Name: Methodik zum Testen von Kontrollmitteln und Insektiziden gegen den Kaffeebeerenzünsler Hypothenemus hampei (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-23T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Lernen Sie eine Methode zur Bewertung von Insektizidtoxizität gegen den Kaffeebeerenzünsler Hypothenemus hampei unter Verwendung grüner Kaffeefrüchte. Dieses Protokoll ermöglicht realistische Toxizitätsstudien.

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Die Autoren danken der Nationalen Föderation der Kaffeebauern Kolumbiens, den Assistenten der Abteilung für Entomologie (Diana Marcela Giraldo, Gloria Patricia Naranjo), der Experimentierstation Naranjal und Jhon Félix Trejos.

HINWEIS: Dieses Protokoll befasst sich mit verschiedenen Methoden, um verschiedene Auswirkungen auf die CBB unter Laborbedingungen zu identifizieren.
1. Obstsammlung
<ol><li>Pflücken Sie GFs mit einem Entwicklungsalter von ~ 120-150 Tagen nach der Blüte von Bäumen in einer Kaffeeplantage am frühen Morgen.</li>
</ol>2. Obstdesinfektion20
<ol><li>Bringen Sie rund 300 GFs ins Labor. Wählen Sie gleichmäßig große und gesunde GFs und ziehen Sie die Stiele zurück.</li>
	<li>Tauchen Sie die GFs in eine Seifenlösung (2 ml flüssige Spülmittel in 998 ml Leitungswasser), gefolgt von Reiben, um die GFs zu waschen. Dann spülen Sie die Früchte mit Wasser ab und wechseln Sie das Wasser dreimal.</li>
	<li>GFs in 0,5% ige Natriumhypochloritlösung (100 ml in 900 ml Leitungswasser) tauchen und 15 min in einem Shaker bei 110 U/min umrühren. Dann spülen Sie die GFs mit Wasser ab, indem Sie in einem Shaker umrühren und das Wasser dreimal alle 10 Minuten wechseln.</li>
	<li>Trocknen Sie die GFs mit sterilen Papiertüchern.</li>
	<li>Legen Sie die GFs in Schalen (33 cm x 25 cm x 2 cm) und bestrahlen Sie sie 15 Minuten lang, wobei Sie die GFs in einem Abstand von 55 cm von der UV-Quelle in einer UV-fähigen horizontalen Laminar-Flow-Station platzieren.</li>
	<li>Bewegen Sie während der 15-minütigen Periode alle 5 Minuten die GFs, um die Bestrahlung der gesamten Frucht sicherzustellen.</li>
</ol>3. Insektendesinfektion21
<ol><li>Verwenden Sie neu aufgetauchte (am selben Tag) CBB-Insekten, um die Bioassays einzurichten.</li>
	<li>Tauchen Sie die CBBs in 0,5% ige Natriumhypochloritlösung und rühren Sie sie langsam mit einer Bürste für 10 min.</li>
	<li>Filtern Sie die CBBs durch ein Musselintuch und waschen Sie sie dreimal mit sterilem destilliertem Wasser.</li>
	<li>Entfernen Sie überschüssiges Wasser mit sterilen Papiertüchern.</li>
</ol>4. Bewertung eines Produktes mit schützender Wirkung auf die Früchte (Vorbefall) (Abbildung 1)
<ol><li>Verwenden Sie eine Gruppe von GFs pro Versuchseinheit. Im Allgemeinen wird eine Gruppe von 30 GFs pro Versuchseinheit verwendet.</li>
	<li>Legen Sie die GFs in Kunststoffboxen (Versuchseinheit).</li>
	<li>Wenden Sie das Testprodukt zur Bewertung in den verschiedenen Konzentrationen an. Führen Sie die Anwendung mit einer tragbaren Sprüheinheit durch. Hier wurde eine Alkaloidemulsion bei 5% und 6% getestet.</li>
	<li>Besprühen Sie als Kontrolle eine Gruppe von GFs mit Wasser.</li>
	<li>Verwenden Sie mindestens drei Wiederholungen (Versuchseinheit) pro Behandlung und sprühen Sie nacheinander.</li>
	<li>Lassen Sie in einer sterilen Haube zwei CBB-Erwachsene pro GFs frei (insgesamt werden 60 CBBs in die Kunststoffboxen eingeführt). Nach 30 Minuten die Kartons abdecken.</li>
	<li>Lassen Sie die Kunststoffboxen mit den befallenen GFs in einem Raum oder Inkubator unter kontrollierten Bedingungen (dunkel, 25 ± 2 °C und relative Luftfeuchtigkeit 71% ± 5%).</li>
	<li>Zählen Sie nach 1, 7, 15 und 21 Tagen die Anzahl der Zündfrüchte und lebenden und toten Insekten außerhalb der Früchte in jeder Box.</li>
	<li>20 Tage nach dem Befall jeden GF unter einem Stereomikroskop sezieren, 10-fache Vergrößerung.</li>
	<li>Zählen Sie die Anzahl der gesunden Samen oder Samen, die von den Insekten in jeder Frucht beschädigt wurden.</li>
	<li>Zählen Sie die verschiedenen CBB-biologischen Stadien22 , die beobachtet wurden, und zählen Sie die Anzahl der toten Insekten in jedem Samen, um die Insektensterblichkeit pro Versuchseinheit zu bestimmen.</li>
</ol>5. Bewertung der Wirkung eines Produkts nach CBB-Befall (Nachbefall) (Abbildung 3)
<ol><li>Verwenden Sie Gruppen von 200 Früchten pro Behandlung.</li>
	<li>In einer sterilen Haube CBB-Erwachsene (Verhältnis 2:1 von CBB-Erwachsenen zu GFs) in die zuvor desinfizierten GFs entlassen, so dass der Befall 3 h bei 21 °C anhalten kann.</li>
	<li>Untersuchen Sie die GFs. Nach 3 h sollten die meisten befallen sein, wobei der Bauch der CBBs noch freigelegt sein sollte (Position A20), wie in Abbildung 2 dargestellt.</li>
	<li>Wählen Sie 46 befallene GFs (Position A) aus und legen Sie sie in Kunststoffgestelle mit 96 Bohrlöchern (Versuchseinheit). Die Früchte sollten in dieser Position bleiben, damit die Behandlung direkt auf die CBB gesprüht werden kann, die die Frucht perforiert.</li>
	<li>Sprühen Sie mindestens dreimal (drei Racks) pro Behandlung, nacheinander, und bedecken Sie die Racks nach 30 min.</li>
	<li>Lassen Sie die Racks mit den befallenen GFs in einem Raum oder Inkubator unter kontrollierten Bedingungen (dunkel, 25 ± 2 °C und relative Luftfeuchtigkeit 71% ± 5%).</li>
	<li>Nach 20 Tagen sezieren Sie die GFs unter einem Stereomikroskop bei 10-facher Vergrößerung.</li>
	<li>Zählen Sie die Anzahl der gesunden Samen oder Samen, die von den Insekten in jeder Frucht beschädigt wurden.</li>
	<li>Zählen Sie die verschiedenen biologischen CBB-Stadien22 und die Anzahl der toten Insekten in jedem Samen, um die Insektensterblichkeit pro Versuchseinheit zu bestimmen.</li>
</ol>6. Bewertung eines Produkts mit abschreckender Wirkung auf die CBB
<ol><li>Befolgen Sie die Schritte 4.1-4.6 zur Bewertung eines Produkts mit einer schützenden Wirkung auf die Früchte.</li>
	<li>Nachdem Sie die CBB-Erwachsenen in die Plastikboxen entlassen haben, zählen Sie die Anzahl der CBBs, die von den Boxen wegfliegen, und die Anzahl, die die GFs befallen. Führen Sie dann die Schritte 4.7-4.11 aus.</li>
	<li>Befolgen Sie die Schritte 5.1-5.5 zur Bewertung des Produkts nach dem CBB-Befall.</li>
	<li>Nachdem Sie jede Behandlung auf die Insekten in Position A gesprüht haben, zählen Sie die Anzahl der CBBs, die sich aus der GF bewegt haben und / oder von der GF weggeflogen sind. Führen Sie dann die Schritte 5.6-5.9 aus.</li>
</ol>7. Statistische Auswertung
HINWEIS: Die Antwortvariablen sind Mortalitätsprozentsätze im Laufe der Zeit und der Prozentsatz gesunder, unbefallener Kaffeesamen.
<ol><li>Schätzen Sie den Durchschnitt und die Standardabweichung jeder Ansprechvariablen für jede Behandlung.</li>
	<li>Führen Sie eine Varianzanalyse für jede Antwortvariable mit einem Modell für ein vollständig randomisiertes Design durch. HINWEIS: Dunnetts 5% -Vergleichstest wird durchgeführt, um die Behandlungen mit der absoluten Kontrolle (Wasserkontrolle) zu vergleichen.</li>
	<li>Wenn sich die Behandlungen signifikant von der absoluten Kontrolle unterscheiden, verwenden Sie einen LSD-Test (Least Significant Difference) von 5%, um die Behandlungen zu vergleichen.</li>
	<li>Bewerten Sie die Stärke des Tests. Wenn größer als 85%, sind die Annahmen der Normalität und Homogenität der Varianzen erfüllt.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63694/63694fig01.jpg"> Abbildung 1: Verfahren zur Bewertung der Vorbefallwirkungen von Insektiziden auf die CBB. Schritte zur Bewertung der präinfestierenden Auswirkungen von Insektiziden auf Hypothenemus hampei (CBB) unter Verwendung von grünen Früchten (GFs). (A) Obstauswahl. (B) Sprühen der Insektizide auf die Kaffeefrüchte. (C) CBB-Befall von Kaffeefrüchten im Verhältnis 2:1 CBB je GF. (D) Befallene Früchte. (E) Inkubation der Früchte unter kontrollierten Bedingungen. (F) Fruchtsezierung. (G) Zählung der CBB-Population in den Samen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63694/63694fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63694/63694fig02.jpg"> Abbildung 2: Verarbeiten Sie den CBB-Befall von Kaffeefrüchten. Die befallenen Früchte enthalten CBB-Erwachsene mit teilweise freiliegendem Bauch (Position A). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63694/63694fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63694/63694fig03.jpg"> Abbildung 3: Verfahren zur Bewertung der posinfestierenden Auswirkungen von Insektiziden auf die CBB. Schritte zur Bewertung der Auswirkungen von Insektiziden nach dem Befall auf die CBB unter Verwendung von GFs. (A) Obstauswahl. (B) Befall der Früchte mit CBB im Verhältnis 2:1 CBB je GF. (C) Selektion der befallenen Früchte. (D) Aufsprühen des Insektizids auf die Früchte. (E) Inkubation der Früchte. (F) Fruchtsezierung. (G) Zählung der CBB-Bevölkerung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63694/63694fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>

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</ol>

Keiner der Autoren hat Interessenkonflikte zu erklären.

In diesem Protokoll sind die Desinfektion der Früchte sowie der Insekten kritische Schritte. Wenn Früchte aus dem Feld im Labor verwendet werden, zeigen sie häufig eine hohe Kontamination und Austrocknung, da Mikroorganismen und Milben in der Epidermis 7,15,16 vorhanden sind. Daher führt die Verwendung von Früchten oder Insekten, die nicht desinfiziert werden, zum Tod von Insekten aufgrund von Kontaminationen, die durch Mikroorg...

Der Kaffeebeerenzünsler (CBB), Hypothenemus hampei, wurde erstmals 1988 in Kolumbien nachgewiesen und hat sich seitdem zur wichtigsten Schädlingsart der Kaffeeernte entwickelt. CBB-Weibchen verlassen die Geburtsfrucht bereits befruchtet und suchen nach neuen Früchten, die von den flüchtigen Chemikalien geleitet werden, die sie emittieren 1,2. Ein kompletter Zyklus wird innerhalb von 23 Tagen3 bei einer Temperatur von 25 °C erfüllt. Der Zyklus beginnt damit, dass das Gründerweibchen in den Samen eindringt und Eier in das Fruchtendosperm legt. Die eingeschlossenen Larven fressen den Samen. Wenn die Früchte an dieser Stelle seziert werden, wäre es möglich, sowohl das Gründerweibchen als auch ihre Nachkommen zu beobachten. Nach 14 Tagen werden die Larven zu Puppen - im Allgemeinen dauert das Puppenstadium 5 Tage. Im Erwachsenenstadium kopulieren die Weibchen mit ihren Geschwistern, und die neu befruchteten Weibchen fliegen von den beschädigten Früchten weg und suchen nach neuen Kaffeefrüchten, um einen neuen Zykluszu beginnen 4.
Sowohl der Penetrationsprozess als auch das Ergebnis der Larvenfütterung schädigen das Kaffeesamen, verringern die Qualität des Kaffeegetränks und verringern den Umsatz erheblich. Ein Befall von mehr als 5% in Kaffeeplantagen gilt allgemein als wirtschaftliche Schwelle.
Die CBB-Bekämpfung basiert auf einer integrierten Schädlingsbekämpfungsstrategie (IPM), die kulturelle Kontroll- und agronomische Praktiken, natürliche biologische Arbeitsstoffe und den Einsatz chemischer Insektizide umfasst, was Sicherheitsbedingungen und eine rechtzeitige Anwendungerfordert 4.
Um neue Insektizide für die Bekämpfung der CBB zu evaluieren, sind kostengünstige Methoden erforderlich, die schnelle Ergebnisse ermöglichen. Derzeit werden sowohl Labor- als auch Feldverfahren verwendet, einschließlich künstlicher Diäten, die Kaffee enthalten, in denen die Insektizide enthaltensind 5,6, oder das Versprühen der Insektizide auf trockenen Pergamentkaffee 7,8,9. Darüber hinaus wurden Experimente im Feld mit Kaffeebaumzweigen, die mit entomologischen Hülsen bedeckt waren, berichtet10,11; Diese Methoden erfordern jedoch intensive Arbeit und lange Evaluierungszeiträume.
Ein Zustand, der natürlichen Feldbedingungen ähnelt und ebenfalls schnell und kostengünstig ist, ist die Verwendung von grünen oder reifen Kaffeefrüchten. Diese Früchte müssen jedoch unter Bedingungen erhalten bleiben, die für die Entwicklung der CBB geeignet sind, wobei Veränderungen und Verunreinigungen durch Mikroorganismen vermieden werden, um ihre Qualität und Eigenschaften zu erhalten. Zu diesem Zweck wurden verschiedene Desinfektionsmittel sowie Verfahren mit Wärme und Strahlung 7,9,12,13,14,15,16 verwendet.
Darüber hinaus erfordern die Methoden zur Insektizidbewertung gegen die CBB Simulationen von erwachsenen Weibchen, die auf der Suche nach Früchten fliegen oder in diese Früchte eindringen17,18. Zu diesem Zweck wurde auf dem Feld 8,11,19 ein künstlicher Fruchtbefall durchgeführt, obwohl dieser Prozess arbeitsintensiv ist und von den Umweltbedingungen abhängt.
Hier beschreiben wir eine standardisierte Methodik zur Bewertung von Produkten, die unter kontrollierten Umgebungsbedingungen, die Feldbedingungen ähneln, unterschiedliche Auswirkungen auf die CBB haben können.

<table><tbody><tr><td>Becher mit Auslauf, niedrige Form 500</td><td>mL MARKE PP</td><td></td><td></td></tr> BR87826 <tr><td>Tischschüttler</td><td>New Brunswick Scientific Innova 4000 Inkubator Schüttler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Geschirrspülmittel Flüssigseife-AXION</td><td>Colgate-Palmolive</td><td>AXION</td><td></td></tr><tr><td>Haube; Horizontale Laminar-Flow-Station</td><td>Terra Universal</td><td></td><td> Pulverbeschichteter Stahl, 1930 mm B x 1118 mm T x 1619 mm H, 120 V (https://www.terrauniversal.com/hood-horizontal-laminar-flow-station-9620-64a.html)</td></tr><tr><td>Insekten</td><td>CBB BIOCAFE</td><td></td><td>(http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html).</td></tr><tr><td>Multi Fold Weiße Papierhandtücher</td><td>Familia</td><td>73551</td><td></td></tr><tr><td>Preval Sprüheinheit</td><td>&nbsp; Preval Merck</td><td>Z365556-1KT</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sigma/z365556?gclid=Cj0KCQiAweaNBhDEARIsAJ 5hwbfZOy1TWGj6huatFtRQt AzOyHe5-oBiKnOUK2T1exuuk WwJLdvxkvsaAjoYEALw_wcB</td></tr><tr><td>Reversible Racks 96-Well</td><td>heathrowwissenschaftliche</td><td>HEA2345A</td><td>https://www.heathrowscientific.com/reversible-racks-96-well-i-hea2345a</td></tr><tr><td>Skalpellklingen N 11</td><td>Merck</td><td>S2771-100EA</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellgriffe N3</td><td>Merck</td><td>S2896-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhypochlorid</td><td>Die clorox Firma</td><td>Clorox</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 508</td><td>https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/stereo-zoom-microscopes/stemi-508.html</td></tr></tbody></table>

methodik zum testen von kontrollmitteln und insektiziden gegen den kaffeebeerenzünsler hypothenemus hampei

Methodology to Test Control Agents and Insecticides Against the Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei

Bevor Insektizide zur Behandlung des Kaffeebeerenzünslers (CBB) Hypothenemus hampei empfohlen werden, ist es wertvoll, die Mortalität und Abwehr dieser Insektizide gegen erwachsene Insekten oder ihre Auswirkungen auf die Fortpflanzungsleistung zu kennen. Die derzeit verfügbaren Methoden bewerten jedoch nur die Erwachsenensterblichkeit, wodurch die Auswahl neuartiger Insektizide mit einer anderen Wirkungsweise eingeschränkt wird. In dieser Arbeit wurden verschiedene experimentelle Methoden untersucht, um die vielfältigen Effekte auf die CBB unter Laborbedingungen zu identifizieren. Dazu wurden grüne Kaffeefrüchte (GFs) gesammelt und durch Eintauchen in Natriumhypochloritlösung mit anschließender UV-Lichtbestrahlung desinfiziert. Parallel dazu wurden CBB-Erwachsene aus einer Kolonie durch Eintauchen in Natriumhypochloritlösung desinfiziert. Um den Fruchtschutz (Vorbefall) zu beurteilen, wurden die Früchte in Plastikboxen gelegt und die Insektizide aufgetragen. Dann wurden die CBB-Erwachsenen mit einer Rate von zwei CBBs pro GF freigelassen. Die GFs wurden unter kontrollierten Bedingungen gelassen, um den CBB-Befall und das Überleben nach 1, 7, 15 und 21 Tagen zu bewerten. Um die Wirksamkeit von Insektiziden nach CBB-Befall (Postbefall) zu bewerten, wurden CBB-Erwachsene in einem Verhältnis von 2:1 für 3 h bei 21 °C in die GFs freigesetzt. Befallene Früchte, die CBB-Erwachsene mit teilweise exponiertem Bauch zeigten, wurden ausgewählt und in 96-Well-Racks gelegt, und die CBBs, die sich in die Früchte bohrten, wurden direkt behandelt. Nach 20 Tagen wurden die Früchte seziert und die biologischen CBB-Stadien in jeder Frucht aufgezeichnet. Die GFs dienten als Substrate, die natürliche Bedingungen nachahmen, um toxische, chemische und biologische Insektizide gegen die CBB zu bewerten.

Die Ergebnisse zeigten, dass die CBB-Weibchen die Früchte erkannten, und abhängig von den Eigenschaften der Fruchtoberfläche und den abgegebenen Gerüchen begannen die CBB-Weibchen, die Früchte innerhalb von 3 h bei 21 ° C zu durchdringen oder zu tragen.
Die Wirkung eines Insektizids auf die CBB, wenn es nach 24 h und im Laufe der Zeit auf die Kaffeefrüchte aufgetragen wird (Präbefallverfahren), ist in Abbildung 4 dargestellt. Die beiden Insektizide (Alkaloidemulsi...

Eine Methode mit grünen Kaffeefrüchten (GFs) wurde entwickelt, um die Toxizität von Insektiziden gegen den Kaffeebeerenzünsler (CBB) zu testen. Insektizide oder toxische Substanzen wurden vor oder nach dem CBB-Befall auf desinfizierte GFs aufgetragen. Insektensterblichkeit, Abwehr und Fortpflanzungsfähigkeit wurden neben anderen Parametern bewertet.

Methodik zum Testen von Kontrollmitteln und Insektiziden gegen den Kaffeebeerenzünsler Hypothenemus hampei

Prior to recommending insecticides to treat the coffee berry borer (CBB) Hypothenemus hampei, it is valuable to know the mortality and repellency of these ...

Diese Methode verwendet grüne Kaffeefrüchte, um die Toxizität von Insektiziden gegen den Kaffeebeerenzünsler zu testen. Die Insektizidanwendung wird vor oder nach dem Insektenbefall durchgeführt, um die Insektensterblichkeitsabweisung und andere Auswirkungen zu untersuchen. Die Verwendung von echtem Rohkaffee mit Nährstoffen, die für das Insektenwachstum geeignet sind, ist der am besten geeignete Weg, um die Toxizität von Verbindungen für Insekten unter simulierten natürlichen Bedingungen zu bewerten.Das Protokoll ermöglicht die Bewertung der toxischen Wirkungen von chemischen Insektiziden und gegenüber Krankheitserregern wie Pilzen oder abweisenden Substanzen. Diese Infektion der Früchte und der Insekten ist der kritische Schritt, da eine unsachgemäße Desinfektion aufgrund von Kontamination zum Tod von Insekten führen kann. Die Qualität der Insekten ist ebenfalls wichtig, da schwache Insekten die Ergebnisse eines giftigen Produkts überschätzen.Die visuelle Demonstration ermöglicht die Identifizierung des geeigneten Stadiums der Früchte des Insektenbefallsprozesses, des geeigneten Zeitpunkts, um die giftige Substanz zu verbreiten. Und der Weg zum Sezieren der Früchte. Das Verfahren wird Claudia Martinez, wissenschaftliche Mitarbeiterin aus dem Labor, demonstrieren.Um zu beginnen, sammeln Sie die grünen Kaffeefrüchte früh am Morgen mit dem ungefähren Entwicklungsalter von 120 bis 150 Tagen nach der Blüte von Kaffeeplantagen. Wählen Sie rund 300 gleichmäßig große und gesunde Früchte und ziehen Sie die Stiele zurück. Tauchen Sie die grünen Kaffeefrüchte in eine 2% ige Seifenlösung und reinigen Sie sie gründlich, indem Sie sie reiben.Dann spülen Sie die Früchte dreimal mit sauberem Wasser ab. Tauchen Sie sie in 0,5% ige Natriumhypochloritlösung und legen Sie sie für 10 Minuten bei 110 Umdrehungen pro Minute auf den Shaker. Spülen Sie die Früchte dreimal mit sauberem Wasser ab und trocknen Sie sie mit sterilen Papiertüchern.Bestrahlen Sie die Früchte, indem Sie sie 15 Minuten lang 55 Zentimeter von der UV-Quelle entfernt in einer UV-fähigen horizontalen Laminar-Flow-Station platzieren. Bewegen Sie die Früchte alle fünf Minuten, um die richtige Bestrahlung der gesamten Frucht sicherzustellen. Um die Bioassays einzurichten, tauchen Sie die Kaffeebeerenzünsler, die am selben Tag aufgetaucht sind, in 0,5%ige Natriumhypochloritlösung und rühren Sie sie langsam mit einer Bürste für 10 Minuten auf.Filtern Sie diese Insekten durch ein Musselintuch und waschen Sie sie dreimal mit sterilem destilliertem Wasser. Entfernen Sie überschüssiges Wasser mit sterilen Papiertüchern. Bereiten Sie eine Gruppe von 30 grünen Kaffeefrüchten pro Versuchseinheit zu und legen Sie sie in eine Plastikbox.Wenden Sie verschiedene Konzentrationen eines Testprodukts zur Bewertung mit einer tragbaren Sprüheinheit an, hier wurden 5% und 6% Alkaloidemulsionen verwendet. Besprühen Sie als Kontrolle eine Gruppe grüner Kaffeefrüchte mit Wasser. Verwenden Sie mindestens drei Versuchseinheiten pro Behandlung und sprühen Sie nacheinander.Lassen Sie in einer sterilen Kapuze zwei Kaffeebeerenzünsler pro grüner Kaffeefrucht los und bedecken Sie die Boxen nach 30 Minuten. Lassen Sie die Plastikboxen mit den befallenen grünen Kaffeefrüchten im Dunkeln in einem Raum oder Inkubator unter kontrollierten Bedingungen. Zählen Sie nach 1, 7, 15 und 21 Tagen die Anzahl der Zündfrüchte und lebenden und toten Insekten außerhalb der Früchte in jeder Box.Sezieren Sie 20 Tage nach dem Befall jede grüne Kaffeefrucht unter einem Stereomikroskop mit 10-facher Vergrößerung und zählen Sie die Anzahl der gesunden Samen oder Samen, die von den Insekten in jeder Frucht beschädigt wurden. Zählen Sie die verschiedenen biologischen Stadien des Kaffeebeerenbohrers. Beobachten Sie die Anzahl der toten Insekten in jedem Samen, um die Insektensterblichkeit pro Versuchseinheit zu bestimmen.In einer sterilen Haube die Kaffeebeerenzünsler Erwachsene im Verhältnis zwei zu eins an die zuvor desinfizierten grünen Kaffeefrüchte abgeben und den Befall drei Stunden bei 21 Grad Celsius andauern lassen. Die meisten grünen Kaffeefrüchte sollten nach drei Stunden befallen sein, wobei der Bauch des Kaffeebeerenzünslers noch freiliegt. Wählen Sie 46 befallene Früchte aus und legen Sie sie in ein 96-Well-Kunststoffgestell, damit die Behandlung direkt auf den Kaffeebeerenzünsler gesprüht werden kann, der die Früchte perforiert.Besprühen Sie drei Racks mindestens dreimal zur Behandlung, nacheinander und decken Sie die Racks nach 30 Minuten ab. Sezieren Sie nach 20 Tagen die grünen Kaffeefrüchte unter einem Stereomikroskop mit 10-facher Vergrößerung und zählen Sie die Anzahl der gesunden Samen oder Samen, die von den Insekten in jeder Frucht beschädigt wurden. Zählen Sie die verschiedenen biologischen Stadien des Kaffeebeerenbohrers und die Anzahl der toten Insekten in jedem Samen, um die Insektensterblichkeit pro Versuchseinheit zu bestimmen.Befolgen Sie die ersten Schritte zur Bewertung eines Produkts mit einer schützenden Wirkung auf die Früchte und geben Sie die grünen Kaffeefrüchte Erwachsene in die Plastikboxen frei. Dann zählen Sie die Anzahl der Kaffeebeerenzünsler, die von den Kisten wegfliegen, und die Anzahl, die die grünen Kaffeefrüchte befallen. Nach der Inkubation, unter kontrollierten Bedingungen, gefolgt von einer Dissektion in 20 Tagen nach dem Befall und dem Zählen der Samen und toten Insekten, befolgen Sie die Schritte zur Bewertung des Produkts nach dem Kaffeebeerenzünslerbefall.Zählen Sie die Anzahl der Kaffeebeerbohrungen, die sich aus den grünen Kaffeefrüchten bewegten oder von den Früchten wegflogen. Befolgen Sie nach dem Sprühen jeder Behandlung die Schritte von der Inkubation unter kontrollierten Bedingungen, um die Insektensterblichkeit pro Versuchseinheit zu bestimmen. 5% und 6% Insektizid, das auf den Kaffeebeerenzünsler aufgetragen wurde, verursachte am 20. Tag eine hohe Insektensterblichkeit und zeigte signifikante Unterschiede im Vergleich zur Kontrolle.Es wurde festgestellt, dass die Anwendung von Insektizid zwei zu 94% gesunder Samen und Insektizid eins zu 89% gesundem Saatgut führte. 37% der Samen waren in der Kontrollgruppe nicht befallen. Im Falle eines Nachbefalls drangen die Produkte in die Nagelhaut des Insekts ein und verursachten ein Insektensterben.Die höchste Mortalität trat mit dem Insektizid zwei auf. Die Wirkung der Insektizide spiegelte sich am 20. Tag der Auswertung im Anteil gesunder nicht infizierter Samen wider. Eine reduzierte Insektenpopulation wurde in den Kaffeesamen gefunden, verglichen mit der Insektenpopulation in der Kontrollgruppe, die mit Wasser besprüht wurde.Die kombinierte Wirkung von Entomopathogen und Repellent führte zu minimalen Samenschäden und maximaler Insektensterblichkeit. Diese Infektion der Früchte und die Desinfektion der Insekten sichern den Protokollerfolg. Diese Methodik kann auch zur Bewertung der Toleranz oder Resistenz von Kaffeefrüchten gegenüber dem Kaffeebeerenzünsler verwendet werden.Ein negativer Effekt kann auch gegen die Insektenpopulation bei insektenresistenten Kaffeesamen beobachtet werden. Diese Methodik kann nicht nur in der Entomologie zur Bewertung von Insektiziden mit verschiedenen Wirkungsweisen eingesetzt werden, sondern auch in der Pflanzenzüchtung zur Bewertung toleranter Sorten und der Pflanzenpathologie zur Untersuchung der Frucht-pathogen-Interaktion.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Environment

Umwelt

Dieses Manuskript zeigt und diskutiert Techniken verwendet, um Pestizid-Anfälligkeit Umfrage erkennen und Widerstand gegen Kontakt-und systemische Pestizide in Arthropoden Schädlinge.

Bioassays zur Überwachung Insecticide Resistance

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Protokolle sind für die Bewertung der Toxizität von Chemikalien zu unreif und Erwachsene Mücken für Entwicklung als neue Klassen von Larviziden, Adulticides und Endectocides beschrieben. Die Protokolle ermöglichen Hochdurchsatz-Prüfung von mehreren Chemikalien bei Einzelpunkt-Dosis und anschließende Auswertung über Dosis-Antwort-Assay Toxizität auf Kontakt zu bestimmen oder Verschlucken.

Protokolle für die Prüfung der Toxizität von neuartigen Insektizide Chemikalien, Mücken

Diese Arbeit präsentiert ein Protokoll zur Etablierung einer Zellsuspensionskultur aus Tee (Camellia sinensis L.) Blätter, die verwendet werden können, um den Stoffwechsel von externen Verbindungen zu studieren, die von der ganzen Pflanze aufgenommen werden können, wie Insektizide.

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Dieses Protokoll beschreibt den obligatorischen Fütterungstest, um die potenziell toxische Wirkung eines sekundären Pflanzenstoffs auf die Larven der Lepidoptera-Insekten zu bewerten. Dabei handelt es sich um einen hochgradig skalierbaren Insekten-Bioassay, mit dem sich die subletale und letale Dosis, die abschreckende Wirkung und die physiologische Wirkung leicht optimieren lassen. Dies könnte für das Screening umweltfreundlicher Insektizide verwendet werden.

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Die verstärkte Erkennung von unreifen Tephritiden-Fruchtfliegen im Feld kann rechtzeitig Anstrengungen zur Beseitigung von Populationen dieser zerstörerischen Schädlinge auslösen. Die Erkennung von Larven im späten Stadium ist schneller und genauer, wenn die Wirtsfrüchte in einem Beutel zerdrückt und das Fruchtfleisch durch eine Reihe von Sieben geführt werden, als beim manuellen Schneiden und bei der visuellen Inspektion.

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Lernen Sie eine Methode zur Bewertung von Insektizidtoxizität gegen den Kaffeebeerenzünsler Hypothenemus hampei unter Verwendung grüner Kaffeefrüchte. Dieses Protokoll ermöglicht realistische Toxizitätsstudien.

Methodik zum Testen von Kontrollmitteln und Insektiziden gegen den Kaffeebeerenzünsler Hypothenemus hampei

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