Bestimmung der Wirksamkeit der Virusdesinfektion durch Heißwasserwäsche

Dieses Protokoll testet die Desinfektionswirksamkeit der Heißwasserwäsche. Es kann helfen zu beurteilen, ob eine Waschmaschine und ein Trockner zum Reinigen von Kleidung geeignet sind, die mit einem Virus kontaminiert ist. Der Hauptvorteil dieser Waschtechnik besteht darin, dass sie in anderen Labors in kleinerem Maßstab mit Verfahren repliziert werden kann, die den Qualitätssicherungsprozess durchlaufen haben.

Ahmed Abdel-Hady, ein Mikrobiologe, Mariela Monge und Jonathan Sawyer, Forscher und andere aus unserem Labor, demonstrieren das Verfahren. Um zu beginnen, bereiten Sie den modifizierten tryptischen Sojaagar vor, indem Sie die Zutaten in entionisiertem Wasser wiegen und mischen, wie im Text beschrieben. Dann fügen Sie einen Milliliter unverdünntes, konzentriertes Phi6-Aliquot zu weichem Agar und 100 Mikroliter einer Log-Phase-Pseudomonas-Syringae-Kultur hinzu.

Als nächstes gießen Sie weichen Agar auf die Oberfläche einer erstarrten modifizierten tryptischen Soja-Agar-Platte mit einem Durchmesser von 100 Millimetern. Vermeiden Sie Blasen oder Verschütten, indem Sie die Platten vorsichtig schwenken und den weichen Agar gleichmäßig über die feste Agaroberfläche verteilen. Nach nächtlicher Inkubation bei Raumtemperatur den Inhalt der drei Platten vorsichtig mit einem sterilen Zellspreizer in ein steriles 50-Milliliter-Chronikröhrchen mit 15 Milliliter SM-Puffer abkratzen.

Wirbeln Sie die Röhrchen bei maximaler Einstellung für ein bis zwei Minuten, um den Agar zu brechen, und zentrifugieren Sie sie dann für 15 Minuten bei 7.000 mal G.Dann sammeln Sie den Überstand und filtern Sie ihn durch einen 0,2 Mikron Spritzenfilter. Lagern Sie den gefilterten Überstand als ein Milliliter Aliquots in Kryovialen bei 80 Grad Celsius bis zur weiteren Verwendung. Führen Sie eine visuelle Beurteilung vor dem Test durch, indem Sie die Länge und Breite der ungewaschenen persönlichen Schutzausrüstung oder PSA an verschiedenen Orten messen und aufzeichnen.

Für die Impfung bereiten Sie eine 10% ige Rindfleischextraktlösung vor, indem Sie ein Gramm Rindfleischextrakt in einem Gesamtvolumen von 10 Milliliter 1X PBS auflösen. Filter sterilisieren das gesamte Volumen der Lösung mit einem 0,2 μm Spritzenfilter. Als nächstes impfen Sie im Biosicherheitswerkkasten die Test- und Positivkontrollcoupons mit etwa 10 bis siebten Plaquebildungseinheiten pro Probe, indem Sie eine 10-Mikroliter-Menge der Lösung als mehrere Tröpfchen auf das PSA-Element pipettieren und das Tröpfchen mit der Spitze der Pipette verteilen.

Die Waschlösung mit einer Heizplatte auf 50 Grad Celsius erwärmen und umrühren. Dann messen und notieren Sie den pH-Wert und die Temperatur der Waschlösung und sammeln Sie 10 Milliliter Lösung zur Sterilitätskontrolle. Dann gießen Sie 3,25 Liter Waschlösung in eine sterilisierte Waschmaschine.

Legen Sie PSA-Artikel, eine geimpfte Gesichtsbedeckung und vier nicht kontaminierte Filmmasken ohne Coupons in die Waschmaschine. Nachdem Sie PSA-Artikel 18 Minuten lang gewaschen haben, lassen Sie die Waschmaschine ab und spülen Sie sie jedes Mal dreimal mit fünf Litern Leitungswasser bei Raumtemperatur ab, um den Schaum zu entfernen. Geben Sie 3,25 Liter sterilisiertes Leitungswasser bei Raumtemperatur in die Waschmaschine und führen Sie einen neunminütigen Spülzyklus durch.

Als nächstes bewegen Sie die PSA-Artikel in die Schleuderseite der Waschmaschine, um sie fünf Minuten lang zu drehen. Trocknen Sie die PSA-Artikel 80 Minuten lang auf der hohen Hitzestufe von 93 Grad Celsius im Trockner. Bringen Sie dann die PSA-Artikel vom Trockner in den sterilen Arbeitsbereich.

Entfernen Sie die Coupons aseptisch von den geimpften Artikeln und legen Sie sie in konische Röhrchen. Als nächstes extrahieren Sie die Coupons in 10 Milliliter 10% Dey-Engley-neutralisierender Brühe, indem Sie zwei Minuten lang bei der maximalen Einstellung des Geräts wirbeln. Um die Extrakte mit einem herkömmlichen Softtop-Agar-Overlay-Verfahren zu beschichten, fügen Sie dem weichen Agarrohr, das sechs Milliliter weichen Agar und 100 Mikroliter der Log-Phase-P-Spritzen enthält, Aliquots der Testprobe hinzu.

Als nächstes gießen Sie den weichen Agar auf die Oberfläche einer erstarrten modifizierten tryptischen Soja-Agar-Platte und verteilen Sie den weichen Agar gleichmäßig über die feste Agaroberfläche, indem Sie die Platte schwenken. Nach der Inkubation über Nacht bei Raumtemperatur die Plattformeinheiten auf jeder Platte manuell aufzählen. Die systematischen Labortests zur Bewertung der Waschwirksamkeit der Virusdesinfektion von PSA oder Kleidung in voller Größe zeigten, dass die Plattformeinheit oder PFU-Plattenzahl und das extrahierte Probenvolumen die Berechnung der Anzahl der Plattformeinheiten pro Testcoupon ermöglichten.

Die Ergebnisse der repräsentativen Viruserholung wurden für einen Gesichtsbedeckungstest erhalten. Die Waschtests lieferten Aufschluss über die Materialeigenschaften wie das Dehnen oder Schrumpfen der Kleidungsstücke und qualitätskontrollierte Daten des Protokolls. Die Wirksamkeit der Heißwasserwäsche bei der Desinfektion von Gesichtsbedeckungen, Denim und Peeling-PSA-Materialien von Phi6 wurde in dieser Grafik demonstriert, in der die Sterne die vollständige Desinfektion anzeigen.

Es ist wichtig, während dieses gesamten Verfahrens aseptische Techniken anzuwenden, um Kreuzkontaminationen zu vermeiden. Außerdem sind die Inokulumtrocknungszeiten für Gutscheine für jedes Material einzigartig und werden vor dem Test festgelegt. Andere ergänzende Methoden umfassen Mikroskopie und Flüssigkeitspenetrationstests zur Untersuchung des Materialabbaus oder weitere Größenbewertungen, um sicherzustellen, dass der Barriereschutz immer noch zum Träger passt.

Diese Technik lieferte die Grundlage für die Ausweitung der Wirksamkeit der Geldwäsche und der Materialprüfung für Kleidung und PSA-Artikel in vollem Umfang. Es kann auch dazu beitragen, wirksame Geldwäscheverfahren während eines anderen Ansteckungsereignisses oder einer Pandemie einzurichten.