Name: Laparoskopische Eizellentnahme und Kryokonservierung während der Vaginoplastik zur Behandlung des Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Syndroms (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: Erfahren Sie die kombinierte laparoskopische Vaginoplastik und Eizellentnahme zur Behandlung des Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser-Syndroms. Diese Methode minimiert invasive Eingriffe und ermöglicht die Kryokonservierung für zukünftige Fruchtbarkeit.

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Die lokale Ethikkommission des tertiären Überweisungszentrums für MRKHS (IRCCS San Raffaele University Hospital, Mailand, Italien) wurde benachrichtigt und genehmigte das Protokoll vor seiner Umsetzung im Juli 2017. Alle Patientinnen oder Erziehungsberechtigten gaben eine unterzeichnete Einverständniserklärung für die laparoskopische Eizellentnahme und Kryokonservierung während der Vaginoplastik und für die Verwendung anonymisierter klinischer / Labordaten für wissenschaftliche Zwecke.
1. Teamzusammensetzung
<ol><li>Benennen Sie ein engagiertes Team, bestehend aus einem erfahrenen laparoskopischen Chirurgen, einem erfahrenen Vaginalchirurgen, einem Unfruchtbarkeitsexperten, einem engagierten Psychologen und einer engagierten Krankenschwester.</li>
	<li>Unterstützen Sie den Patienten als Team während der gesamten Einrichtung und Durchführung des Verfahrens.</li>
</ol>2. Diagnostische Abklärung und Beratung
<ol><li>Führen Sie eine transabdominale Becken- und Bauchsonographie am Patienten durch, um die Eierstöcke zu visualisieren und die Anzahl der Antralfollikel (AFC) zu schätzen. Bestimmen Sie die Blutspiegel des Anti-Müller-Hormons (AMH), um die Gonadotropin-Anfangsdosis für eine kontrollierte Stimulation der Eierstöcke zu optimieren. Durchführung serologischer Tests auf Infektionskrankheiten (HIV-Ab, HCV-Ab, HBV-Ab, RPR-TPHA) gemäß nationalen/lokalen Protokollen zur Kryokonservierung von Geweben/Gameten.</li>
	<li>Beratung der Patientin über die sexuellen und reproduktiven Aspekte der MRKHS, einschließlich der nicht-chirurgischen und chirurgischen Vaginoplastik, die Kosten und Rechtsvorschriften im Zusammenhang mit der Leihmutterschaft, die Perspektive der Gebärmuttertransplantation im Rahmen eines experimentellen Programms, die verschiedenen Ansätze für die Eizellentnahme und die Durchführung der Kryokonservierung von Eizellen in Bezug auf Lebendgeburtenraten.</li>
	<li>Bieten Sie der Patientin eine psychologische Untersuchung an, um sie während des Verfahrens zu unterstützen und die emotionale Stabilität und das Engagement und den Wunsch nach zukünftiger Mutterschaft zu beurteilen. Einholung einer unterschriebenen, informierten Einwilligung für die gleichzeitige laparoskopische Eizellentnahme, Gametenkryokonservierung und laparoskopische Vaginoplastik. Im Falle eines minderjährigen Patienten führen Sie die klinischen Bewertungen in Anwesenheit der Eltern durch, die auch die Einverständniserklärung des Angehörigen unterzeichnen.</li>
</ol>3. Planung des chirurgischen Eingriffs und der kontrollierten Stimulation der Eierstöcke
<ol><li>Planen Sie das Verfahren der gleichzeitigen laparoskopischen Eizellentnahme, Gametenkryokonservierung und laparoskopischen Vaginoplastik unter Berücksichtigung der Verfügbarkeit des klinischen Teams (siehe oben) sowie der des Laborpersonals, das die Vitrifikation der Eizellen durchführt.</li>
	<li>Beginnen Sie mit der kontrollierten Stimulation der Eierstöcke (COS) am Tag -14 ab dem Tag der Operation unter Berücksichtigung einer geplanten COS-Dauer von n = 12 Tagen und den 36 Stunden, die zwischen der Auslösung des Eisprungs und der Eizellentnahme und Vitrifikation erforderlich sind.</li>
	<li>Falls COS eine andere Dauer als erwartet erfordert, planen Sie die Operation entsprechend.</li>
</ol>4. Kontrollierte Stimulation der Eierstöcke: Anfangsdosis, Dosisanpassung und -überwachung, Auslösung der endgültigen Eizellreifung
<ol><li>Starten Sie COS in jeder Phase des Eierstockzyklus, wie es üblicherweise im Zusammenhang mit "zufälligen Start" -Protokollen zur Erhaltung der Fruchtbarkeit geschieht.</li>
	<li>Wählen Sie die Anfangsdosis des follikelstimulierenden Hormons (FSH) / humanen menopausalen Gonadotropins (hMG) basierend auf AFC und AMH des Patienten und weisen Sie den Patienten an, die täglich selbst verabreichten subkutanen Injektionen fortzusetzen. Führen Sie anschließend individuelle Dosisanpassungen basierend auf der ovariellen Reaktion durch.</li>
	<li>Überwachung der ovariellen Reaktion durch seriellen transabdominalen Ultraschall und gleichzeitige Messungen von E2 und P (Tag 1, Tag 6, Tag 8, Tag 10 und Tag 12).</li>
	<li>Auslösen der endgültigen Eizellreifung durch subkutane Verabreichung von 0,2 ml eines Gn-RH-Analogons (Triptorelin).</li>
</ol>5. Klinisches Verfahren (Laparoskopie): Eizellentnahme
<ol><li>Positionieren Sie den Patienten in einer modifizierten dorsalen Lithotomieposition, die einen hervorragenden gleichzeitigen Zugang zu Bauch und Perineum ermöglicht. Induktion einer Vollnarkose und intravenöse Verabreichung von 2 g Cefazolin gemäß der routinemäßigen intraoperativen Antibiotikaprophylaxe. Positionieren Sie einen intravesikalen Foley-Katheter.</li>
	<li>Stellen Sie ein Pneumoperitoneum mit einer peri-umbilical Veress-Nadel her, positionieren Sie einen 10-mm-Nabeltrokar zum Einführen des Laparoskops und zwei 5-mm-Trokare im rechten und linken oberen Quadranten. Verwenden Sie unter laparoskopischem Sehen eine 17 G Einzellumennadel, die mit einer Aspirationspumpe verbunden ist, wie sie üblicherweise für die transvaginale Entnahme verwendet wird, durch den rechten und linken Trokar zur Punktion des rechten bzw. linken Eierstocks.</li>
	<li>Heben und halten Sie die Eierstöcke mit einer laparoskopischen Pinzette, um die Freilegung der Follikel zu erleichtern. Wenn Sie mehrere Follikel ansaugen, die nahe beieinander liegen, behalten Sie die Nadelspitze im Eierstock bei, um die Häufigkeit der Transfixierung der Eierstockrinde und das inhärente Blutungsrisiko zu reduzieren.</li>
</ol>6. Klinisches Verfahren (Laparoskopie): Vaginoplastik
HINWEIS: Die Schritte der Vaginoplastik bleiben im Vergleich zur laparoskopisch modifizierten Technik des Davydov unverändert12.
<ol><li>Sezieren Sie das Peritoneum, indem Sie den Peritonealstrang quer zwischen den beiden rudimentalen Uterushörnern anheben und schneiden und dann den Schnitt anterior, lateral und posterior verlängern.</li>
	<li>Beginnen Sie eine Handtaschennaht aus synthetisch resorbierbarem Polydioxanon (PDS) 2-0-Monofilament in jedem Hemipelvis, aus dem mobilisierten Peritoneum über der Blase, mit aufeinanderfolgender Transfixion des runden Bandes, des Tubenisthmus, des uterovariellen Bandes und des lateralen Peritonealblattes. Dann schließen Sie in die beiden Nähte den lateralen Aspekt des Mesorektums und den vorderen Aspekt der rektalen Serosa unmittelbar unterhalb der rektosigmoidalen Verbindung ein.</li>
	<li>Belichten Sie das vaginale Grübchen auf dem perinealen Zugang und führen Sie einen H-förmigen Schnitt durch und schaffen Sie einen neovaginalen Raum durch scharfe und stumpfe Dissektion des vesikorektalen Raumes. Ziehen Sie dann die präparierten Peritonealränder bis zum Rand des Vaginalvestibulums herunter. Position unterbrochene Nähte bei PDS 3-0 für die peritoneal-vestibuläre Anastomose. Zum Schluss legen Sie eine paraffinbeschichtete Gaze in die peritoneumbeschichtete Neovagina.</li>
</ol>7. IVF-Labor: am Tag vor der Eizellentnahme
<ol><li>Bereiten Sie 2 bis 5 Rundbodenröhrchen mit 9 ml Quinn's Advantage Medium mit HEPES (ergänzt mit 5% humanem Serumalbumin [HSA]) entsprechend der Anzahl der erwarteten Follikel vor und inkubieren Sie sie über Nacht bei 37 °C.</li>
	<li>Bereiten Sie ein oder zwei 4-Well-Schalen mit 0,5 ml/Vertiefung Befruchtungsmedium (ergänzt mit 5% HSA) vor, die mit 0,5 ml Mineralöl für die Embryokultur bedeckt sind, und inkubieren Sie es über Nacht bei 37 °C in kontrollierter Atmosphäre (6% CO2, 5%O2).</li>
	<li>Bereiten Sie eine Schale mit 9 (30 μL) Tropfen Continuous Single Culture (CSCM) medium (ergänzt mit 10% Serumersatzpräparat [SSS]) vor, die mit 6 ml Mineralöl bedeckt sind. Über Nacht bei 37 °C in kontrollierter Atmosphäre (6% CO2, 5%O2) inkubieren.</li>
</ol>8. IVF-Labor: Eizellentnahme
<ol><li>Bereiten Sie eine Lösung von Quinn's Advantage Medium mit HEPES (ergänzt mit 5% HSA) mit Heparin in einer Endkonzentration von 10 IE / ml vor, in der follikuläre Aspirate gesammelt werden.</li>
	<li>Ähnlich wie bei der routinemäßigen transvaginalen Eizellentnahme 13 die follikulären Aspirate in 10 ml Rundbodenröhrchen sammeln, in einem tragbaren Inkubator warm gehalten (37 °C) und sofort in das embryologische Labor transportiert, mit einer Transportzeit von ca.10 min.</li>
	<li>Untersuchen Sie die Follikelflüssigkeit in einer vorgewärmten sterilen 90-mm-Petrischale, um Cumulus-Eizell-Komplexe (COC) zu identifizieren. Sobald ein COC erkannt wurde, spülen Sie es in einer zentralen Well-Schale, die mit 1 ml vorgewärmtem Quinn's Advantage Medium mit HEPES (ergänzt mit 5% HSA) gefüllt ist.</li>
	<li>Wenn alle COCs gesammelt sind, legen Sie sie in die 4-Well-Schale, die das Befruchtungsmedium enthält, und beschriften Sie den Deckel und den Boden mit Daten zur Identität des Patienten.</li>
	<li>Sie werden bei 37 °C in kontrollierter Atmosphäre (6% CO2, 5%O2) inkubiert.</li>
	<li>Stellen Sie sicher, dass eine doppelte Überprüfung des Verfahrens durch ein zweites Mitglied des Laborpersonals durchgeführt wird.</li>
</ol>9. Eizelldenudation
<ol><li>Führen Sie die Entfernung von Kumulus- / Koronazellen innerhalb von 38 Stunden nach dem Ovulationsauslöser durch.</li>
	<li>Bereiten Sie eine Lösung von Quinn's Advantage Medium mit HEPES (ergänzt mit 5% HSA) mit Hyaluronidase in einer Endkonzentration von 10 I.E./ml vor.</li>
	<li>Bereiten Sie eine zentrale Wellschale mit 1 ml vorgewärmtem Quinn's Advantage Medium mit HEPES (ergänzt mit 5% HSA) mit Hyaluronidase und einer weiteren mit 1 ml vorgewärmtem HEPES-gepuffertem Medium (ergänzt mit 5% HSA) vor.</li>
	<li>Beschriften Sie das Eizelldenudationsgeschirr mit Patientenidentifikationsdaten.</li>
	<li>Legen Sie COCs in die zentrale Vertiefung, die das Enzym enthält, um die Cumuluszellen mit einer Pasteur-Pipette aus Glas zu dispergieren, und pipettieren Sie die Lösung mit den COCs vorsichtig bis zu 30 s lang auf und ab.</li>
	<li>Bewegen Sie die Eizellen in die zweite zentrale Well-Schale, die nur HEPES-gepuffertes Medium enthält, und achten Sie darauf, eine minimale Menge des Enzyms zu verdrängen.</li>
	<li>Entfernen Sie die restlichen Koronazellen mit entblößenden Pipetten mit abnehmendem Innendurchmesser (170-140 μm).</li>
	<li>Beurteilen Sie das Stadium der Eizellreifung, wobei Metaphase-II-Eizellen (MII), die durch die Extrusion des ersten Polkörpers gekennzeichnet sind, von Metaphase-I-Eizellen (MI) und Keimbläschen (GV) getrennt werden.</li>
	<li>Transfer der MII-Eizellen in eine IVF-Kultur 60 mm Petrischale mit neun (30 μL) Tropfen Continuous Single Culture (CSCM) Medium (ergänzt mit 10% Serumersatzergänzung [SSS]), die mit 6 ml Mineralöl bedeckt sind.</li>
	<li>Sie werden bei 37 °C in kontrollierter Atmosphäre (6% CO2, 5%O2) inkubiert.</li>
</ol>10. Vitrifikation der Eizellen
<ol><li>Führen Sie die Vitrifikation von MII-Eizellen unmittelbar nach der Eizelldenudation gemäß dem vom Hersteller des Vitrifikationskits bereitgestellten Protokoll durch.</li>
	<li>Auf Raumtemperatur (25-27 °C) bringen: die Gleichgewichtslösung (ES), die Vitrifikationslösung (VS) und die Waschlösung (WS), fast 30 min vor dem Eingriff. HINWEIS: Wie von den Herstellern berichtet, enthält ES 7,5% DMSO, 7,5% Ethylenglykol, 20% Dextran-Serumergänzung (DSS), Gentamicin in M-199 HEPES-gepuffertem Medium; VS enthält 15% DMSO, 15% Ethylenglykol, 0,5 M Saccharose, 20% DSS, Gentamicin in einem M-199 HEPES-gepufferten Medium und WS enthält 20% DSS, Gentamicin in einem M-199 HEPES-gepufferten Medium.</li>
	<li>Verwenden Sie für ein Kryogerät Cryotop, das aus einem feinen Streifen transparenter Folie besteht, der an einem Kunststoffgriff befestigt ist.</li>
	<li>Beschriften Sie die Kryogeräte mit dem Namen der Patientin, dem Geburtsdatum, der ID, dem Datum der Kryokonservierung und der Anzahl der Eizellen, die auf ein einzelnes Gerät geladen sind.</li>
	<li>Beschriften Sie die Vitrifikationsschale mit dem Namen und der ID des Patienten.</li>
	<li>Stellen Sie sicher, dass ein Zeugenbediener die korrekten Patientendaten auf den Kryogeräten und der Schüssel überprüft.</li>
	<li>Füllen Sie eine Kühlbox bis oben mit frischem flüssigem Stickstoff und decken Sie sie bis zum Gebrauch ab, um die Dispersion und Verdunstung zu minimieren.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Stripperpipette mit einem Innendurchmesser von 170 μm, um eine Beschädigung der Eizellen während der Manipulation zu vermeiden.</li>
	<li>Schütteln Sie jede Durchstechflasche mit ES, VS und WS vorsichtig, um den Inhalt vor Gebrauch zu mischen.</li>
	<li>Bereiten Sie den Deckel einer 60-mm-Petrischale mit einem Tropfen 50 μL WS1 vor (Abbildung 1A).</li>
	<li>Tropfen kurz vor Gebrauch platzieren, um die Verdunstung des Mediums zu begrenzen.</li>
	<li>Nehmen Sie die Eizellschale aus dem Inkubator und übertragen Sie die MII-Eizellen (bis zu 3 gleichzeitig) mit minimalem Volumen des Mediums aus der Kulturschale in die 50 μL WS.</li>
	<li>Geben Sie 50 μL Tropfen WS2, ES1 und ES2 in unmittelbarer Nähe ab und übertragen Sie Eizellen vom Tropfen WS1 in den Tropfen WS2 (Abbildung 1B).</li>
	<li>Verschmelzen Sie den Tropfen von ES1 zu WS2 und warten Sie 2 Minuten auf das spontane Mischen beider Lösungen.</li>
	<li>Verschmelzen Sie dann den Tropfen von ES2 mit den zuvor zusammengeführten Tropfen und lassen Sie ihn weitere 2 Minuten einwirken.</li>
	<li>Zum Schluss einen neuen 100 μL Tropfen ES3 zu den zuvor zusammengeführten Tropfen verschmelzen und 1 weitere Minute einwirken lassen.</li>
	<li>Geben Sie die Eizellen für 10 min in einen 100 μL Tropfen ES4 (Abbildung 1C).</li>
	<li>Geben Sie zwei 50-μl-Tropfen VS und einen 100-μL-VS-Tropfen ab (Abbildung 1D).</li>
	<li>Bewegen Sie die Eizellen nacheinander für 60 s in die drei VS-Tropfen, so dass die Eizellen für ~ 20 s in jedem Tropfen bleiben.</li>
	<li>Wenn etwa 10 s vor dem Ende der 60 s Inkubationszeit übrig sind, legen Sie das Kryogerät unter das Mikroskop.</li>
	<li>Tragen Sie die Eizellen an der Spitze der Pipette und legen Sie sie mit der minimalen Menge an VS auf das Kryogerät.</li>
	<li>Saugen Sie den Überschuss an VS ab und lassen Sie die Eizellen von einer dünnen Schicht VS bedeckt.</li>
	<li>Tauchen Sie das Kryogerät direkt in flüssigen Stickstoff und bewegen Sie es schnell. Halten Sie das Gerät in flüssigem Stickstoff und decken Sie es mit dem Schutzdeckel ab.</li>
	<li>Lagern Sie das Kryogerät in einem Speichersystem (z. B. Visiotube) und legen Sie es in den kryogenen Tank. Zeichnen Sie Kryokonservierungsdaten in der Labordatenbank und auf dem Laborblatt auf.</li>
</ol>11. Stationäre postoperative Versorgung
<ol><li>Entfernen Sie den Blasenkatheter und die mit vaginalem Paraffin beschichtete Gaze 48 h nach der Operation.</li>
	<li>Erkunden Sie die Neovagina des Patienten nach der Entfernung digital und weisen Sie den Patienten an, wie er die digitale Erkundung durchführen soll. Beschichten Sie dann eine Vaginalform (9 cm lang und 2 cm im Durchmesser) mit Östrogengel (um die Epithelisierung zu begünstigen) und weisen Sie den Patienten an, wie der Schimmel eingeführt und gepflegt werden soll.</li>
	<li>Ab Tag 3 nach der Operation und an jedem folgenden Tag weisen Sie den Patienten an, wie die Form positioniert und für mindestens 2 Stunden täglich an Ort und Stelle gehalten werden soll.</li>
	<li>Wenn keine Komplikationen auftreten, entlassen Sie den Patienten am Tag 5-6 nach der Operation.</li>
</ol>12. Ambulante postoperative Versorgung
<ol><li>Weisen Sie den Patienten an, wie er eine neovaginale Dilatation für 2 Monate mit dem gleichen Schimmel (9 cm Länge und 2 cm Durchmesser) durchführt, der während des Krankenhausaufenthalts verwendet wird, und dann einem größeren (11 cm lang und 2,5 cm im Durchmesser).</li>
	<li>Lassen Sie die Patientin nach dem 3-monatigen Besuch mit der sexuellen Aktivität beginnen und informieren Sie sie, die Schimmelpilze an den Tagen ohne Geschlechtsverkehr weiter zu verwenden.</li>
</ol>13. Follow-up
<ol><li>Planen Sie Follow-up-Besuche 1, 3, 6 und 12 Monate nach dem Eingriff.</li>
	<li>Beurteilen Sie bei jedem Follow-up-Besuch die Einhaltung der Dilatationsübungen und fragen Sie die Patientin, ob sie eine Einschränkung ihrer täglichen Aktivitäten, Schmerzen, Harnwegssymptome oder sexuelle Dysfunktion erlebt hat (ab dem Besuch nach dem dritten Monat nach der Operation). Führen Sie bei jedem Folgebesuch eine gynäkologische Untersuchung durch, um die Breite, Länge, Suspension und Beweglichkeit der Adnexa zu messen.</li>
</ol>

<ol><li>Committee on Adolescent Health Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ACOG+Committee+Opinion+No.+728%3A+M%C3%BCllerian+Agenesis%3A+Diagnosis%2C+Management%2C+And+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">ACOG Committee Opinion No. 728: Müllerian Agenesis: Diagnosis, Management, And Treatment.</a> Obstetrics and Gynecology. 131 (1), 35-42 (2018).</li>
<li>Reichman, D. E., Laufer, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome%3A+Fertility+counseling+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome: Fertility counseling and treatment.</a> Fertility and Sterility. 94 (5), 1941-1943 (2010).</li>
<li>Ben-Rafael, Z., Bar-Hava, I., Levy, T., Orvieto, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplifying+ovulation+induction+for+surrogacy+in+women+with+Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Simplifying ovulation induction for surrogacy in women with Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.</a> Human Reproduction. 13 (6), 1470-1471 (1998).</li>
<li>Beski, S., Gorgy, A., Venkat, G., Craft, I. L., Edmonds, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+surrogacy%3A+a+feasible+option+for+patients+with+Rokitansky+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Gestational surrogacy: a feasible option for patients with Rokitansky syndrome.</a> Human Reproduction. 15 (11), 2326-2328 (2000).</li>
<li>Brännström, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Livebirth+after+uterus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Livebirth after uterus transplantation.</a> Lancet. 385 (9968), 607-616 (2015).</li>
<li>Sreenivas, K., Campo-Engelstein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Domestic+and+international+surrogacy+laws%3A+implications+for+cancer+survivors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+and+Research%22%5BJournal%5D)">Domestic and international surrogacy laws: implications for cancer survivors.</a> Cancer Treatment and Research. 156, 135-152 (2010).</li>
<li>Soderstrom-Anttila, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogacy%3A+outcomes+for+surrogate+mothers%2C+children+and+the+resulting+families-a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproductive+Update%22%5BJournal%5D)">Surrogacy: outcomes for surrogate mothers, children and the resulting families-a systematic review.</a> Human Reproductive Update. 22 (2), 260-276 (2016).</li>
<li>Wood, E. G., Batzer, F. R., Corson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+response+to+gonadotrophins%2C+optimal+method+for+oocyte+retrieval+and+pregnancy+outcome+in+patients+with+vaginal+agenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Ovarian response to gonadotrophins, optimal method for oocyte retrieval and pregnancy outcome in patients with vaginal agenesis.</a> Human Reproduction. 14 (5), 1178-1181 (1999).</li>
<li>Raziel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogate+in+vitro+fertilization+outcome+in+typical+and+atypical+forms+of+Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Surrogate in vitro fertilization outcome in typical and atypical forms of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.</a> Human Reproduction. 27 (1), 126-130 (2012).</li>
<li>Egarter, C., Huber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+stimulation+and+retrieval+of+oocytes+in+patient+with+Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Successful stimulation and retrieval of oocytes in patient with Mayer-Rokitansky-Küster syndrome.</a> Lancet. 1 (8597), 1283(1988).</li>
<li>Candiani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+retrieval+during+laparoscopic+vaginoplasty+to+reduce+invasiveness+in+the+treatment+of+Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Minimally+Invasive+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Oocyte retrieval during laparoscopic vaginoplasty to reduce invasiveness in the treatment of Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome.</a> Journal of Minimally Invasive Gynecology. 27 (1), 74-79 (2020).</li>
<li>Fedele, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+a+neovagina+by+Davydov%27s+laparoscopic+modified+technique+in+patients+with+Rokitansky+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Creation of a neovagina by Davydov's laparoscopic modified technique in patients with Rokitansky syndrome.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 202 (1), 1-6 (2010).</li>
<li>ESHRE Working Group on Ultrasound in ART et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+good+practice+in+ultrasound%3A+oocyte+pick+up%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Open%22%5BJournal%5D)">Recommendations for good practice in ultrasound: oocyte pick up.</a> Human Reproduction Open. 2019 (4), (2019).</li>
<li>Callens, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+surgical+and+non-surgical+treatments+for+vaginal+hypoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproductive+Update%22%5BJournal%5D)">An update on surgical and non-surgical treatments for vaginal hypoplasia.</a> Human Reproductive Update. 20 (5), 775-801 (2014).</li>
<li>Sönmezer, M., Gülümser, Ç, Sönmezer, M., Sükür, Y. E., Atabekoğlu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transabdominal+ultrasound+guided+oocyte+retrieval+using+vaginal+ultrasound+probe%3A+Definition+of+the+technique%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Obstetrics+and+Gynaecology+Research%22%5BJournal%5D)">Transabdominal ultrasound guided oocyte retrieval using vaginal ultrasound probe: Definition of the technique.</a> The Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 47 (2), 800-806 (2021).</li>
<li>Raju, G. A., Haranath, G. B., Krishna, K. M., Prakash, G. J., Madan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+pregnancy+with+laparoscopic+oocyte+retrieval+and+in+vitro+fertilization+in+Mullerian+agenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Singapore+Medicine+Journal%22%5BJournal%5D)">Successful pregnancy with laparoscopic oocyte retrieval and in vitro fertilization in Mullerian agenesis.</a> Singapore Medicine Journal. 47 (4), 329-331 (2006).</li>
<li>Liszewska-Kapłon, M., Strózik, M., Kotarski, Ł, Bagłaj, M., Hirnle, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome+as+an+interdisciplinary+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Clinical+and+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome as an interdisciplinary problem.</a> Advances in Clinical and Experimental Medicine. 29 (4), 505-511 (2020).</li>
<li>Wagner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+management+during+the+adolescent+transition+period+of+girls+and+young+women+with+Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome+%28MRKHS%29%3A+A+systematic+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Orphanet+Journal+of+Rare+Diseases%22%5BJournal%5D)">Treatment management during the adolescent transition period of girls and young women with Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome (MRKHS): A systematic literature review.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 11 (1), 152(2016).</li>
<li>Bean, E. J., Mazur, T., Robinson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome%3A+sexuality%2C+psychological+effects%2C+and+quality+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+and+Adolescent+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome: sexuality, psychological effects, and quality of life.</a> Journal of Pediatric and Adolescent Gynecology. 22 (6), 339-346 (2009).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.

Dieses Protokoll reduziert die Invasivität bei der Behandlung von MRKHS durch die Kombination der Verfahren der Vaginoplastik und der Eizellentnahme. Zu diesem Zweck ist es entscheidend, dass ein engagiertes Team benannt wird, um sicherzustellen, dass der Zeitpunkt des COS, der chirurgische Eingriff und die Vitrifikation der Eizellen effizient geplant werden.
MRKHS-Patienten, für die diese kombinierte laparoskopische Methode voraussichtlich am vorteilhaftesten ist, sinddiejen...

Mit einer Inzidenz von etwa 1 von 4-10.000 Frauen ist MRKHS die Ursache für 15% der primären Amenorrhoe-Fälle. MRKHS ist gekennzeichnet durch das angeborene Fehlen des oberen Segments der Vagina und der Gebärmutter, während Harnwegs- und Skelettanomalien variabel assoziiert sind. Genauer gesagt ist normalerweise ein Vaginalgewölbe mit einer Tiefe von 1-2 cm vorhanden, und zwei rudimentale Gebärmutterhörner können gefunden werden1.
In der Vergangenheit bestand das primäre medizinische Interesse bei MRKHS darin, normalen Geschlechtsverkehr zu ermöglichen, was in der Regel den Aufbau einer Neovagina durch nicht-chirurgische oder chirurgische Ansätze erfordert2. Fortschritte in der Reproduktionsmedizin ermöglichen jedoch derzeit die genetische Mutterschaft bei MRKHS-Patienten, entweder durch Leihmutterschaft 3,4 oder - in jüngerer Zeit - Gebärmuttertransplantation5. Während die Gebärmuttertransplantation noch ein experimentelles Verfahren ist, ist die Leihmutterschaft in vielen Ländern weltweit verfügbar6, und die berichteten geburtshilflichen und psychosozialen Ergebnisse sind mit denen der Standard-In-vitro-Fertilisation und der Eizellspende vergleichbar7.
Sowohl die Leihmutterschaft als auch die Gebärmuttertransplantation erfordern die Entnahme von Eizellen und die In-vitro-Fertilisation, aber es besteht kein Konsens darüber, wie die Eizellentnahme bei Patienten mit MRKHS durchzuführen ist. Ein transvaginaler Ansatz kann aufgrund unzureichender vaginaler Elastizität8 auch nach Vaginoplastik, atypischer Lage der Eierstöcke9 oder übermäßigem Abstand zwischen den Eierstöcken und der Vaginalmanschette 4,10 nicht durchführbar sein. In diesen Fällen stellt die laparoskopische Eizellentnahme den optimalen Ansatz in Bezug auf den chirurgischen Zugang dar. Da sich die meisten MRKHS-Patientinnen derzeit einer laparoskopischen Neovaginoplastik unterziehen, empfehlen wir jedoch, zum Zeitpunkt der Operation für die Vaginoplastik11 eine laparoskopische Eizellentnahme durchzuführen, gefolgt von der Kryokonservierung der Eizellen für die zukünftige Verwendung, wodurch die Invasivität minimiert und gleichzeitig die Behandlung der sexuellen und reproduktiven Funktion von MRKHS-Patientinnen kombiniert wird.
Demographische Daten von Patienten Dreiundzwanzig MRKH-Patienten wurden bisher mit diesem Protokoll behandelt. Anamnestische, instrumentelle und Laborbefunde von Patienten sind in Tabelle 1 zusammengefasst. Sofern in Tabelle 1 nicht anders angegeben, wurden keine assoziierten angeborenen Anomalien gefunden.

<table><tbody><tr><td>Verfahren zur Eizellentnahme</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ausrüstung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 O2 Inkubator</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar-Flow-Haube</td><td>Cooper Surgical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tragbarer Inkubator</td><td>Cooper Chirurgisches</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Verbrauchsmaterialien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>14 mL Polystyrol-Rundbodenröhrchen</td><td>Falcon</td><td>352057</td><td></td></tr><tr><td>4-Well-Schüssel</td><td>Nunc</td><td>144444</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Petrischale</td><td>Nunc</td><td>FA9150270</td><td></td></tr><tr><td>90 mm Petri Schale</td><td>Nunc</td><td>FA9150360</td><td></td></tr><tr><td>Humanserum Albumin 100 mg/ml in normaler Kochsalzlösung (5%)</td><td>Origio</td><td>3001</td><td></td></tr><tr><td>Mineralöl für die Embryokultur</td><td>Origio</td><td>4008</td><td></td></tr><tr><td>One Well Schale</td><td>Oosafe</td><td>OOPW-CW05</td><td></td></tr><tr><td>Quinn' s Vorteil Düngemedium SAGE</td><td>Origio</td><td>1020</td><td></td></tr><tr><td>Quinn' s Advantage medium mit HEPES</td><td>Origio</td><td>1024</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Glaspasteurpipetten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eizelldenudation<</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>u>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 O2 Inkubator</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet verstellbarer Griff Set</td><td>Cook</td><td>G18674</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar Flow Hood</td><td>Cooper Chirurgisches</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Verbrauchsmaterialien4-Well-Schale</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Nunc</td><td>144444</td><td></td></tr><tr><td>CSCM (Continuos Einzelkultur) Medium</td><td>Fujifilm irvine Scientific</td><td>90165</td><td></td></tr><tr><td>Humanalbumin 100 mg/ml in normaler Kochsalzlösung (5%)</td><td>Origio</td><td>3001</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90101</td><td></td></tr><tr><td>IVF-Kultur 60 mm Petrischale</td><td>Nunc</td><td>FA9150270</td><td></td></tr><tr><td>Mineralöl für die Embryokultur</td><td>Origio</td><td>4008</td><td></td></tr><tr><td>One Well Schale</td><td>Oosafe</td><td>OOPW-CW05</td><td></td></tr><tr><td>Quinn' s Vorteil Medium mit HEPES</td><td>Origio</td><td>1024</td><td></td></tr><tr><td>Serum Substitute Supplement</td><td>Fujifilm irvine Scientific</td><td>99193</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Glaspasteurpipetten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stripping Pipettenspitzen (140 &mu; m)</td><td>Cook</td><td>K-FPIP-1140-10BS-5</td><td></td></tr><tr><td>Pipettenspitzen abisolieren (170 &mu; m)</td><td>Cook</td><td>K-FPIP-1170-10BS-5</td><td></td></tr><tr><td>Vitrifikation von Eizellen</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>35 mm Petrischale</td><td>NUNC</td><td>150255</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Petrischale</td><td>NUNC</td><td>150270</td><td></td></tr><tr><td>90 mm Petrischale</td><td>NUNC</td><td>150360</td><td></td></tr><tr><td>Behälter für Kühlgestell</td><td>Kitazato</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kryogerät/Kryotop</td><td>Kitazato</td><td>81111</td><td></td></tr><tr><td>Elektronischer Timer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet</td><td>COOK</td><td>K- 1000</td><td></td></tr><tr><td>Gilson Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>Labordrucker LabXpert</td><td>Brady</td><td>XSL-86-461</td><td></td></tr><tr><td>Spitzen 20-200 &micro; L</td><td>Thermo Scientific</td><td>2160G</td><td></td></tr><tr><td>Spitzen 2-20 & Mikro; L</td><td>Thermo Scientific</td><td>2139-HR</td><td></td></tr><tr><td>Visotubes</td><td>Cryo Bio System</td><td>20</td><td></td></tr><tr><td>Vitrifikations-Gefrierset</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90133-SO</td><td></td></tr><tr><td>Vitrifikations-Auftauset</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90137-SO</td><td></td></tr></tbody></table>

laparoskopische eizellentnahme und kryokonservierung während der vaginoplastik zur behandlung des mayer-rokitansky-kuster-hauser-syndroms

Laparoscopic Oocyte Retrieval and Cryopreservation during Vaginoplasty for Treatment of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome

Bei Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Syndrom (MRKHS)-Patientinnen, die für eine laparoskopische Vaginoplastik vorgesehen sind und den Wunsch nach biologischer Mutterschaft haben, schlagen wir vor, dass eine gleichzeitige laparoskopische Eizellentnahme zur Kryokonservierung durchgeführt wird. Die Eizellentnahme wird zu Beginn der Laparoskopie durchgeführt. Rechts und links sind 5 mm Trokare positioniert, durch die eine 17 G Eizellenaspirationsnadel zur Punktion des rechten bzw. linken Eierstocks verwendet wird. Um die Freilegung der Follikel zu erleichtern, werden die Eierstöcke mobilisiert und mit laparoskopischen Pinzetten gehalten.
Wenn mehrere Follikel nahe beieinander abgesaugt werden, wird die Nadelspitze im Eierstock verbleiben, um die Häufigkeit zu reduzieren, mit der die Eierstockrinde transfixiert wird, und aufgrund des inhärenten Blutungsrisikos. Die nachfolgenden Schritte sind im Vergleich zur laparoskopisch modifizierten Davydov-Technik für die Vaginoplastik unverändert. Vor der Operation wird eine kontrollierte ovarielle Stimulation mit einem Gonadotropin-Hormon-Releasing-Hormon (Gn-RH) -Antagonistenprotokoll durchgeführt, und das begleitende Verfahren der Eizellentnahme und Vaginoplastik wird 36 Stunden nach dem endgültigen Follikelreifungsauslöser geplant. Follikelflüssigkeit wird in den gleichen 10 ml sterilen Röhrchen gesammelt, die während der transvaginalen Eizellentnahme verwendet werden, und in einem Wärmeblock (37 °C) in das Labor für assistierte Reproduktion überführt, wo reife (Metaphase-II) Eizellen vitrifiziert werden.
In diesem Fall wurde eine Reihe von 23 Frauen mit MRKH, Eizellen erfolgreich entnommen und bei allen Patientinnen kryokonserviert; Die Vaginoplastik wurde anschließend ohne Modifikationen durchgeführt, und die stationäre und ambulante postoperative Versorgung (Tag der Blasenkatheterentfernung, Tag der Krankenhausentlassung, Dilatatoranwendung und Komfort bei der Nachsorge) blieb davon unberührt. Eine postoperative Komplikation trat bei einem Patienten auf (Fieberentwicklung am 5. Tag nach der Operation und intraperitonealer Flüssigkeitsnachweis im transabdominalen Ultraschall) und klang nach konservativer Behandlung ab. Anstatt eine chirurgische Vaginoplastik durchzuführen und die Eizellentnahme bei MRKH-Patientinnen zu verzögern, kombiniert dieser Ansatz beide Verfahren in einer einzigen Laparoskopie, wodurch chirurgische Invasivität und anästhetische Risiken minimiert werden.

Tabelle 2 enthält ovarielle Stimulationsdaten der Patientinnen, während die wichtigsten chirurgischen und funktionellen Ergebnisse in Tabelle 3 beschrieben sind. Die begleitenden laparoskopischen Verfahren der Eizellentnahme und Vaginoplastik wurden bei allen Patientinnen erfolgreich kombiniert. Durchschnittlich wurden 11,4 ± 5,4 (mittlere ± SD) Eizellen entnommen und 9,6 ± 4,3 MII-Eizellen wurden kryokonserviert (Tabelle 3). Nach unserer Erfahrung mit der Kryokonservier...

Ein engagiertes Team kann Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Patientinnen die Möglichkeit bieten, eine kontrollierte Eierstockstimulation und Kryokonservierung der Eizellen zum Zeitpunkt der laparoskopischen Vaginoplastik durchzuführen.

Laparoskopische Eizellentnahme und Kryokonservierung während der Vaginoplastik zur Behandlung des Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Syndroms

In Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome (MRKHS) patients who are scheduled for laparoscopic vaginoplasty and have a desire for biological motherhood, ...

Unser Ansatz ermöglicht es, invasive Erkrankungen bei der Behandlung des Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Syndroms zu minimieren, indem wir laparoskopische Vaginoplastik und Eizellentnahme für zukünftige Fruchtbarkeitsbehandlungen kombinieren. Die Hauptvorteile unseres Ansatzes sind die Notwendigkeit einer einmaligen Anästhesie und die Überwindung der Unmöglichkeit einer transvaginalen Eizellentnahme bei jüngeren Rokitansky-Patienten. Das Verfahren wird von Diana Delprato, einer leitenden Gynäkologin unserer Abteilung für Unfruchtbarkeit, und von Alessandra Alteri und Greta Cermisoni, zwei leitenden klinischen Embryologen aus unserem Labor für assistierte Reproduktion, demonstriert.Beginnen Sie mit der kontrollierten Stimulation der Eierstöcke am Tag 14 ab dem Tag der Operation. Überwachung der ovariellen Reaktion durch seriellen transabdominalen Ultraschall und gleichzeitige Messungen von Estradiol und Progesteron. Etablieren Sie ein Pneumoperitoneum mit einer offenen Technik.Positionieren Sie einen 10-Millimeter-Nabeltrokar zum Einführen des Laparoskops und drei Fünf-Millimeter-Trokare im zentralen, rechten und linken unteren Quadranten. Verwenden Sie unter laparoskopischem Sehen eine 17-Gauge-Nadel mit einem Lumen, die mit einer Aspirationspumpe verbunden ist, wie sie üblicherweise für die transvaginale Entnahme durch die zentralen und linken Trokare zur Punktion des rechten bzw. linken Eierstocks verwendet wird. Heben und halten Sie die Eierstöcke mit einer laparoskopischen Pinzette, um die Freilegung der Follikel zu erleichtern.Wenn Sie mehrere Follikel ansaugen, die nahe beieinander liegen, behalten Sie die Nadelspitze im Eierstock bei, um die Häufigkeit der Transfixierung der Eierstockrinde und das inhärente Blutungsrisiko zu reduzieren. Sezieren Sie das Peritoneum, indem Sie den Peritonealstrang quer zwischen den beiden rudimentalen Uterushörnern anheben und schneiden und dann den Schnitt lateral, anterior und posterior verlängern. Belichten Sie das vaginale Grübchen auf dem perinealen Zugang und führen Sie einen H-förmigen Schnitt durch und schaffen Sie einen neovaginalen Raum durch scharfe und stumpfe Dissektion des vesikorektalen Raumes.Ziehen Sie dann die präparierten Peritonealränder bis zum Rand des Vaginalvestibulums herunter. Position unterbrochene Nähte in Polydioxanon synthetisch resorbierbar 3-0 für die peritoneale vestibuläre Anastomose. Beginnen Sie eine Handtaschennaht aus synthetischem Polydioxanon-synthetischem resorbierbarem 2-0-Monofilament in jedem Hemibecken aus dem mobilisierten Peritoneum oberhalb der Blase mit Bindegliedtransfixierung des Rundbandes, des Tubenisthmus, des utero-ovariellen Bandes und des lateralen Peritonealblattes.Dann schließen Sie in die beiden Nähte den lateralen Aspekt des Mesorektums und den vorderen Aspekt der rektalen Serosa unmittelbar unterhalb des rektosigmoidealen Übergangs ein. Zum Schluss legen Sie eine paraffinbeschichtete Gaze in die peritoneumbeschichtete Neovagina. Sammeln Sie die follikulären Aspirate in 10-Millimeter-Rundbodenröhrchen, die in einem tragbaren Inkubator warm gehalten werden, und transportieren Sie sie sofort mit einer Transportzeit von ca. 10 Minuten zum embryologischen Labor.Wenn alle Cumulus-Eizellkomplexe gesammelt sind, legen Sie sie in die Vier-Well-Schale, die das Befruchtungsmedium enthält, und beschriften Sie den Deckel und den Boden mit Daten zur Identität des Patienten. Inkubieren Sie sie bei 37 Grad Celsius in einer kontrollierten Atmosphäre, die 6% Kohlendioxid und 5% Sauerstoff enthält. Stellen Sie sicher, dass eine doppelte Überprüfung des Verfahrens durch ein zweites Mitglied des Laborpersonals durchgeführt wird.Führen Sie die Entfernung von Cumulus-Coronazellen innerhalb von 38 Stunden nach dem Ovulationsauslöser durch. Legen Sie Cumulus-Eizellkomplexe in die zentrale Vertiefung, die das Enzym enthält, um die Cumuluszellen mit einer Pasteur-Glaspipette zu dispergieren, und pipettieren Sie die Lösung, die Cumulus-Eizellkomplexe enthält, vorsichtig bis zu 30 Sekunden lang auf und ab. Bewegen Sie die Eizellen in die zweite zentrale Well-Schale, die nur HEPES-gepuffertes Medium enthält, und stellen Sie sicher, dass eine minimale Menge des Enzyms verdrängt wird.Entfernen Sie die restlichen Koronazellen mit entblößenden Pipetten mit abnehmenden Innendurchmessern. Beurteilen Sie das Stadium der Eizellreifung und trennen Sie Metaphase-II-Eizellen. Übertragen Sie die Metaphase-II-Eizellen in eine 60-Millimeter-Petrischale der IVF-Kultur, die neun Tropfen eines kontinuierlichen Einzelkulturmediums enthält, das mit sechs Millimetern Mineralöl bedeckt ist.Inkubieren Sie sie bei 37 Grad Celsius in einer kontrollierten Atmosphäre, die 6% Kohlendioxid und 5% Sauerstoff enthält. Füllen Sie eine Kühlbox bis oben mit frischem flüssigem Stickstoff und decken Sie sie ab, bis sie verwendet sind, um die Dispersion und Verdunstung zu minimieren. Verwenden Sie eine Stripperpipette mit einem Innendurchmesser von 170 Mikrometern, um eine Beschädigung der Eizellen während der Manipulation zu vermeiden.Schütteln Sie vorsichtig jede Durchstechflasche mit Gleichgewichtslösung, Vitrifikationslösung und Waschlösung, um den Inhalt vor Gebrauch zu mischen. Bereiten Sie den Deckel einer 60-Milliliter-Petrischale mit einem Tropfen 50 Mikroliter Waschlösung vor. Tropfen kurz vor Gebrauch platzieren, um die Verdunstung des Mediums zu begrenzen.Nehmen Sie die Eizellschale aus dem Inkubator und geben Sie die Metaphase-II-Eizellen mit einem minimalen Volumen Medium aus der Kulturschale in die 50 Mikroliter Waschlösung. Geben Sie 50-Mikroliter-Tropfen Waschlösung zwei, Gleichgewichtslösung eins und Gleichgewichtslösung zwei in unmittelbarer Nähe und übertragen Sie Eizellen aus der Tropfenwaschlösung eins in die Tropfenwaschlösung zwei. Den Tropfen der Gleichgewichtslösung eins mit der Waschlösung zwei verschmelzen und zwei Minuten auf das spontane Mischen beider Lösungen warten.Dann verschmelzen Sie den Tropfen der Gleichgewichtslösung zu den zuvor verschmolzenen Tropfen und lassen Sie weitere zwei Minuten stehen. Zum Schluss wird ein neuer 100-Mikroliter-Tropfen Äquilibrierungslösung drei zu den zuvor verschmolzenen Tropfen zusammengefügt und eine weitere Minute stehen gelassen. Legen Sie die Eizellen für 10 Minuten in 100-Mikroliter-Tropfen Gleichgewichtslösung vier.Dosieren Sie zwei 50-Mikroliter-Tropfen Vitrifikationslösung und einen 100-Mikroliter-Vitrifikationslösung. Bewegen Sie die Eizellen nacheinander für 60 Sekunden in die drei Tropfen Vitrifikationslösung, so dass die Eizellen in jedem Tropfen für etwa 20 Sekunden bleiben. Wenn etwa 10 Sekunden vor dem Ende der 60-Sekunden-Inkubation verbleiben, legen Sie das Kryogerät unter das Mikroskop.Tragen Sie die Eizellen an der Spitze der Pipette und legen Sie sie mit der minimalen Menge an Vitrifikationslösung auf das Kryogerät. Saugen Sie die überschüssige Vitrifikationslösung ab und lassen Sie die Eizellen von einer dünnen Schicht Vitrifikationslösung bedeckt. Tauchen Sie das Kryogerät direkt in flüssigen Stickstoff und bewegen Sie es schnell.Bewahren Sie das Gerät in flüssigem Stickstoff auf und decken Sie es mit einem Schutzdeckel ab. Die begleitenden laparoskopischen Verfahren der Eizellentnahme und Vaginoplastik wurden bei allen Patientinnen erfolgreich kombiniert. Es wurden durchschnittlich 11,4 bis 5,4 Eizellen entnommen und 9,6 4,3 M2 Eizellen kryokonserviert.Die durchschnittliche Gesamteinsatzzeit betrug 114 17 Minuten. Der intraoperative Blutverlust war bei allen Patienten unbedeutend und es wurden keine intraoperativen Nebenwirkungen beobachtet. Am dritten Tag nach der Operation begannen die Patienten mit der täglichen Anwendung von Dilatatoren und wurden am Tag 6,0 1,0 entlassen.Eine vorsichtige Aspiration der Follikel innerhalb des Eierstocks wird empfohlen, wobei der automatischen Mobilisierung der Eierstöcke gebührende Aufmerksamkeit geschenkt wird, um einen optimalen Zugang und Abruf zu gewährleisten.

laparoscopic-oocyte-retrieval-cryopreservation-during-vaginoplasty

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Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

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OP-IVM: Kombination der In-vitro-Reifung nach Eizellentnahme mit gynäkologischer Chirurgie

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Laparoskopische Eizellentnahme und Kryokonservierung während der Vaginoplastik zur Behandlung des Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Syndroms (Video) | JoVE Journal

Laparoskopische Eizellentnahme und Kryokonservierung während der Vaginoplastik zur Behandlung des Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser-Syndroms

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