Standardisierte Rattenkoronarringpräparation und Echtzeitaufzeichnung dynamischer Spannungsänderungen entlang des Gefäßdurchmessers

Dieses Protokoll stellt detailliert die Lokalisation, Trennung und die Muskelringfixierung von Rattenkoronararterien vor. Bereitstellung einer neuen Methode für die Mechanismen, die Erforschung und die Behandlung verschiedener Herz-Kreislauf-Erkrankungen. Das System eignet sich für und die stabile Aufzeichnung der dynamischen Änderungen der in-vitro-arteriellen Spannung mit einem Durchmesser von 60 Mikrometern bis 10 Millimetern.

Wir schlagen vor, dass Anfänger zuerst die anatomische Lage jedes Gefäßes genau verstehen und mit etwas größeren Gefäßen wie der Brustarterie und der Mesenterialarterie beginnen können. Nachdem Sie das Herz dissoziiert und entfernt haben, beginnen Sie damit, das Restblut aus allen Herzkammern abzulassen, indem Sie es leicht mit einer medizinischen Kunststoffzange zusammendrücken. Geben Sie das vorverarbeitete Herz schnell in eine Petrischale, die 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid gesättigte physiologische Salzlösung bei vier Grad Celsius mit einem pH-Wert von 7,40 enthält.

Um die anatomische Position der Koronararterien genau zu identifizieren, passen Sie die Haltung des isolierten Herzens unter dem Lichtmikroskop gemäß dem schematischen Diagramm an. Schneiden Sie die linke und rechte Ventrikelhöhle entlang der interventrikulären Scheidewand von der Wurzel der Lungenarterie mit chirurgischer Schere und Pinzette ab. Um die linke und rechte Koronararterien vom Myokardgewebe zu dissoziieren, sezieren Sie den rechten Ventrikel unter einem optischen anatomischen Mikroskop, um den rechten Koronararterienzweig gründlich freizulegen.

Identifizieren Sie dann die Position der linken Koronararterie, indem Sie das Herzgewebe um 45 Grad im Uhrzeigersinn drehen. Nachdem Sie das umgebende klebrige Myokardgewebe entfernt haben, erkennen Sie explizit die pulsierenden linken und rechten Koronararterien. Trennen Sie die Koronararterien in der Mitte sofort und tauchen Sie bei vier Grad Celsius vollständig in physiologische Salzlösung ein.

Erwerben Sie einen arteriellen Ring von etwa zwei Millimetern, indem Sie die abgelöste Arterie mit einer anatomischen Schere vertikal schneiden, um die Gefäßspannung unter verschiedenen Reizen aufzuzeichnen. Bereiten Sie zwei zwei Zentimeter lange Edelstahldrähte vor und tränken Sie sie in einer physiologischen Salzlösung von vier Grad Celsius, die mit 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid gesättigt ist. Führen Sie beide Drähte parallel durch den arteriellen Ring zusammen mit der Richtung des Gefäßes unter einem optischen anatomischen Mikroskop und mit Drähten gleicher Länge, die an beiden Enden der Gefäßhöhle freiliegen.

Befestigen Sie den arteriellen Ring mit dem Stahldraht vorne und hinten im Bad des Drahtes Mikroaufnahme, gefüllt mit sprudelnder physiologischer Salzlösung mit 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid. Drehen Sie den horizontalen Schraubenknopf für einen angemessenen vorderen und hinteren Abstand, so dass die beiden Drähte horizontal sind und sich der arterielle Ring in einem natürlichen Entspannungszustand befindet. Öffnen Sie nach der Installation des DMT-Bades am Thermostatgerät die Datenerfassungssoftware, um sicherzustellen, dass das entsprechende Wegsignal aufgezeichnet wurde.

Legen Sie die Parameter fest. Erreichen Sie die optimale Anfangsspannung des arteriellen Rings, indem Sie eine angemessene Spannung entlang des Durchmessers des Gefäßes anwenden. Setzen Sie an dieser Stelle den angezeigten Gefäßspannungswert auf Null.

Danach wenden Sie einen Impulsreiz von drei Milli-Newton auf den arteriellen Ring an, indem Sie die Spiralachse des Bades drehen. Klicken Sie auf die LCD-Anzeige, um sie auf null Milli-Newton einzustellen und eine Stunde lang zu warten. Stellen Sie nach der Inkubation für eine Stunde im sauerstoffgesättigten physiologischen Salzlösungspuffer bei 37 Grad Celsius pH 7,40 den Spannungswert auf Null Milli Newton auf dem Zugkontrollfeld der Drahtmikroskopie.

Führen Sie die kontraktile Aktivität des Koronararterienrings mit der Drahtmyographentechnik durch und validieren Sie in drei separaten Operationen, indem Sie mit 60 Millimolar Kaliumionenlösung für jeweils 10 Minuten stimulieren. Nach jeder Stimulation spülen Sie das Bad mit der mit Sauerstoff gesättigten physiologischen Salzlösung, bis der Gefäßtonus in seinen ursprünglichen Zustand zurückkehrt. Fügen Sie 0,3 Mikromolar U46619 zum Baden hinzu und beobachten Sie es für 10 Minuten.

Fügen Sie ein mikromolares Apigenin hinzu und beobachten Sie vaskuläre Effekte. Wenn die Dilatation ein Plateau erreicht, fügen Sie die nächste Konzentration hinzu. Fügen Sie ein mikromolares Apigenin zu einer 60 millimolaren Kalium-Vorschrumpflösung hinzu, um den vaskulären Effekt zu beobachten.

Wenn die Dilatation ein Plateau erreicht, fügen Sie die nächste Konzentration hinzu. Fügen Sie 28 millimolare Kaliumionen in den ruhenden Gefäßring hinzu. Wenn die Kontraktion ein Plateau erreicht, fügen Sie die nächste Konzentration hinzu.

0,01 Mikromolar U46619 in den ruhenden Gefäßring geben. Wenn die Kontraktion ein Plateau erreicht, fügen Sie die nächste Konzentration hinzu. Nachdem eine anfängliche Spannung von drei Milli Newton auf den arteriellen Ring angelegt wurde, überschritt seine Spannung mehr als zwei Milli Newton, indem dreimal parallel eine 60-millimolare Kaliumionenkonzentration angewendet wurde.

So hatten die oben genannten Verfahren zu einem isolierten Koronarring mit ausgezeichneter physiologischer Aktivität geführt. Die kumulative Kaliumionenkonzentration oder U46619 wurde dem Bad von DMT620M zugesetzt, was zu einer konzentrationsabhängigen Erhöhung des In-vitro-Gefäßtonus führte. Die nächste Konzentration von Kaliumion oder U46619 wurde hinzugefügt, als der Vasokonstriktionseffekt ein Plateau erreichte.

Für isolierte Koronarringe, die durch Kaliumion und U46619 eingeengt sind, verursachte das Testmedikament Apigenin in überraschend konzentrationsabhängiger Weise eine Vasodilatation. Das Herz wird entlang des Ventrikelseptums von der Wurzel der Lungenarterie seziert, wodurch zwei Millimeter koronarer Muskelring freigelegt und getrennt werden. Nach diesem Verfahren können wir die vaskuläre Spannung in retinalen Mikrogefäßen, der Nierenfunktion, der Nierenarterie und in der mittleren Hirnarterie aufzeichnen.

Eine regionale Dynamik von 60 Mikrometern bis 10 Millimetern.