Name: Intraperitoneale Transplantation zur Erzeugung akuter myeloischer Leukämie bei Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: Erfahren Sie die intraperitoneale Transplantation zur Erzeugung akuter myeloischer Leukämie bei Mäusen. Diese kostengünstige Methode etabliert zuverlässige AML-Modelle ohne aufwendige intravenöse Injektionstechniken.

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Die Autoren danken der Core Facility für Durchflusszytometrie des Huck-Instituts und der Core Facility für Histopathologie des Animal Diagnostic Laboratory, Department of Veterinary and Biomedical Sciences, The Pennsylvania State University, für die rechtzeitige technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse des American Institute for Cancer Research (KSP), des Penn State College of Agricultural Sciences, des Penn State Cancer Institute, des USDA-NIFA-Projekts 4771, der Beitrittsnummer 00000005 zu K.S.P. und R.F.P. unterstützt.

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<li>Cheng, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+bone+marrow-derived+MSCs+improves+cisplatinum-induced+renal+injury+through+paracrine+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Molecular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transplantation of bone marrow-derived MSCs improves cisplatinum-induced renal injury through paracrine mechanisms.</a> Experimental and Molecular Pathology. 94 (3), 466-473 (2013).</li>
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</ol>

Die Autoren erklären, dass kein Interessenkonflikt besteht.

Diese oben beschriebenen Studien liefern unterstützende Hinweise darauf, dass die Transplantation von Lin- Zellen bei der Erzeugung von 1° muriner AML mit LSK-Zellen vergleichbar ist. Darüber hinaus zeigen die aktuellen Daten auch, dass die i.p. Injektion im Vergleich zur intravenösen (oder r.o.) Injektion eine effiziente und bequeme Methode zur Etablierung einer murinen AML ist.
Zusätzlich zu LSK-Zellen wurde berichtet, dass andere Populationen wie der Granulozyten-Monozyten-Vorläu...

Die akute myeloische Leukämie (AML) ist eine Form der hämatologischen Malignität unterschiedlicher Ätiologie mit schlechter Prognose1. Die Generierung von AML-Tiermodellen legt den Grundstein für das Verständnis ihrer komplexen Variationen und Pathobiologie, um neue Therapien zu entdecken2. Die Leukämiegenese bei Mäusen umfasst die Transplantation von Spenderzellen, die Fusions-Onkoproteine exprimieren, einschließlich Fusionen, an denen das MLL-Gen (Mixed Lineage Leukemia) beteiligt ist, um AML stark zu induzieren und die Krankheit beim Menschen nachzuahmen3. Bei der Transplantation von MLL-Gen-assoziierter AML4 wurden verschiedene zelluläre Ursprünge von Spenderzellen beschrieben, wobei nur sehr wenig über die Zellen bekannt ist, die für die Entstehung der Krankheit verantwortlich sind.
Es wurden mehrere Wege für die Transplantation in Mäuse entwickelt. Anstelle einer intrafemoralen Injektion, bei der mutierte Spenderzellen direkt in das Knochenmark eingeführt werden5, wurde eine intravenöse Injektion, bei der der venöse Sinusplexus, die Schwanzvene und die Halsvene verwendet werden, häufig verwendet, um murine AML-Modelle zu erzeugen 6,7,8,9. Im Falle der retroorbitalen Injektion waren verschiedene inhärente Nachteile, wie z. B. Volumenbegrenzung, hohe technische Anforderungen, geringe Wahrscheinlichkeit von Wiederholungsversuchen oder Fehlern und mögliche Augenverletzungen, große Stolpersteine mit begrenzten oder gar keinen praktikablen Alternativen7. Die Injektion einer Schwanzvene kann neben lokalen Verletzungen ähnliche Probleme haben. Um den Eingriff zu erleichtern, müssen Mäuse oft aufgewärmt werden, um ihre Schwanzvenen zu erweitern10. Es ist auch schwierig, die Schwanzvene ohne eine zusätzliche Lichtquelle zu lokalisieren, insbesondere beim Mäusestamm C57BL/6. Für die Injektion einer Halsvene benötigt das Forschungspersonal eine ausreichende Ausbildung, um die Vene zu lokalisieren und mögliche Komplikationen zu begrenzen. Darüber hinaus müssen sowohl Venenhöhlen- als auch Jugularveneninjektionen unter Narkose durchgeführt werden, was die Komplexität noch erhöht. Daher ist es verlockend, neue Wege für die Transplantation zu erkunden, um die Etablierung von AML-Mausmodellen zu erleichtern.
Die intraperitoneale (i.p.) Injektion wird häufig zur Verabreichung von Medikamenten, Farbstoffen und Anästhetika verwendet 11,12,13,14,15; Es wurde auch verwendet, um hämatopoetische Zellen für die ektopische Hämatopoeseeinzuführen 16 und aus dem Knochenmark stammende mesenchymale Stammzellen in verschiedene Mausmodelle zu transplantieren 17,18,19,20,21. Es wurde jedoch nur selten zur Feststellung hämatopoetischer Malignome bei Mäusen eingesetzt, insbesondere zur Untersuchung des Fortschreitens der AML-Erkrankung.
Die vorliegende Arbeit beschreibt die Machbarkeit der i.p. Injektion bei der Generierung von AML-Mausmodellen und vergleicht die Transplantationseffizienz von liniennegativen (Lin-) und Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) Populationen als Spenderzellen. Diese Ergebnisse bieten eine einfache und effiziente Möglichkeit, experimentelle Modelle für AML und verwandte myeloische Leukämien zu erstellen. Eine solche Methode hat das Potenzial, unser Verständnis der Krankheitsmechanismen zu verbessern und ein relativ einfaches Modell für die Erprobung experimenteller Therapien zu liefern.

<table><tbody><tr><td>a-Kompetente Zellen auswählen&nbsp;</td><td>Bioline</td><td>BIO-85027</td><td></td></tr><tr><td>Ammoniumchlorid (NH4Cl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# A-9434</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# A0797</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA), Fraktion V & Gemini-Bioprodukte mit niedrigem Endotoxingehalt</td><td></td><td>Cat# 700-102P</td><td></td></tr><tr><td>Ciprofloxacin HCl</td><td>GoldBio.com</td><td>Cat# C-861-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, hoher Glukosegehalt, kein Glutamin</td><td>Gibco</td><td>Cat# 11960-044</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Corning</td><td>Cat# 21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>EDTA, Dinatriumsalz (EDTA-2Na), Dihydrat, Molekularbiologie</td><td>Calbiochem</td><td>Cat# 324503</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum - Premium Select</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>Cat# S11550</td><td></td></tr><tr><td>Holo-Transferrin, Rind</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# T1283</td><td></td></tr><tr><td>Insulinlösung human</td><td>Sigma</td><td>Cat# I-9278</td><td></td></tr><tr><td>Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)</td><td>Gibco</td><td>Cat# 12440-053</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin 200 mM (100&mal;) Lösung</td><td>HyClone, Gelifesciences</td><td>Cat# SH30034.01</td><td></td></tr><tr><td>LB Brühe, Lennox</td><td>NEOGEN</td><td>Cat #: 7290A</td><td></td></tr><tr><td>LB Bouillon mit Agar (Miller)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# L-3147</td><td></td></tr><tr><td>Maus Anti-Maus CD45.1 (FITC)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Cat# 130-124-211</td><td></td></tr><tr><td>Maus Interleukin-3 (IL-3)</td><td>Gemini Bio-Produkte</td><td>Cat# 300-324P</td><td></td></tr><tr><td>Maus Interleukin-6 (IL-6)</td><td>Gemini Bio-Produkte</td><td>Cat# 300-327P</td><td></td></tr><tr><td>Maus Stammzellfaktor (SCF)</td><td>Gemini Bio-Produkte</td><td>Cat# 300-348P</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin Lösung, 100x</td><td>Corning</td><td>Cat# 30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Phenix-Eco (pECO) Zellen</td><td>ATCC</td><td>CRL-3214</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumbicarbonat (KHCO3), Granulat</td><td>JT. Baker</td><td>Cat# 2940-01</td><td></td></tr><tr><td>Ratte Anti-Maus CD117 (c-kit) (APC)</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>Katze # 105812</td><td></td></tr><tr><td>Ratte Anti-Maus Ly-6A/E (Sca-1) (PE-Cy7)</td><td>BD Pharmingen</td><td>Katze # 558162</td><td></td></tr><tr><td>rekombinanter Maus Flt3-Ligand</td><td>Pepro Tech, INC.</td><td>Cat# 250-31L</td><td></td></tr><tr><td>RetroNectin Rekombinantes humanes Fibronektin-Fragment</td><td>TaKaRa</td><td>Cat# T100A</td><td></td></tr><tr><td>TransIT-293 Reagenz</td><td>MirusBio</td><td>Cat# MIR 2705</td><td></td></tr><tr><td>TRI Reagenz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# T9424</td><td></td></tr><tr><td>Trypanblau-Lösung, 0,4%</td><td>Gibco</td><td>Cat # 15250061</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,25%), Phenolrot</td><td>Gibco</td><td>Cat# 25200-056</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol (BME)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# M3148</td><td></td></tr><tr><td>Commercial Assays&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasySep Maus Hämatopoetisches Kit zur Isolierung von Vorläuferzellen&nbsp;</td><td>StemCell technologies</td><td>Cat# 19856A</td><td></td></tr><tr><td>cDNA-Reverse-Transkriptionskit mit hoher Kapazität&nbsp;</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td>Cat# 4368813</td><td></td></tr><tr><td>PerfeCTa qPCR SuperMix</td><td>Quanta Bio</td><td>Cat# 95051-500</td><td></td></tr><tr><td>Plasmid Maxi Kit (25)</td><td>Qiagen</td><td>Cat#:12163</td><td></td></tr><tr><td>Animals<</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>em>Ai14TdTomato </td>Mäuse <td>Jackson Laboratory</td><td>Stamm # 007914</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1 C57BL6/J Mäuse& nbsp;</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Stamm # 002014</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2 C57BL6/J Mäuse&nbsp;</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Stamm # 000664</td><td></td></tr><tr><td>Instrumente und Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adobe illustrator&nbsp;</td><td>Version 25.2.3</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD accuri C6 Durchflusszytometer</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo 10.8.0</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GeneSys Softwareprogramm&nbsp;</td><td>Version 1.5.7.0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Version 6&nbsp;</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemavet 950FS&nbsp;</td><td>Drew Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7300 Echtzeit-PCR-System</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Syngene G:BOX Chemi XR5 Chemilumineszenz-Fluoreszenz-Bildgebung</td><td>G:Box Chemi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intraperitoneale transplantation zur erzeugung akuter myeloischer leukämie bei mäusen

Intra-Peritoneal Transplantation for Generating Acute Myeloid Leukemia in Mice

Es besteht ein ungedeckter Bedarf an neuartigen Therapien zur Behandlung der akuten myeloischen Leukämie (AML) und des damit verbundenen Rezidivs, an dem persistierende Leukämiestammzellen (LSCs) beteiligt sind. Ein experimentelles AML-Nagetiermodell zur Erprobung von Therapien, die auf der erfolgreichen Transplantation dieser Zellen durch retroorbitale Injektionen in Empfängermäusen basieren, ist mit Herausforderungen verbunden. Das Ziel dieser Studie war es, eine einfache, zuverlässige und konsistente Methode zu entwickeln, um ein robustes murines AML-Modell auf intraperitonealer Route zu generieren. Im vorliegenden Protokoll wurden Knochenmarkszellen mit einem Retrovirus transduziert, das humanes MLL-AF9-Fusions-Onkoprotein exprimiert. Die Effizienz von liniennegativen (Lin-) und Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) Populationen als Spender-LSCs bei der Entwicklung der primären AML wurde getestet und die intraperitoneale Injektion als neue Methode zur Erzeugung von AML eingeführt. Der Vergleich zwischen intraperitonealen und retroorbitalen Injektionen wurde bei seriellen Transplantationen durchgeführt, um die beiden Methoden zu vergleichen und gegenüberzustellen. Sowohl Lin- als auch LSK-Zellen, die mit dem humanen MLL-AF9-Virus transduzierten, transplantierten gut in das Knochenmark und die Milz der Empfänger, was zu einer ausgewachsenen AML führte. Die intraperitoneale Injektion von Spenderzellen etablierte AML bei Empfängern nach serieller Transplantation, und die Infiltration von AML-Zellen wurde im Blut, Knochenmark, Milz und Leber der Empfänger durch Durchflusszytometrie, qPCR und histologische Analysen nachgewiesen. Daher ist die intraperitoneale Injektion eine effiziente Methode der AML-Induktion durch serielle Transplantation von Spenderleukämiezellen.

Vergleich der Transplantationseffizienz von murinen AML-Zellen unter Verwendung von r.o. und i.p. Transplantationswegen Zuvor wurde die Etablierung von 1° AML in Empfängermäusen berichtet, die retroorbital mit MLL-AF9-transduzierten LSK-Zellen transplantiert wurden, und die Transplantationsfähigkeit von 1° AML-Zellen wurde durch serielle Transplantation nachgewiesen30. Die vorliegende Studie ist die erste, die die Möglichkeit der Verwendung von Knochenmark-Linzellen ...

Dabei wird die intraperitoneale Injektion von Leukämiezellen genutzt, um eine akute myeloische Leukämie (AML) bei Mäusen zu etablieren und zu propagieren. Diese neue Methode ist bei der seriellen Transplantation von AML-Zellen wirksam und kann als Alternative für diejenigen dienen, bei denen Schwierigkeiten und Inkonsistenzen bei der intravenösen Injektion bei Mäusen auftreten können.

Intraperitoneale Transplantation zur Erzeugung akuter myeloischer Leukämie bei Mäusen

There is an unmet need for novel therapies to treat acute myeloid leukemia (AML) and the associated relapse that involves persistent leukemia stem cells ...

Dieses Protokoll ist bedeutsam, da lin-negative Zellen und SK-Zellen, die aus denselben Spendermäusen isoliert wurden, keinen offensichtlichen Unterschied in der Erzeugung von MLL-AF9-induzierter AML aufwiesen. Auch die IP-Injektion von leukämischen Zellen kann erfolgreich ein Mausmodell für AML entwickeln. Im Vergleich zu herkömmlichen Transplantationsmethoden ist diese Technik bequemer und kostengünstiger.Sterilisieren Sie zunächst die 8 bis 10 Wochen alte CD45.1-Maus des weiblichen C57BL/6J-Mäuses mit 70 % Ethanol. Legen Sie die Maus auf eine sterile OP-Unterlage auf einer Styroporplatte und stecken Sie die Beine durch die Pfotenballen der Maus. Schneiden Sie die Haut oberhalb der Bauchhöhle an der Mittellinie auf und erweitern Sie den Unterhautraum in Richtung der Hinterbeine mit einer sterilen Schere mit scharfem Ende.Verlängern Sie den Schnitt von der Bauchmittellinie bis zu den Knöcheln und erweitern Sie den Unterhautraum unter den Hinterbeinen mit den Klingen einer scharfen Schere. Schneiden Sie die Achillessehne mit einer scharfen Schere durch. Halten Sie die Sehne mit einer Pinzette mit Zähnen fest und schneiden Sie das andere Ende, das am Oberschenkelknochen befestigt ist, ab, um den Gastrocnemius-Muskel zu entfernen.Schneiden Sie die am Knie befestigte Quadrizepssehne mit einer Schere durch. Halten Sie die Sehne fest und schneiden Sie den Muskelkopf durch, der am Oberschenkelknochen befestigt ist, um den Gastrocnemius-Muskel zu entfernen. Schneiden Sie die anderen Muskeln, die den Oberschenkelknochen umgeben, am Ende des Schienbeins ab.Schneiden Sie als Nächstes den Knöchel mit einer scharfen Schere ab und achten Sie darauf, dass das Schienbein intakt bleibt. Halten Sie das distale Ende des Oberschenkelknochens fest und schneiden Sie das Hüftgelenk mit einer Schere auf, wobei Sie darauf achten müssen, dass der Hüftkopf intakt bleibt. Übertragen Sie die Tibien und Femurs in einen Flusspuffer in einem 15-Milliliter-Röhrchen.Trenne das Schien- und Oberschenkelsystem, indem du das Knie von Hand brichst. Entfernen Sie die Patella, den Knorpel und die Femurkondylen, um das Tibiaplateau und den distalen Femur freizulegen. Entfernen Sie die Muskeln mit steriler Gaze und tränken Sie die Knochen in einem Flusspuffer.Schneiden Sie den Oberschenkelhals ab und spülen Sie die Knochenmarkzellen mit Flusspuffer von beiden Enden des Oberschenkelknochens mit einer 10-Milliliter-Spritze mit einer 23-Gauge-Nadel. Als nächstes durchtrennen Sie den Knöchel tibia und spülen die Knochenmarkzellen mit Flusspuffer von beiden Enden der Tibia. Dispergieren Sie die Zellen, indem Sie mit einer 10-Milliliter-Spritze mit einer 18-Gauge-Nadel auf und ab pipettieren.Zentrifugieren Sie die einzellige Suspension drei Minuten lang bei vier Grad Celsius und 400 g. Verwerfen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen in fünf Millilitern Lysepuffer der roten Blutkörperchen (RBC), um die Erythrozyten drei Minuten lang zu lysieren. Fügen Sie fünf Milliliter Flusspuffer hinzu, um die Lyse zu stoppen.Anschließend zentrifugieren Sie die Zellsuspension und resuspendieren Sie das Pellet in fünf Millilitern Flusspuffer. Setzen Sie ein 70-Mikron-Zellsieb auf ein 50-Milliliter-Röhrchen und führen Sie die Suspension durch das Sieb, um die Zellen aufzufangen. Stellen Sie die Zellkonzentration mit Durchflusspuffer auf einmal 10 bis acht pro Milliliter in Polypropylenröhrchen mit rundem Boden ein.Wählen Sie liniennegative Zellen mit einem hämatopoetischen Mauszellisolierungskit gemäß den Anweisungen des Herstellers aus. Sobald Sie fertig sind, zentrifugieren Sie die sortierten hämatopoetischen Stammzellen und unsortierten liniennegativen Zellen und resuspendieren Sie sie in drei Millilitern 2X Zytokinen, IMDM-Medien und drei Millilitern viralem Überstand in einer retroreduktiv beschichteten Schale. Inkubieren Sie die Schüssel in einem befeuchteten 5%Kohlendioxid-Inkubator bei 37 Grad Celsius für 6 oder 24 Stunden.Nach der Transduktion werden die Zellen durch Zentrifugation geerntet. Verwenden Sie bei Bedarf Trypsin, um die Zellen zu sammeln, die am Boden der Schale befestigt sind. Entsorgen Sie den Überstand und resuspendieren Sie das Pellet in vorgewärmtem PBS.Injektion von Zellen in die primäre Empfängermaus retroorbital oder intraperitoneal mit einer 27-Gauge-Halbnadel. Überwachen Sie die Maus täglich. Nach einem Monat wird wöchentlich Blut durch retroorbitale Blutung entnommen, um die Leukozytose zu überwachen, indem das vollständige Blutbild auf einem HEMAVET ausgewertet wird.Stützen Sie das Auge mit Daumen und Zeigefinger und dringen Sie dann mit einem sterilen Hämatokrit-Kapillarrohr durch den inneren Canthus in den venösen Sinusplexus ein. Sammeln Sie 20 bis 25 Mikroliter Blut in einem EDTA-Blutentnahmeröhrchen und schließen Sie die Augenlider, um die Blutung zu stoppen. Tragen Sie einen Tropfen Gentamycin Sulfat Augenlösung auf das Auge auf.Wenn die weißen Blutkörperchen viermal 10 bis vier Zellen pro Mikroliter erreichen, isolieren Sie die Knochenmarkszellen, indem Sie die Oberschenkelknochen und Tibien mit Flusspuffer spülen, gefolgt von einer Erythrozytenlyse wie zuvor beschrieben. Um die Splenozyten zu entnehmen, legen Sie die Maus auf ein steriles chirurgisches Pad auf einer Styroporplatte und stecken Sie die Beine durch die Pfotenballen der Maus. Sterilisieren Sie die Maus mit 70%Ethanol.Schneiden Sie die Haut und den Muskel an der Mittellinie auf, um die Bauchhöhle mit einer sterilen Schere freizulegen. Isolieren Sie die Milz und legen Sie sie in einen Flusspuffer in einem 15-Milliliter-Röhrchen. Die Milz wird in einer sechs Zentimeter großen Schale mit drei Millilitern Durchflusspuffer durch ein 70-Mikron-Sieb gesiebt.Übertragen Sie die Zellen aus der Schale in ein 15-Milliliter-Röhrchen, zentrifugieren Sie dann die Einzelzellsuspension, entsorgen Sie den Überstand und resuspendieren Sie das Pellet drei Minuten lang in fünf Millilitern RBC-Lysepuffer. Fügen Sie fünf Milliliter Flusspuffer hinzu, um die Lyse zu stoppen und die Zellsuspension zu zentrifugieren. Resuspendieren Sie das Pellet in fünf Millilitern Durchflusspuffer, mischen Sie es und passieren Sie es durch ein 70-Mikron-Zellsieb, um die Zellen in einem 50-Milliliter-Röhrchen zu sammeln.Identifizierung von Zellen der primären akuten myeloischen Leukämie (AML) durch Färbung der Splenozyten und Knochenmarkszellen mit FITC-konjugiertem Anti-Maus-CD45.1-Antikörper und Nachweis auf einem Durchflusszytometer. Die Zellen werden zunächst auf FSC-A, FSC-H und FSC-A, SSC-A angesteuert, um Singuletts zu erhalten. Die CD45.1-positive Population wird im FL1-Diagramm durch Vergleich mit ungefärbten Zellen kontrolliert.Für die Sekundärtransplantation werden CD45.1 AML-Milzzellen von primären retroorbitalen Empfängern in PBS resuspendiert und retroorbital in die männliche CD45.2-Maus injiziert. Das Vorliegen einer aberranten Leukozytose und einer erhöhten Infiltration leukämischer Zellen im Knochenmark und in der Milz unterstützt die Möglichkeit, Knochenmarklinien-negative Zellen zur Erzeugung einer primären AML zu verwenden. Es wurden keine signifikanten Unterschiede bei primären Empfängern beobachtet, die mit LSK oder liniennegativen Zellen translatiert wurden.Die AML-Zellen verbreiten sich in der Bauchhöhle der primären Empfänger durch gemischte Leukämie- oder MLL-AF9-transduzierte liniennegative Zellen. Diese Ergebnisse bestätigten auch die Etablierung einer primären AML durch intraperitoneale Injektion von MLL-AF9-transduzierten Knochenmark-Lineage-negativen Zellen in Form von Leukozytose und das Vorhandensein von AML-Zellen im Knochenmark und in der Milz von Empfängermäusen. Allerdings dauerte die Primärtransplantation mittels intraperitonealer Injektion trotz gleicher Anzahl von Spenderzellen länger als die retroorbitale Injektion.Die sekundären Empfänger zeigten Leukozytose und signifikante Hepatosplenomegalie in weniger als einem Monat nach der Transplantation. Die AML-Zellen wurden auch im peripheren Blut, Knochenmark und in der Milz sowie in der Bauchhöhle nachgewiesen. Die intraperitoneale Injektion von acht mal 10 an die fünf AML-Zellen erreichte ein vergleichbares Engraftment wie die retroorbitale Injektion von acht mal 10 an die fünf AML.Die tertiären Empfängermäuse zeigten akute AML-Symptome wie Leukozytose und Hepatosplenomegalie, das Vorhandensein von Leukämiezellen im Blut, Knochenmark und in der Milz, die histologische Beobachtung des Femurs und der Milz zeigte außerdem die Infiltration leukämischer Zellen. Im Vergleich zu den sekundären und tertiären Transplantationen verlief die tertiäre Transplantation wesentlich schneller als die sekundäre Transplantation. Für das aktuelle Modell ist das Sortieren von LSK-Zellen nicht erforderlich.Lin-negative Zellen können 6 Stunden oder 24 Stunden lang mit dem AML-Virus transduziert werden. Es hat keinen Einfluss auf die Effizienz der Modelleinrichtung.

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Research

Forschung

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Krebsforschung

In diesem Video führen wir eine intraperitoneale Injektion von Eierstockkrebszellsuspension in einem Mausmodell durch, um die Besiedlung von Eierstockkrebszellen im peritonealen Fettgewebe und ihre anschließende Metastasierung zu untersuchen.

Intraperitoneale Injektion von Zellen: Eine Methode zur Abgabe von Krebszellen in das peritoneale Fettgewebe des Mausmodells

Dieses Video zeigt die Induktion der Darmtransplantat-gegen-Wirt-Krankheit, GvHD, bei einer tödlich bestrahlten Empfängermaus unter Verwendung von allogenen hämatopoetischen Stammzellen und GvHD-induzierenden Milz-alloreaktiven T-Lymphozyten. Dieses Protokoll hilft bei der Etablierung eines schweren akuten intestinalen GvHD-Modells, um den Mechanismus der Krankheit zu verstehen und innovative Therapieoptionen zu entwickeln.

Induktion der Graft-versus-Host-Krankheit in Mausmodellen durch allogene Knochenmark- und Milzzelltransplantation

Wir beschreiben ein Protokoll, bei dem die Busulfan-Konditionierung es ermöglicht, das Knochenmark einer Empfängermaus durch Knochenmarkzellen von Spendermäusen zu ersetzen, die ubiquitär grün fluoreszierendes Protein exprimieren, ohne Bestrahlung. Diese Technik ist nützlich, um die Akkumulation von Knochenmarkzellen im Zentralnervensystem zu untersuchen.

Busulfan als myelosuppressiven Agenten zur Erwirtschaftung stabiler Hochrangige Knochenmark Chimärismus bei Mäusen

Intravitalen Fluoreszenz-Mikroskopie (IVFM) von der Calvarium wird in Kombination mit genetischen Tiermodelle zur Untersuchung der Referenzfahrt und Engraftment des blutbildenden Zellen des Knochenmarks (BM) Nischen angewendet.

Kombination von intravitalen Fluoreszenz-Mikroskopie (IVFM) mit genetischen Modellen Engraftment Dynamik der blutbildenden Zellen des Knochenmarks Nischen zu studieren

Dieses Manuskript bietet eine Beschreibung der Methodik, die zur Etablierung von Transduktions-Transplantations-Mausmodellen verwendet wurde. Es wird detailliert über technische Fehler berichtet, die bei der Durchführung von Knochenmarktransplantationen vermieden werden sollten. Es sollte ein klares Verständnis für die Bedeutung eines hohen Virustiters, Transfektion/Transduktion und Bestrahlung gewonnen werden.

Transduction-Transplantation Maus-Modell der myeloproliferativen Neoplasien

In dieser Arbeit beschreiben wir ein Protokoll, in dem ein von Patienten mit akuter lymphatischer Leukämie abgeleitetes Xenograft-Modell als Strategie zur Bewertung und Überwachung von CD19-gerichteten chimären Antigenrezeptor-T-Zell-assoziierten Toxizitäten verwendet wird.

Bewertung der chimären Antigenrezeptor-T-Zell-assoziierten Toxizität unter Verwendung eines Xenograft-Mausmodells für Patienten mit akuter lymphatischer Leukämie

Dieses Protokoll beschreibt die intrafemorale Injektion einiger hämatopoetischer oder leukämischer Stammzellen, einschließlich geneditierter Zellen, in murine Xenotransplantatmodelle, die nicht nur eine schnelle und sichere Transplantation von Zellen, sondern auch serielle Analysen des Knochenmarks ermöglichen.

Vereinfachte intrafemorale Injektionen mit lebenden Mäusen ermöglichen eine kontinuierliche Knochenmarkanalyse

Intrafemorale Injektionen ermöglichen die Transplantation einer kleinen Anzahl von hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen (HSPCs), indem die Zellen direkt in der Knochenmarkhöhle platziert werden. Hier beschreiben wir ein experimentelles Protokoll zur intrafemoralen Injektion von humanen HSPCs in immundefiziente Mäuse.

Intrafemorale Injektion von humanen hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen in immungeschwächte Mäuse 

Hier wird eine auf Phosphoflow-Zytometrie basierende Methode zur Analyse der Signalwege stromabwärts der mTORC1-, JAK/STAT5- und MAPK-Signalwege in akuten humanen myeloischen Leukämiezellen beschrieben, die in Mäuse xenotransplantiert und aus Knochenmarkaspiraten gewonnen wurden. Die Werte von p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 und p-ERK1/2 werden gleichzeitig mit einem spektralen Durchflusszytometer der nächsten Generation mit hoher Empfindlichkeit gemessen.

Intrazelluläre Phosphoflow-Zytometrie von Xenotransplantaten bei akuter myeloischer Leukämie

Das Protokoll zielt darauf ab, ein Mausmodell zur Erzeugung von Schüben akuter lymphatischer Leukämie zu beschreiben, basierend auf der Dynamik des Ansprechens auf eine Induktionschemotherapie.

Mausmodell des Leukämie-Rezidivs zur Induktionschemotherapie bei akuter lymphatischer Leukämie

Dieses Protokoll demonstriert eine temporale Veneninjektion zur intravenösen Abgabe von pädiatrischen Krebszellen an Neugeborenenmäuse und ermöglicht so eine präzise, reproduzierbare Modellierung früher Immunantworten gegen Krebs. Die Methode ermöglicht die Bewertung der Wirkung von Interventionen, wie Immunmodulation oder Therapie, wenn sie während der neonatalen Periode angewendet werden.

Ein neonatales Modell der intravenösen Transplantation zur Bewertung früher Immunaktivitäten gegen Krebszellen

Erfahren Sie die intraperitoneale Transplantation zur Erzeugung akuter myeloischer Leukämie bei Mäusen. Diese kostengünstige Methode etabliert zuverlässige AML-Modelle ohne aufwendige intravenöse Injektionstechniken.

Intraperitoneale Transplantation zur Erzeugung akuter myeloischer Leukämie bei Mäusen

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