Name: Ein Mäusemodell der Chlorhexidingluconat-induzierten Peritonealschädigung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Erfahren Sie ein einfaches Mäusemodell der Peritonealdialyse zur Untersuchung von Peritonealfibrose mit Chlorhexidingluconat. Diese Methode ermöglicht Forschern, physiologische und pathologische Veränderungen während der PD-Therapie zu studieren.

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Wir danken Shin-Han Tseng herzlich für die kritische Diskussion und teilweise Durchführung der Studie. Diese Studie wurde von EDAHP110003 und NCKUEDA110002 von der Research Foundation of E-DA Hospital und der National Cheng Kung University, Taiwan, unterstützt.

Alle Mausversuche wurden vom Laboratory Animal Center des E-DA Hospital/ I-Shou University genehmigt und nach dem "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals" (NRC, USA 2011) durchgeführt. Männliche C57BL/6-Mäuse im Alter von 7-8 Wochen wurden für die vorliegende Studie verwendet.
1. Chemische Zubereitung
<ol><li>Bereiten Sie den chemischen Reizstoff vor, indem Sie 0,1% Chlorhexidingluconat (CG, siehe Materialtabelle) in 15% Ethanol verdünnen.</li>
</ol>2. Behandlung von Tieren
<ol><li>Weisen Sie drei Mäuse als Kontrollgruppe zu. Führen Sie 3 Wochen lang jeden zweiten Tag eine intraperitoneale Injektion (i.p.) von 1 ml/kg 0,9% normaler Kochsalzlösung (NS) durch, insgesamt neunmal.</li>
	<li>Ordnen Sie drei Mäuse der Peritonealfibrose-Gruppe zu. Induzieren Sie eine Peritonealfibrose mit Chlorhexidingluconat (CG) durch Verabreichung von i.p. Injektionen von 0,1% CG in 15% Ethanol (Schritt 1.1) in einer Dosis von 12,5 μl/g Körpergewicht. Führen Sie dies 3 Wochen lang jeden zweiten Tag durch, insgesamt neunmal.</li>
</ol>3. Peritoneale Funktionstests (modifizierter peritonealer Gleichgewichtstest)
<ol><li>Bereiten Sie eine Dialyselösung mit 4,25% Glukose vor. Ziehen Sie 0,5 ml Dialysatprobe mit einer Spritze und überprüfen Sie dann die Glukosekonzentration in der Dialysatprobe. HINWEIS: Die Glukosekonzentration wird nach der Hexokinase/G6PD-Methode bestimmt. Dialysatproben wurden mit dem L-Typ-Glu-2-Assay zugänglich gemacht und mit einem biochemischen Analysator untersucht (siehe Materialtabelle). Dies ist die anfängliche Dialysat-Glukosekonzentration.</li>
	<li>Anästhesie der Mäuse durch intramuskuläre Injektion von Zoletil und Xylazin (hergestellt im Verhältnis 1:2 nach Volumen, siehe Materialtabelle) in einer Dosis von 20 μl/20 gw. Verwenden Sie zusätzlich Tierarztsalbe auf den Augen, um Trockenheit unter Narkose zu verhindern.</li>
	<li>Führen Sie eine i.p. Instillation der Dialyselösung durch (2 ml/20 g Körpergewicht).</li>
	<li>Beurteilen und überprüfen Sie nach 30 Minuten die Anästhesietiefe ohne Zehenklemmreflex. Führen Sie dann einen vertikalen Schnitt in der Mittellinie des Bauches (unterhalb des Xiphoid-Prozesses) durch, öffnen Sie dann den Bauch der Mäuse und sammeln Sie die intraperitoneale Flüssigkeit mit einer Spritze (definiert als "Volumen 1"). Messen Sie dann das Gewicht einer sauberen und trockenen Baumwolle und legen Sie die Baumwolle in die Bauchhöhle der Mäuse, um die restliche intraperitoneale Flüssigkeit aufzunehmen. Zum Schluss messen Sie noch einmal das Baumwollgewicht. HINWEIS: Die Gewichtszunahme von Baumwolle entspricht dem Gewicht der verbleibenden intraperitonealen Flüssigkeit. Konvertieren Sie dann in das erhaltene Volumen (spezifisches Gewicht: 1 g/cm3; definiert als "Volumen 2"). Das endgültige Dialysatvolumen ist Band 1 plus Band 2.</li>
	<li>Verwenden Sie 0,5 ml Dialysatprobe (Enddialysat), um die Glukosekonzentration zu messen. Dies ist die endgültige Dialysat-Glukosekonzentration.</li>
	<li>Berechnen Sie die Netto-Ultrafiltration mit der Formel15: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq01.jpg" style="margin: auto;"></li>
	<li>Berechnen Sie die peritoneale Permeabilität mit der folgenden Formel15: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq02.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>4. Gewebepräparation der Bauchdecke, des Muskels und der Leber und histologische Analyse
<ol><li>Opfern Sie die Mäuse durch Herzpunktion (Phlebotomie)3,16.</li>
	<li>Schneiden Sie die Bauchdecke (1 cm x 1 cm) und die totale Hepatektomie. Fixieren Sie die Bauchdecke und das Lebergewebe der Mäuse über Nacht in 10% neutral gepuffertem Formalin.</li>
	<li>Bereiten Sie 3 μm dicke Paraffinschnitte des Bauchwandmuskels und der Leber vor und führen Sie eine histologische Analyse gemäß dem zuvor veröffentlichten Bericht17 durch.</li>
	<li>Beurteilen Sie das parietale Peritoneum der Bauchdecke und das viszerale Peritoneum der Leberoberflächen der Mäuse mit Hilfe der Morphometrie18.</li>
	<li>Führen Sie statistische Analysen mit Hilfe von Statistik- und Grafiksoftware durch (siehe Materialtabelle). Alle Daten werden als Mittelwert ± SD ausgedrückt und mit einem t-Test19 auf statistische Signifikanz analysiert. Definieren Sie Werte mit P &lt; 0,05 als signifikante Ergebnisse.</li>
</ol>

<ol><li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+outcome+of+CAPD%3A+twenty-five+years%27+experience+in+a+single+Korean+center%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center.</a> Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).</li>
<li>Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Issues+affecting+the+longevity+of+the+continuous+peritoneal+dialysis+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International+Supplements%22%5BJournal%5D)">Issues affecting the longevity of the continuous peritoneal dialysis therapy.</a> Kidney International Supplements. 62, 105-107 (1997).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+D+can+ameliorate+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+and+functional+deterioration+through+the+inhibition+of+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+mesothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Vitamin D can ameliorate chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis and functional deterioration through the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition of mesothelial cells.</a> BioMed Research International. 2015, 595030(2015).</li>
<li>Nakamoto, H., Kawaguchi, Y., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+technique+survival+on+peritoneal+dialysis+better+in+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Is technique survival on peritoneal dialysis better in Japan.</a> Peritoneal Dialysis International. 26 (2), 136-143 (2006).</li>
<li>Schaefer, F., Klaus, G., Muller-Wiefel, D. E., Mehls, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+practice+of+peritoneal+dialysis+in+children%3A+results+of+a+longitudinal+survey.+Mid+European+Pediatric+Peritoneal+Dialysis+Study+Group+%28MEPPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Current practice of peritoneal dialysis in children: results of a longitudinal survey. Mid European Pediatric Peritoneal Dialysis Study Group (MEPPS).</a> Peritoneal Dialysis International. 19, Suppl 2 445-449 (1999).</li>
<li>Woodrow, G., Turney, J. H., Brownjohn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+failure+in+peritoneal+dialysis+and+its+impact+on+patient+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Technique failure in peritoneal dialysis and its impact on patient survival.</a> Peritoneal Dialysis International. 17 (4), 360-364 (1997).</li>
<li>Schmidt, D. W., Flessner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+basic+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of encapsulating peritoneal sclerosis: basic and translational research.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 10-15 (2008).</li>
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<li>Fusshoeller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histomorphological+and+functional+changes+of+the+peritoneal+membrane+during+long-term+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Histomorphological and functional changes of the peritoneal membrane during long-term peritoneal dialysis.</a> Pediatric Nephrology. 23 (1), 19-25 (2008).</li>
<li>Goffin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+membrane+structural+and+functional+changes+during+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Dialysis%22%5BJournal%5D)">Peritoneal membrane structural and functional changes during peritoneal dialysis.</a> Seminars in Dialysis. 21 (3), 258-265 (2008).</li>
<li>Ito, T., Yorioka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+damage+by+peritoneal+dialysis+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Peritoneal damage by peritoneal dialysis solutions.</a> Clinical and Experimental Nephrology. 12 (4), 243-249 (2008).</li>
<li>Io, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SAHA+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">SAHA suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Peritoneal Dialysis International. 35 (3), 246-258 (2015).</li>
<li>Yoh, K., Ojima, M., Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2-biased+GATA-3+transgenic+mice+developed+severe+experimental+peritoneal+fibrosis+compared+with+Th1-biased+T-bet+and+Th17-biased+RORgammat+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Th2-biased GATA-3 transgenic mice developed severe experimental peritoneal fibrosis compared with Th1-biased T-bet and Th17-biased RORgammat transgenic mice.</a> Experimental Animals. 64 (4), 353-362 (2015).</li>
<li>Karl, Z. J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+Equilibration+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Peritoneal Equilibration Test.</a> Peritoneal Dialysis International. 7 (3), 138-148 (1987).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+implication+of+vitamin+D+nanomedicine+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">The clinical implication of vitamin D nanomedicine for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 14, 9665-9675 (2019).</li>
<li>Goldner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+masson+trichrome+technique+for+routine+laboratory+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Modification of the masson trichrome technique for routine laboratory purposes.</a> The American Journal of Pathology. 14 (2), 237-243 (1938).</li>
<li>Cheng, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+application+of+magnetite+nanoparticle-mediated+vitamin+D3+delivery+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Novel application of magnetite nanoparticle-mediated vitamin D3 delivery for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 16, 2137-2146 (2021).</li>
<li>Ross, A., Willson, V. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoss%2C+A+%22Basic+and+Advanced+Statistical+Tests%3A+Writing+Results+Sections+and+Creating+Tables+and+Figures%22">Basic and Advanced Statistical Tests: Writing Results Sections and Creating Tables and Figures</a>. , SensePublishers. 13-16 (2017).</li>
<li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effect+of+pirfenidone+against+experimental+sclerosing+peritonitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Preventive effect of pirfenidone against experimental sclerosing peritonitis in rats.</a> Experimental and Toxicologic Pathology. 47 (4), 287-291 (1995).</li>
<li>Ishii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+sclerosing+encapsulating+peritonitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">An experimental sclerosing encapsulating peritonitis model in mice.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (6), 1262-1266 (2001).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotides+against+collagen-binding+stress+protein+HSP47+suppress+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats.</a> Kidney International. 64 (3), 887-896 (2003).</li>
<li>Mishima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+expression+of+heat+shock+protein+47+in+rat+model+of+peritoneal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Enhanced expression of heat shock protein 47 in rat model of peritoneal fibrosis.</a> Peritoneal Dialysis International. 23 (1), 14-22 (2003).</li>
<li>Kushiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+liposome-encapsulated+clodronate+on+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of liposome-encapsulated clodronate on chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis in rats.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 26 (10), 3143-3154 (2011).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+lymphocyte+infiltration+in+the+progression+of+mouse+peritoneal+fibrosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Renal+Failure%22%5BJournal%5D)">Involvement of lymphocyte infiltration in the progression of mouse peritoneal fibrosis model.</a> Renal Failure. 34 (6), 760-766 (2012).</li>
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</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

In dieser Studie wird ein Maus-PD-Modell durch i.p. Injektion von CG, und die Ergebnisse zeigten Peritonealfibrose und funktionelle Verschlechterung in diesem Modell, was den Zustand des Parkinson-Patienten nachahmte.
Es gibt mehrere kritische Schritte im Protokoll. Zunächst muss für die Durchführung einer IP-Injektion von CG oder NS die Bauchwandhaut der Maus mit einer Pinzette aufgenommen werden, um eine punktionsbedingte intraperitoneale Organschädigung zu verhindern. Zweitens muss bei der ...

Die Peritonealdialyse (PD) ist eine Form der Nierenersatztherapie. PD hat jedoch Probleme, die nicht gelöst werden können. Zum Beispiel kann eine langfristige Parkinson-Behandlung zu Peritonealschäden führen, die schließlich zum Versagen der Ultrafiltration und zum Absetzen der Behandlung führen 1,2,3,4,5,6. Die Peritonealfibrose ist eine der schwerwiegendsten Komplikationen 7,8. Die peritoneale Fibrose ist gekennzeichnet durch die Ablagerung und Akkumulation von extrazellulärer Matrix im Interstitium sowie durch Neo-Angiogenese und Vaskulopathie des Peritoneums 9,10.
Die Hauptursachen für diese peritonealen Veränderungen sind rezidivierende Peritonitis und Nicht-Biokompatibilität des Dialysats, die hyperosmotisch, hohe Glukose, niedriger pH-Wert und Akkumulation von Glukoseabbauprodukten sind11,12. Daher können geeignete Tierversuchsmodelle den Forschern helfen, die physiologischen und pathologischen Veränderungen des Peritoneums während der Parkinson-Therapie besser zu untersuchen. Daher ist die Etablierung eines tierischen Parkinson-Modells wichtig, um die Parkinson-Technologie und die Wirksamkeit der Dialyse zu verbessern und das Überleben der Patienten zu verlängern. Diese Studie zielte darauf ab, ein PD-Mausmodell durch intraperitoneale (i.p.) Injektion von Chlorhexidingluconat (CG) zu generieren, wie zuvor beschrieben13,14. Dieses PD-Mausmodell ist einfach, leicht zu bedienen und im Vergleich zu anderen PD-Tiermodellen machbar.

<table><tbody><tr><td>0,9 % normale Kochsalzlösung</td><td>Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan-10</td><td></td> % neutrales gepuffertes Formalin Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan 00002A Automatischer biochemischer Analysator Hitachi Ltd., Tokio, Japan Labospect Serie 008 zur Bestimmung der Glukosekonzentration Chlorhexidin-Digluconat-Lösung<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td>, 20 % in H2 <td></td></tr><tr><td>O</td><td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td><td>C9394</td><td>verdünnt auf 0,1 % mit 15 % Ethanol für Injektionszwecke</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA</td><td>BAKR8006-05</td><td>verdünnt auf 15 % mit normaler Kochsalzlösung für die Arbeitskonzentration</td></tr><tr><td>Glukose (dianeal)</td><td>Baxter International, Inc., IL, USA</td><td>FNB9896</td><td>Kommerzielle Dialyselösung (4,25 %)</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0</td><td>GraphPad Software, Inc., CA, US</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Typ Glu 2 Assay</td><td>FUJIFILM Wako, Japan</td><td>461-32403</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin 20</td><td>Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan-Zoletil</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>50</td><td>Virbac Laboratories, Carros, Frankreich</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

ein mäusemodell der chlorhexidingluconat-induzierten peritonealschädigung

A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage

Die Peritonealfibrose ist eine wichtige Komplikation der Peritonealdialyse (PD). Um dieses Problem zu untersuchen und anzugehen, ist ein geeignetes Tiermodell für Parkinson erforderlich. Das vorliegende Protokoll etabliert ein Chlorhexidingluconat (CG)-induziertes Peritonealfibrosemodell, das den Zustand eines Patienten mit Parkinson nachahmt. Die Peritonealfibrose wurde durch intraperitoneale Injektion von 0,1% CG in 15% Ethanol für 3 Wochen (jeden zweiten Tag verabreicht) induziert, insgesamt neunmal bei männlichen C57BL/6-Mäusen. Am 22. Tag wurden dann peritoneale Funktionstests durchgeführt. Nachdem die Mäuse getötet worden waren, wurden das parietale Peritoneum der Bauchdecke und das viszerale Peritoneum der Leber geerntet. Sie waren dicker und fibrotischer, wenn sie nach Massons Trichromfärbung mikroskopisch analysiert wurden. Die Ultrafiltrationsrate nahm ab und der Glukose-Stofftransport zeigte eine CG-induzierte Erhöhung der peritonealen Permeabilität an. Das so etablierte PD-Modell kann Anwendungen zur Verbesserung der PD-Technologie, der Wirksamkeit der Dialyse und der Verlängerung des Überlebens der Patienten haben.

In Abbildung 1A, B war das parietale Peritoneum der Bauchdecke unter der Masson-Trichromfärbung deutlich dicker und fibrotischer17, was darauf hindeutet, dass die Peritonealfibrose in der CG-exponierten Gruppe schwerer ist als in der Kontrollgruppe mit Kochsalzlösung (NS). In Abbildung 2A,B war das viszerale Peritoneum der Leberoberflächen ebenfalls deutlich dicker und fibrotischer, was beweist, dass die Peritonealfibrose...

Das vorliegende Protokoll etabliert ein Peritonealdialyse (PD)-Mausmodell der Chlorhexidingluconat (CG)-induzierten Peritonealfibrose. Das aktuelle Modell ist im Vergleich zu anderen PD-Tiermodellen einfach und leicht zu bedienen.

Ein Mäusemodell der Chlorhexidingluconat-induzierten Peritonealschädigung

Peritoneal fibrosis is an important complication of peritoneal dialysis (PD). To investigate and address this problem, an appropriate animal model of PD ...

Die Etablierung eines Tiermodells für die Peritonealdialyse (PD) ist sehr wichtig. Wir hoffen, dass es die Technologie und die Wirksamkeit der Parkinson-Therapie verbessern und schließlich das Überleben des Patienten verbessern kann. Dieses Mausmodell für die Peritonealdialyse ist einfach, leicht zu bedienen und im Vergleich zu anderen Tiermodellen der Peritonealdialyse sichtbar.Ein geeignetes Tiermodell für die Peritonealdialyse kann Forschern helfen, die peritoneale, physiologische und pathologische Veränderung während der Parkinson-Therapie zu untersuchen. Demonstration des Verfahrens wird von Fang-Ling Liao, einem wissenschaftlichen Mitarbeiter aus meinem Labor, durchgeführt. Bereiten Sie zunächst den chemischen Reizstoff vor, indem Sie 0,1% Chlorhexidingluconat in 15% Ethanol verdünnen.Als nächstes weisen Sie drei Mäuse als Kontrollgruppe zu und injizieren Sie drei Wochen lang jeden zweiten Tag einen Milliliter pro Kilogramm 0,9% normaler Kochsalzlösung intraperitoneal für insgesamt neun Mal. Ordnen Sie dann drei Mäuse der Peritonealfibrose-Gruppe zu und induzieren Sie eine Peritonealfibrose, indem Sie eine intraperitoneale Injektion von 0,1% Chlorhexidingluconat-Lösung verabreichen, die zuvor in einer Dosis von 12,5 Mikrolitern pro Kilogramm Körpergewicht hergestellt wurde. Bereiten Sie für Peritonealfunktionstests eine Dialyselösung mit 4,25 % Glukose vor.Verwenden Sie dann eine Spritze, um 0,5 Milliliter Dialysatprobe zu entnehmen. Bereiten Sie eine Injektion von Zoletil und Xylazin vor und betäuben Sie die Mäuse durch Verabreichung einer intramuskulären Injektion. Führen Sie die intraperitoneale Installation der Dialyselösung in einer Dosis von zwei Millilitern pro 20 Gramm Körpergewicht durch.Machen Sie einen kleinen Einschnitt in der Mittellinie des Abdomens und sammeln Sie die große intraperitoneale Flüssigkeit mit einer Spritze. Führen Sie nach 30 Minuten einen vertikalen Schnitt in der Mittellinie des Abdomens unter dem Xiphoid-Prozess durch und öffnen Sie den Bauch der Maus, um die restliche intraperitoneale Flüssigkeit mit einer Spritze zu sammeln. Messen Sie anschließend das Gewicht eines sauberen und trockenen Wattestäbchens.Legen Sie die Watte in die Bauchhöhle der Maus, um die restliche intraperitoneale Flüssigkeit aufzunehmen, und entfernen Sie sie dann. Messen Sie das Baumwollgewicht erneut. Massons Trichromfärbung zeigte, dass das parietale Peritoneum der Bauchdecke in der Chlorhexidingluconat-exponierten Gruppe deutlich dicker und fibrotischer war als in der Kontrollgruppe.Das viszerale Peritoneum der Leberoberflächen war in der Chlorhexidingluconat-exponierten Gruppe ebenfalls signifikant dicker und fibrotischer als in der Kontrollgruppe, was darauf hindeutet, dass die Peritonealfibrose in der Chlorhexidingluconat-exponierten Gruppe schwerer ist. Die Chlorhexidingluconat-exponierte Gruppe zeigte eine verringerte Ultrafiltrationsrate und einen erhöhten Glukosestofftransport, was darauf hindeutet, dass die peritoneale Permeabilität bei den Chlorhexidingluconat-exponierten Mäusen zunimmt. Verwenden Sie während der Durchführung eines intraperitonealen Injektionsverfahrens die Pinzette und pflücken Sie die Bauchhaut der Maus, um eine punktionsbedingte intraperitoneale Organschädigung zu vermeiden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Quelle: de Vries, C. R., et.al. Ein verzögertes Impfungsmodell der chronischen Wundinfektion von Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020)Dieses Video zeigt die verzögerte Impfung von leuchtender Pseudomonas aeruginosa in eine Maus, die zwei vollwertige Dorsalhautwunden trägt, die von einem transparenten Filmverband abgedeckt sind. Dies erleichtert die Bildung von Biofilmen und die Entstehung chronischer Infektionen. Regelmäßige Biolumineszenzüberwachung ermöglicht die Quantifizierung der...

Entwicklung eines Mausmodells der chronischen Pseudomonas aeruginosa-Hautwundinfektion 

Hier beschreiben wir eine neuartige diabetische Mausmodell nutzt haarlose Mäusen für Echtzeit-, nicht-invasive Überwachung der Biofilm Wundinfektionen der Biolumineszenz Pseudomonas Aeruginosa. Diese Methode lässt sich die Infektion anderer Bakterienarten und genetisch veränderten Mikroorganismen, einschließlich Multi-Spezies Biofilme und testen die Wirksamkeit von Antibiofilm Strategien anpassen.

Besuchen Sie die Licht-Seite: In Vivo Monitoring von Pseudomonas Aeruginosa Biofilms Infektionen bei chronischen Wunden in einer diabetischen haarlose Mausmodell

Dieser Artikel beschreibt die Methode für die chirurgische Platzierung bei Mäusen eine intraperitoneale Katheter befestigt an einem Zugang-Anschluss, der an der Rückseite des Tieres positioniert ist. Darüber hinaus erklärt, das Verfahren für eine 5/6 Nephrektomie urämischen Bundesstaat PD-Patienten ähneln.

Chirurgische Techniken zur Platzierung des Katheters und 5/6 Nephrektomie in murinen Modellen der Peritonealdialyse

Chronische Wunden werden aus akuten Wunden auf einem diabetischen Mausmodell entwickelt, indem sie nach einer schweren Kutanwunde einen hohen Grad an oxidativem Stress induzieren. Die Wunde wird mit Inhibitoren für Katathase und Glutathionperoxidase behandelt, was zu einer beeinträchtigungen Heilung und Biofilmentwicklung durch Bakterien im Hautmikrobiom führt.

Protokoll zur Herstellung chronischer Wunden bei diabetischen Mäusen

Hier stellen wir ein Protokoll vor, um apische Parodontitis bei Mäusen lokal zu induzieren. Wir zeigen, wie man ein Loch in den Zahn der Maus bohrt und seinen Zellstoff freilegt, um lokale Entzündungen zu verursachen. Es werden auch Analysemethoden zur Untersuchung der Art dieser Entzündung wie Mikro-CT und Histologie gezeigt.

Induzieren apische Parodontitis bei Mäusen

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine standardisierte chirurgische Methode für das Elastase-induzierte AAA-Modell durch die direkte Anwendung von Elastase auf die Adventitia der infrarenalen abdominalen Aorta bei Mäusen.

Mausmodell für das abdominale Aortenaneurysma, das durch die perivaskuläre Anwendung der Elastase induziert wird

Dieser Artikel beschreibt Modifikationen eines Verfahrens zur Implantation eines Peritonealdialysekatheters in ein Mausmodell, um größere technische Probleme zu vermeiden, die bei den herkömmlichen Techniken beobachtet werden.

Ein retrograder Implantationsansatz für die Peritonealdialysekatheter-Platzierung bei Mäusen

Diese Studie stellt zwei entscheidende experimentelle Techniken vor: die Konstruktion eines murinen Wundmodells zur Beurteilung des Wundverschlusses und die Herstellung von einzelligen Suspensionen aus der Haut von Mäusen, um die zelluläre Lebensfähigkeit zu erhalten.

Maus-Wundmodelle und Herstellung von Einzelzellsuspensionen

Dieses Manuskript stellt ein Protokoll zur Etablierung eines Modells für ein abdominales Aortenaneurysma der Maus unter Verwendung von Calciumchlorid und Elastase vor, das die Vorteile früherer Modellierungsmethoden kombiniert. Dieses Modell kann verwendet werden, um die pathophysiologischen Mechanismen zu untersuchen, die abdominalen Aortenaneurysmen zugrunde liegen.

Ein Modell eines abdominalen Aortenaneurysmas der Maus durch periadventielle Calciumchlorid- und Elastase-Infiltration

Die intraperitoneale Verabreichung von Arzneimitteln ist ein sicherer und wirksamer nicht-invasiver Ansatz zur Induktion von Pankreasverletzungen. In dieser Studie wurden fünf verschiedene intraperitoneale Injektionsprotokolle an Mäusen verglichen, um einen unterschiedlichen Grad an Pankreasschädigung zu induzieren, und ein Modell für schwere Pankreasverletzungen etabliert, um die pathologischen Veränderungen und Behandlungsstrategien für schwere akute Pankreatitis (SAP) zu untersuchen.

Vorbereitung eines Mäusemodells für schwere akute Pankreatitis durch eine Kombination aus Caerulein und Lipopolysaccharid intraperitoneale Injektion

Erfahren Sie ein einfaches Mäusemodell der Peritonealdialyse zur Untersuchung von Peritonealfibrose mit Chlorhexidingluconat. Diese Methode ermöglicht Forschern, physiologische und pathologische Veränderungen während der PD-Therapie zu studieren.

Ein Mäusemodell der Chlorhexidingluconat-induzierten Peritonealschädigung

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