Innere Empfindlichkeit der mitochondrialen Membran gegenüber Na+ zeigt teilweise segmentierte funktionelle CoQ-Pools

Dieses Protokoll hebt die Rolle von Natrium als zweiter Botenstoff hervor und zeigt auch die Existenz von teilweise differenzierten Ubiquinol-Pools. Diese Technik zeigt einen extrem einfachen Ansatz für die Untersuchung von Ubiquinol-Pools, der ansonsten sehr spezifische Zellmodelle erfordert. Dieser Ansatz kann für die Untersuchung des Elektronentransfers in anderen Membranen, insbesondere von Enzymen in Lipidtropfen, verwendet werden.

Teilen Sie die Proben in vier Teilproben zu je 20 Mikrogramm auf und kennzeichnen Sie sie A bis D.Teilen Sie die Proben A und B in zwei Teilproben von je 10 Mikrogramm auf und kennzeichnen Sie sie als A1, A2, B1 und B2. Bereiten Sie den C1/C2-Puffer wie im Textprotokoll beschrieben vor und heizen Sie ihn auf 37 Grad Celsius vor. In einer Ein-Milliliter-Küvette wird jede der Teilproben zu 30 Mikrolitern Cytochrom c und 10 Mikrolitern Malonat addiert. Fügen Sie C1 / C2-Puffer hinzu, um das Volumen auf 980 Mikroliter in den Küvetten A1 und B1 und 979 Mikroliter in A2 und B2 zu erhöhen. Fügen Sie 10 Mikroliter einmolares Kaliumchlorid in die Küvetten A1 und A2 und 10 Mikroliter einmolares Natriumchlorid in B1 und B2 hinzu. Geben Sie einen Mikroliter einmillimolares Rotenon in die Küvetten A2 und B2. Fügen Sie kurz vor der Messung 10 Mikroliter 10-Millimolar NADH in alle Küvetten hinzu.