Name: Standardisierte Rattenkoronarringpräparation und Echtzeitaufzeichnung dynamischer Spannungsänderungen entlang des Gefäßdurchmessers (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-16T14:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Lernen Sie die standardisierte Präparation von Rattenkoronararterien und die Echtzeitaufzeichnung dynamischer Spannungsänderungen mit dem Wire-Myographen. Diese Methode ermöglicht präzise Messungen der Gefäßreaktivität für kardiovaskuläre Forschung.

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Diese Arbeit wurde durch das Key R&D-Projekt des Sichuan Provincial Science and Technology Plan (2022YFS0438), der National Natural Science Foundation of China (82104533), der China Postdoctoral Science Foundation (2020M683273) und der Abteilung für Wissenschaft und Technologie der Provinz Sichuan (2021YJ0175) unterstützt.

Das Tierprotokoll wurde vom Management Committee der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine überprüft und genehmigt (Record No. 2021-11). Männliche Sprague Dawley (SD) Ratten (260-300 g, 8-10 Wochen alt) wurden für die vorliegende Studie verwendet. Die Ratten wurden in einer Tierkammer gehalten und konnten während des Experiments frei trinken und essen.
1. Lösungsvorbereitung
<ol><li>Es wird eine physiologische Salzlösung (PSS) hergestellt, indem 118 mM NaCl, 4,7 mM K+, 2,5 mMCaCl2, 1,2 mMKH2PO4, 1,2 mM MgCl2∙6H 2O,25mM NaHCO 3, 11 mM D-Glucose und 5 mM HEPES (siehe Materialtabelle) gelöst werden.</li>
	<li>Es wird eine Salzlösung mit hohem K+-Gehalt hergestellt, indem 58 mM NaCl, 60 mM K+, 2,5 mM CaCl 2, 1,2 mM KH 2 PO4, 1,2 mM MgCl2∙6H 2O, 25 mM NaHCO 3, 11 mMD-Glucose und 5 mM HEPES gelöst werden.</li>
	<li>Die beiden oben genannten Lösungen werden gesättigt und mit einem Mischgas von 95% O2 und 5% CO2 blasen. In der Zwischenzeit werden die pH-Werte der Lösung zwischen 7,38 und 7,42 mit 2 mM NaOH gehalten. HINWEIS: Detaillierte Informationen zur Lösungsvorbereitung finden Sie unter Referenz15.</li>
</ol>2. Koronararteriendissektion der Ratte
<ol><li>Betäuben Sie die Ratte durch Inhalation von 2% Isofluran. Bestätigen Sie die Tiefenanästhesie durch Zehenkneifen und verabreichen Sie bei Bedarf zusätzliche Anästhetika. Öffnen Sie dann sofort die Brusthöhle, um das Herz auf dem tragbaren Operationstisch nach einem zuvor veröffentlichten Bericht12 freizulegen.</li>
	<li>Nachdem Sie das Herz dissoziiert und entfernt haben, lassen Sie das restliche Blut aus allen Herzkammern ab, indem Sie es leicht mit einer medizinischen Kunststoffzange zusammendrücken. Geben Sie das vorverarbeitete Herz schnell in eine Petrischale mit 95%O2 + 5% CO2 gesättigtem PSS bei 4 °C mit einem pH-Wert von 7,40.</li>
	<li>Um die anatomische Position der Koronararterien genau zu identifizieren, passen Sie die Haltung des isolierten Herzens unter dem Lichtmikroskop gemäß dem schematischen Diagramm an (Abbildung 2A). HINWEIS: In der Frontalansicht befanden sich die rechte Ohrmuschel und die Lungenarterie oben links bzw. oben rechts.<ol>
<li>Schneiden Sie die linke und rechte Ventrikelhöhle entlang der interventrikulären Septum von der Wurzel der Lungenarterie mit chirurgischer Schere und Pinzette ab (Abbildung 2B).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Um die linke und rechte Koronararterien vom Myokardgewebe zu dissoziieren, sezieren Sie den rechten Ventrikel unter einem optischen anatomischen Mikroskop, um den rechten Koronararterienzweig gründlich freizulegen. Identifizieren Sie dann die Position der linken Koronararterie, indem Sie das Herzgewebe um 45° im Uhrzeigersinn drehen (Abbildung 2D).</li>
	<li>Nachdem Sie das umgebende klebrige Myokardgewebe entfernt haben, erkennen Sie explizit die pulsierenden linken (ca. 5 mm) und rechten (ca. 5 mm) Koronararterien. Trennen Sie die Koronararterien in der Mitte sofort und tauchen Sie bei 4 °C vollständig in PSS ein. Erwerben Sie einen arteriellen Ring von etwa 2 mm, indem Sie die abgelöste Arterie mit einer anatomischen Schere vertikal schneiden, um die Gefäßspannung unter verschiedenen Reizen aufzuzeichnen (Abbildung 2E).</li>
</ol>3. Aufhängung und Fixierung des arteriellen Rings
HINWEIS: Weitere Informationen zu diesem Schritt finden Sie unter Referenz14.
<ol><li>Bereiten Sie zwei 2 cm lange Edelstahldrähte vor (siehe Materialtabelle) und tränken Sie sie in einer 4 °C PSS-Lösung, die mit 95% O 2 + 5% CO2 gesättigt ist. Führen Sie beide Drähte parallel durch den arteriellen Ring zusammen mit der Richtung des Gefäßes unter einem optischen anatomischen Mikroskop und mit Drähten gleicher Länge, die an beiden Enden der Gefäßhöhle freiliegen.</li>
	<li>Befestigen Sie den arteriellen Ring mit dem Stahldraht vorne und hinten im Bad des Drahtes Mikrograph, gefüllt mit sprudelndem PSS mit 95% O 2 + 5% CO2. Drehen Sie den horizontalen Schraubenknopf für einen angemessenen vorderen und hinteren Abstand, so dass die beiden Drähte horizontal sind und sich der arterielle Ring in einem natürlichen Entspannungszustand befindet.</li>
	<li>Öffnen Sie nach der Installation des DMT-Bades am Thermostatgerät die Datenerfassungssoftware (siehe Materialtabelle), um sicherzustellen, dass das entsprechende Wegsignal aufgezeichnet wurde. Stellen Sie die folgenden Parameter ein: Okularkalibrierung (mm/div): 0,36; Zieldruck (kPa): 13,3; IC1/IC100: 0,9; Online-Mittelungszeit: 2 s; Verzögerungszeit: 60 S. Die Schritte der arteriellen Ringfixierung sind in Abbildung 3 dargestellt.</li>
</ol>4. Standardisierung der Gefäßspannung im arteriellen Ring der Ratte
HINWEIS: Für verschiedene Hohlraumproben war eine optimale Anfangsspannung erforderlich, damit die Gefäße eine außergewöhnliche Aktivität in vitro aufrechterhalten konnten. Weitere Informationen finden Sie unter Referenz15.
<ol><li>Erreichen Sie die optimale Anfangsspannung des arteriellen Rings, indem Sie eine angemessene Spannung entlang des Durchmessers des Gefäßes anwenden. ANMERKUNG: Basierend auf der vorherigen Studie 16 wurde die maximale Agonisten-induzierte Spannung beim Faktor k Wert von 0,90 mit der Anfangsdehnungsspannung von 1,16 ± 0,04 mN/mm erreicht (Referenzwerte für verschiedene Gefäßproben: k-Wert, 0,90-0,95; Anfangsspannung, 1,16-1,52 mN/mm).</li>
	<li>Setzen Sie an dieser Stelle den angezeigten Gefäßspannungswert auf Null. Danach wenden Sie einen 3 mN Zugreiz auf den arteriellen Ring an, indem Sie die Spiralachse des Bades drehen.</li>
	<li>Nach der Inkubation für 1 h im sauerstoffgesättigten PSS-Puffer bei 37 °C, pH 7,40, stellen Sie den Spannungswert auf dem Zugkontrollfeld der Drahtmikroskopaufnahme erneut auf 0 mN ein. Der Abbindeprozess der Anfangsspannung des arteriellen Rings ist in Abbildung 4 dargestellt.</li>
</ol>5. Reaktivitätserkennung des Koronararterienrings
<ol><li>Führen Sie die kontraktile Aktivität des Koronararterienrings mit der Drahtmyographentechnik 14 durch und validieren Sie in drei separaten Operationen, indem Sie mit 60 mM K + -Lösung für jeweils10 min stimulieren.</li>
	<li>Nach jeder Stimulation spülen Sie das Bad mit sauerstoffgesättigtem PSS, bis der Gefäßtonus in seinen ursprünglichen Zustand zurückkehrt. HINWEIS: Nur wenn die Spannungsschwankung der drei parallelen Messungen weniger als 10% betrug und die Amplitude jeder Kontraktion größer als 1 mN/mm war, konnten qualifizierte und hochaktive arterielle Ringe für weitere Experimente verwendet werden. Die Aktivitätsüberprüfung des Rattenkoronarrings ist in Abbildung 5 dargestellt.</li>
</ol>6. Postoperative Behandlung
<ol><li>Nach der Operation die Tiere nach institutionell genehmigten Protokollen einschläfern. ANMERKUNG: Für die vorliegende Studie wurden die Tiere durch Einatmen von überschüssigem Isofluran eingeschläfert.</li>
</ol>

<ol><li>Malakar, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+coronary+artery+disease%2C+its+risk+factors%2C+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">A review on coronary artery disease, its risk factors, and therapeutics.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (10), 16812-16823 (2019).</li>
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<li>Niccoli, G., Scalone, G., Lerman, A., Crea, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+microvascular+obstruction+in+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Coronary microvascular obstruction in acute myocardial infarction.</a> European Heart Journal. 37 (13), 1024-1033 (2016).</li>
<li>Mumma, B., Flacke, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+diagnostic+and+therapeutic+strategies+in+microvascular+angina%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Emergency+and+Hospital+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Current diagnostic and therapeutic strategies in microvascular angina.</a> Current Emergency and Hospital Medicine Reports. 3 (1), 30-37 (2015).</li>
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<li>Fu, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-atherosclerosis+and+cardio-protective+effects+of+the+Angong+Niuhuang+Pill+on+a+high+fat+and+vitamin+D3+induced+rodent+model+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-atherosclerosis and cardio-protective effects of the Angong Niuhuang Pill on a high fat and vitamin D3 induced rodent model of atherosclerosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 195, 118-126 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chinese+medicine+She-Xiang-Xin-Tong-Ning%2C+containing+moschus%2C+corydalis+and+ginseng%2C+protects+from+myocardial+ischemia+injury+via+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chinese medicine She-Xiang-Xin-Tong-Ning, containing moschus, corydalis and ginseng, protects from myocardial ischemia injury via angiogenesis.</a> The American Journal of Chinese Medicine. 48 (1), 107-126 (2020).</li>
<li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+dimensional+reconstruction+of+coronary+artery+stents+from+optical+coherence+tomography%3A+Experimental+validation+and+clinical+feasibility%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Three dimensional reconstruction of coronary artery stents from optical coherence tomography: Experimental validation and clinical feasibility.</a> Scientific Reports. 11 (1), 1-15 (2021).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Janus-like+role+of+fibroblast+growth+factor+2+in+arteriosclerotic+coronary+artery+disease%3A+Atherogenesis+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Janus-like role of fibroblast growth factor 2 in arteriosclerotic coronary artery disease: Atherogenesis and angiogenesis.</a> Atherosclerosis. 229 (1), 10-17 (2013).</li>
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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Die Störung der koronaren Mikrozirkulation, an der ein breites Spektrum von Patienten mit KHK beteiligt ist, wurde allmählich erkannt und betraf die Grundlage für eine adäquate Myokardperfusion. In Anbetracht der schwerwiegenden Komplikationen der plötzlichen koronaren Herzkrankheit und der Herz-Kreislauf-Erkrankung sind eine rechtzeitige medikamentöse Prävention und Behandlung für eine klinische Person mit CAD17 äußerst wichtig. Zwangsläufig haben die Geheimhaltung der Anatomie der Koronararterie...

Die koronare Herzkrankheit (KHK) wurde weithin als typische und repräsentative Herz-Kreislauf-Erkrankung anerkannt und ist die häufigste Todesursache sowohl in Industrie- als auch in Entwicklungsländern 1,2. Als Blut- und Sauerstoffversorgungsweg für eine normale kardiale physiologische Funktion gelangt zirkulierendes Blut durch zwei Hauptkoronararterien und ein Blutgefäßnetzwerk auf der Oberfläche des Myokards in das Herz und nährt eses 3,4. Cholesterin und Fettablagerungen in den Koronararterien unterbrechen die Blutversorgung des Herzens und die heftige Entzündungsreaktion des Gefäßsystems, was zu Atherosklerose, stabiler Angina, instabiler Angina pectoris, Myokardinfarkt oder plötzlichem Herztodführt 5,6. Als Reaktion auf eine pathologische Stenose der Koronararterien befriedigt der kompensatorisch beschleunigte physiologische Herzschlag die Blutversorgung des Herzens selbst oder der lebenswichtigen Organe des Körpers, indem er die Leistung des linken Ventrikels7 erhöht. Wenn eine längere Koronarstenose nicht rechtzeitig gelindert wird, können sich in bestimmten Bereichen des Herzens ausgedehnte neue Blutgefäße entwickeln8. Gegenwärtig umfasst die klinische Behandlung von CAD häufig medikamentöse Thrombolyse oder chirurgische mechanische Thrombolyse und einen exogenen bionischen Gefäßbypass mit häufigen Medikamenten und großer chirurgischer Behinderung9. Daher ist die funktionelle Untersuchung der physiologischen Aktivität der Koronararterien immer noch ein dringender Durchbruch für Herz-Kreislauf-Erkrankungen10.
Es gibt keine verfügbaren technischen Mittel zur Erkennung der koronaren physiologischen Aktivität, mit Ausnahme von drahtlosen Telemetriesystemen, die in vivo Koronardruck, Gefäßspannung, Blutsauerstoffsättigung und pH-Werte dynamisch aufzeichnenkönnen 11. Angesichts der strukturellen Geheimhaltung und Komplexität der Koronararterien sind daher die genaue Identifizierung und Isolierung der Koronararterien zweifellos die beste Wahl für die Erforschung mehrerer Mechanismen der CAD in vitro4.
Ein Serien-Multimyographensystem, insbesondere ein mikrovaskulärer Spannungsdetektor für Drahtmikroskopie (siehe Materialtabelle), ist ein sehr ausgereiftes marktfähiges Gerät zur Erfassung von In-vitro-Gewebespannungsänderungen kleiner Gefäß-, Lymph- und Bronchienröhren mit den Eigenschaften einer hochpräzisen und kontinuierlichen dynamischen Aufzeichnung12. Das besagte System wurde umfassend eingesetzt, um In-vitro-Gewebespannungseigenschaften von Hohlraumstrukturen mit Durchmessern von 60 μm bis 10 mm zu erfassen. Die kontinuierlichen Erwärmungseigenschaften der Plattform der Drahtmikroskopie gleichen die Stimulation der nachteiligen äußeren Umgebung weitgehend aus. In der Zwischenzeit ermöglichen uns die konstanten Eingaben des Gasgemisches und die pH-Werte, genauere Gefäßspannungsdaten in einem ähnlichen physiologischen Zustandzu erhalten 13. In Anbetracht der Komplexität der anatomischen Lokalisation von Koronararterien von Ratten (Abbildung 1) hat seine Isolierung jedoch die Erforschung diversifizierter kardiovaskulärer Erkrankungen und der Arzneimittelentwicklung durch den Mechanismus verwirrt und eingeschränkt. Daher stellt das vorliegende Protokoll die anatomische Lage und den Trennprozess der Koronararterie der Ratte im Detail vor, gefolgt von einer Spannungsmessung auf der Plattform der Drahtmikroskopie14.

<table><tbody><tr><td>Apigenin</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>150731</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A501330</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A610219</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China</td><td>S3872</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A100781</td><td></td></tr><tr><td>LabChart Professional Version 8.3&nbsp;</td><td>ADInstruments, Australien</td><td>&ndash;</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot; 6H2O</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A100288</td><td></td></tr><tr><td>Multi-Myographen-System&nbsp;</td><td>Danish Myo Technology, Aarhus, Dänemark</td><td>620M</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A100241</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A100865</td><td></td></tr><tr><td>Stahldrähte</td><td>Danish Myo Technology, Aarhus, Dänemark</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>U46619</td><td>Sigma, USA</td><td>D8174</td><td></td></tr></tbody></table>

standardisierte rattenkoronarringpräparation und echtzeitaufzeichnung dynamischer spannungsänderungen entlang des gefäßdurchmessers

Standardized Rat Coronary Ring Preparation and Real-Time Recording of Dynamic Tension Changes Along Vessel Diameter

Als Schlüsselereignis von Erkrankungen des Herz-Kreislauf-Systems wurde die koronare Herzkrankheit (KHK) weithin als Hauptursache für Atherosklerose, Myokardinfarkt und Angina pectoris angesehen, die das Leben und die Gesundheit von Menschen auf der ganzen Welt ernsthaft bedrohen. Wie man jedoch die dynamischen biomechanischen Eigenschaften isolierter Blutgefäße aufzeichnet, hat die Menschen lange verwirrt. Inzwischen ist die präzise Positionierung und Isolierung von Koronararterien zur Messung dynamischer Veränderungen der vaskulären Spannung in vitro zu einem Trend in der Entwicklung von CAD-Medikamenten geworden. Das vorliegende Protokoll beschreibt die makroskopische Identifizierung und mikroskopische Trennung von Rattenkoronararterien. Die Kontraktions- und Dilatationsfunktion des Koronararterienrings entlang des Gefäßdurchmessers wurde mit dem etablierten Multimyographensystem überwacht. Die standardisierten und programmierten Protokolle der Koronarangspannungsmessung, von der Probenahme bis zur Datenerfassung, verbessern die Wiederholbarkeit der experimentellen Daten enorm, was die Authentizität der vaskulären Spannungsaufzeichnungen nach physiologischen, pathologischen und medikamentösen Eingriffen gewährleistet.

Anatomisch positionierte, tief im Myokardgewebe verteilte und verborgene Koronararterien der Ratten waren nicht leicht zu erkennen. Durch den Vergleich der Koronararterien von Menschen (Abbildung 1A) und Ratten (Abbildung 1B) wurde eine schnelle und genaue Trennung der Koronararterien von Ratten gemäß dem Probenahmeverfahren in Abbildung 2 durchgeführt. Nach der präzisen Lokalisierung der rechten Ohrmuschel, der Lungenarterie und de...

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Drahtmyographentechnik zur Messung der vaskulären Reaktivität der Koronararterie der Ratte.

Standardisierte Rattenkoronarringpräparation und Echtzeitaufzeichnung dynamischer Spannungsänderungen entlang des Gefäßdurchmessers

As a key event of cardiovascular system diseases, coronary artery disease (CAD) has been widely regarded as the main culprit of atherosclerosis, ...

Dieses Protokoll stellt detailliert die Lokalisation, Trennung und die Muskelringfixierung von Rattenkoronararterien vor. Bereitstellung einer neuen Methode für die Mechanismen, die Erforschung und die Behandlung verschiedener Herz-Kreislauf-Erkrankungen. Das System eignet sich für und die stabile Aufzeichnung der dynamischen Änderungen der in-vitro-arteriellen Spannung mit einem Durchmesser von 60 Mikrometern bis 10 Millimetern.Wir schlagen vor, dass Anfänger zuerst die anatomische Lage jedes Gefäßes genau verstehen und mit etwas größeren Gefäßen wie der Brustarterie und der Mesenterialarterie beginnen können. Nachdem Sie das Herz dissoziiert und entfernt haben, beginnen Sie damit, das Restblut aus allen Herzkammern abzulassen, indem Sie es leicht mit einer medizinischen Kunststoffzange zusammendrücken. Geben Sie das vorverarbeitete Herz schnell in eine Petrischale, die 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid gesättigte physiologische Salzlösung bei vier Grad Celsius mit einem pH-Wert von 7,40 enthält.Um die anatomische Position der Koronararterien genau zu identifizieren, passen Sie die Haltung des isolierten Herzens unter dem Lichtmikroskop gemäß dem schematischen Diagramm an. Schneiden Sie die linke und rechte Ventrikelhöhle entlang der interventrikulären Scheidewand von der Wurzel der Lungenarterie mit chirurgischer Schere und Pinzette ab. Um die linke und rechte Koronararterien vom Myokardgewebe zu dissoziieren, sezieren Sie den rechten Ventrikel unter einem optischen anatomischen Mikroskop, um den rechten Koronararterienzweig gründlich freizulegen.Identifizieren Sie dann die Position der linken Koronararterie, indem Sie das Herzgewebe um 45 Grad im Uhrzeigersinn drehen. Nachdem Sie das umgebende klebrige Myokardgewebe entfernt haben, erkennen Sie explizit die pulsierenden linken und rechten Koronararterien. Trennen Sie die Koronararterien in der Mitte sofort und tauchen Sie bei vier Grad Celsius vollständig in physiologische Salzlösung ein.Erwerben Sie einen arteriellen Ring von etwa zwei Millimetern, indem Sie die abgelöste Arterie mit einer anatomischen Schere vertikal schneiden, um die Gefäßspannung unter verschiedenen Reizen aufzuzeichnen. Bereiten Sie zwei zwei Zentimeter lange Edelstahldrähte vor und tränken Sie sie in einer physiologischen Salzlösung von vier Grad Celsius, die mit 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid gesättigt ist. Führen Sie beide Drähte parallel durch den arteriellen Ring zusammen mit der Richtung des Gefäßes unter einem optischen anatomischen Mikroskop und mit Drähten gleicher Länge, die an beiden Enden der Gefäßhöhle freiliegen.Befestigen Sie den arteriellen Ring mit dem Stahldraht vorne und hinten im Bad des Drahtes Mikroaufnahme, gefüllt mit sprudelnder physiologischer Salzlösung mit 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid. Drehen Sie den horizontalen Schraubenknopf für einen angemessenen vorderen und hinteren Abstand, so dass die beiden Drähte horizontal sind und sich der arterielle Ring in einem natürlichen Entspannungszustand befindet. Öffnen Sie nach der Installation des DMT-Bades am Thermostatgerät die Datenerfassungssoftware, um sicherzustellen, dass das entsprechende Wegsignal aufgezeichnet wurde.Legen Sie die Parameter fest. Erreichen Sie die optimale Anfangsspannung des arteriellen Rings, indem Sie eine angemessene Spannung entlang des Durchmessers des Gefäßes anwenden. Setzen Sie an dieser Stelle den angezeigten Gefäßspannungswert auf Null.Danach wenden Sie einen Impulsreiz von drei Milli-Newton auf den arteriellen Ring an, indem Sie die Spiralachse des Bades drehen. Klicken Sie auf die LCD-Anzeige, um sie auf null Milli-Newton einzustellen und eine Stunde lang zu warten. Stellen Sie nach der Inkubation für eine Stunde im sauerstoffgesättigten physiologischen Salzlösungspuffer bei 37 Grad Celsius pH 7,40 den Spannungswert auf Null Milli Newton auf dem Zugkontrollfeld der Drahtmikroskopie.Führen Sie die kontraktile Aktivität des Koronararterienrings mit der Drahtmyographentechnik durch und validieren Sie in drei separaten Operationen, indem Sie mit 60 Millimolar Kaliumionenlösung für jeweils 10 Minuten stimulieren. Nach jeder Stimulation spülen Sie das Bad mit der mit Sauerstoff gesättigten physiologischen Salzlösung, bis der Gefäßtonus in seinen ursprünglichen Zustand zurückkehrt. Fügen Sie 0,3 Mikromolar U46619 zum Baden hinzu und beobachten Sie es für 10 Minuten.Fügen Sie ein mikromolares Apigenin hinzu und beobachten Sie vaskuläre Effekte. Wenn die Dilatation ein Plateau erreicht, fügen Sie die nächste Konzentration hinzu. Fügen Sie ein mikromolares Apigenin zu einer 60 millimolaren Kalium-Vorschrumpflösung hinzu, um den vaskulären Effekt zu beobachten.Wenn die Dilatation ein Plateau erreicht, fügen Sie die nächste Konzentration hinzu. Fügen Sie 28 millimolare Kaliumionen in den ruhenden Gefäßring hinzu. Wenn die Kontraktion ein Plateau erreicht, fügen Sie die nächste Konzentration hinzu.0,01 Mikromolar U46619 in den ruhenden Gefäßring geben. Wenn die Kontraktion ein Plateau erreicht, fügen Sie die nächste Konzentration hinzu. Nachdem eine anfängliche Spannung von drei Milli Newton auf den arteriellen Ring angelegt wurde, überschritt seine Spannung mehr als zwei Milli Newton, indem dreimal parallel eine 60-millimolare Kaliumionenkonzentration angewendet wurde.So hatten die oben genannten Verfahren zu einem isolierten Koronarring mit ausgezeichneter physiologischer Aktivität geführt. Die kumulative Kaliumionenkonzentration oder U46619 wurde dem Bad von DMT620M zugesetzt, was zu einer konzentrationsabhängigen Erhöhung des In-vitro-Gefäßtonus führte. Die nächste Konzentration von Kaliumion oder U46619 wurde hinzugefügt, als der Vasokonstriktionseffekt ein Plateau erreichte.Für isolierte Koronarringe, die durch Kaliumion und U46619 eingeengt sind, verursachte das Testmedikament Apigenin in überraschend konzentrationsabhängiger Weise eine Vasodilatation. Das Herz wird entlang des Ventrikelseptums von der Wurzel der Lungenarterie seziert, wodurch zwei Millimeter koronarer Muskelring freigelegt und getrennt werden. Nach diesem Verfahren können wir die vaskuläre Spannung in retinalen Mikrogefäßen, der Nierenfunktion, der Nierenarterie und in der mittleren Hirnarterie aufzeichnen.Eine regionale Dynamik von 60 Mikrometern bis 10 Millimetern.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Eine automatisierte Myographie Methode zur Kraftmessung in isolierten mesenterialen Arterien beschrieben. Es beschäftigt Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myographions 510A, um Antworten auf Phenylephrin und extrazelluläres Calcium zu bestimmen. Die Methode ermöglicht eine konsistente Bestimmung der isometrischen Antworten auf Agonisten in kleinen Gefäßen mit einem Durchmesser von 60 bis 300 um, unabhängig.

A. mesenterica Kontraktion und Entspannung Studies Verwendung automatisierter Draht Myographie

Dieses Manuskript beschreibt in Vitro Videomikroskopie Protokolle für die Bewertung der Gefäßfunktion in Ratte zerebralen Widerstand Arterien. Das Manuskript beschreibt auch Techniken für die Bewertung der kapilläre Dichte mit Gewebekulturen beschrifteten Lektine und Gewebe Perfusion mit Laser-Doppler-Flowmetry.

Bewertung der vaskulären Kontrollmechanismen Nutzung Videomikroskopie der isolierten Widerstand Arterien von Ratten

Das Protokoll beschreibt die Verwendung von Drahtsynografie zur Bewertung der transmural isometrischen Spannung von mesenterischen Arterien, die von Mäusen isoliert sind, unter besonderer Berücksichtigung der Modulation durch Faktoren, die aus Endothelzellen und perivaskulären Fettgewebe freigesetzt werden.

Bewertung der Reaktion der Gefäß-Tone mit isolierten mesenterischen Arterien mit einem Schwerpunkt auf der Modulation durch Perivascular Adipose Tissues

Präsentiert wird hier ein Protokoll zur Untersuchung der koronaren Mikrozirkulation im lebenden murinen Herzgewebe durch ex vivo-Überwachung des arteriellen Perfusionsdrucks und -flusses, der den Druck aufrechterhält, sowie gefäßvaskulärer Baumbestandteile, einschließlich der Kapillarbetten und Pericyten, da die Septalarterie kanüliert und unter Druck steht.

Dynamische Messung und Bildgebung von Kapillaren, Arteriolen und Pericyten im Mausherz

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Konzepte und die technische Anwendung der tensometrischen Myographentechnik unter Verwendung eines Mehrkammer-Myographensystems bei der experimentellen ex vivo Bewertung der Aortenendothelfunktion der Maus.

Messung der endothelabhängigen Vasorelaxation in der thorakalen Aorta der Maus mittels tensometrischer Kleinvolumenkammermyographie

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur gleichzeitigen Messung von zytosolischem, freiem Calcium [Ca2+]i und Gefäßdurchmesser in kontrahierenden Lymphgefäßen in Echtzeit und zur Berechnung der absoluten Ca2+ -Konzentrationen sowie der Kontraktilitäts-/Rhythmizitätsparameter. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um Ca2+ und kontraktile Dynamik unter einer Vielzahl von experimentellen Bedingungen zu untersuchen.

Echtzeit-Auswertung der absoluten, zytosolischen, freien ca2+ und der entsprechenden Kontraktilität in isolierten, druckbeaufschlagten Lymphgefäßen

Die Rechtsherzinsuffizienz (RHF) ist gekennzeichnet durch eine rechtsseitige Herzdilatation und Hypertrophie, die zu ventrikulären und atrialen Fehlfunktionen führt. Herz-Lungen-Erkrankungen im Zusammenhang mit RHF gehen mit einem erhöhten Risiko für Herzrhythmusstörungen einher. In diesem Artikel wird ein standardisiertes Modell der durch Lungenarterienbanding induzierten RHF beschrieben, das mit einer verstärkten ventrikulären und atrialen Arrhythmogenese einhergeht.

Rattenmodell des rechtsseitigen kardialen Umbaus und der Arrhythmie unter Verwendung von Lungenarterienbändern

In diesem Artikel wird ein Schritt-für-Schritt-Protokoll für die Isolierung und funktionelle Bewertung von arteriellen Ästen der menschlichen Nieren vorgestellt, das präklinische Studien für die pharmazeutische Entwicklung erleichtert.

Mehrstufige Mikrodissektion und funktionell-strukturelle Profilierung humaner Nierenarterienäste

Wir entwickeln eine dynamische adaptive Aufnahmetechnik mit unseren Abtaststrahl digitalen Röntgenanlage. Anstatt auszusetzen ein Objekt gleichmäßig, wird die Belichtung angepasst abhängig von der Deckkraft des Objekts. Hier zeigen wir ein Experiment mit einer anthropomorphen Phantom, das in einer Dosis Einsparung von 30% geführt.

X-ray Dosisreduktion durch Adaptive Exposure in Durchleuchtungs Imaging

Visualisierung der Herzkranzgefäße ist entscheidend für die Erweiterung der Kenntnisse über Herz-Kreislauf-Erkrankungen. Hier beschreiben wir ein Verfahren zum Perfundieren murinen Koronargefäße mit einem röntgendichten Silikonkautschuk (Microfil), in Vorbereitung für die Mikro-Computertomographie (μCT) Bildgebung.

Retrograde Perfusion und Abfüllung von Maus Koronargefäße als Vorbereitung für die Mikro-Computertomographie Imaging

Lernen Sie die standardisierte Präparation von Rattenkoronararterien und die Echtzeitaufzeichnung dynamischer Spannungsänderungen mit dem Wire-Myographen. Diese Methode ermöglicht präzise Messungen der Gefäßreaktivität für kardiovaskuläre Forschung.

Standardisierte Rattenkoronarringpräparation und Echtzeitaufzeichnung dynamischer Spannungsänderungen entlang des Gefäßdurchmessers (Video) | JoVE Journal

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