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DOI: 10.3791/64804-v
Erin Crawford*1, Heather L. Mentrup*2,3, Elizabeth A. Novak2,3, Kevin P. Mollen2,3
1Division of Pediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition,UPMC Children’s Hospital of Pittsburgh, 2Division of Pediatric Surgery,UPMC Children’s Hospital of Pittsburgh, 3Department of Surgery,University of Pittsburgh School of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a protocol for isolating murine colonic crypts to develop 3-dimensional colonoids, which can be differentiated to mimic the intestinal epithelium. This approach enables the investigation of intestinal physiology and barrier function in diseased states, particularly inflammatory bowel disease.
Wir beschreiben ein Protokoll, das die Isolierung von murinen Kolonkrypten für die Entwicklung von 3-dimensionalen Kolonoiden beschreibt. Die etablierten Kolonoide können dann terminalisiert werden, um die zelluläre Zusammensetzung des Wirtsepithels widerzuspiegeln, bevor sie eine entzündliche Herausforderung erhalten oder angewiesen werden, eine epitheliale Monoschicht zu bilden.
Durch unsere Forschung wollen wir untersuchen, wie murine Kolonoide von einem konventionellen Kolonoidkultursystem modifiziert werden können, um bestimmte Aspekte der Darmphysiologie und ihre Veränderung bei Vorhandensein eines entzündeten Krankheitszustands zu untersuchen. Die Untersuchung der Barrierefunktion und der Darmphysiologie bei Krankheitszuständen wie entzündlichen Darmerkrankungen ist begrenzt, wenn ein traditionelles murines Kolonoidkultursystem verwendet wird, das nur die Physiologie der Stammzellen widerspiegelt. Unser Protokoll ist insofern vorteilhaft, als es dem Leser mehrere Techniken zur Verfügung stellt, um zu untersuchen, wie Entzündungsmediatoren das Darmepithel beeinflussen, indem es sie entweder terminale Differenzierung oder die Schaffung eines 2D-Monolayer-Systems ermöglicht.
In Zukunft wird sich unser Labor darauf konzentrieren, zu verstehen, wie das menschliche Darmkultursystem verändert werden kann, um verschiedene Aspekte der Darmphysiologie und -erkrankungen, insbesondere entzündliche Darmerkrankungen, zu untersuchen.
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