Name: Biolumineszentes Monitoring des Transplantatüberlebens in einem adoptiven Transfermodell des Autoimmundiabetes bei Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Lernen Sie ein biolumineszenten Monitoring-Verfahren zur Untersuchung von Transplantatüberleben bei NOD-SCID-Mäusen. Diese Methode ermöglicht die Analyse autoimmuner Angriffe auf Beta-Zellen und die Identifizierung therapeutischer Ziele für Diabetes-Typ-1.

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Wir danken Dr. Erica P. Cai und Dr. Yuki Ishikawa für die Entwicklung der in diesem Protokoll beschriebenen Methode (siehe Ref. 11). Die Forschung in den Labors von S.K. und P.Y. wird durch Zuschüsse der National Institutes of Health (NIH) (R01DK120445, P30DK036836), JDRF, des Harvard Stem Cell Institute und der Beatson Foundation unterstützt. T.S. wurde durch ein Postdoc-Stipendium des National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK) (T32 DK007260-45) unterstützt, und K.B. wurde teilweise durch ein Stipendium der Mary K. Iacocca Foundation unterstützt.

<ol><li>Katsarou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+1+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Type 1 diabetes mellitus.</a> Nature Reviews Disease Primers. 3, 17016(2017).</li>
<li>Shapiro, A. M., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pancreatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature Reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).</li>
<li>Pagliuca, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+functional+human+pancreatic+beta+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Generation of functional human pancreatic beta cells in vitro.</a> Cell. 159 (2), 428-439 (2014).</li>
<li>Russ, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+induction+of+human+pancreatic+progenitors+produces+functional+beta-like+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Controlled induction of human pancreatic progenitors produces functional beta-like cells in vitro.</a> EMBO Journal. 34 (13), 1759-1772 (2015).</li>
<li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+diabetes+with+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Reversal of diabetes with insulin-producing cells derived in vitro from human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 32 (11), 1121-1133 (2014).</li>
<li>Vertex Announces Positive Day 90 Data for the First Patient in the Phase 1_2 Clinical Trial Dosed With VX-880, a Novel Investigational Stem Cell-Derived Therapy for the Treatment of Type 1 Diabetes. Businesswire. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.businesswire.com/news/home/20211018005226/en/Vertex-Announces-Positive-Day-90-Data-for-the-First-Patient-in-the-Phase-12-Clinical-Trial-Dosed-With-VX-880-a-Novel-Investigational-Stem-Cell-Derived-Therapy-for-the-Treatment-of-Type-1-Diabetes">https://www.businesswire.com/news/home/20211018005226/en/Vertex-Announces-Positive-Day-90-Data-for-the-First-Patient-in-the-Phase-12-Clinical-Trial-Dosed-With-VX-880-a-Novel-Investigational-Stem-Cell-Derived-Therapy-for-the-Treatment-of-Type-1-Diabetes</a> (2021).</li>
<li>Gamble, A., Pepper, A. R., Bruni, A., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+journey+of+islet+cell+transplantation+and+future+development%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">The journey of islet cell transplantation and future development.</a> Islets. 10 (2), 80-94 (2018).</li>
<li>Pearson, J. A., Wong, F. S., Wen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+Non+Obese+Diabetic+%28NOD%29+mouse+model+in+autoimmune+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">The importance of the Non Obese Diabetic (NOD) mouse model in autoimmune diabetes.</a> Journal of Autoimmunity. 66, 76-88 (2016).</li>
<li>Hamaguchi, K., Gaskins, R. H., Leiter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIT-1%2C+a+pancreatic+%CE%B2-cell+line+established+from+a+transgenic+NOD%2FLt+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">NIT-1, a pancreatic β-cell line established from a transgenic NOD/Lt mouse.</a> Diabetes. 40 (7), 842-849 (1991).</li>
<li>Christianson, S. W., Shultz, L. D., Leiter, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+transfer+of+diabetes+into+immunodeficient+NOD-scid%2Fscid+mice%3A+Relative+contribution+of+CD4%2B+and+CD8%2B+T-cells+from+diabetogenic+versus+prediabetic+NOD.NON-Thy1a+donors%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Adoptive transfer of diabetes into immunodeficient NOD-scid/scid mice: Relative contribution of CD4+ and CD8+ T-cells from diabetogenic versus prediabetic NOD.NON-Thy1a donors.</a> Diabetes. 42 (1), 44-55 (1993).</li>
<li>Cai, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+in+vivo+CRISPR+screen+identifies+RNLS+as+a+target+for+beta+cell+protection+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Genome-scale in vivo CRISPR screen identifies RNLS as a target for beta cell protection in type 1 diabetes.</a> Nature Metabolism. 2 (9), 934-945 (2020).</li>
<li>Parent, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+deletion+of+human+leukocyte+antigens+protects+stem+cell-derived+islets+from+immune+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Selective deletion of human leukocyte antigens protects stem cell-derived islets from immune rejection.</a> Cell Reports. 36 (7), 109538(2021).</li>
<li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+acute+xenogeneic+graft-versus-host+disease%2C+but+retention+of+T-cell+function+following+engraftment+of+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+in+NSG+mice+deficient+in+MHC+class+I+and+II+expression%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Lack of acute xenogeneic graft-versus-host disease, but retention of T-cell function following engraftment of human peripheral blood mononuclear cells in NSG mice deficient in MHC class I and II expression.</a> FASEB Journal. 33 (3), 3137-3151 (2019).</li>
<li>Abdulreda, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+type+1+diabetes+immunopathology+using+eye-transplanted+islets+in+NOD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of type 1 diabetes immunopathology using eye-transplanted islets in NOD mice.</a> Diabetologia. 62 (7), 1237-1250 (2019).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

T1D ist eine verheerende Krankheit, für die es derzeit keine Heilung gibt. Die Betazellersatztherapie bietet eine vielversprechende Behandlung für Patienten mit dieser Krankheit, aber das entscheidende Hindernis für diese Strategie ist das Potenzial für wiederkehrende Autoimmunangriffe gegen die transplantierten Betazellen. Eine mögliche Lösung für dieses Problem ist die gentechnische Veränderung von SC-beta-Zellen, um deren Immunsichtbarkeit oder -anfälligkeit zu verringern. Hier wird ein Protokoll für die nicht-invasiv...

Typ-1-Diabetes (T1D) wird durch die autoimmune Zerstörung der insulinproduzierenden Betazellen der Bauchspeicheldrüse verursacht. Der Verlust von Betazellmasse führt zu Insulinmangel und Hyperglykämie. T1D-Patienten sind auf mehrere tägliche Injektionen von exogenem Insulin angewiesen und leiden im Laufe ihres Lebens unter Episoden schwerer Hyperglykämie und Hypoglykämie. Zu den Komplikationen, die mit diesen Episoden verbunden sind, gehören diabetische Retinopathie, verminderte Nierenfunktion und Neuropathie1.
Insulininjektionen sind eine Behandlung, aber keine Heilung für T1D. Der Ersatz der verlorenen Betazellmasse hat jedoch das Potenzial, die Krankheit rückgängig zu machen, indem die Patienten in die Lage versetzt werden, ihr eigenes Insulin zu produzieren. Das Angebot an Leichenspenderinseln ist jedoch begrenzt2. Aus Stammzellen gewonnene Inseln (SC-Inselchen) können einen praktisch unbegrenzten Vorrat an Betazellen für die Transplantation bieten. Mehrere Gruppen haben gezeigt, dass humane embryonale Stammzellen (ES-Zellen) und induzierte pluripotente Stammzellen (iPS-Zellen) differenziert werden können, um funktionelle beta-ähnliche Zellen zu erzeugen 3,4,5. Vielversprechende frühe klinische Studiendaten deuten darauf hin, dass diese Zellen ihre Funktion nach der Transplantation beibehalten und es den Patienten ermöglichen könnten, insulinunabhängig zu werden6. Es ist jedoch eine chronische Immunsuppression erforderlich, die ihre Anfälligkeit für Krebs und Infektionen erhöht. Darüber hinaus können Immunsuppressiva langfristig zytotoxisch für Transplantate sein7. Um die Notwendigkeit einer Immunsuppression zu eliminieren, können SC-Inseln genetisch verändert werden, um sie vor rezidivierender Autoimmunität sowie Alloimmunität nach der Transplantation zu schützen.
Die Stammzellforschung ist sehr kosten- und arbeitsintensiv. Mauszelllinien und Tiermodelle sind nützliche Werkzeuge für die erste Identifizierung und experimentelle Validierung von Strategien zum Schutz transplantierter Zellen vor Autoimmunität. Die NOD-Maus entwickelt einen spontanen Autoimmundiabetes mit vielen Ähnlichkeiten zu humanem T1D8, und die NIT-1-Insulinom-Zelllinie teilt einen genetischen Hintergrund mit diesem Mausstamm9. Diabetes kann durch die Injektion von diabetischen Milzzellen aus NOD-Mäusen adoptativ auf den verwandten immundefizienten NOD-scid-Mausstamm übertragen werden, um den Ausbruch des Diabetes in replizierten Versuchsmäusen zeitlich zu synchronisieren10. Mit diesem Modell lassen sich relativ schnell und kostengünstig genetische Zielstrukturen für die weitere Validierung in SC-Inseln identifizieren. Kürzlich wurde die Methode zur Identifizierung und Validierung von RNLS angewendet, einem Ziel, das primäre menschliche Inseln in vivo vor Autoimmunität und aus iPS-Zellen gewonnene Inseln vor Betazellstress in vitroschützt 11. Hier wird ein einfaches Protokoll beschrieben, um gentechnisch veränderte NIT-1-Zellen zu transplantieren und ihr Überleben nicht-invasiv in einem adoptiven Transfermodell für Autoimmundiabetes bei Mäusen zu überwachen.

<table><tbody><tr><td>0,05 % Trypsin, 0,53 mM EDTA</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>293FT</td><td>Invitrogen</td><td>R70007</td><td>Schnellwachsendes, hochgradig transfizierbares klonales Isolat, das aus menschlichen embryonalen Nierenzellen gewonnen wird, die mit dem SV40-Large-T-Antigen transformiert</td></tr><tr><td>wurden ACK Lysing Buffer</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>Alkoholvorbereitungspads, 70 % Isopropylalkohol</td><td>Amazon/Ever Ready Erste Hilfe</td><td>B08NWF31DX</td><td></td></tr><tr><td>BD 5ml Spritze Luer-Lok Spitze</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide Nadel 26G x 5/8 (0,45 mm x 16 mm) Sub-Q</td><td>BD</td><td>305115</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 mL TB Spritze Slip Tip</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Blasticidin S HCl</td><td>Corning</td><td>&nbsp; 30-100-RB</td><td></td></tr><tr><td>Zellsieb premium SureStrain, 70 & micro; m, steril</td><td>Southern Labware</td><td>C4070</td><td>Oder verwenden Sie ein ähnliches steriles Sieb mit einer Porengröße von 40-70 μm</td></tr><tr><td>CellDrop automatisierter Zellzähler</td><td>Denovix</td><td>CellDrop BF-PAYG</td><td>Oder verwenden Sie ein ähnliches Zellzählergerät</td></tr><tr><td>Corning 100 mL Penicillin-Streptomycin-Lösung, 100x</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Einweg-Aspirationspipetten, Polystyrol, steril, Kapazität=2 mL</td><td>VWR</td><td>414004-265</td><td>Oder verwenden Sie eine ähnliche Aspirationspipette</td></tr><tr><td>D-Luciferin, Kaliumsalz, Molekularbiologie, Pulver, >99%</td> <td>Goldbio</td><td>LUCK-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, hohe Glukose, Pyruvat, kein Glutamin</td><td>Gibco</td><td>10313039</td><td></td></tr><tr><td>Falcon BD Röhrchen, 50 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49A</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette Premium für Gewebe, 1 x 2 Zähne 5 Zoll, German</td><td>Steel Fisher Scientific</td><td>13-820-074</td><td></td></tr><tr><td>Glukose-Urin-Teststreifen</td><td>California Pet Pharmacy</td><td>u-tsg100</td><td>Oder verwenden Sie einen ähnlichen Teststreifen für Glukosemessungen im Urin/Blut</td></tr><tr><td>GlutaMAX&ndash; 1 (100x)</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Infrarot-Heizlampe</td><td>Cole Parmer</td><td>03057-00</td><td>Oder verwenden Sie eine ähnliche Infrarotlampe&nbsp;</td></tr><tr><td>Insulinspritze 0,5 ml, U-100 29 g 0,5 in</td><td>Becton Dickinson</td><td>309306</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran, USP</td><td>Piramal Critical Care</td><td>6679401725</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum In-vivo-Bildgebungssystem</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td>Instrument zur nicht-invasiven Sammlung von biolumineszierenden Bildern transplantierter Zellen</td></tr><tr><td>Software zur Analyse lebender Bilder</td><td>Perkin Elmer</td><td>128113</td><td>Software zum Sammeln und Quantifizieren von Biolumineszenzsignalen</td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenröhrchen seal-rite, 1,5 mL</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5510</td><td>Oder verwenden Sie ähnliche sterile Mikrozentrifugenröhrchen</td></tr><tr><td>NIT-1</td><td>ATCC</td><td>CRL-2055</td><td>Pankreas-Beta-Zelll-Linie, abgeleitet von NOD/Lt-Mäusen</td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid/J</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001303</td><td>Mäuse, die homozygot für die schwere kombinierte Immundefizienz-Spontanmutation sind&nbsp; Prkdcscid, allgemein bezeichnet als&nbsp; scid, zeichnen sich durch das Fehlen von funktionellen T-Zellen und B-Zellen, Lymphopenie, Hypogammaglobulinämie und eine normale hämatopoetische Mikroumgebung aus.</td></tr><tr><td>NOD/ShiLtJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001976</td><td>Der NOD/ShiLtJ-Stamm von Mäusen (allgemein als NOD bezeichnet) ist ein polygenes Modell für Autoimmun-Typ-1-Diabetes</td></tr><tr><td>PBS, pH 7,4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010031</td><td>Kein Kalzium, kein Magnesium, kein Phenolrot</td></tr><tr><td>pCMV-VSV-G</td><td>Addgene</td><td>8454</td><td></td></tr><tr><td>pLenti-Luciferase-Blast</td><td>Hergestellt im Haus</td><td>Plasmid auf Anfrage</td> <td>erhältlichSiehe ergänzende Datei 1</td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>pMDLg/pRRE</td><td>Addgene</td><td>12251</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylenimin, linear, MW 25.000, Transfektionsgrad (PEI 25K)</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1014320</td><td></td></tr><tr><td>pRSV-Rev</td><td>Addgene</td><td>12253</td><td></td></tr><tr><td>Rückhaltesystem für Nagetiere, brutartig Runde 1 in</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-288-32A</td><td></td></tr><tr><td>Schere, scharfe Spitze</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td>Oder verwenden Sie eine andere Schere aus chirurgischem Edelstahl</td></tr><tr><td>Mit Gewebekulturen behandelte Kulturschalen</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS430167-20EA</td><td>Oder verwenden Sie andere sterile, mit Zellkulturen behandelte Petrischalen</td></tr><tr><td>Pinzetten/Pinzetten, feine Präzision mit mittlerer Spitze</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-157</td><td></td></tr></tbody></table>

biolumineszentes monitoring des transplantatüberlebens in einem adoptiven transfermodell des autoimmundiabetes bei mäusen

Bioluminescent Monitoring of Graft Survival in an Adoptive Transfer Model of Autoimmune Diabetes in Mice

Typ-1-Diabetes ist gekennzeichnet durch die autoimmune Zerstörung der insulinproduzierenden Betazellen der Bauchspeicheldrüse. Eine vielversprechende Behandlung für diese Krankheit ist die Transplantation von Betazellen aus Stammzellen. Genetische Veränderungen können jedoch notwendig sein, um die transplantierten Zellen vor anhaltender Autoimmunität zu schützen. Diabetische Mausmodelle sind ein nützliches Werkzeug für die vorläufige Evaluierung von Strategien zum Schutz transplantierter Zellen vor Autoimmunangriffen. Hier wird ein minimalinvasives Verfahren zur Transplantation und Bildgebung von Zelltransplantaten in einem adoptiven Transfermodell von Diabetes in Mäusen beschrieben. In diesem Protokoll werden Zellen aus der murinen Pankreas-Betazelllinie NIT-1, die das Glühwürmchen-Luciferase-Transgen luc2 exprimieren, subkutan in immundefizige, nicht-adipöse diabetische (NOD)-schwere kombinierte immundefiziente (scid) Mäuse transplantiert. Diesen Mäusen werden gleichzeitig Splenozyten von spontandiabetischen NOD-Mäusen intravenös injiziert, um Autoimmunität zu übertragen. Die Transplantate werden in regelmäßigen Abständen mittels nicht-invasiver biolumineszenter Bildgebung abgebildet, um das Überleben der Zellen zu überwachen. Das Überleben von mutierten Zellen wird mit dem von Kontrollzellen verglichen, die in dieselbe Maus transplantiert wurden.

Eine Übersicht über das Protokoll ist in Abbildung 1 dargestellt. Das Überleben zweier Zelllinien, wie z.B. einer mutierten und einer nicht-zielgerichteten Kontrolle, kann verglichen werden, oder das Überleben einer Zelllinie kann in mehreren Gruppen von Mäusen gemessen werden, wie z. B. medikamentös behandelte Mäuse im Vergleich zu mit Vehikeln behandelten Kontrollen. Abbildung 3A zeigt drei 8 Wochen alte weibliche NOD-scid-Mäuse, die mit einer nicht-zielgerich...

Dieses Protokoll beschreibt eine unkomplizierte und minimalinvasive Methode zur Transplantation und Bildgebung von NIT-1-Zellen in nicht-adipösen diabetischen (NOD)-schweren kombinierten immundefizienten Mäusen, die mit Splenozyten konfrontiert wurden, die von spontan diabetischen NOD-Mäusen gereinigt wurden.

Biolumineszentes Monitoring des Transplantatüberlebens in einem adoptiven Transfermodell des Autoimmundiabetes bei Mäusen

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease ...

Dieses Protokoll kann helfen, die Mechanismen des Schutzes vor Autoimmunangriffen zu verstehen und therapeutische Ziele für den Betazellersatz bei Typ-1-Diabetes zu identifizieren. Der Hauptvorteil dieser Technik sind die relativ geringen Kosten, die Einfachheit der Zellkultur-, Transplantations- und Bildgebungsmethoden sowie die minimale Invasivität der Maustechniken. Personen, die noch nie eine Schwanzveneninjektion durchgeführt haben, können Schwierigkeiten haben, die Nadel in die Vene einzuführen.Lassen Sie sich vor der ersten Injektion von einem Experten vorführen. Nehmen Sie zunächst die betäubte Maus und entfernen Sie Haare von ihrer Rückenseite mit einem Elektrorasierer mit einem Schutz, wobei Sie etwa einen Zoll mal zwei Zoll der Haut freilegen. Lege die rasierte Maus in die Knockdown-Kammer zurück.Übertragen Sie vor der Transplantation jeweils eine Maus aus der Kammer auf eine saubere Oberfläche, die mit einem Isofluran-Nasenkegel ausgestattet ist, und führen Sie den Kopf der Maus vorsichtig in den Nasenkegel. Wischen Sie die rasierte Stelle mit einem Isopropylalkohol-Vorbereitungspad ab, um lose Haare zu entfernen und die Haut zu desinfizieren. Ziehen Sie als Nächstes me

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Ein Verfahren zur sicheren Pfropfen Luciferase-markierten menschlichen malignen peripheren Nervenscheide Tumorzellen in den Ischiasnerv von immundefizienten Mäusen beschrieben. Der Einsatz von Biolumineszenz-Bildgebung, um die ordnungsgemäße Errichtung von Tumor Transplantate und Kriterien für die zufällige Trennung der Tiere in Arbeitsgruppen zeigen, werden ebenfalls diskutiert.

Orthotopen Xenografting of Human Luciferase-Tagged malignen peripheren Nervenscheide Tumorzellen für In vivo Prüfung von Kandidaten Therapeutika

Dieses Video demonstriert die Verwendung...

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Murine Knochenmark-Transplantation ist eine weit verbreitete Technik, um immunologische Mechanismen für Graft-versus-Host-Krankheit beim Menschen zu studieren. Die Fähigkeit zur T-Zell-Trafficking-Muster zu...

Induktion der Graft-versus-Host-Krankheit und<em&gt; In Vivo</em&gt; T-Zell-Überwachung mit einem MHC-matched Mausmodell

Dieses Video zeigt ein orthotopes Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs, das Matrigel für die lokalisierte Zellabgabe und in vivo Biolumineszenz-Bildgebung zur nicht-invasiven Überwachung der Tumorprogression verwendet. Das orthotope Modell eignet sich sowohl für syngene als auch für Xenotransplantatmodelle und könnte in präklinischen Studien verwendet werden, um den Einfluss neuartiger Krebstherapeutika auf das Wachstum des primären Pankreastumors und die Metastasierung zu untersuchen.

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Dieses Video demonstriert eine bildgebende Methode zur Visualisierung transplantierter Luciferase-exprimierender Betazellen in einer nicht adipösen diabetischen immundefizienten Maus. Die Einführung von Splenozyten aus einer diabetischen Maus führt zu einer fortschreitenden Zerstörung der Betazelle, die visuell durch eine abnehmende Lumineszenz nach Substrateinführung bestätigt wird.

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Hier verwenden wir Biolumineszenz, Röntgen und Positronen-Emissions-Tomographie/berechnet Tomographie Bildgebung wie hemmende mTOR-Aktivität zu studieren Auswirkungen des Knochenmarks pfropfte Myelom Tumoren in einem Xenograft-Modell. Dies ermöglicht eine physiologisch relevante, nicht-invasive und multimodalen Analysen der Anti-Myelom-Wirkung von Therapien gezielt Knochenmark pfropfte Myelom Tumoren in Vivo.

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Ziel dieses Protokolls ist es, die Dynamik des menschlichen Pankreas-Islet-Entransplantierungsprozesses und des beitragenden Wirts- und Spenderzellen kontinuierlich zu überwachen. Dies wird durch die Transplantation menschlicher Inselchen in die vordere Augenkammer (ACE) eines NOD erreicht. (Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-Mausempfänger gefolgt von wiederholter 2-Photonen-Bildgebung.

Längsschnitt in Vivo Bildgebung und Quantifizierung der menschlichen Pankreas-Islet-Grafting- und Beitragenden Wirtszellen in der Vorderen Augenkammer

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