Synovialflüssigkeitsanalyse zur Erkennung von Arthrose

Die Synovialflüssigkeitsanalyse kann den Grad der Entzündung und das Vorhandensein von pathogenen Kristallen bei der Erstuntersuchung eines Patienten mit muskuloskelettalen Symptomen und Gelenkergüssen aufdecken. Der Hauptvorteil dieser Technik ist ihre Einfachheit und Zuverlässigkeit. In wenigen Schritten kann der Arzt wichtige diagnostische Informationen über die Erkrankung des Patienten erhalten.

Die Identifizierung spezifischer Kristalle ist für die Diagnose und Behandlung von entscheidender Bedeutung. Uratkristalle deuten auf Gicht hin, während Calciumpyrophosphat und andere Calciumkristalle auf kalziumbedingte Arthropathien oder eine schwerere Form der Arthrose hinweisen. Entnehmen Sie zunächst die Synovialflüssigkeitsprobe, die während der Arthrozentese von geschwollenen Gelenken von Patienten entnommen wird.

Markieren Sie das Volumen der Probe in Millilitern und übertragen Sie sie separat in ein Röhrchen mit dem Gerinnungshemmer EDTA und ein weiteres Röhrchen ohne Zusatzstoffe. Bei Verdacht auf eine Infektion werden einige Milliliter der Synovialflüssigkeitsprobe zur mikrobiologischen Untersuchung aseptisch in eine Kulturflasche überführt. Um die Probe makroskopisch zu untersuchen, nehmen Sie ein Röhrchen mit der Probe und definieren Sie die Farbe der Probe, die von blass bis dunkelgelb reichen kann.

Notieren Sie das Vorhandensein von Blut, falls vorhanden. Definieren Sie den Grad der Klarheit der Probe, indem Sie sie im Gegenlicht beobachten und bestimmen, wie leicht eine gedruckte Seite durch das Röhrchen mit der Probe gelesen werden kann. Beurteilen Sie dann die Viskosität der Probe, indem Sie sie aus einer Einwegpipette tropfen lassen.

Während das Auftreten eines langen Flüssigkeitsstrangs auf eine hohe Viskosität hinweist, deutet die Bildung von Tropfen auf eine niedrige Viskosität hin. Beobachten Sie die Probe durch das Röhrchen mit Licht im Hintergrund auf das Vorhandensein von Partikeln wie Gewebefragmenten oder Fibrin. Um die Gesamtzahl der weißen Blutkörperchen zu bestimmen, entnehmen Sie 0,5 Mikroliter der Probe mit einer Malassez-Potain-Pipette aus dem Röhrchen mit EDTAA.

Verwenden Sie dieselbe Pipette, um 9,5 Mikroliter 0,1%ige Methylenblaulösung zu entnehmen. Mischen Sie die Probe und die Methylenblaulösung in der Pipette durch sanfte Inversion. Verwerfen Sie die ersten Tropfen, bevor Sie die Mischung in die Zählkammer eines Hämozytometers gießen.

Zählen Sie nun die Zellen in zwei aufeinanderfolgenden Quadraten von neun und multiplizieren Sie die erhaltene Zahl mit 100. Drücken Sie die Gesamtzahl der weißen Blutkörperchen als Anzahl der Leukozyten pro Kubikmillimeter aus. Verwenden Sie die Synovialflüssigkeitsprobe aus dem Röhrchen ohne Zusatzstoffe, um die Differenzialzahl der weißen Blutkörperchen der Synovialflüssigkeitsproben zu bestimmen.

Um die differentielle Zellzahl mittels Supravital-Färbung zu bestimmen, nehmen Sie einen gebrauchsfertigen Objektträger, der mit Kristallviolett und Methylenblau vorbeschichtet ist, und geben Sie einen kleinen Tropfen der Probe in die Mitte des Objektträgers. Decken Sie anschließend den Probentropfen mit einem Deckglas ab und geben Sie einen Tropfen Mikroskopimmersionsöl auf das Deckglas. Um die herkömmliche Färbung zur Schätzung der unterschiedlichen Zellzahl zu verwenden, geben Sie zunächst einen kleinen Tropfen der Probe an das Ende eines sauberen Objektträgers.

Verwenden Sie nun einen zweiten Objektträger oder ein Deckglas, um den Tropfen mit einer Vorwärtsbewegung entlang des Objektträgers zu verteilen. Lassen Sie den Abstrich an der Luft trocknen. Untersuchen Sie den Objektträger mit dem luftgetrockneten Abstrich unter dem 1.000-fachen Ölimmersionsobjektiv.

Schätzen Sie die unterschiedliche Zellzahl, indem Sie 100 aufeinanderfolgende Zellen zählen und dabei die polymorphkernigen Zellen, die Monozyten und die Lymphozyten voneinander unterscheiden. Reinigen Sie einen Objektträger mit optischem oder weichem Papier, das mit Ethanol getränkt ist. Tragen Sie einen kleinen Tropfen der nicht mit Zusatzstoffen vermischten Probe auf den Objektträger auf und decken Sie ihn mit einem Deckglas ab, bevor Sie den Objektträger unter das Mikroskop legen.

Fokussieren Sie den Objektträger unter dem Mikroskop mit einem Objektiv mit geringer Vergrößerung und untersuchen Sie ihn sorgfältig unter einem hellen Feld mit einem 40-fachen Objektiv. Schauen Sie innerhalb und außerhalb der Zellen, um die Kristalle anhand ihrer Größe und Form zu identifizieren, die rautenförmig, nadelförmig oder stäbchenförmig sein können. Setzen Sie dann den Polarisationsfilter zwischen die Lichtquelle und die Probe ein.

Um einen dunklen Hintergrund zu erzeugen, drehen Sie den Polarisator, bis seine optische Achse senkrecht zum Analysator steht. Sobald ein doppelbrechender Kristall identifiziert wurde, setzen Sie den Kompensator zwischen Polarisator und Probe ein und bewegen Sie ihn parallel oder senkrecht zur optischen Achse des Kristalls. Beobachte die Farbe, die der Kristall offenbart.

Für die Alizarinrot-Färbung mischen Sie einen Tropfen der Synovialflüssigkeitsprobe mit dem gleichen Volumen der zuvor hergestellten Alizarinrot-Lösung auf einem sauberen Objektträger. Decken Sie den Objektträger mit einem Deckglas ab und untersuchen Sie ihn mit 400-facher Vergrößerung unter einem Mikroskop, um die Kristalle zu identifizieren. Die makroskopischen Merkmale der Gelenkflüssigkeitsproben gaben Aufschluss über den Grad der Entzündung.

Eine Probe mit blassgelber Farbe und mehr Klarheit wird im Allgemeinen mit nicht-entzündlichen Erkrankungen wie Arthrose in Verbindung gebracht. Auf der anderen Seite weist eine Probe mit dunkelgelber Farbe und trübem Aussehen auf das Vorhandensein von Zellen, Trümmern, Hyaluronsäure und Fibrinfragmenten hin, die mit entzündlichen Ergüssen in Verbindung gebracht werden. Bei den Leukozyten, die in Synovialflüssigkeitsproben von Arthrosepatienten beobachtet wurden, handelte es sich hauptsächlich um Monozyten und andere mononukleäre Zellen wie Synoviozyten.

Calciumpyrophosphatkristalle wurden in Synovialflüssigkeitsproben nachgewiesen, die auf relativ höhere Konzentrationen von entzündlichen Zytokinen hindeuten. Darüber hinaus zeigte eine positive Alizarinrot-Färbung das Vorhandensein von basischen Calciumphosphatkristallen in den Proben. Es ist sehr wichtig, den Objektträger bei normalem Licht sorgfältig zu untersuchen, wenn man nach Kristallen sucht.

Denken Sie daran, dass Pyrophosphatkristalle oft schwach doppelbrechend sind und unter polarisiertem Licht übersehen werden können. Das Vorhandensein von Kalziumkristallen in der Gelenkflüssigkeit und ihre Assoziation mit schwereren Krankheitsformen haben Forscher dazu veranlasst, neue Mechanismen in der Pathogenese und dem Fortschreiten der Arthrose zu erforschen.