGF-2</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-839</td><td></td></tr><tr><td>GDNF</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-290</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut Serumersatz</td><td>Gibco</td><td>10828028</td><td>Serumersatz</td></tr><tr><td>mTESR1</td><td>STEMCELL Technologies Inc</td><td>85850</td><td>Pliripotentes Stammzellmedium</td></tr><tr><td>N2 Supplement</td><td>Gibco</td><td></td><td></td>17502001</tr><tr><td>Neurobasales Medium</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>Basalmedium zur Erhaltung neuronaler Zellen</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin Lösung</td><td>Gibco</td><td>15140130</td><td></td></tr><tr><td>Plasmocin</td><td>InvivoGen</td><td>ant-mpt-1</td><td>Antimikrobielle Mittel</td></tr><tr><td>Purmorphamin</td><td>EMD Millipore</td><td>540220</td><td></td></tr><tr><td>StemMACS Y27632</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-538</td><td>Y27632</td></tr><tr><td>StielMACS Dorsomorphin</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-466</td><td>Dorsomorphin</td></tr><tr><td>Stiel MACS LDN-193189</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-540</td><td>LDN-193189</td></tr><tr><td>Stiel MACS SB431542</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-543</td><td>SB431542</td></tr><tr><td>Trypanblau Lösung</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Versen Lösung</td><td>Gibco</td><td>15040066</td><td>0,48 mM EDTA in PBS</td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol</td><td>Gibco</td><td>31350010</td><td></td></tr></tbody></table>

gehirnorganoid-erzeugung aus induzierten pluripotenten stammzellen in hausgemachten mini-bioreaktoren

Brain Organoid Generation from Induced Pluripotent Stem Cells in Home-Made Mini Bioreactors

Das iPSC-abgeleitete Gehirnorganoid ist eine vielversprechende Technologie für die In-vitro-Modellierung der Pathologien des Nervensystems und das Drogenscreening. Diese Technologie ist in letzter Zeit entstanden. Es steckt noch in den Kinderschuhen und hat einige noch ungelöste Einschränkungen. Die derzeitigen Protokolle erlauben es nicht, Organoide konsistent genug für die Entdeckung von Medikamenten und präklinische Studien zu erhalten. Die Reifung von Organoiden kann bis zu einem Jahr dauern, was die Forscher dazu veranlasst, mehrere Differenzierungsprozesse gleichzeitig zu starten. Es verursacht zusätzliche Kosten für das Labor in Bezug auf Platz und Ausstattung. Darüber hinaus haben Hirnorganoide oft eine nekrotische Zone im Zentrum, die an Nährstoff- und Sauerstoffmangel leidet. Daher verwenden die meisten aktuellen Protokolle ein zirkulierendes System für Kulturmedium, um die Ernährung zu verbessern.
Mittlerweile gibt es keine kostengünstigen dynamischen Systeme oder Bioreaktoren für die Organoidkultivierung. Dieses Papier beschreibt ein Protokoll zur Herstellung von Gehirnorganoiden in kompakten und kostengünstigen hausgemachten Mini-Bioreaktoren. Dieses Protokoll ermöglicht die Gewinnung hochwertiger Organoide in großen Mengen.

Das Protokollschema ist in Abbildung 1 dargestellt. Das Protokoll umfasste fünf Medien, in denen sich iPS-Zellen während mindestens eines Monats in Gehirnorganoide differenzierten. Die Differenzierung wurde gestartet, dann erreichten iPS-Zellen den 75-90%igen Zusammenfluss (Abbildung 2A,B). Die ersten Anzeichen einer Differenzierung in Richtung Neuronen wurden an den Tagen 10-11 der iPSC-Kultivierung in Medium A beobachtet, als zellen begannen, ...

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Erzeugung von Hirnorganoiden aus humanen induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS-Zellen). Um Gehirnorganoide in großen Mengen und von hoher Qualität zu erhalten, verwenden wir hausgemachte Mini-Bioreaktoren.

Gehirnorganoid-Erzeugung aus induzierten pluripotenten Stammzellen in hausgemachten Mini-Bioreaktoren

The iPSC-derived brain organoid is a promising technology for in vitro modeling the pathologies of the nervous system and drug screening. This technology ...

Bis heute sind die zerebralen Organoide, die von pluripotenten Stammzellen unterschieden werden, ein vitro 3D-Modell, das dem nativen menschlichen Hirngewebe am nächsten kommt. Darüber hinaus eignen sich zerebrale Organoide gleichermaßen für die Modellierung verschiedener Pathologien des zentralen Nervensystems, die Untersuchung pharmakologisch wirksamer Substanzen und auch für den Einsatz in der regenerativen Medizin. Mittlerweile befindet sich diese Technologie noch im Anfangsstadium der Entwicklung.Das Protokoll kann in zwei Gruppen unterteilt werden, abhängig von der Methode der Gewinnung von Aggregaten und der weiteren Kultivierung mit Differenzierung. Die erste umfasst Protokolle und Differenzierungsschemata, die sich in der Kultivierungszeit unterscheiden, und Differenzierungsinduktoren mit anschließender Reifung des Organoids im Shaker in speziellen Geräten mit geringer Haftung wie Marktröhren oder Platten. Eine weitere Gruppe umfasst die Verwendung eines speziellen Bioreaktors.Die Analyse verschiedener Protokolle hat gezeigt, dass Organoide unter Bedingungen mit zirkulierendem Nährmedium kultiviert werden sollten. Das Fehlen einfacher und kostengünstiger Systeme zur Gewinnung von Organoiden mit einer Standardgröße und -morphologie erfordert jedoch die Entwicklung solcher Vorrichtungen zur Skalierung des Prozesses. In dieser Arbeit beschreiben wir unsere Methode zur Gewinnung und Prüfung einfacher und kostengünstiger Mini-Bioreaktoren, die es ermöglichen, große Mengen hochwertiger Organoide zu erhalten.Schneiden Sie die sterilen 15 Milliliter Zentrifugenröhrchen in die Ringe, 7 oder 8 Millimeter hoch. Autoklavieren Sie die Ringe. Brechen Sie niedrige Aggregationen auf behandelten oder mikrobiologischen Petrischalen in Krümel auf.Lösen Sie etwa 1 Gramm Kunststoffkrümel über Nacht in 10 Milliliter Chloroform auf, um einen flüssigen Kunststoff herzustellen. Machen Sie einen Kunststoffknopf in der Mitte einer sterilen, ultra-niedrigen Haftung 6 Zentimeter Petrischale. Es gibt zwei gleichermaßen geeignete Wege.Die erste, legen Sie den Autoklaven in einen Kunststoffring auf eine Mitte und tragen Sie halbe Milliliter flüssigen Kunststoffs auf die Innenseite des Rings auf. Die zweite, ohne Plastikringe, lässt halbe Milliliter flüssigen Kunststoffs auf die Mitte der Petrischale fallen. Lassen Sie das Geschirr für 2 oder 3 Stunden in einer Laminar-Flow-Haube bis zur vollständigen Trockenheit offen.Kultivieren Sie induzierte pluripotente Stammzellen im Medium für pluripotente Stammzellen, bis zu 75 oder 90% Konfluenz in den 35 Millimeter Petrischalen, vorbeschichtet mit einer Matrix, die in kaltem Dulbecco Modified Eagle Medium und Fisher-12 Medium gelöst ist. Bereiten Sie Medium A plus Serumersatz vor. Kultivieren Sie induzierte pluripotente Stammzellen für 1 Tag im Medium mit Serumersatz.Wechseln Sie das Medium für pluripotente Stammzellen am Tag Null der Differenzierung in ein Serumersatzmedium. Bereiten Sie Medium A vor.Ändern Sie das Medium am Tag 2 der Differenzierung in Medium A. Kultivieren Sie Zellen in Medium A für 2 Wochen, erfrischendes Medium in Petrischalen alle 2 Tage.Beginnen Sie am Tag 14 mit der Bildung von Sphäroiden unter Verwendung einer speziellen 24-Well-Kulturplatte, die in jedem Bohrloch etwa 1.200 Mikrobohrungen enthält. Bereiten Sie eine 24-Well-Kulturplatte mit Mikrotiterlöchern vor. Zu jeder Vertiefung 1 Milliliter Medium A geben, kurz bei 1,300g für 5 Minuten in einem schaukelbaren Eimerrotor mit Plattenhalter zentrifugieren.Kontrollieren Sie unter dem Mikroskop, dass es keine Blasen in Mikrotrossen gibt. Bereiten Sie das Medium B vor.Entfernen Sie das Medium aus der Petrischale. Für die Zellablösung behandeln Sie die Zellen mit 1,5 Milliliter EDTA-Lösung, die auf PBS hergestellt wird.Kontrollieren Sie die Zellablösung unter dem Mikroskop. Ernten Sie die Zelle in ein 15-Milliliter-Röhrchen. Fügen Sie 5 Milliliter gemischtes Dulbecco- und Fisher-Medium in das Röhrchen in Richtung der Zellen hinzu.Zentrifugiere bei 200g für 5 Minuten. Entfernen Sie den Überstand und suspendieren Sie die Zellen in 2 Millilitern Medium B.Übertragen Sie die Zellsuspension mit 1 Milliarde Zellen in jede Vertiefung einer 24-Well-Platte mit Mikrobohrungen. Zellen mehrmals vorsichtig nach oben und unten pipettieren und 100 g für 1 Minute kurz zentrifugieren, um die Zelle in Mikrotiterlöchern einzufangen.Kontrollieren Sie unter dem Mikroskop, dass die Zellen gleichmäßig in Mikrotrinnen verteilt sind. Inkubieren Sie die Platte über Nacht für die Zellaggregation in Sphäroide. Überprüfen Sie am nächsten Morgen, Tag 15, unter den Mikroskopen die Qualität der Sphäroide, die transparent und glatt sind, wenn sie gesund sind.Sammeln Sie die Sphäroide vorsichtig aus jeder Vertiefung in einem 15-Milliliter-Rohr, lassen Sie die Sphäroide 2 und 3 Minuten lang durch schwerkraft ausfallen und entfernen Sie dann den Überstand. Zu den Sphäroide werden 2 Milliliter der Matrix, aufgetaut und ex tempore auf Eis, gegeben. Durch Pipettieren vorsichtig mischen und bei Raumtemperatur 30 Minuten inkubieren.Um den Überschuss der Matrix zu waschen, fügen Sie dem Röhrchen 8 Milliliter Medium B.Pipette vorsichtig hinzu und zentrifugieren Sie das Röhrchen dann für 1 Minute bei 100 g. Entfernen Sie den Überstand. In das Röhrchen 20 Milliliter Medium B geben, vorsichtig pipettieren und dann die Sphäroidesuspension zwischen Mini-Bioreaktoren aufteilen.Dann legen Sie die Mini-Bioreaktoren in eine 15 Zentimeter große Petrischale, die die Verdunstung von Wasser und Verunreinigungen verhindert. Legen Sie die Petrischale mit Mini-Bioreaktoren auf einen Orbitalschüttler. Kultivieren Sie die Organoide mit einer Rotationsrate von 70, 75 U / min.Bereiten Sie am Tag 16 medium C vor.Transfer Organoid in 50 Milliliter Röhrchen. Lassen Sie sie für 5 Minuten auf den Boden fallen. Aspirieren Sie den Überstand und fügen Sie 5 Milliliter des Mediums C hinzu.Verbinden Sie die Organoide in den Mini-Bioreaktoren.Kultivieren Sie Sphäroide in Medium C für 2 Wochen und erfrischen Sie das Medium alle 2 Tage. Wählen Sie während dieser 2 Wochen etwa 100 Sphäroide pro Mini-Bioreaktor für die folgende Kultivierung aus. Bereiten Sie am Tag 30 das Medium D vor.Wechseln Sie das Kultivierungsmedium in das Medium D, das ein Reifemedium ist.Kultivierungsmedium alle 2 oder 3 Tage für 3 Wochen auffrischen. Verwenden Sie dann das medium D gelöst in F und GDNF. Nach 1 Monat aufeinanderfolgender Kultivierung in Medium A und B werden Organoide erhalten, die in Größe und Morphologie standardisiert sind.Wenn es wächst, müssen sie das Medium häufiger wechseln, bis zu 4 Mal pro Woche erhöht sich auch. Nach 2 Monaten Kultivierung erreichen sie einen Durchmesser von 4 und 5 Millimetern. Und nach einem weiteren Monat 5 und 6 Millimeter und das Wachstum hört auf.Die Abbildung zeigt das Aussehen von Organoidenzym, klare Abschnitte, die mit Hämatoxylin und Eosin gemalt sind. Die immunhistochemische Analyse für 1 Monat zeigt das Vorhandensein von SOX2-positiven Clustern von Vorläuferzellen, einschließlich des zentralen Teils. In der Peripherie der Organoide, Gliafibrillär saures Protein, Mikrotubuli-assoziiertes Protein 2 und Thiazin Hydrolase positiv.Zellen sind konzentriert, was der reifen Form von Neuronen entspricht. In einigen Fällen bilden sich im zentralen Teil Cluster von Weißen auf nekrotischem Bereich. Dies zeigt die Einschränkung dieses Protokolls für die Gewinnung größerer Organoide an.Höchstwahrscheinlich ist der begrenzende Faktor des Wachstums die Diffusionsrate von Nährstoffen und Sauerstoff. Die verschiedenen Medien und Zelltypen von Sphäroide und das Testen unseres Systems auf einige Arten von Organoiden. Viel Gehirn und Netzhaut, kombinierte Organoide aus Leberkarzinomzellen und mesenchymalen Stammzellen, kombinierte Organoide aus Kapitalexplosions-mesenchymalen Stammrufen und die hämatopoetische Stammzellen Differenzierung von induzierten pluripotenten Stammzellen und Darmorganoiden.War es variabel in der anfänglichen Zusammensetzung der Zellen? Differenzierungsfaktoren, Kultur und Medium, extrazelluläre Matrix und möglicherweise auch die Zusammensetzung des Gasgemisches, die Geschwindigkeit der Plattformrotation und andere Parameter. Es wird möglich sein, Organoide mit der gleichen Form, Größe oder dem gleichen Morphologiemodell in verschiedenen Organen und Geweben zu erhalten.Die Verwendung von Mini-Bioreaktoren, die in dieser Arbeit vorgeschlagen wurden.

brain-organoid-generation-from-induced-pluripotent-stem-cells-home

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Das Video demonstriert eine Methode zur Erzeugung menschlicher Gehirnorganoide aus induzierten pluripotenten Stammzellen. Es wird gezeigt, wie die Neurosphäre eine neuroektodermale Schicht bildet, die die Bildung anderer Keimblätter unterdrückt. Die Neurosphären sind in eine 3D-Gelmatrix eingebettet und bilden neuroepitheliale Knospen. Wenn diese neuroepithelialen Knospen mit Organoidmedien inkubiert werden, differenzieren sie sich in spezifische Hirnregionen, was zur Bildung reifer...

Eine In-vitro-Methode zur Erzeugung von Organoiden des menschlichen Gehirns

Dieses Video zeigt einen Assay zur Erzeugung von zerebralen Organoiden aus induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs). Humane iPSCs werden dazu angeregt, Embryoidkörper (EBs) zu bilden. Die EBs werden unter Verwendung eines Induktionsmediums über einem Polymergerüst kultiviert, wodurch die Differenzierung in neurale Stammzellen, Vorläuferzellen und unreife Neuronen gefördert wird. Schließlich werden die EBs in eine Matrix eingebettet und in ein Erhaltungsmedium für die Bildung von zerebralen...

Generierung von induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten zerebralen Organoiden

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Erzeugung reifer Kleinhirn-Organoide aus induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) unter Verwendung eines Einweg-3D-Bioreaktors. Der Bioreaktor erleichtert die Bildung von iPSC-Aggregaten, die dann mit einer Reihe von Nährmedien behandelt werden, die mit Wachstumsfaktoren und Chemokinen angereichert sind, die die Differenzierung der iPSC-Aggregate in reife Kleinhirnorganoide induzieren. Anschließend werden die Organoide geerntet und für die weitere...

Erzeugung reifer Kleinhirn-Organoide aus induzierten pluripotenten Stammzellen mit Hilfe von Einweg-Bioreaktoren

Zerebrale Organellen repräsentieren eine neue Modellsystem, frühe menschliche Gehirn Entwicklung in Vitrozu untersuchen. Dieser Artikel enthält die detaillierte Methodik um homogene dorsalen Vorderhirn-Typ Organellen aus menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen einschließlich kritische Charakterisierung und Validierung Schritte effizient zu generieren.

Generation von standardisierten und reproduzierbaren Vorderhirn-Typ zerebralen Organellen aus menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen

Dieses Protokoll wurde als Mittel zur Herstellung von Gehirnorganoiden in einer vereinfachten, kostengünstigen Weise ohne exogene Wachstumsfaktoren oder Kellermembranmatrix unter Beibehaltung der Vielfalt der Gehirnzelltypen und vieler Merkmale der zellulären Organisation erzeugt.

Eine statische selbstgesteuerte Methode zur Generierung von Hirnorganoiden aus menschlichen embryonalen Stammzellen

Dieses Protokoll beschreibt ein dynamisches Kultursystem zur Herstellung kontrollierter Größenaggregate menschlicher pluripotenter Stammzellen und zur weiteren Stimulierung der Differenzierung in Kleinhirnorganoiden unter chemisch definierten und feederfreien Bedingungen mit einem Einweg-Bioreaktor.

Skalierbare Generierung von reifen Zerebellar-Organoiden aus humanen pluripotenten Stammzellen und Charakterisierung durch Immunostainierung

Dieses Protokoll ermöglicht die Differenzierung menschlicher pluripotenter Zellen in Darmorganoide. Das Protokoll ahmt die normale menschliche Entwicklung nach, indem es Zellen in eine Population von definitivem Endoderm, Hinterdarm-Endoderm und dann Darmepithel differenziert. Dadurch eignet sich das Protokoll sowohl für die Untersuchung der Darmentwicklung als auch für Anwendungen zur Modellierung von Krankheiten.

Generierung von hiPSC-abgeleiteten Darmorganoiden für Entwicklungs- und Krankheitsmodellierungsanwendungen

Wir präsentieren detaillierte Protokolle für die Erzeugung und Charakterisierung von 2D- und 3D-Modellen für humane induzierte pluripotente Stammzellen (hIPSC) der neokortikalen Entwicklung sowie ergänzende Methoden, die eine qualitative und quantitative Analyse der primären Cilium (PC) -Biogenese und -Funktion ermöglichen.

2D- und 3D-humaninduzierte pluripotente Stammzell-basierte Modelle zur Sezierung der primären Ciliumbeteiligung während der neokortikalen Entwicklung

Hier werden detaillierte Methoden zur Erzeugung, Erhaltung und Charakterisierung von humanen pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Dünndarm- und Dickdarm-Organoiden beschrieben. Diese Methoden wurden entwickelt, um die Reproduzierbarkeit zu verbessern, die Skalierbarkeit zu erweitern und die Arbeitszeit zu verringern, die für die Beschichtung und Passage von Organoiden erforderlich ist.

Erzeugung, Erhaltung und Charakterisierung von humanen pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Darm- und Dickdarm-Organoiden

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur effizienten Herstellung entwicklungsrelevanter menschlicher Herzorganoide (hHOs) unter Verwendung menschlicher pluripotenter Stammzellen durch Selbstorganisation. Das Protokoll beruht auf der sequentiellen Aktivierung von Entwicklungshinweisen und produziert hochkomplexes, funktionell relevantes menschliches Herzgewebe.

Erzeugung von selbstorganisierenden menschlichen Herzorganoiden aus pluripotenten Stammzellen

Dieses Protokoll stellt ein Verfahren zur Erzeugung von Gefäßorganoiden unter Verwendung menschlicher pluripotenter Stammzellen vor.

Generierung von Gefäßorganoiden aus humaninduzierten pluripotenten Stammzellen

Erfahren Sie die Gehirnorganoid-Erzeugung aus induzierten pluripotenten Stammzellen in hausgemachten Mini-Bioreaktoren. Diese Methode ermöglicht die großskalige Produktion hochwertiger Organoidmodelle für Neurowissenschaften.

Gehirnorganoid-Erzeugung aus induzierten pluripotenten Stammzellen in hausgemachten Mini-Bioreaktoren

Weitere Videos entdecken