Name: Isolierung von Epithelzellen aus dem menschlichen Zahnfollikel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 7 s
Description: Erfahren Sie die optimierte Isolierung menschlicher Dental-Epithelzellen aus Zahnfollikeln mit Kollagenase und serumfreiem Medium. Diese Methode ermöglicht reine Koloniebildung für Studien zu epithelial-mesenchymalen Interaktionen.

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Diese Studie wurde durch Zuschüsse der National Research Foundation of Korea (NRF) unterstützt, die von der koreanischen Regierung finanziert wurden (NRF-2017R1C1B2008406 und NRF-2021R1F1A1064350). Dr. Hee-Yeon Bae stellte freundlicherweise den DF für die Primärkultur zur Verfügung.

Diese Studie wurde vom Institutional Review Board des Kyung Hee University Hospital in Gangdong (IRB-Zulassung Nr. KHNMC 2017-06-009).
1. DF sammeln
HINWEIS: Die Patienten gaben vor der Operation die Einverständniserklärung für die Entfernung eines reifen oder unreifen betroffenen dritten Backenzahns. Patienten mit der folgenden Erkrankung wurden ausgeschlossen: Diabetes, Bluthochdruck, Tuberkulose, Hepatitis, erworbenes Immunschwächesyndrom. Schwangere Frauen wurden ebenfalls ausgeschlossen.
<ol><li>Ernte DF während der chirurgischen Extraktion von impaktierten dritten Molaren (Abbildung 1A). HINWEIS: Die Operation wurde von einem Mund-, Kiefer- und Gesichtschirurgen durchgeführt. Für die Gewebeentnahme ist die Zusammenarbeit mit einem Zahnarzt erforderlich.</li>
	<li>VOR GEBRAUCH DF in Dulbeccos phosphatgepufferter Kochsalzlösung (DPBS) mit 3 % Penicillin-Streptomycin bei 4 °C lagern. Führen Sie isolationsprozeduren am Tag der DF-Ernte durch (Abbildung 1B).</li>
</ol>2. Isolieren Sie Einzelzellpopulationen aus DF
<ol><li>Brühlösungen von Kollagenase Typ I und Protease in DPBS so heraufbereiten, dass die Endkonzentrationen der Kollagenase Typ I und der Protease 1 mg/ml bzw. 2,4 mg/ml betragen.</li>
	<li>Bereiten Sie drei 50-ml-Waschröhrchen mit 20 ml DPBS pro Röhrchen vor. Beschriften Sie die Tuben mit 1, 2 und 3.</li>
	<li>Waschen Sie den DF nacheinander in den Waschschläuchen. Halten Sie den DF mit einer Pinzette fest und legen Sie den DF in Röhre 1. Nehmen Sie den DF aus Röhre 1 und legen Sie ihn in Röhre 2. Nehmen Sie den DF aus Röhre 2 und legen Sie ihn in Röhre 3. Schütteln Sie DF vorsichtig 10-15 Mal in jedem Röhrchen. Nach dreimaligem Waschen den DF in eine 60-mm-Kulturschale geben (Abbildung 2A).</li>
	<li>Zerkleinern Sie das DF mit einer Gewebeschere (Abbildung 2B). Übertragen Sie nur eine kleine Portion in die Kulturschale, um den Gewebeverlust zu minimieren. Wiederholen Sie den Schnitt, bis der DF breiig oder matschig aussieht (Abbildung 2C).</li>
	<li>Mischen Sie 1 ml Kollagenase Typ I und 1 ml Proteaselösung in einem 15 ml konischen Röhrchen, um Endkonzentrationen von 1 mg/ml bzw. 2,4 mg/ml zu erhalten.</li>
	<li>Das zerkleinerte DF aus Schritt 2.5 in das konische 15-ml-Rohr überführen. Schütteln und inkubieren Sie das Röhrchen vorsichtig für 1 h bei 37 °C.</li>
	<li>5 ml 0,05% Trypsin-EDTA in das Röhrchen geben, schütteln und das Röhrchen 15 min bei 37 °C inkubieren.</li>
	<li>Herstellung eines Keratinozytenmediums, das Keratinozyten SFM 10% fötales Rinderserum (FBS) enthält. Fügen Sie 3 ml Keratinozytenmedium in ein neues 50 ml konisches Röhrchen hinzu. Legen Sie ein 40-μm-Sieb auf dieses Röhrchen und verwenden Sie eine 10 ml serologische Pipette, um den Überstand aus Schritt 2,6 abzusaugen und durch das Sieb zu leiten. HINWEIS: Minimieren Sie den Einbau von verdauten Geweberesten während der Einnahme des Überstandes. Entfernen Sie die Gewebereste mit einem 40 μm-Sieb, um ein Versagen zu minimieren. Gewebereste können 70 μm-Schmutzfänger passieren und die Koloniebildung behindern. FBS im Keratinozytenmedium inaktiviert die Enzyme.</li>
	<li>Wiederholen Sie die Schritte 2.7 und 2.8.</li>
	<li>Die gesammelte Suspension wird in ein konisches 15-ml-Rohr gegeben.</li>
	<li>Zentrifugieren Sie das 15 mL konische Rohr bei 288 × g für 3 min bei 4 °C. Entfernen Sie den Überstand. HINWEIS: Achten Sie darauf, eine versehentliche Entfernung von pelletierten Zellen zu vermeiden, die meist unsichtbar sind.</li>
	<li>3 ml Keratinozyten-SFM zugeben und die Zellen zweimal mit einer 1-ml-Pipette mit Zentrifugation gemäß Schritt 2.11 waschen.</li>
	<li>Die Einzelzellpopulation wird mit Keratinozyten-SFM in eine 60-mm-Kulturschale gekeltert. Bewahren Sie die Kulturschale mit einem Endvolumen von 5 ml in einer befeuchteten Atmosphäre von 5% CO2 bei 37 °C auf. Wechseln Sie das Kulturmedium täglich, bis keine Gewebe- oder Zelltrümmer mehr beobachtet werden. HINWEIS: Entfernen Sie schwimmende Ablagerungen im Kulturmedium, indem Sie das Medium wechseln. Die verzögerte Entfernung von Gewebetrümmern oder abgestorbenen Zellen wirkt sich ungünstig auf die Primärkultur aus.</li>
	<li>Untersuchen Sie die Platte aus Schritt 2.13, um das Wachstum von Epithelzellen zu überprüfen (Abbildung 3A). HINWEIS: Epithelzellen wachsen innerhalb von 7-10 Tagen nach der Plattierung von Einzelzellpopulationen.</li>
	<li>Erweitern Sie die Epithelkolonien und subkulturieren Sie die Zellen.<ol>
<li>Aspirieren Sie das Medium und waschen Sie den Boden der Kulturplatte einmal mit 3 ml Keratinozyten-SFM.</li>
		<li>2 ml Zelldissoziationsprotease zugeben und in einer befeuchteten Atmosphäre von 5% CO2 bei 37 °C für 3 min inkubieren. HINWEIS: Wiederholen Sie Schritt 2.15.2, wenn die Zellablösung nicht wirksam ist.</li>
		<li>Geben Sie 2 ml Keratinozytenmedium in die Kulturplatte und übertragen Sie den Inhalt in ein 15 mL konisches Röhrchen. HINWEIS: Die Zugabe von mehr Keratinozytenmedium ist nicht erforderlich, wenn Schritt 2.15.2 wiederholt wird.</li>
		<li>Zentrifugieren Sie das 15 mL konische Rohr bei 288 × g für 3 min bei 4 °C.</li>
		<li>Entfernen Sie den Überstand und waschen Sie das Zellpellet zweimal mit 3 ml Keratinozyten-SFM.</li>
		<li>Die Zellen werden in einer 100-mm-Kulturschale mit Keratinozyten-SFM (Endvolumen von 10 mL pro 100-mm-Schale) plattiert.</li>
	</ol></li>
	<li>Bereiten Sie Zellbestände vor und lagern Sie sie in einem Flüssigstickstofftank.<ol>
<li>Ernten Sie Zellen wie in den Schritten 2.15.1-2.15.5 beschrieben.</li>
		<li>Verteilen Sie die Zellen in Kryovolen in 1 ml Gefriermedium (80% Keratinozyten SFM, 10% Dimethylsulfoxid, 10% FBS).</li>
		<li>Legen Sie die Durchstechflaschen in einen Gefrierbehälter und lagern Sie sie bei -80 °C für 24 h.</li>
		<li>Die Fläschchen aus der Tiefkühltruhe in einen Flüssigstickstofftank überführen.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Tucker, A., Sharpe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cutting-edge+of+mammalian+development%3B+How+the+embryo+makes+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">The cutting-edge of mammalian development; How the embryo makes teeth.</a> Nature Reviews Genetics. 5 (7), 499-508 (2004).</li>
<li>Choung, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+CPNE7+on+periodontal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Connective+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The effect of CPNE7 on periodontal regeneration.</a> Connective Tissue Research. 60 (5), 419-430 (2019).</li>
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<li>Bonczek, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tooth+agenesis%3A+What+do+we+know+and+is+there+a+connection+to+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Genetics%22%5BJournal%5D)">Tooth agenesis: What do we know and is there a connection to cancer.</a> Clinical Genetics. 99 (4), 493-502 (2021).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte haben.

Dieses Protokoll enthält kritische Schritte. Die Entnahme von Einzelzellpopulationen ist für die erfolgreiche Isolierung von Epithelzellen aus DF unerlässlich. Wir versuchten, Epithelzellen aus dem DF zu isolieren, basierend auf unserer Hypothese, dass es mehr Epithelzellen im DF gibt. Das Zerkleinerungsverfahren verbessert die Ablösung und Freisetzung von Zellen aus dem DF. Das Zerkleinerungsverfahren wurde verbessert und das Zerkleinern wurde wiederholt, bis das DF breiig erschien, um die Freisetzung einzelner Zellen z...

Die Zahnbildung beginnt mit der Invagination des oralen Epithels1. Je nach Entwicklungsstadium des Zahns hat das orale Epithel verschiedene Namen, einschließlich des inneren und äußeren Schmelzepithels, der zervikalen Schleife und der Hertwig-Epithelwurzelscheide (HERS). Die Epithelkompartimente kommunizieren mit den umgebenden mesenchymalen Zellen. Epithelial-mesenchymale Wechselwirkungen regulieren die Zahnbildung und Geweberegeneration. Die Beschaffung von zahnärztlichen Epithelzellen wie oralen Keratinozyten und Hertwigs epithelialen Wurzelscheidenzellen (HERSCs) ist entscheidend für die Untersuchung von zahnärztlichen epithelial-mesenchymalen Interaktionen2.
Nagetier-abgeleitete dentale Epithelzellen werden aus der Epithelstruktur isoliert, wie z.B. dem HERS. Li und Kollegen isolierten und immortalisierten herSCs aus Rattenmolaren, nachdem sie den apikalen Teil der sich entwickelnden Zahnkeime von 8 Tage alten Ratten geerntet hatten3. Das HERS wurde unter Vergrößerung vom apikalen Gewebe getrennt. In Anbetracht des Entwicklungsstadiums und des Alters des Zahnes ist die Ernte des HERS vom Menschen aus ethischen Gründen fast unmöglich: Ein sich entwickelnder Zahnkeim muss von einem kleinen Kind entfernt werden, um das menschliche HERS zu ernten. Unreife Zahnkeime werden selten extrahiert. Menschliche Zahnepithelzellen können aus der Gingiva und dem Parodontalband (PDL) isoliert werden. Epithelstruktur-abgeleitete Zellen sind zusammen mit mesenchymalen Komponenten an der Zahnbildung beteiligt und könnten für die Untersuchung von zahnärztlichen epithelial-mesenchymalen Interaktionen besser geeignet sein als orale Keratinozyten. Epithelzellreste von Malassez (ERM) sind HERS-abgeleitete Epithelreste und befinden sich in geringer Anzahl im PDL4. Studien berichten über die Isolierung menschlicher HERSCs von PDL5. Die Entnahme menschlicher HERSCs aus PDL-Gewebe ist jedoch aufgrund der Knappheit der Epithelpopulation an diesem Ort nicht immer erfolgreich5,6.
Obwohl aus Nagetieren gewonnene HERSCs in serumhaltigen Medien gehalten werden3,7, werden humane DF-abgeleitete Epithelzellen mit serumfreien Medien kultiviert, die anderen menschlichen Epithelzellen ähneln, wie normale menschliche epidermale Keratinozyten und normale menschliche orale Keratinozyten8,9. Dies impliziert physiologische oder funktionelle Unterschiede zwischen Nagetier-Dentalepithelzellen und menschlichen Zahnepithelzellen. Das Verständnis des Mechanismus in Bezug auf zahnärztliche epithelial-mesenchymale Wechselwirkungen könnte zur Entwicklung klinischer Anwendungen beitragen, einschließlich parodontaler Wiederanlagerung während der Replantation, parodontaler Regeneration bei Parodontitis, Pulpa-Dentin-Komplex-Regeneration und Biozahnerzeugung. In Anbetracht der Merkmale der translationalen Forschung können menschliche Zahnepithelzellen für die Untersuchung von epithelial-mesenchymalen Interaktionen besser geeignet sein als Nagetier-Dentalepithelzellen.
Das menschliche DF ist ein lockeres Bindegewebe und befindet sich oft in einem impaktierten Zahn. Das DF enthält mesenchymale Vorläufer10. Unseres Wissens hat jedoch keine Studie über die Isolierung von Epithelzellen aus Zahnfollikeln vor 2021 berichtet. Oh und Yi berichteten über die Isolierung von Epithelzellen aus menschlichen DF im Jahr 2028. Der epitheliale Phänotyp wurde durch Western Blotting und morphologische Analyse bestätigt. Die Analyse des Ursprungs von DF-abgeleiteten Epithelzellen zeigte ähnliche Ergebnisse wie andere Studien. DF-abgeleitete Epithelzellen waren weder endothel- noch hämatopoetisch5,11, und Oh und Yi schlugen vor, diese Zellen als DF-HERSCs zu benennen. Das DF hat ein größeres Volumen als das PDL, und mehr Epithelzellen können aus dem DF isoliert werden. Dies verstärkt die Entstehung von Epithelkolonien und führt zu einer hohen Erfolgsrate bei der Gewinnung von Epithelzellen aus DF. Diese Studie schlägt vor, die DF als Gewebequelle für die Isolierung von Zahnepithelzellen zu verwenden.
In der vorliegenden Studie wurden einzelne Zellen aus dem DF nach zuvor beschriebenen Verfahren isoliert10,12. Das DF enthält heterogene Zellpopulationen, und mehrere Zelltypen könnten im frühen Stadium des Verfahrens vorhanden sein. Morsczek und Kollegen isolierten DF-abgeleitete mesenchymale Stammzellen10. Wir stellten die Hypothese auf, dass das DF Epithelzellen enthält und dass nur Epithelzellen unter serumfreien Bedingungen überleben können. Diese Studie unterscheidet sich von der von Morsczek et al. hinsichtlich der Selektion der Epithelpopulation und der Hemmung mesenchymaler Zellen. Die Selektion erfolgte unter Verwendung keratinocyte serum-free media (SFM), die die Proliferation von Epithelzellen ermöglichen und die mesenchymale Zellproliferation hemmen. Diese Studie entstand aus einem Bericht von Oh und Yi8. Ziel dieser Studie war es, Details der in diesem Bericht verwendeten Methode zur Isolierung von Epithelzellen aus menschlicher DF zu beschreiben.

<table><tbody><tr><td>EMSURE ACS,ISO,Reag. Ph Eur 2-Propanol</td><td>EMD Millipore Co., MA, USA</td><td>1096341011</td><td>1 L</td></tr><tr><td>0,05% Trypsin-EDTA</td><td>Gibco, Grand Island, NY, USA</td><td>25300054</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>40 &mu; m Zell-Sieb</td><td>Falcon, NC, USA</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Zellkulturschale (100 x 20 mm)</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA</td><td>172958</td><td>Auslaufartikel</td></tr><tr><td>Zellkulturschale (60 x 15 mm)</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA</td><td>150326</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase Typ 1</td><td>Gibco, Grand Island, NY, USA</td><td>17100017</td><td>1 g</td></tr><tr><td>Combi-514R / Gekühlt mit großem Fassungsvermögen Zentrifuge</td><td>Hanil science industrial Co., LTD., Daejeon, Südkorea</td><td>CB-514R</td> Konisches Röhrchen <td></td></tr><tr><td></td><td>SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, Südkorea</td><td>50015 50050</td><td>15 mL 50 mL</td></tr><tr><td>Kryo-Fläschchen</td><td>Corning Inc., NY, US</td><td>430488</td><td>2 mL</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich, Missouri, US</td><td>D2650-100ml</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Gibco, Grand island, NY, USA</td><td>17105041</td><td>1 g</td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline</td><td>Welgene Inc., Gyengsangbuk-do, Südkorea</td>&<td>nbsp;LB 001-02</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Gibco, Grand Island, NY, USA</td><td>16000044</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Heraeus BB 15 / CO2 Inkubator</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA</td><td>51023121</td><td></td></tr><tr><td>Keratinozyten-serumfreies Medium</td><td>Gibco, Grand Island, NY, USA</td><td>10724-011</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>MVE CryoSystem 2000</td><td>MVE Biological Solutions Co., GA, USA</td><td>CryoSystem 2000</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene Mr. Frosty Gefrierbehälter</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA</td><td>5100-0001</td><td>für 1,2-2 mL KryoFläschchen</td></tr><tr><td>Olympus CKX41 / Inverses Zellkulturmikroskop</td><td>Olympus Life Science, Waltham, Massachusetts</td><td>22-00723-01</td><td>Eingestelltes</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin Strep</td><td>Gibco, Grand Island, NY, USA</td><td>15140122</td><td>100 mL (10.000 U/ml)</td></tr><tr><td>Pipettierhilfe XP</td><td>Drummond scientific Co., PA, USA</td><td>HDR-4-000-201</td><td></td></tr><tr><td>Pipetman Classic P1000</td><td>Gilson, Villiers le Bel, Frankreich</td><td>F123602</td><td>100-1000 &micro; L</td></tr><tr><td>Kältemittel</td><td>Nihon Freezer Co. Ltd., Tokio, Japan</td><td>CLN 540U</td><td>~-80 &deg; C / Eingestellte</td></tr><tr><td>serologische Pipette</td><td>SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, Südkorea</td><td>91010</td><td>10ml</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzym (1x), phenolrot</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA</td><td>12605010</td><td>Zelldissoziationsprotease</td></tr></tbody></table>

isolierung von epithelzellen aus dem menschlichen zahnfollikel

Isolation of Epithelial Cells from Human Dental Follicle

Der Zahnfollikel (DF) wurde bei der Entfernung eines betroffenen dritten Backenzahns durch einen Mund-, Kiefer- und Gesichtschirurgen geerntet. Die Isolierung der Epithelzellen wurde am Tag der DF-Ernte durchgeführt. Das DF wurde dreimal mit DPBS gewaschen und dann mit einer Gewebeschere seziert, bis das Gewebe eine breiige oder matschige Konsistenz aufwies. Einzelzellpopulationen wurden durch Zentrifugation pelletiert und mit keratinozyten-serumfreiem Medium gewaschen. Heterogene Zellpopulationen wurden in einer Kulturschale verteilt. Keratinozyten-serumfreies Medium wurde verwendet, um die Epithelzellen auszuwählen. Das Kulturmedium wurde täglich gewechselt, bis keine schwimmenden Trümmer oder toten Zellen mehr beobachtet wurden. Epithelzellen erschienen innerhalb von 7-10 Tagen nach der Zellpopulationsverteilung. Epithelzellen überlebten in serumfreiem Medium, während α minimales essentielles Medium mit minimaler Modifikation, ergänzt mit 10% fetalem Rinderserum, die Proliferation von mesenchymalen Zellen ermöglichte. Das DF ist eine Gewebequelle zur Isolierung von Zahnepithelzellen.
Der Zweck dieser Studie war es, eine Methode zur Isolierung von Epithelzellen aus menschlicher DF zu etablieren. Das Parodontalband (PDL) wurde zur Isolierung menschlicher Zahnepithelzellen verwendet. Die Beschaffung von Epithelzellen aus menschlicher PDL ist aufgrund des geringen Gewebevolumens nicht immer erfolgreich, was zu einer geringen Anzahl von Epithelzellen führt. DF hat ein größeres Volumen als PDL und enthält mehr Zellen. DF kann eine Gewebequelle für die Primärkultur menschlicher Zahnepithelzellen sein. Dieses Protokoll ist einfacher und effizienter als die Isolationsmethode mit PDL. Die Beschaffung menschlicher Zahnepithelzellen kann weitere Studien zu zahnärztlichen epithelial-mesenchymalen Wechselwirkungen erleichtern.

DF-Ernte Die Operation wurde von einem Mund-, Kiefer- und Gesichtschirurgen durchgeführt. Menschliche Materialien, einschließlich des Zahnfragments, des Zahnfleischgewebes und der DF, wurden von einem Chirurgen gesammelt (Abbildung 1A). Der DF könnte am Zahnfragment befestigt sein. Ein Mund-, Kiefer- und Gesichtschirurg wird in der Lage sein, die DF zu identifizieren. Die Zusammenarbeit und Kommunikation mit dem Chirurgen sind für die Gewebeentnahme erforderlich. Das DF i...

Der Dentalfollikel enthält eine Epithelpopulation und mesenchymale Zellen. Die Epithelpopulation wurde aus der heterogenen Dentalfollikelzellpopulation ausgewählt, indem ein bestimmtes Kulturmedium bereitgestellt wurde. Epithelzellen überlebten und bildeten Kolonien in einem serumfreien Medium.

Isolierung von Epithelzellen aus dem menschlichen Zahnfollikel

The dental follicle (DF) was harvested during the removal of an impacted third molar by an oral maxillofacial surgeon. Epithelial cell isolation was ...

Dieses Protokoll demonstriert eine verbesserte Methode zur Beschaffung menschlicher Zahnepithelzellen. Es ist schwierig, das aggregierte Zellpellet während der Verfahren zu identifizieren. Seien Sie vorsichtig, wenn Sie mit Überständen umgehen, um den Verlust von Zellpopulationen zu verhindern.Um zu beginnen, ernten Sie Zahnfollikel während der chirurgischen Extraktion von betroffenen dritten Molaren. Beginnen Sie mit der Zellisolierung oder lagern Sie die Zahnfollikel bei vier Grad Celsius in DPBS mit 3% Penicillin-Streptomycin. Um die Zahnfollikel zu waschen, halten Sie den Zahnfollikel mit einer Pinzette fest und legen Sie ihn in das Waschrohr 1.Schütteln Sie es vorsichtig 10 bis 15 Mal. Nehmen Sie es heraus und legen Sie es in Röhre 2. Schütteln Sie es erneut 10 bis 15 Mal.Nehmen Sie es schließlich heraus und legen Sie es in Röhre 3, dann schütteln Sie es. Nachdem Sie den Zahnfollikel dreimal gewaschen haben, legen Sie ihn in eine 60-Millimeter-Kulturschale. Zerkleinern Sie das Gewebe mit einer Gewebeschere, bis der Zahnfollikel ein breiiges oder matschiges Aussehen hat.Verwenden Sie einen kleinen Seitenbereich der Kulturschale, um den Gewebeverlust zu minimieren. Mischen Sie j

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Biology

Biologie

Eine schnelle und robuste Lösung zur Isolierung von lebensfähigen Erwachsenen epithelialen Stammzellen aus menschlicher Haut beschrieben wird. Das Verfahren nutzt enzymatische Verdauung der Haut Kollagen-Matrix, durch Zupfen der Haarfollikel und Isolierung von einzelnen Zellsuspensionen oder Gewebestücke für die Zellkultur gefolgt.

Isolierung und Kultivierung von Adult epithelialen Stammzellen aus menschlicher Haut

Das beschriebene Verfahren Isolierung und Charakterisierung von menschlichen Zahnpulpa Stammzellen (hDPSCs) unter Verwendung...

Isolation, Charakterisierung und vergleichende Differenzierung humaner Dental Pulp Stammzellen aus bleibenden Zähne mit zwei verschiedenen Methoden abgeleitet

Das kontinuierlich wachsende Maus Schneidezahn stellt ein Modell für die Untersuchung Erneuerung der Zahngewebe aus Zahn epithelialen Stammzellen (DESC). Ein robustes System für konsistent und zuverlässig diese Zellen von den Schneide erhalten und in vitro expandiert sie hier berichtet wird.

Isolation und Kultur der Dental epithelialen Stammzellen aus dem erwachsenen Maus Schneidezahn

Ein ideales Modell für das Studium der adulten Stammzellbiologie ist der Haarfollikel der Maus. Hier stellen wir ein Protokoll zur Isolierung verschiedener Populationen von Haarfollikeln, Stammzellen und epidermalen Keratinozyten vor, wobei die enzymatische Verdauung der Rückenhaut von Mäusen mit anschließender FACS-Analyse zum Einsatz kommt.

Isolieren von Haarfollikelstammzellen und epidermalen Keratinozyten von Dorsal Mäusehaut

Dieses Protokoll beschreibt der Transienten Gentechnik zahnmedizinische Stammzellen aus der menschlichen zahnmedizinische Follikel extrahiert. Die angewandte nicht-viralen Modifikation Strategie kann eine Grundlage für die Verbesserung der therapeutischen Stammzellen Produkte geworden.

Isolierung, Charakterisierung und RNA-basierte gentechnische Veränderung von menschlichen Dental follikelstimulierendes Stammzellen

Dieses Manuskript beschreibt ein FACS-basiertes Protokoll zur Isolierung von papillären und Netzfibroblasten von der menschlichen Haut. Sie umgeht in der vitro-Kultur, die mit dem häufig verwendeten Isolationsprotokoll über Explantationskulturen unvermeidlich war. Die ausstrahlenden fibroblasten Untersätze sind funktional unterscheidbar und zeigen eine differenzierte Genexpression und Lokalisierung innerhalb der Dermis.

Isolierung von papillären und retikulären Fibroblasten aus der menschlichen Haut durch Fluoreszone-aktivierte Zellsortierung

Wir präsentieren eine Methode zur Isolierung und Kultivierung primärer menschlicher Speicheldrüsen-abgeleiteten Epithelzellen. Diese Zellen zeigen Genexpressionsmuster, die mit ihrem Epithel-Ursprung übereinstimmen und können als Salisphären auf Kellermembranmatrizen aus Engelbreth-Holm-Schwarm-Tumorzellen oder als Monolayer auf behandelten Kulturgerichten angebaut werden.

Isolierung von Speicheldrüsenepithelzellen aus menschlichen Speicheldrüsen für In-Vitro-Wachstum als Speicheldrüsen oder Monolayer

Hier stellen wir eine modifizierte Methode zur Isolierung und Kultur menschlicher Zahnfleischepithelzellen vor, indem wir den Rock-Inhibitor Y-27632 zur traditionellen Methode hinzufügen. Diese Methode ist einfacher, weniger zeitaufwendig, verbessert die Stammzelleigenschaften und produziert eine größere Anzahl von Epithelzellen mit hohem Potenzial sowohl für das Labor als auch für klinische Anwendungen.

Isolierung und Kultur primärer humaner Zahnfleischepithelzellen mit Y-27632

Das aktuelle Protokoll stellt eine schnelle, effiziente und schonende Methode zur Isolierung einzelner Zellen dar, die für die Einzelzell-RNA-seq-Analyse aus einem kontinuierlich wachsenden Mausschneidezahn, Mausmollaren und menschlichen Zähnen geeignet sind.

Schnelle Isolierung einzelner Zellen aus Maus- und menschlichen Zähnen

Dieses Protokoll beschreibt eine eintägige Methode zur Isolierung von humanen Eileiterepithelzellen. Isolierte Epithelzellen können in 2-dimensionalen (2D) Kulturen plattiert oder in Einzelzellsuspensionen dissoziiert und in nachgelagerten Experimenten, einschließlich Durchflusszytometrie und Einzelzell-RNA-Sequenzierung, verwendet werden.

Eine effiziente Methode zur Extraktion von Epithelien aus menschlichen Eileitern für Einzelzellanalysen

Erfahren Sie die optimierte Isolierung menschlicher Dental-Epithelzellen aus Zahnfollikeln mit Kollagenase und serumfreiem Medium. Diese Methode ermöglicht reine Koloniebildung für Studien zu epithelial-mesenchymalen Interaktionen.

Isolierung von Epithelzellen aus dem menschlichen Zahnfollikel

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