Generierung eines künstlichen Dezidualisierungsmodells der Maus mit Ovariektomie für die Endometrium-Dezidualisierungsforschung

Eine Beeinträchtigung der Dezentralisierung führt zu Viruserkrankungen des Endometriums, wie z. B. bei Todesfällen, einer wiederkehrenden Fehlgeburt. Diese Methode bietet ein gutes und zuverlässiges Tiermodell für die Untersuchung der Dezentralisierung des Endometriums. Dieses künstliche Dezentralisierungsmodell mit Ovarektomie kann den Einfluss von Angelina auf Hormone vermeiden, die oft sehr reproduzierbare Ergebnisse mit geringfügigen Unterschieden innerhalb der Gruppe erzielen können.

Zu Beginn sterilisieren Sie die chirurgischen Instrumente einen Tag vor der Operation mit einem Hochtemperatur- und Hochdrucksterilisator. Tragen Sie die schützende Augensalbe auf die Augäpfel auf, um Trockenheit während der Narkose zu vermeiden. Starten Sie die Operation, wenn die Mäuse vollständig betäubt sind.

Platzieren Sie die Mäuse in Bauchlage auf der Operationsfläche und rasieren Sie die Haare auf dem Rücken, nachdem Sie sie mit Seifenwasser benetzt haben. Desinfizieren Sie die Haut mit 70% Ethanol. Die Operationsstelle befindet sich 0,5 Zentimeter am oberen Rand der Oberschenkelwurzel beider Hinterbeine parallel zur Wirbelsäule.

Nehmen Sie die Inzisionsstelle als Mitte und desinfizieren Sie den Inzisionsbereich dreimal mit Jodophor. Machen Sie mit einer Schere einen Längsschnitt von etwa 0,5 bis einem Zentimeter. Schneiden Sie die Faszie ab und trennen Sie die Muskeln passiv mit einer Pinzette.

Finden Sie ein Stück des weißen Fettpolsters im Schnittfeld in der Nähe des unteren Pols der Niere durch die dünne Muskelschicht. Klemmen Sie die Fettmasse mit hämostatischen Clips fest und ziehen Sie den vom Fettpolster umwickelten Eierstock aus dem Einschnitt. Klemmen Sie die Verbindung von Eierstock und Eileiter mit einer gebogenen Pinzette fest und entfernen Sie den Eierstock entlang des Eierstockstiels mit einer Schere.

Stoppen Sie die Blutung mit einem Elektrokoagulationsstift oder einer Nadel einer Ein-Milliliter-Spritze, die auf der Alkohollampe erhitzt wird. Spülen Sie den chirurgischen Schnitt mit normaler Kochsalzlösung ab, um eine Anhaftung des Gewebes zu verhindern. Verwenden Sie eine 4-0-Naht, um den Muskel bzw. die Haut zu säen, und desinfizieren Sie den chirurgischen Schnitt erneut mit Jodophor.

Platzieren Sie die Mäuse in Bauchlage im Käfig und reanimieren Sie sie in einem 25 Grad Celsius heißen Inkubator. Ausgestattet mit einer Lichtquelle und einem Belüftungssystem für ca. zwei Stunden. Achten Sie nach der Operation auf die Mäuse.

Setzen Sie sie alleine wieder an den ursprünglichen Futterplatz, bis sie sich vollständig erholt haben, und geben Sie ihnen genügend Wasser und Futter. Injizieren Sie subkutan 100 Nanogramm Östrogen in 50 Mikroliter Sesamöl für drei Tage in jede Maus, gefolgt von zwei Tagen Ruhe. Injizieren Sie ein Milligramm Progesteron und 10 Nanogramm Östrogen in 50 Mikroliter Sesamöl für weitere drei Tage in jede Maus.

Betreiben Sie die Mäuse, um das künstliche Residualisierungsmodell sechs Stunden nach der dritten kombinierten Östrogen-Progesteron-Injektion zu induzieren. Finden Sie das Uterushorn am unteren Ende der Eileiter und injizieren Sie 20 Mikroliter Sesamöl langsam entlang des Gebärmutterhorns. Schieben Sie das Gewebe zurück, nähen Sie den Schnitt und lassen Sie die Maus sich erholen.

Fixieren Sie drei bis fünf Milliliter des Gebärmuttergewebes mit 10%igem Formalin, das in Paraffin eingebettet ist, und schneiden Sie sie. Färben Sie die Schnitte mit Hämatoxylin und Eosin, um die morphologischen Veränderungen zu beobachten. Weitere drei bis fünf Millimeter des Gebärmuttergewebes in optimale Schnitttemperatur einbetten, in flüssigem Stickstoff einfrieren und in einem Gefrierschrank bei minus 80 Grad Celsius lagern.

Gefrorener Schnitt des Gewebes in 10 Mikrometern und Nachweis der alkalischen Phosphataseaktivität im Uterusgewebe durch die Azo-Kopplungsmethode. Die allgemeine Morphologie des künstlichen dezentralen Uterus von Mäusen, die durch Öl induziert werden, ist näher an der des Uterus in der Schwangerschaft. Der Uteruskörper wird dick und die Gebärmutterhöhle wird kleiner als die nicht induzierte Seite.

Das Volumen und das Gewicht des induzierten Uterushorns sind signifikant höher als das der nicht induzierten Seite. Die Hämatoxylin- und Eosin-Färbung des Uterusgewebes zeigte, dass die Drüsen verschwinden und die Endendometrialstromazellen auf dem induzierten Zerriss in große runde zytoplasmatische und mehrkernige Dezidualzellen mit unklaren Zellgrenzen differenziert werden. Die nicht induzierten Seitenschnitte zeigen die Morphologie des Endometriumgewebes in einem normalen physiologischen Zustand.

Das Ergebnis der Azo-Kopplungsmethode zeigte, dass der alkalische Phosphatasegehalt der ölinduzierten Seite signifikant höher war als der der nicht induzierten Seite. Die QPCR-Ergebnisse zeigten, dass die mRNA-Expression von PRL-8-A-2, ALPL und IGFBP-1 im induzierten Horn signifikant höher war als die im nicht induzierten Horn, was darauf hindeutet, dass Öl bei Mäusen eine künstliche Dezentralisierung induzieren kann. Die Homo-Supplementierung ist ein langwieriger Prozess, der besondere Aufmerksamkeit erfordert: Kontamination zwischen Homos, die der Schlüssel zum Erfolg ist.

Auf der Grundlage dieses Modells kann eine Uterushorninjektion von Adenovirus durchgeführt werden, die den relevanten Mechanismus spezifischer Moleküle untersuchen kann, die die Residualisierung regulieren.