Name: Isolierung kleiner präantraler Follikel aus dem Rindereierstock durch eine Kombination aus Fragmentierung, Homogenisierung und serieller Filtration (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Lernen Sie die effiziente Isolierung kleiner präantraler Follikel aus Rindereierstöcken durch Fragmentierung, Homogenisierung und serielle Filtration. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Ergebnisse für die Erforschung der Follikulogenese.

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Dieses Projekt wurde teilweise durch das USDA Multi-State-Projekt W4112 und den UC Davis Jastro Shields Award an SM finanziert.
Die Autoren möchten Central Valley Meat, Inc. für die Bereitstellung der in allen Experimenten verwendeten Rindereierstöcke danken. Die Autoren danken auch Olivia Silvera für die Unterstützung bei der Eierstockverarbeitung und Follikelisolierung.

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine reproduzierbare Methode zur Gewinnung präantraler Follikel im Frühstadium, insbesondere in primären und frühen sekundären Stadien, aus dem Rindereierstock. Dieses Protokoll baut auf früheren Berichten 20,25,30,34,35,36 auf und bietet Optimierungen, die zur Isolierung einer sinnvollen Anzahl von...

Eierstockfollikel sind die funktionellen Einheiten des Eierstocks, die für die Produktion der Gameten (Eizellen) sowie von Hormonen verantwortlich sind, die für die Fortpflanzungsfunktion und die allgemeine Gesundheit entscheidend sind. Primordiale Follikel bilden sich im Eierstock während der fetalen Entwicklung oder in der Neugeborenenperiode, abhängig von der Art1, und sie bilden die ovarielle Reserve einer Frau. Das follikuläre Wachstum beginnt mit der Aktivierung von primordialen Follikeln, die das Ruhebecken verlassen und in die Wachstumsphase eintreten. Die präantrale Follikulogenese, die alle Follikelstadien vor der Entwicklung des Antrums umfasst, ist ein hochdynamischer Prozess, der synchrone morphologische und metabolische Veränderungen in der Eizelle und den umgebenden Granulosazellen erfordert, die durch eine enge Kommunikation zwischen diesen beiden Zelltypen angetriebenwerden 2,3. Präantralfollikel bilden die Mehrheit der follikulären Einheiten, die zu einem bestimmten Zeitpunkt im Eierstock gefunden werden4. Es wird geschätzt, dass die Entwicklung durch die präantralen Stadien der Follikulogenese mehrere Wochen länger dauert als die antrale Entwicklung 5,6, und diese Zeit ist notwendig, damit die Eizellen und die Körperzellen eine ausreichende Reife erlangen, um in das Endstadium der Entwicklung (d.h. das Antralstadium) einzutreten und sich auf Eisprung, Befruchtung und Embryonalentwicklung vorzubereiten 7,8,9.
Ein Großteil des aktuellen Wissens über die präantrale Follikulogenese der Eierstöcke stammt aus Mausmodellen10,11,12,13, was zum Teil auf die Leichtigkeit zurückzuführen ist, eine große Anzahl dieser Follikel aus einem kleineren und weniger faserigen Eierstock zu gewinnen. Obwohl Berichte über die Isolierung einer großen Anzahl präantraler Follikel aus Rinderovarien etwa 30 Jahre zurückreichen14, ist ein vollständigeres Verständnis der Prozesse, die die Entwicklung dieser Follikel im Frühstadium regulieren, unrealisiert geblieben, hauptsächlich aufgrund des Mangels an optimierten, effizienten und wiederholbaren Methoden, um eine ausreichende Anzahl lebensfähiger präantraler Follikel zu gewinnen, insbesondere in frühen Entwicklungsstadien. Mit dem zunehmenden Interesse, die Eierstockreserve für die zukünftige Verwendung in der assistierten Reproduktion beim Menschen zu erhalten, werden Kühe aufgrund ihrer ähnlicheren Eierstockstruktur zu einem attraktiven Modell15. Der Rinderstock ist jedoch deutlich kollagenreicher als der Eierstock der Maus16, was die mechanische Isolierung mit den für die Maus beschriebenen Methoden sehr ineffizient macht. Die Bemühungen zur Erweiterung der Techniken zur Erhaltung der Fruchtbarkeit umfassen das vollständige In-vitro-Wachstum der präantralen Follikel in das Antralstadium, gefolgt von der In-vitro-Reifung (IVM) der eingeschlossenen Eizellen, der In-vitro-Fertilisation (IVF) sowie der Embryonenproduktion und -übertragung17. Bisher wurde dieser gesamte Prozess nur bei Mäusen18 erreicht. Bei Rindern beschränkt sich der Fortschritt in Richtung Follikelwachstum in vitro auf wenige Berichte mit variablen Follikelstadien zu Beginn der Kultur sowie variabler Kulturlänge zwischen den Protokollen17,19.
Die in der Literatur beschriebenen Methoden zur Gewinnung präantraler Follikel aus dem Rindereierstock haben meist mechanische und enzymatische Techniken verwendet, entweder isoliert oder in Kombination 2,14,17,20. Der erste Bericht über ein Protokoll zur präantralen Follikelisolierung von Rindern verwendete einen Gewebehomogenisator und eine serielle Filtration, um ganze Eierstöcke zu verarbeiten20. Dieser Studie folgten Berichte, die mechanische und enzymatische Verfahren kombinierten, die Kollagenase14 verwendeten. Ein wiederkehrendes Thema bei der Verwendung von Kollagenase zur Verdauung des Eierstockgewebes ist das potenzielle Risiko einer Schädigung der follikulären Basalmembran, die die Lebensfähigkeit der Follikel beeinträchtigen kann 14,21,22,23. Daher wurden verschiedene Kombinationen von mechanischen Methoden verwendet, wie die Verwendung eines Gewebehackers und wiederholtes Pipettieren oder eines Gewebehackers in Kombination mit Homogenisierung20,24,25,26. Eine andere mechanische Technik, die beschrieben wurde, verwendet Nadeln, um präantrale Follikel direkt aus dem Eierstockgewebe zu sezieren, was besonders nützlich ist, um größere (>200 μm) sekundäre Follikel zu isolieren. Dieser Prozess ist jedoch zeitaufwendig, ineffizient für die Isolierung kleinerer präantraler Follikel und abhängig von Fähigkeiten, wenn er in Rinderovarien versuchtwird 19,27,28.
Unter Ausnutzung der verschiedenen in der Literatur beschriebenen Techniken zielte dieses Protokoll darauf ab, die Isolierung präantraler Follikel aus einzelnen Rinderovarien auf einfache, konsistente und effiziente Weise zu optimieren, die eine Inkubation in enzymatischen Lösungen vermeidet. Die Verbesserung der Methoden zur Isolierung präantraler Follikel bietet die Möglichkeit, das Verständnis dieses Stadiums der Follikulogenese zu verbessern und die Entwicklung effektiver Kultursysteme zur Entwicklung präantraler Follikel bis zum Antralstadium zu ermöglichen. Die hier beschriebenen detaillierten Verfahren zur Isolierung präantraler Follikel von einem großen Säugetier wie der Rinderart werden für Forscher, die die frühe Follikulogenese bei einer nicht-murinen Art untersuchen wollen, die auf den Menschen übertragbar ist, von entscheidender Bedeutung sein.

<table><tbody><tr><td>5-3/4" Soda Limette Einweg-Glas-Pasteur-Pipette</td><td>Duran Wheaton Kimble</td><td>63A54</td><td>Pasteur-Pipette, die verwendet werden kann, um Follikel von Ablagerungen zu entfernen, während in der Petrischale gesucht</td></tr><tr><td>wird 16% Paraformaldehyd</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>15710</td><td>Verdünnt auf 4%; Fixierung von Follikeln für die Immunfärbung</td></tr><tr><td>20 mL Luer-Lock-Spritze</td><td>Fisher Scientific</td><td>Z116882-100EA</td><td>Spritze, die mit der 18-G-Nadel verwendet wird, um Follikel aus dem 40 μ; m cell Sieb</td></tr><tr><td>#21 Sterile Skalpellklinge</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-365-023</td><td>Wird verwendet, um die Eierstöcke zu schneiden und die Medula</td></tr><tr><td>zu entfernen 40 &mu; m Zell-Sieb</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>22-363-547</td><td>Wird verwendet, um das Filtrat aus dem 300 &mu; m cell ssieb</td></tr><tr><td>104 mm Kunststofftrichter</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-348C</td><td>Die Größe kann variieren, aber stellen Sie sicher, dass das Käsetuch richtig geschnitten ist und dass das Ovarialhomogenat nicht über</td></tr><tr><td>300 μm überläuft. m Zellsieb</td><td>pluriSelect&nbsp;</td><td>43-50300-03</td><td>Wird verwendet, um das Filtrat aus dem Käsetuch zu filtern&nbsp;</td></tr><tr><td>500 mL Erlenmeyerkolben</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB500500</td><td>Trichter und Kolben zum Auffangen von Filtrat aus dem Käsetuch</td></tr><tr><td>Air-Tite Sterile Nadeln 18 G</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14-817-151</td><td>18 G bietet genügend Druck, um Follikel aus dem 40 μ; m cell Sieb</td></tr><tr><td>Air-Tite Sterile Nadeln 27 G 13 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-171</td><td>Nadeln, mit denen Ablagerungen manipuliert werden können, in denen Follikel stecken</td></tr><tr><td>geblieben sind BD Hoechst 33342 Lösung</td><td>Fisher Scientific</td> BDB561908 <td>Fluoreszierender</td><td>DNA-Farbstoff</td></tr><tr><td>Rinderserum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030-100G&nbsp;</td><td>Bestandteil des Follikelwaschmediums</td></tr><tr><td>Käsetuch</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>71748-00</td><td>Erster Filterschritt des Eierstockhomogenats zur Entfernung großer Gewebereste</td></tr><tr><td>Klassische Doppelkanten-Sicherheitsrasierklingen</td><td>Wilkinson Schwert</td><td>N/A</td><td>Rasierklingen, die am besten in den McIlwain Tissue Chopper passen und nicht schnell abstumpfen</td></tr><tr><td>Esel-Anti-Kaninchen Sekundärantikörper, Alexa Fluor 488</td><td>Fisher Scientific</td><td>A-21206</td><td>Sekundärer Antikörper für die Immunfärbung</td></tr><tr><td>Eisco Latex-Pipettenbirnen</td><td>Fisher Scientific</td><td>S29388</td><td>Gummibirne zur Verwendung mit Pasteur-Pipetten</td></tr><tr><td>HEPES-Puffer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td>Bestandteil des Follikelwaschmediums</td></tr><tr><td>Homogenisator</td><td>VWR</td><td>10032-336</td><td>Homogenisieren Sie das Eierstockgewebe, um Follikel freizusetzen&nbsp;</td></tr><tr><td>ImageJ/Fiji</td><td>NIH</td><td>v2.3.1</td><td>Software für die Analyse der Fluoreszenz-Immunlokalisierung</td></tr><tr><td>McIlwain Tissue Chopper</td><td>Ted Pella</td><td>10184</td><td>Wird verwendet, um Eierstockgewebe klein genug für die Homogenisierung zu schneiden</td></tr><tr><td>Mikroskop - Stereoskop</td><td>Olympus</td><td>SZX2-ILLT</td><td>Dissektionsmikroskop zum Suchen und Entnehmen von Follikeln aus dem Filtrat</td></tr><tr><td>Mikroskop - Inverted</td><td>Nikon</td><td>Diaphot 300</td><td>Inverses Mikroskop für die Hellfeldvisualisierung isolierter Follikel mit hoher Vergrößerung</td></tr><tr><td>Mikroskop - Inverses</td><td>ECHO</td><td>Revolve R4</td><td>Inverses Mikroskop für die Hellfeld- und Epifluoreszenzvisualisierung isolierter Follikel mit hoher Vergrößerung</td></tr><tr><td>Mineralöl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8410-1L</td><td>Öl zum Abdecken der Tropfen des Follikelwaschmediums, um eine Verdunstung während der Suche zu verhindern</td></tr><tr><td>Nicht-essentielle Aminosäuren (NEAA)</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td>Bestandteil des Follikelwaschmediums</td></tr><tr><td>Normales Eselsserum</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>017-000-001</td><td>Reagenz zur Immunfärbung blockierender Puffer</td></tr><tr><td>Nunc 4-Well-Schalen für IVF</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>144444</td><td>4-Well-Schalen für die Follikelisolierung und das Waschen</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin-Lösung 100x</td><td>Gibco</td><td>15-140-122</td><td>Komponente des Follikelwaschmediums</td></tr><tr><td>Petrischale, 60 mm OD x 13,7 mm</td><td>Ted Pella</td><td>10184-04</td><td>Petrischale, die am besten in die McIlwain Tissue Chopper</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS) passtFisher</td> <td>Scientific</td><td>BP665-1</td><td>Waschpuffer für Eierstöcke und Follikel</td></tr><tr><td>Kunststoff-Schneidebrett</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-002-24A</td><td>Schneidebrett in ausreichender Größe zum sicheren Schneiden Eierstöcke</td></tr><tr><td>Polyvinylpyrrolidon (PVP)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP431-100</td><td>Die Zugabe von PVP (0,1 % w/v) zu PBS verhindert, dass Follikel an der Platte oder aneinander kleben.</td></tr><tr><td>ProLong Gold Antifade Eindeckmittel</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36930</td><td>Eindeckmedium für fluoreszenzmarkierte Zellen oder Gewebe</td></tr><tr><td>Qiagen RNeasy Micro Kit</td><td>Qiagen</td><td>74004</td><td>RNA-Säulenreinigungskit</td></tr><tr><td>R</td><td>The R Foundation</td><td>v4.1.2</td><td>Statistische Analysesoftware</td></tr><tr><td>Kaninchen-Anti-Mensch Cx37/GJA4 Polyklonaler Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab181701</td><td>Cx37 Primärantikörper für Immunfärbung</td></tr><tr><td>RevertAid RT Reverse Transkriptionskit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>K1691</td><td>cDNA-Synthesekit</td></tr><tr><td>Rstudio</td><td>RStudio, PBC</td><td>v2021.09.2</td><td>Statistische Analysesoftware</td></tr><tr><td>Natriumhydroxidlösung (1N/zertifiziert)</td><td>Fisher Scientific</td><td>SS266-1</td><td>Wird verwendet, um den pH-Wert des Mediums auf 7,6-7,8</td></tr><tr><td>zu erhöhen Natriumpyruvat (NaPyr)</td><td>Gibco</td><td>11360-070</td><td>Bestandteil des Follikelwaschmediums</td></tr><tr><td>Quadratische Petrischale, 100 mm x 15 mm&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>60872-310</td><td>Petrischalen mit Raster ermöglichen eine effizientere Identifizierung von Follikeln.</td></tr><tr><td>SsoAdvanced Universal SYBR Green</td><td>Supermix BioRad 1725271</td><td></td><td>Mastermix für PCR-Reaktionen</td></tr><tr><td>Steritop Gewindefilter mit Flaschenaufsatz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2GPT02RE</td><td>Wird zur Sterilisation von Follikelwaschmedium verwendet</td></tr><tr><td>SYBR-sicherer DNA-Gel-Farbstoff</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S33102</td><td>Färben auf visuellen PCR-Produkten auf Agarosegel</td></tr><tr><td>TCM199 mit Hank' s Salze</td><td>Gibco</td><td>12-350-039</td><td>Bestandteil des Follikelwaschmediums</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-100</td><td>Reinigungsmittel für die Immunfärbung Permeabilisierungspuffer</td></tr><tr><td>Trizol-Reagenz</td><td>Thermo Fisher Scientific</td> 15596026 <td>RNA-Isolationsreagenz</td><td></td></tr><tr><td>Trypanblau-Lösung, 0,4%</td><td>Gibco</td><td>15-250-061</td><td>Wird zur Prüfung der Lebensfähigkeit isolierter Follikel</td></tr> verwendet<tr><td>Tween 20</td><td></td><td></td><td>Reinigungsmittel für Immunflecken Waschpuffer</td></tr><tr><td>Warmer Plate Universal</td><td>WTA</td><td>20931</td><td>Warmhalteplatte, um die Follikel bei 38,5 &° zu halten; C bei der Suche unter dem Mikroskop</td></tr><tr><td>Wiretrol II Kalibrierte Mikropipetten</td><td>Drummond</td><td>50002-005</td><td>Mikropipetten aus Glas zur Manipulation von Follikeln</td></tr></tbody></table>

isolierung kleiner präantraler follikel aus dem rindereierstock durch eine kombination aus fragmentierung, homogenisierung und serieller filtration

Isolation of Small Preantral Follicles from the Bovine Ovary Using a Combination of Fragmentation, Homogenization, and Serial Filtration

Das Verständnis des gesamten Prozesses der Follikulogenese von Säugetieren ist entscheidend für die Verbesserung der assistierten Reproduktionstechnologien bei Nutztieren, Menschen und gefährdeten Arten. Die Forschung beschränkte sich meist auf antrale und große präantrale Follikel aufgrund von Schwierigkeiten bei der Isolierung kleinerer präantraler Follikel, insbesondere bei großen Säugetieren wie Rindern. Diese Arbeit stellt einen effizienten Ansatz dar, um eine große Anzahl kleiner präantraler Follikel aus einem einzelnen Rinderstock zu gewinnen. Der Kortex einzelner Rinderovarien wurde mit einem Gewebechopper in 500 μm Würfel geschnitten und 6 min bei 9.000-11.000 U/min mit einer 10 mm Sonde homogenisiert. Große Ablagerungen wurden mit einem Käsetuch vom Homogenat getrennt, gefolgt von einer seriellen Filtration durch 300 μm und 40 μm Zellsieb. Der im 40-μm-Sieb zurückgehaltene Inhalt wurde in eine Suchschale gespült, wo Follikel identifiziert und zu einem Tropfen Medium gesammelt wurden. Die Lebensfähigkeit der gesammelten Follikel wurde mittels Trypanblau-Färbung getestet. Diese Methode ermöglicht die Isolierung einer großen Anzahl lebensfähiger kleiner präantraler Follikel aus einem einzigen Rindereierstock in ca. 90 min. Wichtig ist, dass diese Methode vollständig mechanisch ist und die Verwendung von Enzymen zur Dissoziation des Gewebes vermeidet, was die Follikel schädigen kann. Die mit diesem Protokoll erhaltenen Follikel können für nachgeschaltete Anwendungen wie die Isolierung von RNA für RT-qPCR, Immunlokalisierung spezifischer Proteine und In-vitro-Kultur verwendet werden.

Überblick und kritische Schritte Mit diesem Protokoll können kleine präantrale Rinderfollikel zuverlässig aus einzelnen Eierstöcken in experimentell relevanter Anzahl isoliert werden. Von insgesamt 30 Replikaten wurden durchschnittlich 41 Follikel pro Replikat mit einem Bereich von 11 bis 135 Follikeln erhalten (Abbildung 4A). In 14 Replikaten wurden die Follikel für das Entwicklungsstadium wie zuvor beschrieben26 durch Messung des Follikeldurchmes...

Um die Untersuchung der präantralen Follikulogenese voranzutreiben, sind effiziente Methoden der Follikelisolierung aus einzelnen Eierstöcken erforderlich. Hier wird ein optimiertes, mechanisches Protokoll zur Follikelisolierung aus Rinderovarien mit einem Gewebezerkleinerer und Homogenisator vorgestellt. Diese Methode ermöglicht die Entnahme einer großen Anzahl lebensfähiger präantraler Follikel aus einem einzigen Eierstock.

Isolierung kleiner präantraler Follikel aus dem Rindereierstock durch eine Kombination aus Fragmentierung, Homogenisierung und serieller Filtration

Understanding the full process of mammalian folliculogenesis is crucial for improving assisted reproductive technologies in livestock, humans, and ...

Dieses Protokoll ermöglicht die effiziente und wiederholbare Isolierung präantraler Follikel im Frühstadium von einem einzigen Rindereierstock und schafft neue Möglichkeiten für die Untersuchung der Follikulogenese der Eierstöcke bei einer nicht-rindernen Spezies. Durch die Verwendung einer größeren Anzahl von Follikeln aus einem einzigen Eierstock ermöglicht diese Technik In-vivo-Behandlungen vor der Ernte der Eierstöcke oder die Verlagerung mehrerer Proben desselben Tieres im Laufe der Zeit durch eine Eierstockbiopsie. Die Isolierung und Kryokonservierung von präantralen Follikeln im Frühstadium kann eine wertvolle Option für die Erhaltung der Fruchtbarkeit bei jungen Frauen sein, die sich einer gonadotoxischen Behandlung wie Chemotherapie sowie der Keimplasmakonservierung von gefährdeten Arten unterziehen.Stephanie McDonnell, Amanda Morton und Juliana Candelaria, Doktorandinnen aus meinem Labor, demonstrieren das Verfahren. Um zu beginnen, übertragen Sie Eierstöcke im Labor in warme, sterile PBS-haltige Pen-Streptokokken und ausgewählte Eierstöcke mit vielen kleinen Antralfollikeln und ohne prominentes Corpus lutetium. Entfernen Sie überschüssiges Bindegewebe und Fett aus den Ei

isolation-small-preantral-follicles-from-bovine-ovary-using

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Eine neue Methode zur Ovarialfollikel Kapselung in einer 3D-Fibrin-Alginat durchdringendes Netzwerk beschrieben. Dieses System kombiniert strukturelle Unterstützung mit proteolytischen Abbau der Entwicklung von unreifen Follikeln Unterstützung, um zu reifen Eizellen zu produzieren. Diese Methode kann zur Kultur Zellaggregate angewendet werden, um Zell-Zell-Kontakte ohne Beschränkungen für die Ausweitung aufrecht zu erhalten.

Eine Methode zur Ovarialfollikel Encapsulation und Kultur in einem Proteolytisch Degradable 3 Dimensional-System

Dieses Video beschreibt die Isolierung von antralen Eizellen aus frisch entnommenen Maus-Eierstöcken. Diese antralen Eizellen können für weitere Charakterisierungs- und Entwicklungsstudien verwendet werden.

Isolierung von antralen Eizellen aus der Maus: Eine Methode zur Isolierung von antralen Eizellen aus frisch entnommenen Eierstöcken der Maus

Dieses Video beschreibt die Technik zur Isolierung des Kumulus-Eizell-Komplexes oder COC aus Schweine-Eierstöcken. Das isolierte intakte COC kann verwendet werden, um die In-vitro-Fertilisation durchzuführen - die assistierte Reproduktionstechnik zur Entwicklung von Fruchtbarkeitsbehandlungen.

Isolierung des Schweine-Cumulus-Oozytenkomplexes: Eine Technik zur Isolierung des Cumulus-Oozytenkomplexes aus dem Eierstockfollikel des Schweins für die In-vitro-Fertilisation

Hier werden zwei Protokolle für die Verkapselung von Schweineeioozyten unter 3D-Kulturbedingungen vorgestellt. In der ersten werden Cumulus-Oozyten-Komplexe (COCs) in Fibrin-Alginat-Perlen eingekapselt. In der zweiten werden sie mit fluorierten Ethylenpropylenpulverpartikeln (Mikrobioreaktoren) umschlossen. Beide Systeme sorgen für optimale Bedingungen, um ihre 3D-Organisation aufrechtzuerhalten.

Proteolytisch abgebaute Alginat-Hydrogele und hydrophobe Mikrobioreaktoren zur Poren-Oozyten-Verkapselung

Wir beschreiben die Verfahren zur Isolierung wachsender Eizellen von Eierstockfollikel in frühen Entwicklungsstadien sowie den Aufbau eines In-vitro-Kultursystems, das das Wachstum und die Differenzierung bis in die ausgewachsene Phase unterstützen kann.

In Vitro Kulturstrategie für Oozyten aus dem frühen Antralfollikel bei Rindern

Hier stellen wir eine einfache Methode zur Trennung von Follikelzellen und Eizellen in Zebrafisch-Ovarialfollikel vor, die Untersuchungen der Eierstockentwicklung bei Zebrafischen erleichtern.

Trennung von Follikulärzellen und Oozyten in Denrogarischen Follikel von Zebrafischen

Hier stellen wir Protokolle für die Identifizierung und Reinigung von Ovarialzellen aus Antralfollikeln vor. Wir erarbeiten Methoden zur Verarbeitung ganzer Eierstöcke für die Kryokonservierung von kortikalen Streifen bei gleichzeitiger Entnahme intakter Antralfollikel, die enzymatisch behandelt werden, um mehrere follikelresidente Zelltypen freizusetzen, darunter Granulosa-, Theka-, Endothel-, hämatopoetische und Stromazellen.

Extraktion, Markierung und Reinigung von linienspezifischen Zellen aus humanen Antralfollikeln

Hier beschreiben wir ein Protokoll, das beschreibt, wie menschliche Ovarialfollikel aus gefrorenem und aufgetautem kortikalem Gewebe isoliert werden können, um Genexpressionsanalysen durchzuführen.

Genexpressionsanalysen in humanen Follikeln

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Trennung von Dotter-, Granulosazellen und Thekazellen in präovulatorischen Follikeln von Vögeln. Diese präzise Handhabung ermöglicht kritische Untersuchungen der Rolle dieser Schichten für die Fortpflanzungsfunktion und hilft beim Verständnis der Follikelentwicklung, der Hormonregulation und der Krankheitsforschung, um den landwirtschaftlichen Ertrag zu steigern und biomedizinische Erkenntnisse zu gewinnen.

Trennung von präovulatorischen Follikel-, Granulosa- und Thekazellschichten von Vögeln für Downstream-Anwendungen

Dieses Protokoll beschreibt ein neuartiges dreidimensionales (3-D) Kulturmodell, bei dem ein Tyramin-gebundenes Hyaluronan-Hydrogel verwendet wird, um präantrale Follikel aus dem Eierstock der Maus zu verkapseln und zu kultivieren. Wir beschreiben auch zwei Ansätze zur Kryokonservierung von Eierstockfollikeln durch Vitrifikation.

Anwendung eines neuartigen Hyaluron-Hydrogels für die dreidimensionale Follikelkultur und Methodik für die Kryokonservierung von Ovarialfollikeln in der Maus

In diesem Artikel wird ein Co-Kulturmodell von Rinder-, Theka- und Granulosazellen vorgestellt. Diese Methode hat das Potenzial, als zuverlässige Grundlage für Analysen zu dienen, die sich auf die Untersuchung der parakrinen Kommunikation und des Substrattransports zwischen den somatischen Zellen innerhalb des Follikels konzentrieren.

Ein modifiziertes Co-Kultursystem zum Verständnis von Granulosa-Theka-Zell-Interaktionen im Rinder-Eierstock

Lernen Sie die effiziente Isolierung kleiner präantraler Follikel aus Rindereierstöcken durch Fragmentierung, Homogenisierung und serielle Filtration. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Ergebnisse für die Erforschung der Follikulogenese.

Isolierung kleiner präantraler Follikel aus dem Rindereierstock durch eine Kombination aus Fragmentierung, Homogenisierung und serieller Filtration (Video) | JoVE Journal

Isolierung kleiner präantraler Follikel aus dem Rindereierstock durch eine Kombination aus Fragmentierung, Homogenisierung und serieller Filtration

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