Name: Durchflusszytometrische Analyse multipler mitochondrialer Parameter in humaninduzierten pluripotenten Stammzellen und deren neuronalen und glialen Derivaten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: Erfahren Sie die Durchflusszytometrie zur Analyse mitochondrialer Parameter in humanen iPS-Zellen und neuronalen Derivaten. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung mitochondrialer Dysfunktion bei neurodegenerativen Erkrankungen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wir danken dem Molecular Imaging Centre und der Flow Cytometry Core Facility an der Universität Bergen in Norwegen. Diese Arbeit wurde durch Mittel des Norwegian Research Council (Förderkennzeichen: 229652), Rakel og Otto Kr.Bruuns legat und des China Scholarship Council (Projektnummer: 201906220275) unterstützt.

<ol><li>Wang, Y., Xu, E., Musich, P. R., Lin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction+in+neurodegenerative+diseases+and+the+potential+countermeasure%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neuroscience+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases and the potential countermeasure.</a> CNS Neuroscience & Therapeutics. 25 (7), 816-824 (2019).</li>
<li>Chen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotinamide+riboside+and+metformin+ameliorate+mitophagy+defect+in+induced+pluripotent+stem+cell-derived+astrocytes+with+POLG+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Nicotinamide riboside and metformin ameliorate mitophagy defect in induced pluripotent stem cell-derived astrocytes with POLG mutations.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 737304(2021).</li>
<li>Liang, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disease-specific+phenotypes+in+iPSC-derived+neural+stem+cells+with+POLG+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Disease-specific phenotypes in iPSC-derived neural stem cells with POLG mutations.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (10), 12146(2020).</li>
<li>Chen, H., Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics--fusion%2C+fission%2C+movement%2C+and+mitophagy--in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics--fusion, fission, movement, and mitophagy--in neurodegenerative diseases.</a> Human Molecular Genetics. 18, 169-176 (2009).</li>
<li>Lin, M. T., Beal, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction+and+oxidative+stress+in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction and oxidative stress in neurodegenerative diseases.</a> Nature. 443 (7113), 787-795 (2006).</li>
<li>Singh, A., Kukreti, R., Saso, L., Kukreti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress%3A+A+key+modulator+in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress: A key modulator in neurodegenerative diseases.</a> Molecules. 24 (8), Basel, Switzerland. 1583(2019).</li>
<li>Kondadi, A. K., Anand, R., Reichert, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+interplay+between+cristae+biogenesis%2C+mitochondrial+dynamics+and+mitochondrial+DNA+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Functional interplay between cristae biogenesis, mitochondrial dynamics and mitochondrial DNA integrity.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (17), 4311(2019).</li>
<li>Sterneckert, J. L., Reinhardt, P., Schöler, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+human+disease+using+stem+cell+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">Investigating human disease using stem cell models.</a> Nature Reviews. Genetics. 15 (9), 625-639 (2014).</li>
<li>Patani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+stem+cell+models+of+disease+and+the+prognosis+of+academic+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Human stem cell models of disease and the prognosis of academic medicine.</a> Nature Medicine. 26 (4), 449(2020).</li>
<li>Liang, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-acetylcysteine+amide+ameliorates+mitochondrial+dysfunction+and+reduces+oxidative+stress+in+hiPSC-derived+dopaminergic+neurons+with+POLG+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">N-acetylcysteine amide ameliorates mitochondrial dysfunction and reduces oxidative stress in hiPSC-derived dopaminergic neurons with POLG mutation.</a> Experimental Neurology. , 337(2021).</li>
<li>Kikuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+iPS+cell-derived+dopaminergic+neurons+function+in+a+primate+Parkinson%27s+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Human iPS cell-derived dopaminergic neurons function in a primate Parkinson's disease model.</a> Nature. 548 (7669), 592-596 (2017).</li>
<li>Juopperi, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+generated+from+patient+induced+pluripotent+stem+cells+recapitulate+features+of+Huntington%27s+disease+patient+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Astrocytes generated from patient induced pluripotent stem cells recapitulate features of Huntington's disease patient cells.</a> Molecular Brain. 5, 17(2012).</li>
<li>Liang, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+derived+astrocytes+with+POLG+mutations+and+mitochondrial+dysfunction+including+abnormal+NAD%2B+metabolism+is+toxic+for+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Stem cell derived astrocytes with POLG mutations and mitochondrial dysfunction including abnormal NAD+ metabolism is toxic for neurons.</a> bioRxiv. , (2020).</li>
<li>Liu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+crest+stem+cells+derived+from+human+ESCs+and+induced+pluripotent+stem+cells%3A+induction%2C+maintenance%2C+and+differentiation+into+functional+schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Human neural crest stem cells derived from human ESCs and induced pluripotent stem cells: induction, maintenance, and differentiation into functional schwann cells.</a> Stem Cells Translational Medicine. 1 (4), 266-278 (2012).</li>
<li>Hong, Y. J., Do, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+lineage+differentiation+from+pluripotent+stem+cells+to+mimic+human+brain+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Neural lineage differentiation from pluripotent stem cells to mimic human brain tissues.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 7, 400(2019).</li>
<li>Lundin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+iPS-derived+astroglia+from+a+stable+neural+precursor+state+show+improved+functionality+compared+with+conventional+astrocytic+models%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Human iPS-derived astroglia from a stable neural precursor state show improved functionality compared with conventional astrocytic models.</a> Stem Cell Reports. 10 (3), 1030-1045 (2018).</li>
<li>Liang, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-acetylcysteine+amide+ameliorates+mitochondrial+dysfunction+and+reduces+oxidative+stress+in+hiPSC-derived+dopaminergic+neurons+with+POLG+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">N-acetylcysteine amide ameliorates mitochondrial dysfunction and reduces oxidative stress in hiPSC-derived dopaminergic neurons with POLG mutation.</a> Experimental Neurology. 337, 113536(2021).</li>
<li>Pendergrass, W., Wolf, N., Poot, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+MitoTracker+Green%E2%84%A2+and+CMXrosamine+to+measure+changes+in+mitochondrial+membrane+potentials+in+living+cells+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Efficacy of MitoTracker Green™ and CMXrosamine to measure changes in mitochondrial membrane potentials in living cells and tissues.</a> Cytometry. Part A. 61 (2), 162-169 (2004).</li>
<li>Keij, J. F., Bell-Prince, C., Steinkamp, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staining+of+mitochondrial+membranes+with+10-nonyl+acridine+orange%2C+MitoFluor+Green%2C+and+MitoTracker+Green+is+affected+by+mitochondrial+membrane+potential+altering+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Staining of mitochondrial membranes with 10-nonyl acridine orange, MitoFluor Green, and MitoTracker Green is affected by mitochondrial membrane potential altering drugs.</a> Cytometry. 39 (3), 203-210 (2000).</li>
<li>Buckman, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MitoTracker+labeling+in+primary+neuronal+and+astrocytic+cultures%3A+influence+of+mitochondrial+membrane+potential+and+oxidants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">MitoTracker labeling in primary neuronal and astrocytic cultures: influence of mitochondrial membrane potential and oxidants.</a> Journal of Neuroscience Methods. 104 (2), 165-176 (2001).</li>
<li>Zanchetta, L. M., Kirk, D., Lyng, F., Walsh, J., Murphy, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-density-dependent+changes+in+mitochondrial+membrane+potential+and+reactive+oxygen+species+production+in+human+skin+cells+post+sunlight+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Photodermatology%2C+Photoimmunology+%26+Photomedicine%22%5BJournal%5D)">Cell-density-dependent changes in mitochondrial membrane potential and reactive oxygen species production in human skin cells post sunlight exposure.</a> Photodermatology, Photoimmunology & Photomedicine. 26 (6), 311-317 (2010).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.

Hierin befinden sich Protokolle zur Erzeugung von iPSC-abgeleiteten Neuronen und Astrozyten und zur Bewertung mehrerer Aspekte der mitochondrialen Funktion mittels Durchflusszytometrie. Diese Protokolle ermöglichen eine effiziente Umwandlung menschlicher iPS-Zellen in Neuronen und Glia-Astrozyten und die detaillierte Charakterisierung der mitochondrialen Funktion, hauptsächlich in lebenden Zellen. Die Protokolle bieten auch eine auf der Durchflusszytometrie basierende Strategie zur Erfassung und Analyse mehrerer mitochon...

Mitochondrien sind essentielle Organellen, die in fast allen eukaryotischen Zellen vorhanden sind. Mitochondrien sind für die Energieversorgung verantwortlich, indem sie Adenosintriphosphat (ATP) durch oxidative Phosphorylierung produzieren und als metabolische Vermittler für Biosynthese und Stoffwechsel fungieren. Mitochondrien sind tief an vielen anderen wichtigen zellulären Prozessen beteiligt, wie ROS-Generierung, Zelltod und intrazellulärer Ca2+-Regulation. Mitochondriale Dysfunktion wurde mit verschiedenen neurodegenerativen Erkrankungen in Verbindung gebracht, darunter Parkinson-Krankheit (PD), Alzheimer-Krankheit (AD), Huntington-Krankheit (HD), Friedreich-Ataxie (FRDA) und amyotrophe Lateralsklerose (ALS)1. Es wird auch angenommen, dass eine erhöhte mitochondriale Dysfunktion und mtDNA-Anomalie zum menschlichen Altern beitragen 2,3.
Verschiedene Arten von mitochondrialer Dysfunktion treten bei neurodegenerativen Erkrankungen auf, und Veränderungen des mitochondrialen Volumens, der MMP-Depolarisation, der Produktion von ROS und Veränderungen der mtDNA-Kopienzahl sind häufig 4,5,6,7. Daher ist die Fähigkeit, diese und andere mitochondriale Funktionen zu messen, von großer Bedeutung, um Krankheitsmechanismen zu untersuchen und potenzielle Therapeutika zu testen. Darüber hinaus ist angesichts des Mangels an Tiermodellen, die menschliche neurodegenerative Erkrankungen originalgetreu nachbilden, die Etablierung geeigneter In-vitro-Modellsysteme, die die menschliche Krankheit in Gehirnzellen rekapitulieren, ein wichtiger Schritt zu einem besseren Verständnis dieser Krankheiten und zur Entwicklung neuer Therapien 2,3,8,9.
Humane iPS-Zellen können verwendet werden, um verschiedene Gehirnzellen zu erzeugen, einschließlich neuronaler und nicht-neuronaler Zellen (dh Gliazellen), und mitochondriale Schäden im Zusammenhang mit neurodegenerativen Erkrankungen wurden in beiden Zelltypengefunden 3,10,11,12,13. Geeignete Methoden zur iPSC-Differenzierung in neuronale und gliale Linien stehen zur Verfügung14,15,16. Diese Zellen bieten eine einzigartige Mensch-Patienten-Plattform für die In-vitro-Krankheitsmodellierung und das Arzneimittelscreening. Da diese von Patienten stammen, liefern iPSC-abgeleitete Neuronen und Gliazellen Krankheitsmodelle, die genauer widerspiegeln, was beim Menschen passiert.
Bisher gibt es nur wenige komfortable und zuverlässige Methoden zur Messung mehrerer mitochondrialer Funktionsparameter in iPS-Zellen, insbesondere lebenden Neuronen und Gliazellen. Der Einsatz der Durchflusszytometrie bietet dem Wissenschaftler ein leistungsfähiges Werkzeug zur Messung biologischer Parameter, einschließlich der mitochondrialen Funktion, in einzelnen Zellen. Dieses Protokoll liefert Details für die Erzeugung verschiedener Arten von Gehirnzellen, einschließlich neuraler Stammzellen (NSCs), Neuronen und glialer Astrozyten aus iPSCs, sowie neuartige durchflusszytometrische Ansätze zur Messung mehrerer mitochondrialer Parameter in verschiedenen Zelltypen, einschließlich iPSCs und iPSC-abgeleiteten Neural- und Gliazellen. Das Protokoll bietet auch eine Co-Färbestrategie für die Verwendung der Durchflusszytometrie zur Messung des mitochondrialen Volumens, MMP, mitochondrialen ROS-Spiegels, MRC-Komplexe und TFAM. Durch die Einbeziehung von Messungen des mitochondrialen Volumens oder der mitochondrialen Masse ermöglichen diese Protokolle auch die Messung sowohl des Gesamtniveaus als auch des spezifischen Niveaus pro mitochondrialer Einheit.

<table><tbody><tr><td>anti-Oct4</td><td>Abcam</td><td>ab19857, RRID:AB_445175</td><td>Primärer Antikörper; verwendbar als 1:100, 10 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; Alexa Fluor verwenden &reg; 488 Anti-Kaninchen für Ziegen IgG&nbsp; (1:400, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11008) als Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>anti-SSEA4</td><td>Abcam</td><td>ab16287, RRID:AB_778073</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:100, 10 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; Alexa Fluor verwenden &reg; 594 Ziegen-Anti-Maus-IgG (1:800, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11005) als Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>anti-Sox2</td><td>Abcam</td><td>ab97959, RRID:AB_2341193</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:100, 10 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; Alexa Fluor verwenden &reg; 488 Anti-Kaninchen für Ziegen IgG&nbsp; (1:400, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11008) als Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>anti-Pax6</td><td>Abcam</td><td>ab5790, RRID:AB_305110</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:100, 10 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; Alexa Fluor verwenden &reg; 488 Anti-Kaninchen für Ziegen IgG&nbsp; (1:400, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11008) als Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>anti-Nestin</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-23927, RRID:AB_627994</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:50, 20 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; Alexa Fluor verwenden &reg; 594 Ziegen-Anti-Maus-IgG (1:800, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11005) als Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>anti-GFAP</td><td>Abcam</td><td>ab4674, RRID:AB_304558</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:100, 10 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; &nbsp; Alexa Fluor verwenden &reg; 594 Anti-Hühner-IgG (1:800, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11042) als Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>Anti-S100&Beta; &nbsp; konjugiert mit Alexa Fluor 488</td><td>Abcam</td><td>ab196442, RRID:AB_2722596</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:400, 2,5 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung;</td></tr><tr><td>anti-TH</td><td>Abcam</td><td>ab75875, RRID:AB_1310786</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:100, 10 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; Alexa Fluor verwenden &reg; 488 Anti-Kaninchen für Ziegen IgG&nbsp; (1:400, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11008) als Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>anti-Tuj 1</td><td>Abcam</td><td>ab78078, RRID:AB_2256751</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:1000, 1 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; Alexa Fluor verwenden &reg; 594 Ziegen-Anti-Maus-IgG (1:800, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11005) als Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>anti-Synaptophysin</td><td>Abcam</td><td>ab32127, RRID:AB_2286949</td><td>Primärer Antikörper; verwendbar als 1:100, 10 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; Alexa Fluor verwenden &reg; 488 Anti-Kaninchen für Ziegen IgG&nbsp; (1:400, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11008) als Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>anti-PSD-95</td><td>Abcam</td><td>ab2723, RRID:AB_303248</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:100, 10 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; &nbsp; Alexa Fluor verwenden &reg; 594 Anti-Hühner-IgG (1:800, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11042) als Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>anti-TFAM, konjugiert mit Alexa Fluor 488</td><td>Abcam</td><td>ab198308</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:400, 2,5 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; monoklonales IgG2b&nbsp-Maus verwenden; Alexa Fluor&reg; 488 als Isotyp-Kontrolle.</td></tr><tr><td>anti-TOMM20 konjugiert mit Alexa Fluor 488</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Cat# sc-17764 RRID:AB_628381</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:400, 2,5 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; monoklonales IgG2a&nbsp-Maus verwenden; Alexa Fluor&reg; 488 als Isotyp-Kontrolle.</td></tr><tr><td>anti-NDUFB10</td><td>Abcam</td><td>ab196019</td><td>Primärer Antikörper; verwendbar als 1:1000, 1 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; Alexa Fluor verwenden &reg; 488 Anti-Kaninchen für Ziegen IgG&nbsp; (1:400, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11008) als Sekundärantikörper; monoklonales Kaninchen-IgG als Isotypkontrolle verwenden.</td></tr><tr><td>anti-SDHA</td><td>Abcam</td><td>ab137040</td><td>Primärer Antikörper; verwendbar als 1:1000, 1 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; &nbsp; Alexa Fluor verwenden &reg; 488 Anti-Kaninchen für Ziegen IgG&nbsp; (1:400, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11008) als Sekundärantikörper; monoklonales Kaninchen-IgG als Isotypkontrolle verwenden.</td></tr><tr><td>anti-COX IV</td><td>Abcam</td><td>ab14744, RRID:AB_301443</td><td>Primärer Antikörper; verwenden als 1:1000, 1 &mu; L in 1000 &mu; L-Färbelösung; verwenden&nbsp; Alexa Fluor &reg; 488 Ziegen Anti-Maus IgG&nbsp; (1:400, Thermo Fisher Scientific, Katalog # A-11001) als Sekundärantikörper; monoklonales Maus-IgG als Isotypkontrolle verwenden.</td></tr><tr><td>Activin A</td><td>PeproTech</td><td>120-14E</td><td>Astrozyten-Differenzierungsmedium Inhaltsstoff</td></tr><tr><td>ABM Basalmedium</td><td>Lonza</td><td>CC-3187</td><td>Basalmedium für Astrozytenkultur</td></tr><tr><td>AGM SingleQuots Supplement Pack</td><td>Lonza</td><td>CC-4123</td><td>Nahrungsergänzungsmittel für Astrozytenkultur</td></tr><tr><td>Antibiotisch-Antimykotisch</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15240062</td><td>CDM Inhaltsstoff</td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F-12</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12634010</td><td>Basalmedium für verdünntes Geltrex</td></tr><tr><td>Rinderserum Albumin</td><td>Europa Bioproducts</td><td>EQBAH62-1000</td><td>Blockierungsmittel zur Verhinderung der unspezifischen Bindung von Antikörpern in Immunfärbeassays und CDM-Wirkstoff</td></tr><tr><td>BDNF</td><td>PeproTech</td><td>450-02</td><td>DA Neuronen mittlerer Inhaltsstoff</td></tr><tr><td>B-27 Supplement</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17504044</td><td>Wirkstoff für Astrozytendifferenzierungsmedium</td></tr><tr><td>BD Accuri C6 Plus Durchflusszytometer</td><td>BD Biosciences, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chemisch definiertes Lipidkonzentrat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11905031</td><td>CDM-Inhaltsstoff</td></tr><tr><td>Kollagenase IV</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17104019</td><td>Reagenz für die schonende Dissoziation humaner iPSCs</td></tr><tr><td>CCD-Mikroskop Kamera Leica DFC3000 G</td><td>Leica Mikrosysteme, Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Corning unbehandelte Kulturschalen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS430589</td><td>Suspensionskultur</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190250</td><td>Wird für eine Vielzahl von Zellkulturwaschungen</td></tr><tr><td>DMEM/F-12, GlutaMAX Supplement</td><td>verwendet Thermo Fisher Scientific</td><td>10565018</td><td>Astrozytendifferenzierung basal Medium</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15575020</td><td>Reagenz für die schonende Dissoziation humaner iPSCs</td></tr><tr><td>Essential 8 Basalmedium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1516901</td><td>Basalmedium für iPSC-Kultur</td></tr><tr><td>Essential 8 Supplement (50X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1517101</td><td>Supplement für iPSC-Kultur</td></tr><tr><td>EGF Rekombinantes humanes Protein</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PHG0314</td><td>Supplement für NSC-Kultur</td></tr><tr><td>FGF-basic (AA 10&ndash; 155) Rekombinantes humanes Protein</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PHG0024</td><td>Ergänzung für NSC-Kultur</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12103C</td><td>Mittlerer Inhaltsstoff</td></tr><tr><td>FGF-basic</td><td>PeproTech</td><td>100-18B</td><td>Astrozytendifferenzierungsmedium Zutat</td></tr><tr><td>FCCP</td><td>Abcam</td><td>ab120081</td><td>Eliminiert das mitochondriale Membranpotenzial und die TMRE-Färbung</td></tr><tr><td>Flüssigkeitsabsaugsystem BVC-Steuerung</td><td>Vacuubrand, Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyd (PFA) 16%</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28908</td><td>Zellfixierung</td></tr><tr><td>Geltrex</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1413302</td><td>Wird zur Bindung und Aufrechterhaltung von humanen iPSCs verwendet</td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td>Supplement für NSC-Kultur</td></tr><tr><td>GDNF</td><td>Peprotech</td><td>450-10</td><td>DA Neuronen Medium Inhaltsstoff Glycin</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8898</td><td>Wird zum Blockieren von Puffer</td></tr><tr><td>verwendet Ham's F-12 Nutrient Mix</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31765027</td><td>Basalmedium für CDM</td></tr><tr><td>Heregulin Beta-1 Mensch</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SRP3055</td><td>Astrozyten Differenzierungsmedium Zutat</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H1399</td><td>Färben Sie die Zellkerne für konfokale Bilder</td></tr><tr><td>Heracell 150i CO2-Inkubatoren</td><td>Fisher Scientific, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21980032</td><td>Basalmedium für CDM</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Roche</td><td>1376497</td><td>CDM-Inhaltsstoff</td></tr><tr><td>InSolution AMPK-Inhibitor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>171261</td><td>Bestandteil des neuronalen Induktionsmediums</td></tr><tr><td>Insulin-like Growth Factor-I human</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3769</td><td>Astrozyten Differenzierungsmedium Inhaltsstoff</td></tr><tr><td>KnockOut DMEM/F-12 Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12660012</td><td>Basalmedium für NSC-Kultur</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2020</td><td>Fördert die Bindung und das Wachstum von Nervenzellen in vitro</td></tr><tr><td>Leica TCS SP8 STED konfokales Mikroskop</td><td>Leica Microsystems, Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Monothioglycerin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6145</td><td>CDM Inhaltsstoff</td></tr><tr><td>MitoTracker Green FM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>M7514</td><td>Verwendet für mitochondriale Volumenindikator</td></tr><tr><td>MitoSox Red</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>M36008</td><td>Verwendet für mitochondriale ROS-Indikator</td></tr><tr><td>N-Acetyl-L-Cystein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7250</td><td>Neural Induktionsmedium Zutat</td></tr><tr><td>N-2 Ergänzung</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17502048</td><td>Astrozytendifferenzierungsmedium Zutat</td></tr><tr><td>Normales Ziegenserum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PCN5000</td><td>Wird zum Blockieren</td></tr> von <tr><td>Puffer Orbital Shaker verwendet - SSM1</td><td>Stuart Equipment, UK</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Ornithin-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4957</td><td>Fördert die Anheftung und das Wachstum von Nervenzellen in vitro</td></tr><tr><td>Poly-D-Lysinhydrobromid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7405</td><td>Fördert die Anheftung und das Wachstum von Nervenzellen in vitro</td></tr><tr><td>Purmorphamin</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>72204</td><td>Fördert die Differenzierung von DA-Neuronen</td></tr><tr><td>ProLong Gold Antifade Eindeckmittel</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36930</td><td>Einbetten des Deckglases für konfokale Bilder</td></tr><tr><td>PBS 1x</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>18912014</td><td>Wird für eine Vielzahl von Waschvorgängen</td></tr><tr><td>verwendet Rekombinantes Mensch/Maus FGF-8b Protein</td><td>R& D Systems</td><td>423-F8-025/CF</td><td>Fördert die Differenzierung von DA-Neuronen</td></tr><tr><td>SB 431542</td><td>Tocris Bioscience</td><td>TB1614-GMP</td><td>Neural Induction Medium Inhaltsstoff</td></tr><tr><td>StemPro Neural Supplement</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A10508-01</td><td>Supplement für NSCs-Kultur</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzym</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12604013</td><td>Zelldissoziationsreagenz</td></tr><tr><td>Transferrin</td><td>Roche</td><td>652202</td><td>CDM-Wirkstoff</td></tr><tr><td>TRITON X-100</td><td>VWR International</td><td>9002-93-1</td><td>Zur Permeabilisierung von Zellen in Immunfärbeassays</td></tr><tr><td>TMRE</td><td>Abcam</td><td>ab113852</td><td>Zur Färbung des Potenzials der Mitochondrienmembran</td></tr><tr><td>Wasserbad Jb Academy Basic Jba5 JBA5 Grant Instruments</td><td>Grant Instruments, USA</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

durchflusszytometrische analyse multipler mitochondrialer parameter in humaninduzierten pluripotenten stammzellen und deren neuronalen und glialen derivaten

Flow Cytometric Analysis of Multiple Mitochondrial Parameters in Human Induced Pluripotent Stem Cells and Their Neural and Glial Derivatives

Mitochondrien sind wichtig für die Pathophysiologie vieler neurodegenerativer Erkrankungen. Änderungen des mitochondrialen Volumens, des mitochondrialen Membranpotentials (MMP), der mitochondrialen Produktion von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) und der Kopienzahl der mitochondrialen DNA (mtDNA) sind häufig Merkmale dieser Prozesse. Dieser Bericht beschreibt einen neuartigen, auf Durchflusszytometrie basierenden Ansatz zur Messung mehrerer mitochondrialer Parameter in verschiedenen Zelltypen, einschließlich humaner induzierter pluripotenter Stammzellen (iPSCs) und iPSC-abgeleiteter Neural- und Gliazellen. Diese flussbasierte Strategie verwendet lebende Zellen zur Messung des mitochondrialen Volumens, des MMP- und ROS-Spiegels sowie fixierte Zellen zur Schätzung von Komponenten der mitochondrialen Atmungskette (MRC) und mtDNA-assoziierte Proteine wie den mitochondrialen Transkriptionsfaktor A (TFAM). 
Durch Co-Färbung mit fluoreszierenden Reportern, einschließlich MitoTracker Green (MTG), Tetramethylrhodaminethylester (TMRE) und MitoSox Red, können Veränderungen des mitochondrialen Volumens, des MMP und der mitochondrialen ROS quantifiziert und mit dem mitochondrialen Inhalt in Beziehung gesetzt werden. Die Doppelfärbung mit Antikörpern gegen MRC-Komplex-Untereinheiten und Translokase der äußeren Mitochondrienmembran 20 (TOMM20) ermöglicht die Beurteilung der MRC-Untereinheitsexpression. Da die Menge an TFAM proportional zur mtDNA-Kopienzahl ist, ergibt die Messung von TFAM pro TOMM20 eine indirekte Messung der mtDNA pro mitochondrialem Volumen. Das gesamte Protokoll kann innerhalb von 2-3 h durchgeführt werden. Wichtig ist, dass diese Protokolle die Messung mitochondrialer Parameter sowohl auf der Gesamtebene als auch auf der spezifischen Ebene pro mitochondrialem Volumen mittels Durchflusszytometrie ermöglichen.

Eine schematische Beschreibung der Differenzierungsmethode und der durchflusszytometrischen Strategien ist in Abbildung 3 dargestellt. Humane iPS-Zellen werden in neuronale Rosetten differenziert und dann zur Differenzierung in neuronale Sphären in die Suspensionskultur gehoben. Neuronale Sphären werden weiter differenziert und zu DA-Neuronen gereift. Neuronale Kugeln werden in einzelne Zellen dissoziiert, um gliale Astrozyten zu erzeugen, die in Monoschichten als NSCs umplattiert und dann i...

Diese Studie berichtet über einen neuartigen Ansatz zur Messung mehrerer mitochondrialer Funktionsparameter basierend auf Durchflusszytometrie und Doppelfärbung mit zwei fluoreszierenden Reportern oder Antikörpern, um Veränderungen des mitochondrialen Volumens, des mitochondrialen Membranpotentials, des reaktiven Sauerstoffgehalts, der mitochondrialen Atmungskettenzusammensetzung und der mitochondrialen DNA zu erkennen.

Durchflusszytometrische Analyse multipler mitochondrialer Parameter in humaninduzierten pluripotenten Stammzellen und deren neuronalen und glialen Derivaten

Mitochondria are important in the pathophysiology of many neurodegenerative diseases. Changes in mitochondrial volume, mitochondrial membrane potential ...

Unser Protokoll bietet dem Wissenschaftler ein leistungsfähiges Werkzeug, um mehrere Mikroparameter auf Einzelzellebene aus humanem IPS und ihren neurologischen und klaren Derivaten zu verbinden. Diese Protokolle ermöglichen die Fröhlichkeit der mitochondrialen Parameter, sowohl auf der Gesamtebene als auch auf der spezifischen Ebene pro mitochondrialem Volumen, mittels Durchflusszytometrie. Diese Technik kann auf verschiedene Zelltypen angewendet werden, einschließlich solcher aus anderen neurodegenerativen Erkrankungen.So kann es helfen, Einblicke in die Mechanismen hinter diesen Krankheitstypen zu geben und möglicherweise auch beim therapeutischen Screening zu helfen. Um zu beginnen, säen Sie die Zellen separat in vier Vertiefungen in einer Platte mit sechs Vertiefungen und inkubieren Sie die Zellen, bis 50 bis 60% Konfluenz erreicht ist. Am Ende der Kulturperiode fünf einzelne Färbelösungen mit unterschiedlichen Kombinationen von Kulturmedium, FCCP, TMRE, MTG und Mito Sockenaufstrich herstellen.Fügen Sie sie in die jeweiligen Vertiefungen hinzu und inkubieren Sie die Zellen wie im Manuskript beschrieben. Als nächstes saugen Sie das Medium aus allen Vertiefungen ab und waschen Sie es mit PBS. Für die Zellablösung inkubieren Sie die Zellen mit einem Milliliter Zelldissoziationsreagenz bei 37 Grad Celsius für fünf Minuten.Neutralisieren Sie das Zelldissoziationsreagenz mit einem Milliliter DMEM, ergänzt mit 10% FBS. Dann sammeln Sie den Brunneninhalt in einem 15-Milliliter-Chronikrohr. Pelletieren Sie die Zellen durch Zentrifizierung und waschen Sie das Zellpellet ein- oder zweimal mit PBS.Saugen Sie den gesamten Überstand ab und lassen Sie etwa 100 Mikroliter in der Röhre. Resuspendieren Sie die Zellpellets in 300 Mikroliter PBS. Nach dem Einbringen der Zellsuspension in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen das Röhrchen bei Raumtemperatur im Dunkeln halten.Analysieren Sie die Zellen mit dem Durchflusszytometer mit den im Textmanuskript beschriebenen Bandpassfiltereinstellungen. Lösen Sie ungefähr 1 Million Zellen mit dem Zelldissoziationsreagenz ab und pelletieren Sie die Zellen wie zuvor gezeigt. Neutralisieren Sie die Zellsuspension mit DMEM plus 10% FBS und sammeln Sie die Suspension in einem 15-Milliliter-Röhrchen.Fixieren Sie die Zellen mit einem Milliliter 1,6% Paraformaldehyd bei Raumtemperatur für 10 Minuten. Permeabolisieren Sie die Zellen mit einem Milliliter eiskaltem 90%Methanol bei minus 20 Grad Celsius für 20 Minuten. Dann blockieren Sie die Proben in einem Milliliter Blockierpuffer und waschen Sie die Zellen durch Zentrifugation mit PBS, wie gezeigt.Um verschiedene mitochondriale Komplexe und Untereinheiten nachzuweisen, inkubieren Sie die Zellen für 30 Minuten mit den jeweiligen primären Antikörpern, die im Textmanuskript beschrieben sind. Nachdem Sie die Zellen einmal mit PBS gewaschen haben, inkubieren Sie die Zellen 30 Minuten lang mit sekundären Antikörpern. Am Ende der Inkubation waschen und suspendieren Sie die Zellen und PBS wie gezeigt.Die Zellsuspension wird in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen überführt, das im Dunkeln auf Eis gehalten wird. Als nächstes analysieren Sie die Zellen auf dem Durchflusszytometer und erkennen Signale und filtern Sie eine mit einem 5 30/30-Bandpassfilter. Wählen Sie für jede Zellsubpopulation ein Histogrammdiagramm aus und analysieren Sie die mediane Fluoreszenzintensität oder MFI der verschiedenen Filterkanäle.Berechnen Sie die TMRE-Ebenen, spezifische Werte für MMP ROS komplexe Untereinheit und TFAM, wie im Textmanuskript beschrieben. Durchflusszytometrie und lebende Zellen wurden verwendet, um das MMP-Mitochondrienvolumen und die ROS-Spiegel zu untersuchen. In POLG DA-Neuronen wurden niedrigere spezifische MMP und höhere spezifische ROS beobachtet, während keine Veränderungen des mitochondrialen Volumens, des Gesamt-MMP und des ROS beobachtet wurden.POLG-Astrozyten hatten MMP verringert, aber keine Veränderung des mitochondrialen Volumens und der ROS. Durchflusszytometrie und fixierte Zellen wurden verwendet, um das Niveau der MRC-Komplex-Untereinheit und TFAM zu untersuchen. DA-Neuronen zeigten erhöhte komplexe Eins und TFAM versus Kontrolle, aber keine Veränderung in komplexen zwei Ebenen.POLG-Astrozyten zeigten eine Reduktion von Komplex eins vier und spezifischem TFAM. Da die Zelldichte auch MMP und die Beziehung zwischen MTG- und MMP-Fluoreszenz beeinflussen kann, ist dies zellspezifisch. Die Anpassung dieses Protokolls an andere Zelltypen erfordert wahrscheinlich eine Optimierung Nach diesem Verfahren kann eine mikroskopisch basierte ASIS, zum Beispiel eine konfokale Mikrokopie, durchgeführt werden, die zusätzliche Details der mitochondrialen Strukturen liefert.Während diese Strategie also mitochondriale Dysfunktion in DA-Neuronen und Astrozyten aus einer bekannten mitochondrialen Erkrankung erkennt, können diese Techniken auch angewendet werden, um die mitochondriale Funktion in jeder Art von Zelle und Krankheit zu erforschen.

flow-cytometric-analysis-multiple-mitochondrial-parameters-human

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Dieses Video zeigt die Markierung neuronaler Zellen mit Antikörpern für mitochondriale Atmungskettenkomplexe, mitochondriale DNA-assoziierte Proteine und mitochondriale äußere Membranproteine, gefolgt von einer Durchflusszytometrie zur Quantifizierung ihrer Spiegel.

Messung mehrerer mitochondrialer Parameter in Neuronen mittels Durchflusszytometrie

Der Artikel beschreibt die detaillierte Methode zur menschlichen pluripotenten Stammzellen differenzieren zu Herzmuskelzellen wirksam durch selektives Modulieren des Wnt-Signalwegs, gefolgt von Durchflusszytometrie-Analyse von Referenzmarkierungen, um die Homogenität und Identität der Population abzuschätzen.

High Efficiency Differenzierung von humanen pluripotenten Stammzellen zu Kardiomyozyten und Charakterisierung mittels Durchflusszytometrie

Dendritischen Dornen von Pyramidenneuronen sind die Websites der meisten Synapsen im Gehirn von Säugetieren Kortex. Diese Methode beschreibt ein 3D-quantitative Analyse der Wirbelsäule Morphologien in der menschlichen kortikalen Pyramiden glutamatergen Neuronen aus induzierten pluripotenten Stammzellen abgeleitet.

Dreidimensionale Quantifizierung der dendritischen Dornen von Pyramidenzellen aus humanen induzierten pluripotenten Stammzellen

Menschliche induzierte pluripotenten Stammzellen (hiPSCs) gelten als ein leistungsfähiges Werkzeug für die Arzneimittel- und Chemikalien-Screening und für die Entwicklung neuer in vitro- Modelle für die Toxizitätstests, einschließlich Neurotoxizität. Hier wird ein detailliertes Protokoll zur Differenzierung von hiPSCs in Neuronen und Glia beschrieben.

Protokoll zur Differenzierung von human induzierten pluripotenten Stammzellen in Mischkulturen von Neuronen und Glia für Neurotoxizitätstests

Wir präsentieren eine Durchflusszytometrie-Methode, um gleichzeitig verschiedene Zelltypen zu identifizieren, die aus dem Gehirn oder Rückenmark der Maus abgerufen wurden. Diese Methode könnte genutzt werden, um reine Zellpopulationen bei neurodegenerativen Erkrankungen zu isolieren oder zu charakterisieren oder das Ausmaß der Zellausrichtung bei der In-vivo-Verabreichung von viralen Vektoren oder Nanopartikeln zu quantifizieren.

Gleichzeitige zytometrische Charakterisierung mehrerer Zelltypen, die durch verschiedene Homogenisierungsmethoden aus dem Maushirn/Spinalcord abgerufen wurden

Hier beschreiben wir eine zuverlässige Methode zur Messung des mitochondrialen Massen- und Membranpotenzials in ex vivo kultivierten hämatopoetischen Stammzellen und T-Zellen.

Messung des mitochondrialen Masse- und Membranpotenzials in hämatopoetischen Stammzellen und T-Zellen durch Durchflusszytometrie

Beeinträchtigter mitochondrialer Transport und Morphologie sind an verschiedenen neurodegenerativen Erkrankungen beteiligt. Das vorgestellte Protokoll verwendet induzierte pluripotente Stammzell-abgeleitete Vorhirn-Neuronen, um mitochondrialen Transport und Morphologie bei erblicher spastischer Paraplegie zu bewerten. Dieses Protokoll ermöglicht die Charakterisierung des mitochondrialen Handels entlang von Axonen und die Analyse ihrer Morphologie, die das Studium neurodegenerativer Erkrankungen...

Analyse von mitochondrialem Transport und Morphologie bei humaninduzierten Pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Neuronen bei erblicher spastischer Paraplegie

Wir zeigen die Automatisierung von humaninduzierten pluripotenten Stammzellkulturen (hiPSC) und neuronalen Differenzierungen, die mit automatisierter Bildgebung und Analyse kompatibel sind.

Automatisierte Produktion von humaninduzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten kortikalen und dopaminergen Neuronen mit integrierter Live-Zell-Überwachung

Wir beschreiben ein detailliertes Protokoll für die Erzeugung von humaninduzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Hirnorganoiden und deren Verwendung bei der Modellierung mitochondrialer Erkrankungen.

Generierung menschlicher Gehirnorganoide für die mitochondriale Krankheitsmodellierung

Die vorliegende Video zeigt eine Methode, die nutzt die Kombination von Elektroporation und konfokale Mikroskopie, um Live-Aufnahmen zu den einzelnen neuronalen Vorläuferzellen im sich entwickelnden Zebrafisch Vorderhirn führen.

Zeitraffer-Live-Imaging von klonal verbundenen neuronalen Vorläuferzellen in der Entwicklung von Zebrafisch Vorderhirnneuronen

Erfahren Sie die Durchflusszytometrie zur Analyse mitochondrialer Parameter in humanen iPS-Zellen und neuronalen Derivaten. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung mitochondrialer Dysfunktion bei neurodegenerativen Erkrankungen.

Durchflusszytometrische Analyse multipler mitochondrialer Parameter in humaninduzierten pluripotenten Stammzellen und deren neuronalen und glialen Derivaten (Video) | JoVE Journal

Durchflusszytometrische Analyse multipler mitochondrialer Parameter in humaninduzierten pluripotenten Stammzellen und deren neuronalen und glialen Derivaten

Weitere Videos entdecken