Isolierung von Ganzzellproteinlysaten aus Gesichtsprozessen der Maus und kultivierten palatalen Mesenchymzellen für die Phosphoproteinanalyse

Dieses Protokoll kann verwendet werden, um einen besseren Einblick in die Dynamik und Rolle von Phosphoproteinen zu erhalten, die während der kraniofazialen Entwicklung von Säugetieren aktiv sind. Dieses Protokoll überwindet die gemeinsame Barriere der Dephosphorylierung während der Proteinisolierung aus zwei physiologisch relevanten Kontexten, Mausgesichtsprozessen und kultivierten embryonalen Gaumenchymzellen der Maus. Es ist unerlässlich, sich schnell zu bewegen, während alle Reagenzien und Materialien auf Eis gehalten werden, und Phosphatase-Inhibitoren in allen Lysepuffern zu verwenden, um die Integrität phosphorylierter Proteine zu erhalten.

Legen Sie zunächst den Mauskörper mit der Bauchseite nach oben auf ein Sezierbrett und besprühen Sie den Mausbauch mit 70% Ethanol. Öffnen Sie dann die Bauchhöhle, indem Sie die Haut vor die Vaginalöffnung mit gerader Semken-Pinzette kneifen und anheben. Als nächstes schneiden Sie die angehobene Haut in darunter liegende Schichten mit einer geraden chirurgischen Schere in einem Winkel von 45 Grad auf beiden Seiten, um eine V-Form zu erzeugen, die sich etwa auf halbem Weg zwischen den vier Gliedmaßen und Hinterbeinen auf jede seitliche Oberfläche erstreckt.