Name: Messung der endothelabhängigen Vasorelaxation in der thorakalen Aorta der Maus mittels tensometrischer Kleinvolumenkammermyographie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Erfahren Sie die Anwendung der tensometrischen Myographie zur Messung der endothelabhängigen Vasorelaxation in der Maus-Aorta. Diese zuverlässige Methode ermöglicht präzise Untersuchungen der Gefäßfunktion.

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Diese Arbeit wurde durch Mittel der National Institutes of Health (R15HL145646) und des Midwestern University College of Graduate Studies unterstützt.

<ol><li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li>
<li>Deanfield, J. E., Halcox, J. P., Rabelink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function+and+dysfunction%3A+Testing+and+clinical+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function and dysfunction: Testing and clinical relevance.</a> Circulation. 115 (10), 1285-1295 (2007).</li>
<li>Lerman, A., Zeiher, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function%3A+Cardiac+events%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function: Cardiac events.</a> Circulation. 111 (3), 363-368 (2005).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> International Journal of Biological Sciences. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Galley, H. F., Webster, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Physiology of the endothelium.</a> British Journal of Anaesthesia. 93 (1), 105-113 (2004).</li>
<li>Orita, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+phosphate%2C+bicarbonate%2C+and+Hepes+buffered+storage+solutions+on+hypothermic+injury+to+immature+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Drugs+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of phosphate, bicarbonate, and Hepes buffered storage solutions on hypothermic injury to immature myocytes.</a> Cardiovascular Drugs and Therapy. 8 (6), 851-859 (1994).</li>
<li>Liu, Y. H., Bian, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicarbonate-dependent+effect+of+hydrogen+sulfide+on+vascular+contractility+in+rat+aortic+rings%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Bicarbonate-dependent effect of hydrogen sulfide on vascular contractility in rat aortic rings.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (4), 866-872 (2010).</li>
<li>Griffiths, K., Madhani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+wire+myography+to+investigate+vascular+tone+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%3A+Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">The use of wire myography to investigate vascular tone and function.</a> Methods in Molecular Biology: Atherosclerosis. 2419, 361-367 (2022).</li>
<li>Pfeiffer, S., Leopold, E., Schmidt, K., Brunner, F., Mayer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+nitric+oxide+synthesis+by+NG-nitro-L-arginine+methyl+ester+%28L-NAME%29%3A+Requirement+for+bioactivation+to+the+free+acid%2C+NG-nitro-L-arginine%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of nitric oxide synthesis by NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME): Requirement for bioactivation to the free acid, NG-nitro-L-arginine.</a> British Journal of Pharmacology. 118 (6), 1433-1440 (1996).</li>
<li>Bacon, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+dysfunction+in+systemic+vasculitis%3A+New+developments+and+therapeutic+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell dysfunction in systemic vasculitis: New developments and therapeutic prospects.</a> Current Opinion in Rheumatology. 17 (1), 49-55 (2005).</li>
<li>Gallo, G., Volpe, M., Savoia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+dysfunction+in+hypertension%3A+Current+concepts+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endothelial dysfunction in hypertension: Current concepts and clinical implications.</a> Frontiers in Medicine. 8, 798958(2021).</li>
<li>Mikolajczyk, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+important+role+of+endothelium+and+extracellular+vesicles+in+the+cellular+mechanism+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">The important role of endothelium and extracellular vesicles in the cellular mechanism of aortic aneurysm formation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (23), 13157(2021).</li>
<li>Vallance, P., Hingorani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+nitric+oxide+in+humans+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Endothelial nitric oxide in humans in health and disease.</a> International Journal of Experimental Pathology. 80 (6), 291-303 (1999).</li>
<li>Tousoulis, D., Kampoli, A. M., Tentolouris, C., Papageorgiou, N., Stefanadis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+nitric+oxide+on+endothelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Vascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The role of nitric oxide on endothelial function.</a> Current Vascular Pharmacology. 10 (1), 4-18 (2012).</li>
<li>Gibson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+aerobic+exercise+blocks+elastin+fiber+fragmentation+and+aortic+dilatation+in+a+mouse+model+of+Marfan+syndrome+associated+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mild aerobic exercise blocks elastin fiber fragmentation and aortic dilatation in a mouse model of Marfan syndrome associated aortic aneurysm.</a> Journal of Applied Physiology. 123 (1), 147-160 (2017).</li>
<li>Xiao, X., Ping, N. N., Li, S., Cao, L., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimal+initial+tension+for+rat+basilar+artery+in+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">An optimal initial tension for rat basilar artery in wire myography.</a> Microvascular Research. 97, 156-158 (2015).</li>
<li>Chung, A. W., Yang, H. H., Yeung, K. A., van Breemen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+and+pharmacological+approaches+to+investigate+the+pathogenesis+of+Marfan+syndrome+in+the+abdominal+aorta%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanical and pharmacological approaches to investigate the pathogenesis of Marfan syndrome in the abdominal aorta.</a> Journal of Vascular Research. 45 (4), 314-322 (2008).</li>
<li>Zhong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+impairs+soluble+guanylyl+cyclase+function+in+mouse+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Age impairs soluble guanylyl cyclase function in mouse mesenteric arteries.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (21), 11412(2021).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Das Gebiet der vaskulären Biologie stützt sich stark auf Werkzeuge, die Forschern helfen, die funktionelle und strukturelle Integrität der Blutgefäßwand zu beurteilen. Es erfordert auch besondere Aufmerksamkeit für die direkten und indirekten Wechselwirkungen zwischen den drei Schichten der Blutgefäße: die Intima, die Medien und die Adventitia. Unter diesen drei Schichten wird die Intima durch eine Monoschicht von Endothelzellen gebildet und hat eine sehr wichtige Funktion bei der Regulierung der Gefäßgesundheit und Hämo...

In den letzten Jahrzehnten wurde das kleine Kammermyographiesystem verwendet, um die Reaktivität verschiedener Schichten von Blutgefäßwänden als Reaktion auf verschiedene pharmakologische Wirkstoffe und Neurotransmitter in einer Ex-vivo-Echtzeitumgebung zu messen. Die vaskuläre Reaktivität ist ein wesentlicher Bestandteil eines gesunden funktionellen Blutgefäßes und entscheidend für die Regulierung des Blutflusses und der Durchblutung in peripheren und zerebralen Gefäßen1. Innerhalb der Blutgefäßwand ist die Interaktion zwischen endothelialen und glatten Muskelschichten eine wichtige Determinante des Gefäßtonus, der auch ständig durch strukturelle Veränderungen in der Bindegewebsschicht um die Blutgefäßwand (Adventitia) beeinflusst wird.
Die Endothelschicht steuert die Vasomotion, indem sie einige gefäßerweiternde Faktoren freisetzt, darunter Stickstoffmonoxid (NO), Prostacyclin (PGI2) und Endothel-abgeleiteter Hyperpolarisationsfaktor (EDHF), oder indem vasokonstriktive Mittel wie Endothelin-1 (ET-1) und Thromboxan (TXA2) 2,3,4 produziert werden. Unter diesen Faktoren wurde NO ausführlich untersucht, und seine wichtige regulatorische Rolle bei anderen kritischen zellulären Funktionen wie Entzündung, Migration, Überleben und Proliferation wurde in der wissenschaftlichen Literatur häufig zitiert 2,5.
Auf dem Gebiet der Gefäßbiologie hat die Kammermyographie Gefäßphysiologen und Pharmakologen ein wertvolles und zuverlässiges Werkzeug zur Messung der Endothelfunktion in einem streng kontrollierten semiphysiologischen System zur Verfügung gestellt1. Derzeit stehen Wissenschaftlern zwei verschiedene Myographensysteme zur Verfügung: Draht- (oder Pin-) tensometrische (isometrische) Myographie und Druckmyographie. In einem Drahtmyographiesystem wird das Blutgefäß zwischen zwei Drähten oder Stiften gestreckt, was die isometrische Messung der Kraft- oder Spannungsentwicklung in der Wand des Blutgefäßes ermöglicht, während die Druckmyographie eine bevorzugte Plattform für Messungen der vaskulären Reaktivität in kleinen Widerstandsarterien ist, wo Änderungen des Blutdrucks als Hauptstimulus für Veränderungen des Gefäßtonus und der Vasomotion angesehen werden. Es besteht allgemeine Übereinstimmung darüber, dass die Druckmyographie für kleine Widerstandsarterien wie Mesenterial- und Hirnarterien einen Zustand schafft, der den physiologischen Bedingungen im menschlichen Körper näher kommt. Der kleine Kammermyograph kann für Gefäße mit sehr kleinen Durchmessern (200-500 μm) bis hin zu viel größeren Gefäßen wie der Aorta verwendet werden.
Während der Drahtmyograph ein leistungsfähiges System zur Aufzeichnung der Blutgefäßspannung unter isometrischen Bedingungen ist, ist der Druckmyograph ein geeigneteres System zur Messung von Änderungen des Gefäßdurchmessers als Reaktion auf Änderungen der isobaren Bedingungen. Die Durchmesseränderungen im Gefäß als Reaktion auf Änderungen des Drucks oder des Flusses sind in einer kleinen Muskelarterie (Arteriole) im Vergleich zu großen elastischen Arterien wie der Aorta viel größer. Aus diesen Gründen gilt der Druckmyograph als besseres Werkzeug für kleine Blutgefäße mit erheblicher Vasoreaktivität1. Eine der weiteren praktischen Stärken der zehnometrischen Mehrkammer-Kammermikrosometrie mit kleinem Volumen besteht darin, dass man den Beitrag verschiedener Mechanismen zur vaskulären Reaktivität erkennen kann, indem man mehrere (bis zu vier) Segmente derselben Arterie und desselben Tieres untersucht, um die Variabilität zu reduzieren und robuste und schlüssige Daten zu liefern. Es ist auch technisch relativ einfach einzurichten und zu warten. Gefäße fast jeder Größe können mit einem Drahtmyographen untersucht werden. Es ist eine kostengünstigere Lösung zur Beurteilung der Gefäßfunktion und ist eine gute Alternative zur Druckmyographie in Experimenten, bei denen die Länge des sezierten Gefäßes für das Druckmyographenprotokoll zu kurz ist.
Dieser Bericht enthält ein detailliertes Protokoll für die Beurteilung der Endothelfunktion im isolierten Brustaortenring der Maus unter Verwendung von Montagestiften in der tensometrischen Myographietechnik der kleinen Kammerkammer unter Verwendung des Mehrkammer-Myographiesystems DMT-620 (DMT-USA). Dieses Protokoll verwendet eine 6 Monate alte männliche C57BL6-Maus mit einem Durchschnittsgewicht zwischen 25-35 g. Glücklicherweise kann dieses Protokoll auf verschiedene Tierarten und -gewichte angewendet werden, wenn man die breite Palette von Schiffstypen und -durchmessern berücksichtigt, für die dieses Protokoll verwendet werden kann.

<table><tbody><tr><td>Acetylcholin</td><td>SigmaAldrich</td><td>A6625-100G</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Carbogen Gas</td><td>Matheson</td><td>H103847</td><td></td></tr><tr><td>Präparierschere</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>DMT 620 Mehrkammer-Myographensystem</td><td>DMT</td><td>DMT 620</td><td>Mehrkammer-Myographensystem</td></tr><tr><td>Dumont Pinzette</td><td>FST</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>SigmaAldrich</td><td>E5134-10G</td><td></td></tr><tr><td>Glukose</td><td>SigmaAldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>SigmaAldrich</td><td>H7006-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P9541-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5655-1KG</td><td></td></tr><tr><td>LabChart</td><td>ADI-Instrumente</td><td></td><td>Datenerfassungssoftware</td></tr><tr><td>Lichtquelle</td><td>Volpi</td><td>14363</td><td></td></tr><tr><td>L-Name</td><td>Fischer Scientific</td><td>50-200-7725</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2643-500G</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Leica</td><td>S6D</td><td>Stereo-Zoom-Mikroskop</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886-5KG</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Organbadsystem</td><td>DMT</td><td>720MO</td><td></td></tr><tr><td>Phenylephrin</td><td>SigmaAldrich</td><td>P6126-10G</td><td></td></tr><tr><td>Pumpe</td><td>Welch</td><td>2546B-01</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td>ADI Instrumente</td><td>LabChart 8.1.20</td><td></td></tr><tr><td>Federschere</td><td>FST</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Kit</td><td>Elektronenmikroskopie Dienstleistungen</td><td>24236-10</td><td>Silikonelastomer Kit</td></tr><tr><td>Tankregler</td><td>Fischer Scientific</td><td>10575147</td><td></td></tr><tr><td>Wasserbadsystem</td><td>Fischer Scientific</td><td>15-462-10</td><td></td></tr></tbody></table>

messung der endothelabhängigen vasorelaxation in der thorakalen aorta der maus mittels tensometrischer kleinvolumenkammermyographie

Measurement of Endothelium-Dependent Vasorelaxation in the Mouse Thoracic Aorta Using Tensometric Small Volume Chamber Myography

Die tensometrische Myographie mit kleinen Kammern ist eine häufig verwendete Technik zur Beurteilung der vaskulären Kontraktilität kleiner und großer Blutgefäße bei Labortieren und kleinen Arterien, die aus menschlichem Gewebe isoliert wurden. Die Technik ermöglicht es Forschern, isolierte Blutgefäße in einer streng kontrollierten und standardisierten (nahezu physiologischen) Umgebung aufrechtzuerhalten, mit der Möglichkeit, sich an verschiedene Umweltfaktoren anzupassen, während die isolierten Gefäße mit verschiedenen pharmakologischen Wirkstoffen herausgefordert werden, die Vasokonstriktion oder Vasodilatation induzieren können. Die Myographenkammer bietet auch eine Plattform zur Messung der vaskulären Reaktivität als Reaktion auf verschiedene Hormone, Inhibitoren und Agonisten, die die Funktion der glatten Muskulatur und der Endothelschichten separat oder gleichzeitig beeinflussen können. Die Blutgefäßwand ist eine komplexe Struktur, die aus drei verschiedenen Schichten besteht: der Intima (Endothelschicht), den Medien (glatte Muskulatur und Elastinfasern) und der Adventitia (Kollagen und anderes Bindegewebe). Um ein klares Verständnis der funktionalen Eigenschaften jeder Schicht zu erhalten, ist es wichtig, Zugang zu einer experimentellen Plattform und einem System zu haben, die einen kombinierten Ansatz zur gleichzeitigen Untersuchung aller drei Schichten ermöglichen. Ein solcher Ansatz erfordert den Zugang zu einem semiphysiologischen Zustand, der die In-vivo-Umgebung in einer Ex-vivo-Umgebung nachahmen würde. Die tensometrische Myographie mit kleinen Kammern bietet eine ideale Umgebung, um die Auswirkungen von Umwelthinweisen, experimentellen Variablen oder pharmakologischen Agonisten und Antagonisten auf die vaskulären Eigenschaften zu bewerten. Seit vielen Jahren verwenden Wissenschaftler die tensometrische Myographie-Technik, um die Endothelfunktion und die Kontraktilität der glatten Muskulatur als Reaktion auf verschiedene Wirkstoffe zu messen. In diesem Bericht wird ein tensometrisches Myographiesystem mit kleinem Volumen verwendet, um die Endothelfunktion in der isolierten Mausaorta zu messen. Dieser Bericht konzentriert sich darauf, wie die tensometrische Myographie der kleinvolumigen Kammer verwendet werden kann, um die funktionelle Integrität des Endothels in kleinen Segmenten einer großen Arterie wie der thorakalen Aorta zu bewerten.

Das hier erläuterte tensometrische Kleinkammermyographieprotokoll ist die Standardmethode zur Messung der Gefäßreaktivität in kleinen und großen Arterien und ermöglicht die gleichzeitige Messung der vaskulären Reaktivität in bis zu vier Blutgefäßsegmenten desselben experimentellen kleinen Labortieres. In diesem Bericht verwenden wir das System speziell zur Messung der Endothelfunktion in der isolierten Mausaorta (Abbildung 1). In diesem Protokoll sind isolierte Aortensegmente auf einer klein...

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Konzepte und die technische Anwendung der tensometrischen Myographentechnik unter Verwendung eines Mehrkammer-Myographensystems bei der experimentellen ex vivo Bewertung der Aortenendothelfunktion der Maus.

Messung der endothelabhängigen Vasorelaxation in der thorakalen Aorta der Maus mittels tensometrischer Kleinvolumenkammermyographie

Small volume chamber tensometric myography is a commonly used technique to evaluate the vascular contractility of small and large blood vessels in ...

Wir demonstrieren die isometrische oder tensometrische Myographie als Goldstandardprotokoll, um die Reaktivität von kleinen Widerständen oder großen Blutgefäßen in einem gut kontrollierten physiologischen Zustand zu messen. Die Messungen sind sehr reproduzierbar und zuverlässig. Die Technik ist sehr wertvoll, um es Forschern zu ermöglichen, verschiedene Schichten von Blutgefäßen separat zu untersuchen oder die Interaktion zwischen verschiedenen Schichten der Blutgefäßwand gleichzeitig zu untersuchen.Das Verfahren wird von Robert Folk, dem Forschungslaborspezialisten aus meinem Labor, demonstriert. Schalten Sie zunächst das Wasserbad ein und stellen Sie es auf 37 Grad Celsius ein. Geben Sie zwei Becher mit entsprechender Beschriftung in das Wasserbad, eines mit 600 Milliliter HEPES-PSS-Lösung und eines mit 150 Milliliter kaliumreicher Lösung.Belüften Sie ein Becherglas mit 300 Milliliter HEPES-PSS-Lösung mindestens 10 Minuten lang mit Carbogengas. 30 Milliliter der belüfteten HEPES-PSS-Lösung in ein 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen geben, entsprechend etikettieren und auf Eis legen. Bewahren Sie die verbleibende belüftete HEPES-PSS-Lösung auf Eis auf, um sie während der Aortendissektion zu verwenden.Schalten Sie die Vierkammer-Myographeneinheit bei 5 Milliliter HEPES-PSS-Lösung in jede Myographenkammer ein und stellen Sie die Hitze auf 37 Grad Celsius ein. Lassen Sie die Lösung in jeder Kammer 30 Minuten lang belüften und prüfen Sie, ob die Kammern die gewünschten 37 Grad Celsius erreicht haben. Schalten Sie die Datenerfassungshardware und den Computer für die Datenerfassung für Myographen ein.Den von den euthanasierten Mäusen ausgeschnittenen Brustkorb in eine klare, mit Silikonelastomer beschichtete Petrischale geben, die mit eiskalt belüftetem HEPES-PSS-Puffer gefüllt ist, und beidseitig festnageln. Unter dem Mikroskop das Herz und die befestigte Aorta vorsichtig aus dem Brustkorb schneiden und entfernen und in eine saubere, mit Silikonelastomer beschichtete Schale geben, dann sanft Fettbindegewebe und geronnenes Blut aus der Aorta entfernen. Mit einer scharfen kleinen Schere sezieren und isolieren Sie die gesamte Aorta vom Bogenbereich bis zum Boden der absteigenden Aorta.Schneiden Sie die sezierte Aorta in vier Segmente von je 2 Millimetern. Verwenden Sie das Minilineal innerhalb der Schale als Referenz. In Kammern, die bereits 5 Milliliter erwärmtem und belüftetem HEPES-PSS-Puffer enthalten, schieben Sie jedes der 2-Millimeter-Aortensegmente vorsichtig mit einer Pinzette auf die beiden Montagestifte.Wenn Sie die Kammer wieder in die Myographeneinheit einsetzen, bewegen Sie die Stifte langsam auseinander, indem Sie den Mikrometer gegen den Uhrzeigersinn drehen, damit das Aortensegment nicht von den Stiften rutscht. Bringen Sie jede Myographenkammer in das Gerät zurück und beginnen Sie mit der Belüftung der Kammern bei 37 Grad Celsius für 20 Minuten. Die Kammern abtropfen lassen und 5 Milliliter frische, warme, belüftete HEPES-PSS-Lösung in jede Kammer geben.Passen Sie bei Bedarf die Kraftmessungen nach, um die optimale Spannung von 6 Millinewton abzulesen. Lassen Sie das Gewebe für weitere 15 bis 20 Minuten ruhen. Öffnen Sie die Datenerfassungssoftware.Ändern Sie die Tracking-Nummern von 50 zu 1 zu 500 zu 1 und drücken Sie Start. Bevor Sie ein neues Experiment starten, stellen Sie sicher, dass Sie die entsprechende Bezeichnung auf der Datenerfassungssoftware hinzufügen. Lassen Sie die Kammern noch einmal abtropfen, bevor Sie 5 Milliliter kaliumreiche Lösung in jede Kammer geben.Entleeren Sie die Kammern wieder, sobald die kontraktile Reaktion auf die kaliumreiche Lösung ein Plateau für die Krafterzeugung erreicht. Waschen Sie das Gewebe dreimal mit HEPES-PSS-Lösung. Fügen Sie 5 Milliliter kaliumreiche Lösung in jede Kammer hinzu.Entleeren Sie die Kammern, sobald die kontraktile Reaktion auf kaliumreiche Lösung ein Plateau für die Krafterzeugung erreicht, und waschen Sie das Gewebe dreimal mit HEPES-PSS, dann ruhen Sie das Gewebe für 15 bis 20 Minuten. Die Aortensegmente mit dem Vasokonstriktormittel PE in einer submaximalen Dosis vorkontrahieren. Lassen Sie die PE-induzierte Kontraktionskurve ein Plateau für die Spannungsentwicklung erreichen.Fügen Sie PE ein Plateau der Spannungsentwicklung bei 5 Mikrolitern steigender Dosen von Acetylcholin-Arbeitsmateriallösungen in 3-Minuten-Intervallen hinzu, um die endgültigen Konzentrationen von Acetylcholin von 50 Picomolar bis 10 Mikromolar in der Myographenkammer zu bestimmen, wie im Textmanuskript beschrieben. Nach Abschluss des Dosis-Wirkungs-Experiments die Kammern entleeren, die Aortensegmente dreimal mit warmer und belüfteter HEPES-PSS-Lösung waschen und das Gewebe 30 Minuten ruhen lassen. Nachdem Sie die Aortensegmente für 30 Minuten ruhen lassen, die Kammern entleeren und frische, warme kaliumreiche Lösung in jede Kammer geben, dann die Kammern abtropfen lassen und das Gewebe mit HEPES-PSS-Lösung waschen, wenn die Kontraktionsreaktion auf kaliumreiche Lösung ein F-Plateau erreicht, wie zuvor gezeigt.Vorinkubation der Aortensegmente mit L-NAME durch Zugabe von 10 Mikrolitern der vorbereiteten 100-Millimolar-Arbeitsmateriallösung, um den Beitrag der Stickstoffmonoxidproduktion zur beobachteten Acetylcholin-induzierten Vasorelaxation zu beurteilen. Ohne den L-Namen zu entfernen, fügen Sie die submaximale Dosis von PE in die Kammer ein, um eine Aortenkontraktion zu induzieren. Warten Sie, bis die PE-induzierte Kontraktionskurve ein Plateau für die Spannungsentwicklung erreicht, und fügen Sie dann Acetylcholin in die Myographenkammer hinzu, um eine Endkonzentration von 500 Nanomolaren zu erreichen.Warten Sie einige Minuten, um mögliche Änderungen in der Kraftentwicklung zu registrieren, bis das gebildete Plateau stabil ist. Die Kammern abtropfen lassen und das Gewebe dreimal mit warmer, belüfteter HEPES-PSS-Lösung waschen. Positionieren Sie die Myographenkammer unter dem Mikroskop und führen Sie vorsichtig einen kleinen Draht durch das Lumen der Aorta.Bewegen Sie den Draht für kurze Zeit vorsichtig durch das Lumen. Schneiden Sie die Aorta in 2-Millimeter-Aortenringe und montieren Sie diese Ringe auf die Myographenkammer. Stellen Sie die optimale Spannung auf 6 Millinewton ein und lassen Sie das Gewebe 30 Minuten in belüftetem warmen HEPES-PSS-Puffer ruhen, dann die Kammern abtropfen lassen und 5 Milliliter frische, warme belüftete HEPES-PSS-Lösung in jede Kammer geben.Null die Kraft für alle Myographenkammern und drehen Sie den Mikrometer langsam gegen den Uhrzeigersinn, um den Abstand zwischen den Pins zu vergrößern, bis die registrierte Kraft die gewünschte optimale Spannung für die Mausaorta erreicht. Drücken Sie das Gewebe für weitere 15 bis 20 Minuten bei optimaler Spannung, dann entleeren Sie die Kammern erneut, bevor Sie 5 Milliliter kaliumreiche Lösung in jede Kammer geben. Entleeren Sie die Kammern erneut und waschen Sie das Gewebe dreimal mit HEPES-PSS-Lösung, sobald die Kontraktionsreaktion auf die kaliumreiche Ionenlösung ein Plateau erreicht.Ruhen Sie das Gewebe für 15 bis 20 Minuten, dann ziehen Sie die Aortensegmente mit PE, dem Vasokonstriktor, vor. Wenn die PE-induzierte Kraft ein Plateau erreicht, fügen Sie die submaximale Konzentration von Acetylcholin in die Myographenkammer hinzu, um eine Endkonzentration von 500 Nanomolaren zu erreichen. Warten Sie 3 Minuten, um sicherzustellen, dass sich das registrierte Plateau für die PE-induzierte Kraftentwicklung nicht ändert, bevor Sie das Experiment beenden.Die Integrität und Lebensfähigkeit jedes isolierten Schiffes wurde durch die Aufzeichnung der kontraktilen Krafterzeugung bewertet. Der Höhepunkt der aufgezeichneten Kraft wurde später verwendet, um die Krafterzeugung für dasselbe Segment als Reaktion auf die Agonisten zu normalisieren. Die Endothel-vermittelten Vasorelaxationsmessungen zeigten die durch die glatte Muskulatur vermittelte Kontraktion und Krafterzeugung.Wenn die PE-induzierte Kontraktion ein Plateau erreichte, erreichten steigende Dosen von Acetylcholin die maximale Vasorelaxation im isolierten Segment. Der Stickstoffmonoxid-Inhibitor L-NAME blockierte die Acetylcholin-induzierte Vasorelaxation in der vorkontrahierten Aorta vollständig, was darauf hindeutet, dass Acetylcholin durch Erhöhung der Stickstoffmonoxidproduktion eine Aortenvasorelaxation induziert. Darüber hinaus blockierte das Entfernen der Endothelschicht aus den Aortensegmenten auch die Acetylcholin-induzierte Vasorelaxation, was die Rolle des Endothels bei der Entspannung der Blutgefäße unterstreicht.Achten Sie darauf, beim Behandeln, Reinigen und Sezieren des Blutgefäßes vorsichtig zu sein. Es ist wichtig, die pharmakologischen Agonisten und Inhibitoren mit Vorsicht hinzuzufügen, um die Blutgefäßringe an den Myographenkammern nicht zu stören. Die Informationen können helfen, Experimente zu entwerfen, um mögliche therapeutische Ansätze zur Behandlung der Funktionsstörung der Schichten eines bestimmten Blutgefäßes zu erforschen.

measurement-endothelium-dependent-vasorelaxation-mouse-thoracic-aorta

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Eine automatisierte Myographie Methode zur Kraftmessung in isolierten mesenterialen Arterien beschrieben. Es beschäftigt Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myographions 510A, um Antworten auf Phenylephrin und extrazelluläres Calcium zu bestimmen. Die Methode ermöglicht eine konsistente Bestimmung der isometrischen Antworten auf Agonisten in kleinen Gefäßen mit einem Durchmesser von 60 bis 300 um, unabhängig.

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In Druck Myographie, wird ein intaktes kleines Segment von einem Schiff auf zwei kleine Kanülen angebracht und unter Druck gesetzt, um eine geeignete luminalen Druck. Hier beschreiben wir die Methode Vasorelaxation Reaktion der Maus 3...

Beurteilung Murine Widerstand Artery Funktion Mit Druck Myographie

Druck Myographie wird verwendet, um Vasoaktivität der kleinen Arterien, die anhaltende Verengung zu entwickeln, wenn unter Druck zu bewerten. Diese Handschrift ein detailliertes Protokoll, um in isolierten Segmenten der kleinen Mesenterialarterien von Ratten, Vasoaktivität und die Wirkung der intraluminale Druck auf die Gefäßdurchmesser zu bewerten.

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Endotheliale Dysfunktion ist mit zahlreichen Krankheitszuständen verbunden und prädiktiv für unerwünschte kardiovaskuläre Ereignisse bei Menschen. Flussvermittelte Vasodilatation (FMD) ein nicht-invasiven Ultraschall Verfahren zur Bewertung der endothelialen Funktion. Methodische Entscheidungen und Erfahrung des Bedieners können die Ergebnisse beeinflussen. Ein systematischer Ansatz zur Bekämpfung der MKS in Studien am Menschen wird hier diskutiert.

Ultraschall Beurteilung der Endothelial Abhängige Fluss Vasodilatation der Arteria brachialis in der klinischen Forschung

Wir beschreiben eine Technik zur Messung der Aortensteifigkeit anhand ihrer Druck-Durchmesser-Beziehung in vivo bei Mäusen. Der Aortendurchmesser wird mittels Ultraschall erfasst und der Aortendruck invasiv mit einem Festkörperdruckkatheter gemessen. Der Blutdruck wird schrittweise verändert und der resultierende Durchmesser gemessen.

Mess aufsteigende Aorta Steifigkeit In-vivo- In Mäuse Mit Ultraschall

Videomicroscopy Systeme werden verwendet, um die funktionelle Eigenschaften der isolierten Fettgewebe Arteriolen in Reaktion auf physiologische und pharmakologische Stimuli zu untersuchen. Diese Technik kann verwendet werden, zu prüfen, mikrovaskuläre Phänotypen in verschiedenen Fettgewebe Domänen bei übergewichtigen Menschen.

Bewertung der menschlichen Fettgewebe mikrovaskuläre Funktion mit Videomicroscopy

Dieses Manuskript beschreibt in Vitro Videomikroskopie Protokolle für die Bewertung der Gefäßfunktion in Ratte zerebralen Widerstand Arterien. Das Manuskript beschreibt auch Techniken für die Bewertung der kapilläre Dichte mit Gewebekulturen beschrifteten Lektine und Gewebe Perfusion mit Laser-Doppler-Flowmetry.

Bewertung der vaskulären Kontrollmechanismen Nutzung Videomikroskopie der isolierten Widerstand Arterien von Ratten

Myograph Leitertechnik dient zur vaskulären glatten Muskelzellen Funktionen und Bildschirm neue Drogen zu untersuchen. Wir berichten über ein detailliertes Protokoll zur Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie und für das screening von neuen Muskelrelaxantien von vaskulären glatten Muskelzellen.

Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit Draht Myographie

High-Intensity-Training in Hypoxie ist ein Protokoll, die potenziell vorteilhaft bei einigen Patienten vaskuläre Anpassungen zu induzieren und Athleten zu verbessern Sprint Fähigkeit wiederholt bewährt hat. Hier testen wir die Machbarkeit der Ausbildung Mäuse verwenden, das Protokoll und die vaskulären Anpassungen mit ex-Vivo Gefäßfunktion Bewertung zu identifizieren.

Supramaximalen hypoxischer Intensität und Gefäßfunktion Bewertung bei Mäusen

Das Protokoll beschreibt die Verwendung von Drahtsynografie zur Bewertung der transmural isometrischen Spannung von mesenterischen Arterien, die von Mäusen isoliert sind, unter besonderer Berücksichtigung der Modulation durch Faktoren, die aus Endothelzellen und perivaskulären Fettgewebe freigesetzt werden.

Bewertung der Reaktion der Gefäß-Tone mit isolierten mesenterischen Arterien mit einem Schwerpunkt auf der Modulation durch Perivascular Adipose Tissues

Erfahren Sie die Anwendung der tensometrischen Myographie zur Messung der endothelabhängigen Vasorelaxation in der Maus-Aorta. Diese zuverlässige Methode ermöglicht präzise Untersuchungen der Gefäßfunktion.

Messung der endothelabhängigen Vasorelaxation in der thorakalen Aorta der Maus mittels tensometrischer Kleinvolumenkammermyographie (Video) | JoVE Journal

Messung der endothelabhängigen Vasorelaxation in der thorakalen Aorta der Maus mittels tensometrischer Kleinvolumenkammermyographie

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