Dissektionstechniken und histologische Probenahme des Herzens in Großtiermodellen für Herz-Kreislauf-Erkrankungen

Die strukturellen Unterschiede im Herzen zwischen Arten und Individuen sowie Diskrepanzen in der Literatur erfordern ein gründliches Verständnis der Herzanatomie und die Einhaltung strenger Methoden. Diese Technik kann die Homogenität der Beobachter verbessern und die Vergleichbarkeit und Reproduzierbarkeit der experimentellen Forschung zu kardiovaskulären Erkrankungen erhöhen. Eine Person, die mit dieser Technik nicht vertraut ist, kann Schwierigkeiten haben, alle Komponenten des Herzens zu identifizieren.

Meine Empfehlung ist, einige Zeit damit zu verbringen, sich mit der Anatomie des Herzens vertraut zu machen. Da die komplexe Anatomie des Herzens schwer zu verstehen ist, ist eine visuelle Darstellung der Methode erforderlich. Wiegen Sie zunächst das Tier, bevor Sie es auf den Nekropsietisch auf der linken Seite legen.

Führen Sie dann eine externe Untersuchung des Subjekts durch, indem Sie die Kutis und Schleimhaut untersuchen und abtasten und alle Veränderungen in Farbe, Konsistenz und Volumen notieren. Als nächstes machen Sie mit einem Messer einen scharfen sieben Zentimeter langen Einschnitt in die rechte Achselhöhle. Nachdem Sie die coxofemorale Verbindung gefunden haben, öffnen Sie die Kapsel mit einem Messer und schneiden Sie das Band des Femurkopfes.

Verlängern Sie den Hautschnitt in der Achselhöhle kranial zur Unterkiefersymphyse und kaudal zum Peroneum. Entfernen Sie die Haut mit dem Skalpell und legen Sie die Brust- und Bauchdecke von der ventralen Mittellinie bis zur Höhe der Wirbelfortsätze frei. Als nächstes erstellen Sie mit dem Skalpell und der Pinzette eine Klappe durch die Bauchdecke, ventrocaudal zum rechten Rippenbogen.

Dann, nach dem kaudalen Aspekt des rechten Hypochondriums, öffnen Sie die Bauchhöhle mit einer Schere. Verlängern Sie den Schnitt kaudal entlang des rechten paralumbalen Bereichs bis zum äußeren Beckenkamm. Danach verlängern Sie den Schnitt bis zum Schambein der Linea alba und untersuchen Sie kurz die Bauchorgane in situ, um eine Veränderung ihrer Farbe, Konsistenz, ihres Volumens und ihrer Position festzustellen.

Als nächstes durchstechen Sie mit dem Skalpell und der Pinzette das Zwerchfell am höchsten Punkt. Entfernen Sie dann mit einer Knochenschneidezange den rechten Brustkorb, indem Sie zuerst das parasternale Knorpelsegment und dann das dorsale Segment der Rippen in der Nähe der costovertebralen Gelenke schneiden. Untersuchen Sie das Herz in situ, um seine Größe, Farbe, Position und Verbindungen mit benachbarten Geweben zu bemerken.

Achten Sie auch auf jede Veränderung der Konsistenz durch Palpation. Öffnen Sie dann mit einer Schere die Perikardhöhle mit einem Längsabschnitt von der Basis bis zur Herzspitze. Untersuchen Sie die Perikardhöhle und das Epikard auf Veränderungen in Farbe, Konsistenz und Volumen.

Als nächstes lösen Sie mit einer Schere das Herz, indem Sie die obere Hohlvene mindestens einen Zentimeter über dem Eingang in den rechten Vorhof schneiden, die Crista terminalis erhalten und die Querabschnitte der Aorta, des Lungenstamms und der beiden Hohlvenen ergeben. Untersuchen Sie die äußere Kontur des Organs, das Aussehen des Epikards, das des Myokards durch die Transparenz des Epikards und das äußere Erscheinungsbild der großen Gefäße. Um die Zufluss-Ausfluss-Methode für die Herzdissektion durchzuführen, legen Sie das Herz mit dem Vorhofgesicht nach oben und schneiden Sie mit einer Schere und einer zahnlosen Pinzette breit von der kaudalen Hohlvene in den rechten Vorhof.

Nachdem Sie das Herz in den rechten Ohranhang geschnitten haben, um die Crista terminalis oder den Sinusknoten freizulegen, untersuchen Sie die Trikuspidalklappe aus dorsaler Sicht. Wenn Sie dann einen Abschnitt vom rechten Vorhof bis zur Verbindung zwischen dem rechten Ventrikel und dem intraventrikulären Septum schneiden, zeigen Sie die rechte atrioventrikuläre Klappe an. Als nächstes schneiden Sie die rechte ventrikelfreie Wand entlang des intraventrikulären Septums bis zum Ursprung des Lungenstammes.

Nach gründlicher Untersuchung der rechten atrioventrikulären Klappen, einschließlich der Chordae tendineae und der papillären Muskeln, schneiden Sie die Chordae tendineae. Als nächstes platzieren Sie die Pinzette entlang des Lungenstamms und schneiden Sie den Stamm längs, um den Lungenausflusstrakt, den Ursprung des Lungenstamms und die Halbmondklappen zu untersuchen. Um die Bikuspidalklappe aus dorsaler Sicht zu untersuchen, schneiden Sie den linken Vorhof von den Lungenvenen bis zur Spitze der linken Ohrmuschel ab.

Als nächstes legen Sie das Herz mit dem interventrikulären Septum nach unten und machen einen großen Schnitt in der ventrikulären freien Wand von der Ventrikelbasis bis zur Herzspitze. Dann schneiden Sie die Chordae tendineae von der Spitze der linken atrioventrikulären Klappe. Öffnen Sie schließlich die Aorta, indem Sie eine Pinzette durch den linksventrikulären Ausflusstrakt legen.

Verwenden Sie Kochsalzlösung, um alle Blutgerinnsel zu entfernen und das Herz zu wiegen. Um Proben für die Histologie zu entnehmen, machen Sie zunächst zwei parallele Längsschnitte im Abstand von etwa fünf Millimetern mit einem Skalpell, das den rechten Vorhof, die Trikuspidalklappe und die rechte ventrikuläre freie Wand umfasst. Als nächstes machen Sie zwei ähnliche parallele Schnitte, die den linken Vorhof, die Mitralklappe, den dorsalen Papillarmuskel und den linken Ventrikel betreffen.

Innerhalb des dorsalen oberen Drittels des Herzens, quer schneiden die Basis des Herzens nach einer Linie, einschließlich des interventrikulären Septums, des rechten Vorhofs, der Aorta, der Aortenklappe und der Trikuspidalklappe. Und machen Sie zwei parallele Längsschnitte, die die Basis der Aorta und das interventrikuläre Septum betreffen. Schneiden Sie dann das rechte Atrium um die Crista terminalis.

Um sechs Teile des Sinusknotens zu erhalten, machen Sie mehrere parallele Abschnitte im Abstand von etwa drei bis vier Millimetern, die quer auf der Längsachse der Crista ausgerichtet sind. Als nächstes schneiden Sie das erhaltene Gewebe in histologische Kassetten und tauchen das Gewebe für mindestens 48 Stunden in 10% neutrales gepuffertes Formalin. Um die Koronararterien zu entnehmen, verwenden Sie eine Pinzette und ein Skalpell, um die Koronararterien aus der parakonalen Rille zu sezieren und sie über Nacht in 10% neutralem gepuffertem Formalin zu fixieren.

Bei Bedarf entkalken Sie das Gewebe in einer Eins-zu-Eins-Mischung aus 8% Ameisensäure und Salzsäure. Als nächstes machen Sie mehrere Querschnitte im Abstand von etwa drei Millimetern. Legen Sie die Abschnitte in eine histologische Kassette und legen Sie die Kassette in 10% neutrales gepuffertes Formalin zum Einbetten.

Nachdem Sie das Herz mindestens 48 Stunden lang in 10% neutralem gepuffertem Formalin fixiert haben, setzen Sie zwei zahnlose gerade Dissektionszangen ein. Eine durch die Schädelhöhle, den rechten Vorhof, die Trikuspidalklappe und den rechten Ventrikel. Und das andere durch die Lungenvene, den linken Vorhof, die Mitralklappe und den linken Ventrikel.

Verwenden Sie den Raum zwischen den Pinzetten als Führung und verwenden Sie eine Schneidmesser, um von der Basis bis zur Spitze des Herzens zu schneiden. Etwa fünf Millimeter voneinander entfernt, schneiden Sie einen weiteren Längsabschnitt des Herzsegments, der die Aorta umfasst. Trennen Sie dann die Herzbasis vollständig von der Spitze.

Nachdem Sie jedes Gewebesegment in eine histologische Kassette gelegt haben, legen Sie die Kassetten bis zum Einbetten in 10% neutrales gepuffertes Formalin. Dieses Protokoll ermöglichte die erfolgreiche Visualisierung der äußeren Merkmale und inneren Strukturen des Herzens. Mit dieser Technik konnten erfolgreich Herzgewebeproben für histologische Studien von verschiedenen Tieren wie Hunden und Katzen gesammelt werden.

Seien Sie immer vorsichtig, wenn Sie das Herz loslassen, da dies einige interessante Strukturen beschädigen kann. Und auch beim Sezieren, Ernten und Einbetten des Sinusknotens. Obwohl diese Methode entwickelt wurde, um Arrhythmie-Modellierung, hypertrophe Kardiomyopathie, Myokardinfarkt und Herzintoxikation zu diagnostizieren, kann sie verwendet werden, um jeden Herzzustand zu diagnostizieren.