Name: Mausmodell für das abdominale Aortenaneurysma, das durch die perivaskuläre Anwendung der Elastase induziert wird (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: Lernen Sie ein standardisiertes chirurgisches Protokoll zur Induktion eines abdominellen Aortenaneurysmas bei Mäusen mittels perivaskulärer Elastase-Applikation. Diese Methode bietet hohe Reproduzierbarkeit und niedrige Kosten.

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Wir danken der Abteilung für Labortiermedizin der University of Michigan für ihre Hilfe bei der Tierfütterung und -zucht. Diese Studie wird von NIH RO1 HL138139, NIH RO1 HL153710 an J. Zhang, NIH RO1 HL109946, RO1 HL134569 an Y.E. Chen und dem American Heart Association Grant 20POST35110064 an G. Zhao unterstützt.

Die Tierprotokolle wurden vom University of Michigan Institutional Animal Care and Use Committee (PRO00010092) genehmigt. Männliche und weibliche C57BL/6J Wildtyp-Mäuse (WT) im Alter von ~ 7 Wochen wurden für die Experimente verwendet.
1. Tierpräparation
<ol><li>Füttern Sie die Mäuse vor und nach der Operation mit der Standard-Chow-Diät (siehe Materialtabelle). HINWEIS: Verschiedene Stämme und Altersstufen von Mäusen können verwendet werden. Es wird jedoch empfohlen, ein Alter von 5,5 bis 12 Wochen alt zu sein, um eine maximale Inzidenzrate zu erreichen.</li>
	<li>Verabreichen Sie für jede Maus 30 Minuten vor der Einleitung der Anästhesie 5 mg/kg Carprofen subkutan.</li>
	<li>Nach 30 min 100 mg/kg Ketamin und 5 mg/kg Xylazine über intraperitoneale Injektion verabreichen, um eine Anästhesie zu induzieren.</li>
</ol>2. Vorbereitung auf die Operation
<ol><li>Bereiten Sie das chirurgische Material vor.<ol>
<li>Schneiden Sie die Nitrilhandschuhe in Streifen von 4 cm x 4 mm. Schneiden Sie die Wattepads in Stücke von 3 cm x 2 mm. Autoklavieren Sie diese mit anderen chirurgischen Instrumenten, einschließlich chirurgischer Scheren, Gewebezange und Halsted-Moskito-Hämostaten (siehe Materialtabelle).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Legen Sie die Maus in Rückenlage auf ein steriles, saugfähiges Verbandspad. Immobilisieren Sie die Vorder- und Hinterpfoten mit chirurgischem Klebeband.</li>
	<li>Verwenden Sie Applikatoren mit Baumwollspitze (siehe Materialtabelle), um die Haarentfernerlotion über den mittleren und unteren Bauchbereich zu bürsten, und tupfen Sie dann den Bereich mit chirurgischer Gaze ab, um die Haare zu entfernen.</li>
	<li>Desinfizieren Sie den Operationsbereich mindestens dreimal in einer kreisförmigen Bewegung mit abwechselnden Anwendungen von 70% Alkohol und einem Peeling auf Jod- oder Chlorhexidinbasis. Trocknen lassen.</li>
</ol>3. Chirurgischer Eingriff
<ol><li>Führen Sie die folgenden Schritte aus, um auf die Bauchhöhle zuzugreifen.<ol>
<li>Testen Sie die Maus auf das Fehlen einer Zehenklemmreaktion vor dem Hautschnitt.</li>
		<li>Machen Sie einen 2,5 cm langen Längseinschnitt auf der Haut entlang der Mittellinie des Mittel- und Unterbauches mit einer chirurgischen Schere.</li>
		<li>Ziehen Sie den darunter liegenden Muskel vorsichtig hoch und machen Sie einen 2,5 cm langen Längseinschnitt entlang der Linea alba, um Zugang zur Bauchhöhle zu erhalten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Legen Sie die Bauchaorta frei.<ol>
<li>Verwenden Sie benetzte Applikatoren mit Baumwollspitze, um den Darm und den Magen auf die rechte Seite der Maus zu bewegen. HINWEIS: Im Idealfall wird dadurch das infrarenale Segment der Aorta freigelegt. Wenn die Aorta schwer zu lokalisieren ist, können die rechte Niere und die rechte Nierenarterie die Aorta identifizieren (da die rechte Niere eine etwas niedrigere anatomische Lage hat als die linke Niere).</li>
		<li>Verwenden Sie eine Pinzette, um das Bindegewebe, das die Bauchaorta und die Hohlvene inferior (IVC) bedeckt, vorsichtig zu entfernen. HINWEIS: Die Bauchaorta und IVC sind in derselben Gefäßscheide enthalten. Es ist unnötig, das gesamte Bindegewebe zu entfernen, da eine vollständige Entfernung das Risiko einer Beschädigung dieser beiden Gefäße erhöhen würde.</li>
		<li>Verwenden Sie eine Pinzette, um die Rückseite der Bauchaorta und IVC sanft von den darunter liegenden Muskeln zu sezieren. HINWEIS: Spitzen der Pinzette sollten quer in die Rückseite der Scheide gehen und ein Loch in der Faszie erzeugen, das die Hülle mit den darunter liegenden Muskeln verbindet. Sobald das Loch gemacht ist, erweitern Sie seine Größe, indem Sie die Pinzette langsam loslassen.</li>
		<li>Legen Sie ein Stück des 4 cm x 4 mm großen Handschuhstreifens (wie bereits erwähnt, Schritt 2.1.1) durch die Rückseite der Bauchaorta und IVC, dann richten Sie den Streifen aus. Platzieren Sie den Streifen ~ 0,5 cm von der rechten Nierenarterie entfernt. HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass das Loch groß genug ist, damit die umgebende Faszie den Streifen nicht verdreht.</li>
		<li>Über dem Streifen ein Stück 3 cm x 2 mm Wattepad durch die Rückseite der Bauchaorta und IVC legen und dann das Wattepad begradigen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Inkubieren Sie die Elastase.<ol>
<li>Verwenden Sie eine Pipette, um 30 μL Schweinepankreas-Elastase (Gesamtenzymaktivität von 1,8 Einheiten, siehe Materialtabelle) auf das Aortensegment über dem Wattepad zu tropfen, wickeln Sie dann das Wattepad und streifen Sie es um die Aorta und IVC. Spülen Sie ein Stück 10 cm x 10 cm Gaze mit steriler 0,9% Kochsalzlösung ab und legen Sie es auf den Bauch. HINWEIS: Die Gaze muss nur teilweise gespült werden, da eine Übertreibung die darunter liegende Elastase verdünnen könnte.</li>
		<li>Nach 30 min den Streifen und das Wattepad mit einer Pinzette entfernen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Schließen Sie die Bauchhöhle mit den folgenden Schritten.<ol>
<li>Bewässern Sie die Aorta und die Bauchhöhle mit 500 μL steriler 0,9% Kochsalzlösung. Verwenden Sie eine 10 cm x 10 cm große Gaze, um die verbleibende Kochsalzlösung zu absorbieren.</li>
		<li>Reapproximieren Sie die Muskelschichten mit einer laufenden 6-0 nicht resorbierbaren monofilen Naht.</li>
		<li>Schließen Sie die Haut mit 3-4 unterbrochenen 6-0 nicht resorbierbaren monofilen Nähten.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Nachsorge
<ol><li>Verabreichen Sie 5 mg/kg Carprofen subkutan am postoperativen Tag 1.</li>
	<li>Entfernen Sie Hautnähte am postoperativen Tag 10.</li>
</ol>5. Messung des Durchmessers des Bauchaortenaneurysmas
<ol><li>Euthanasie die Mäuse durch CO2 Überdosierung am postoperativen Tag 14. Dies stellt den Zeitpunkt der maximalen Dilatation dar.</li>
	<li>Greifen Sie wie in Schritt 3.1 beschrieben auf die Bauchhöhle zu.</li>
	<li>Führen Sie eine vaskuläre Perfusion durch, indem Sie 10 ml 0,9% Kochsalzlösung durch den linken Ventrikel in den Kreislauf injizieren.</li>
	<li>Belichten Sie das infrarenale Segment der Bauchaorta, wie in den Schritten 3.1-3.2 beschrieben. Entfernen Sie vorsichtig das umgebende Bindegewebe und trennen Sie die Bauchaorta von IVC.</li>
	<li>Messen Sie den Durchmesser der Bauchaorta mit einem Bremssattel.</li>
</ol>

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice%3A+Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical practice: Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (22), 2101-2108 (2014).</li>
<li>Karthikesalingam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+from+ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+Clinical+lessons+from+a+comparison+of+outcomes+in+England+and+the+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Mortality from ruptured abdominal aortic aneurysms: Clinical lessons from a comparison of outcomes in England and the USA.</a> Lancet. 383 (9921), 963-969 (2014).</li>
<li>Noel, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+The+excessive+mortality+rate+of+conventional+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ruptured abdominal aortic aneurysms: The excessive mortality rate of conventional repair.</a> Journal of Vascular Surgery. 34 (1), 41-46 (2001).</li>
<li>Lederle, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rupture+rate+of+large+abdominal+aortic+aneurysms+in+patients+refusing+or+unfit+for+elective+repair%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Rupture rate of large abdominal aortic aneurysms in patients refusing or unfit for elective repair.</a> JAMA. 287 (22), 2968-2972 (2002).</li>
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<li>Kuivaniemi, H., Ryer, E. J., Elmore, J. R., Tromp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Cardiovascular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Understanding the pathogenesis of abdominal aortic aneurysms.</a> Expert Review of Cardiovascular Therapy. 13 (9), 975-987 (2015).</li>
<li>Trollope, A., Moxon, J. V., Moran, C. S., Golledge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm+and+their+role+in+furthering+management+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Animal models of abdominal aortic aneurysm and their role in furthering management of human disease.</a> Cardiovascular Pathology. 20 (2), 114-123 (2011).</li>
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<li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> Journal of Surgical Research. 99 (2), 371-376 (2001).</li>
<li>Allaire, E., Guettier, C., Bruneval, P., Plissonnier, D., Michel, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+arterial+grafts%3A+Morphologic+characteristics+of+aortic+isografts%2C+allografts%2C+and+xenografts+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Cell-free arterial grafts: Morphologic characteristics of aortic isografts, allografts, and xenografts in rats.</a> Journal of Vascular Surgery. 19 (3), 446-456 (1994).</li>
<li>Anidjar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastase-induced+experimental+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Elastase-induced experimental aneurysms in rats.</a> Circulation. 82 (3), 973-981 (1990).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+modulate+the+pathogenesis+of+elastase-induced+abdominal+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mast cells modulate the pathogenesis of elastase-induced abdominal aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 117 (11), 3359-3368 (2007).</li>
<li>Bhamidipati, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+murine+model+of+aortic+aneurysms+using+peri-adventitial+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Development of a novel murine model of aortic aneurysms using peri-adventitial elastase.</a> Surgery. 152 (2), 238-246 (2012).</li>
<li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+%28gelatinase+B%29+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li>
<li>Tanaka, A., Hasegawa, T., Chen, Z., Okita, Y., Okada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rat+model+of+abdominal+aortic+aneurysm+using+a+combination+of+intraluminal+elastase+infusion+and+extraluminal+calcium+chloride+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel rat model of abdominal aortic aneurysm using a combination of intraluminal elastase infusion and extraluminal calcium chloride exposure.</a> Journal of Vascular Surgery. 50 (6), 1423-1432 (2009).</li>
<li>Busch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+surgical+modifications+to+the+classic+elastase+perfusion+aneurysm+model+enable+haemodynamic+alterations+and+extended+elastase+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four surgical modifications to the classic elastase perfusion aneurysm model enable haemodynamic alterations and extended elastase perfusion.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 56 (1), 102-109 (2018).</li>
<li>Liang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KLF11+protects+against+venous+thrombosis+via+suppressing+tissue+factor+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">KLF11 protects against venous thrombosis via suppressing tissue factor expression.</a> Thrombosis and Haemostasis. , (2021).</li>
<li>Marinov, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+the+infusion+of+elastase+in+the+abdominal+aorta+of+the+Yucatan+miniature+swine+consistently+produce+experimental+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Can the infusion of elastase in the abdominal aorta of the Yucatan miniature swine consistently produce experimental aneurysms.</a> Journal of Investigative Surgery. 10 (3), 129-150 (1997).</li>
<li>Shannon, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+model+of+infrarenal+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Visualized Experiments. (153), e60169(2019).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Das Elastase-induzierte AAA-Modell wurde erstmals 1990 von Anidjar et al. mit Ratten berichtet17. In den letzten dreißig Jahren wurde eine Vielzahl von modifizierten Versionen eingeführt, zusammen mit einer signifikanten Verbesserung der chirurgischen Techniken 19,20,21,22. Hunderte von Instituten verwenden Elastase-induzierte AAA-Modelle als das am zweithäufigsten verwe...

Das Abdominalaortenaneurysma (AAA) ist definiert als eine segmentale Erweiterung der Bauchaorta mit einer Zunahme des Gefäßdurchmessers1 um mindestens 50%. AAA ist potenziell tödlich, da der Bruch zu einer extrem hohen Sterblichkeitsrate führen kann, selbst beiIntervention 2,3,4. Es wurde berichtet, dass AAA in den USA jährlich für etwa 13.000 Todesfälle verantwortlich ist, was sie zur 10. häufigsten Todesursache von 1,5 macht.
Die Pathogenese von AAA ist noch nicht vollständig verstanden 6,7,8. Um den molekularen Mechanismus von AAA zu untersuchen und potenzielle therapeutische Ziele zu testen, wurden mehrere experimentelle AAA-Modelle erstellt 9,10. Nagetiermodelle von AAA umfassen Elastase-, Calciumchlorid-, Angiotensin-II- und Xenograft-Modelle, unter denen das Elastase-induzierte AAA-Modell das am zweithäufigsten verwendete Modell 10,11,12,13,14,15,16,17 ist. Dieses Modell beinhaltet eine direkte Infusion oder Anwendung der porcinen Pankreaselastase (PPE) auf das infrarenale Segment der Aorta. Das Eindringen von Elastase in die mediale Schicht der Aorta führt zum Abbau elastischer Lamellen und zur Infiltration von Entzündungszellen, was zum Verlust der Integrität der Aortenwand und zur anschließenden Erweiterung der Bauchaortaführt 7,18. Das Elastase-induzierte AAA-Modell wurde erstmals 1990 von Anidjar et al. an Ratten berichtet, bei denen ein isoliertes Segment der Aorta mit Elastase17 durchblutet wurde. Später im Jahr 2012 wurde ein modifiziertes Modell mit einer periadventitiellen Anwendung von PSA von Bhamidipati et al.19 berichtet. Heutzutage sind die meisten Operationen für das Elastase-induzierte AAA-Modell von Bhamidipatis Gruppe inspiriert und werden mit der externen Anwendung und nicht mit intraluminaler Perfusion von PSA durchgeführt. Obwohl die externe Anwendung weniger Anforderungen an feine chirurgische Fähigkeiten stellt, ist die Inzidenzrate von AAA relativ niedriger und die Größe etwas kleiner als die der intraluminalen Perfusion11,19.
Obwohl das Elastase-induzierte AAA-Modell in AAA-Studien weit verbreitet ist, weist es bestimmte Einschränkungen auf. Ein Vorbehalt dieses Modells sind die unvermeidlichen Variationen der Art und Weise, wie die Operation durchgeführt wird, was zu dem Problem der Reproduzierbarkeit führen kann. Zum Beispiel kann der Unterschied im chirurgischen Verfahren bestehen, wie das infrarenale Segment der Aorta isoliert wird und welcher Teil des Segments für die PSA-Anwendung in verschiedenen Labors ausgewählt wird. Die enzymatische Aktivität von PSA und die Zeitdauer der PSA-Inkubation können ebenfalls variieren. Dies sind jedoch alles wesentliche Determinanten, die die eventuelle AAA-Bildungsrate und den Aneurysmadurchmesser beeinflussen. Die Variation dieser kritischen Determinanten macht den Datenvergleich von AAA-Studien aus verschiedenen Gruppen mit diesem Modell sehr schwierig. Daher ist ein standardisierter chirurgischer Eingriff als Werkzeug erforderlich, um vergleichbare Ergebnisse von verschiedenen Institutionen zu erhalten.
Dieser Artikel beschreibt ein standardisiertes chirurgisches Protokoll für das Elastase-induzierte AAA-Modell durch direkte Anwendung von PSA auf die Adventitia der infrarenalen Bauchaorta bei Mäusen. Details über chirurgisches Material und Verfahren, die für eine erfolgreiche und robuste Erzeugung von AAA bei Mäusen mit diesem Modell unerlässlich sind, werden ebenfalls diskutiert.

<table><tbody><tr><td>6-0 nicht resorbierbares monofiles Nahtmaterial</td><td>Pro Advantage</td><td>P420697</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis Inc.</td><td>NDC: 54771-8507</td><td></td></tr><tr><td>Chow Diet</td><td>LabDiet</td><td>3005659-220</td><td>PicoLab 5L0D</td></tr><tr><td>Baumwoll-Applikator</td><td>Dynarex</td><td>4303</td><td></td></tr><tr><td>Wattepad</td><td>Rael</td><td>UPC: 810027130969</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td></td><td>Version 8.4.3</td></tr><tr><td>Grarfe Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Halsted Mosquito Hämostaten</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>von Pharmaceutical</td><td>NDC: 42023-0115-10</td><td></td></tr><tr><td>Nitrilhandschuhe</td><td>Fisherbrand</td><td>19-130-1597</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Fisher</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Pankreas-Elastase für Schweine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1250-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Schere</td><td>Fine Science Tools</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 0,9%ige Kochsalzlösung</td><td>Baxter</td><td>2B1324X</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>Akorn</td><td>NDC: 59399-110-20</td><td></td></tr></tbody></table>

mausmodell für das abdominale aortenaneurysma, das durch die perivaskuläre anwendung der elastase induziert wird

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

Abdominales Aortenaneurysma (AAA), obwohl in erster Linie asymptomatisch, ist potenziell lebensbedrohlich, da der Bruch von AAA in der Regel ein verheerendes Ergebnis hat. Derzeit gibt es mehrere verschiedene experimentelle Modelle von AAA, die jeweils einen anderen Aspekt in der Pathogenese von AAA betonen. Das Elastase-induzierte AAA-Modell ist das am zweithäufigsten verwendete Nagetier-AAA-Modell. Dieses Modell beinhaltet eine direkte Infusion oder Anwendung der porcinen Pankreaselastase (PPE) auf das infrarenale Segment der Aorta. Aufgrund technischer Herausforderungen werden die meisten Elastase-induzierten AAA-Modelle heutzutage mit der externen Anwendung und nicht mit einer intraluminalen Infusion von PSA durchgeführt. Die Infiltration der Elastase führt zu einem Abbau elastischer Lamellen in den medialen Schichten, was zum Verlust der Integrität der Aortenwand und zur anschließenden Erweiterung der Bauchaorta führt. Ein Nachteil des Elastase-induzierten AAA-Modells ist jedoch die unvermeidliche Variation der Art und Weise, wie die Operation durchgeführt wird. Insbesondere die chirurgische Technik der Isolierung des infrarenalen Segments der Aorta, das Material, das für die Aortenwicklung und die PSA-Inkubation verwendet wird, die enzymatische Aktivität von PSA und die zeitliche Dauer der PSA-Anwendung können wichtige Determinanten sein, die die eventuelle AAA-Bildungsrate und den Aneurysmadurchmesser beeinflussen. Insbesondere der Unterschied in diesen Faktoren aus verschiedenen Studien zu AAA kann zu Reproduzierbarkeitsproblemen führen. Dieser Artikel beschreibt einen detaillierten chirurgischen Ablauf des Elastase-induzierten AAA-Modells durch direkte Anwendung von PSA auf die Adventitia der infrarenalen Bauchaorta in der Maus. Nach diesem Verfahren ist eine stabile AAA-Bildungsrate von etwa 80% bei männlichen und weiblichen Mäusen erreichbar. Die Konsistenz und Reproduzierbarkeit von AAA-Studien unter Verwendung eines Elastase-induzierten AAA-Modells kann durch die Etablierung eines chirurgischen Standardverfahrens erheblich verbessert werden.

Insgesamt dreiundzwanzig 7 Wochen alte Wildtyp-Mäuse (WT), darunter 12 Weibchen und 11 Männchen, wurden nach dem vorgestellten Protokoll operiert. Die Überlebensrate betrug 100% (chirurgische Mortalität ausgeschlossen). Der maximale Durchmesser der Bauchaorta wurde mit einem Bremssattel gemessen.
AAA wurde definiert als Erweiterung der Bauchaorta mit einer 50%igen Gefäßdurchmesserzunahme. Daher wurde eine 50%ige Erhöhung des maximalen Bauchaortendurchmessers als Cut-off-Punkt für eine erfolgre...

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine standardisierte chirurgische Methode für das Elastase-induzierte AAA-Modell durch die direkte Anwendung von Elastase auf die Adventitia der infrarenalen abdominalen Aorta bei Mäusen.

Mausmodell für das abdominale Aortenaneurysma, das durch die perivaskuläre Anwendung der Elastase induziert wird

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

Dies ist ein standardisiertes Protokoll für das Elastase-induzierte Bauchaortenaneurysma, das die Reproduzierbarkeit und die Konsistenz von Studien mit diesem Modell erheblich verbessern würde. Diese Technik hat eine konsistente Induktionsrate des Bauchaortenaneurysmas. Es besitzt auch den Vorteil der geringen Kosten und der kurzen Betriebszeit, was zu einer stärkeren statistischen Aussagekraft und der Reproduzierbarkeit führt.Sie müssen sicherstellen, dass das Bindegewebe, das die Aorta bedeckt, entfernt wurde, damit die Elastase eine bessere Chance auf Penetration hat, aber achten Sie darauf, die Gefäße nicht zu beschädigen. Um zu beginnen, verabreichen Sie fünf Milligramm pro Kilogramm Carprofen subkutan, 30 Minuten vor der Einleitung der Anästhesie. Testen Sie die betäubte Maus auf das Fehlen einer Zehenklemmreaktion vor dem Hautschnitt.Machen Sie einen 2,5 Zentimeter langen Schnitt auf der Haut, entlang der Mittellinie des Mittel- und Unterbauchs. Ziehen Sie den darunter liegenden Muskel vorsichtig hoch und machen Sie einen 2,5 Zentimeter langen Schnitt entlang der Linea alba. Verwenden Sie benetzte Applikatoren mit Baumwollspitze, um den Darm und den Magen auf die rechte Seite der Maus zu bewegen und auf die Bauchhöhle zuzugreifen.Verwenden Sie eine Pinzette, um das Bindegewebe, das die Bauchaorta und die Hohlvene inferior bedeckt, vorsichtig zu entfernen. Verwenden Sie eine Pinzette, um die Rückseite der Bauchaorta und der unteren Hohlvene von den darunter liegenden Muskeln sanft zu sezieren. Legen Sie ein Stück von vier Zentimetern mal vier Millimetern Handschuhstreifen durch die Rückseite der Bauchaorta und der unteren Hohlvene und richten Sie den Streifen auf.Platzieren Sie den Streifen etwa 0,5 Zentimeter von der rechten Nierenarterie entfernt. Über dem Streifen ein Stück von drei Zentimetern mal zwei Millimetern Wattepad durch die Rückseite der Bauchaorta und der unteren Hohlvene legen. Dann richten Sie das Wattepad auf.Um die Elastase zu inkubieren, verwenden Sie eine Pipette, um 30 Mikroliter Schweine-Pankreas-Elastase auf das Aortensegment über dem Wattepad fallen zu lassen. Das Wattepad wickeln und um die Aorta und die untere Hohlvene streifen. Spülen Sie ein Stück 10 Zentimeter mal 10 Zentimeter Gaze mit steriler 0,9% Kochsalzlösung und legen Sie es auf den Bauch.Entfernen Sie nach 30 Minuten den Streifen und das Wattepad mit einer Pinzette. Bewässern Sie die Aorta und die Bauchhöhle mit 500 Mikrolitern steriler 0,9% Kochsalzlösung. Verwenden Sie Gaze, um die verbleibende Kochsalzlösung zu absorbieren.Nähern Sie die Muskelschichten mit einer laufenden 6-0 nicht resorbierbaren monofilen Naht an. Schließen Sie dann die Haut mit drei bis vier unterbrochenen 6-0 nicht resorbierbaren monofilen Nähten. Die Inzidenzrate der Entwicklung eines Bauchaortenaneurysmas am postoperativen Tag 14 betrug 91,7% für weibliche Tiere, während die Inzidenzrate für männliche Tiere 72,7% betrug.Unter den 19 Tieren, bei denen ein Bauchaortenaneurysma entwickelt wurde, wurde bei Weibchen bzw. Männchen eine 1,7-fache und 1,6-fache Zunahme des maximalen Bauchaortendurchmessers beobachtet. im Vergleich zu nicht-chirurgischen Kontrollen.Repräsentative Bilder der Aorta aus nicht-chirurgischen und chirurgischen Gruppen an einem postoperativen Tag 14 werden angezeigt. Diese Technik diente als potenzielles Werkzeug, um die Pathophysiologie von Triple A zu sezieren und bei der Entdeckung neuer potenzieller therapeutischer Ziele zu helfen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video zeigt, wie man abdominalen Aortenaneurysmen (AAA) in Mäusen über vorübergehende intraluminale Infusion von Schweine-Pankreas-Elastase in der infrarenalen Segment der abdominalen Aorta induzieren. Das Modell verfügt über die Fähigkeit zur umfassenden Einblick in die Pathobiologie von AAA durch die Entstehung zahlreicher transgenen und Knockout-Mäuse hinzu.

Erstellung von Murine Experimental Bauchaortenaneurysmen mit Elastase

Wir beschreiben ein chirurgisches Protokoll, um bei Mäusen konsequent robuste absteigende thorakale Aortenaneurysmen zu induzieren. Das Verfahren beinhaltet linke Thorakotomie, thorakale Aorta-Exposition und Platzierung eines Schwamms, der in schweinepankreasischer Elastase auf der Aortenwand getränkt ist.

Murine chirurgisches Modell der topischen Elastase induzierte absteigende Thorax Aortenaneurysm

Dieses Protokoll beschreibt ein Calciumphosphat-induziertes Bauchaortenaneurysma (AAA) Mausmodell, um die pathologischen Merkmale und molekularen Mechanismen von AAAs zu untersuchen.

Ein Calciumphosphat-induziertes Maus-Bauchaortenaneurysma-Modell

Dieses Manuskript stellt ein Protokoll zur Etablierung eines Modells für ein abdominales Aortenaneurysma der Maus unter Verwendung von Calciumchlorid und Elastase vor, das die Vorteile früherer Modellierungsmethoden kombiniert. Dieses Modell kann verwendet werden, um die pathophysiologischen Mechanismen zu untersuchen, die abdominalen Aortenaneurysmen zugrunde liegen.

Ein Modell eines abdominalen Aortenaneurysmas der Maus durch periadventielle Calciumchlorid- und Elastase-Infiltration

Dieses Protokoll beschreibt einen methodischen chirurgischen Ansatz zur Modellierung fortgeschrittener Bauchaortenaneurysmen bei Mäusen durch eine Kombination aus direkter Applikation von Elastase auf die infrarenale Aorta und Verabreichung von ß-Aminopropionitril über das Trinkwasser.

Fortgeschrittene Modellierung des abdominalen Aortenaneurysmas bei Mäusen durch Kombination von topischer Elastase und oralem ß-Aminopropionitril

Das vorliegende Protokoll beschreibt ein standardisiertes Operationsverfahren zur Induktion von Karotisaneurysmen in einem Mausmodell durch einen einzigen chirurgischen Eingriff.

Ein Mausmodell der Karotis-Aneurysmabildung

Dieses Protokoll bietet eine wiederholbare und zuverlässige Methode zur Induzierung von abdominalen Aortenaneurysmen (AAAs) bei C57BL/6-Mäusen mittels Elastinsensibilisierung und perivaskulärer Elastase-Anwendung als AAA-Modell, das eine Immunsensibilisierungskomponente integriert.

Zuverlässige Erstellung eines murinalen abdominalen Aortenaneurysma-Modells unter Verwendung von Elastinsensibilisierung und perivaskulärer Elastase

Orthotopen Tiermodellen von Eierstockkrebs zu replizieren besser menschlicher Erkrankungen und damit zu unserem Verständnis der Tumorprogression und Ansprechen des Tumors auf die Therapie. Ein Maus-Modell erhält eine intrabursalen Injektion von Luciferase-exprimierenden Eierstock-Tumorzellen. Die Behandlung erfolgt über eine orale Sonde verabreicht. Das Tumorwachstum wird durch...

In-vivo-Imaging und therapeutische Behandlungen in einem orthotopen Mausmodell des Eierstockkrebs

Erzeugung induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS) Linien produziert Linien unterschiedlicher Entwicklungspotenzial, auch wenn sie Standard-Tests für Pluripotenz passieren. Hier beschreiben wir ein Protokoll, um Mäuse vollständig aus iPS, die die iPSC Linien definiert als die über volle Pluripotenz abgeleitet...

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In-vivo-4-Dimensional-Tracking von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen im erwachsenen Maus Schädeldachknochenmark

Lernen Sie ein standardisiertes chirurgisches Protokoll zur Induktion eines abdominellen Aortenaneurysmas bei Mäusen mittels perivaskulärer Elastase-Applikation. Diese Methode bietet hohe Reproduzierbarkeit und niedrige Kosten.

Mausmodell für das abdominale Aortenaneurysma, das durch die perivaskuläre Anwendung der Elastase induziert wird

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