Name: Isolierung von retinalen Pigmentepithelzellen aus Meerschweinchenaugen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: Lernen Sie eine effiziente Methode zur Isolierung von retinalen Pigmentepithelzellen aus Meerschweinchenaugen für molekularbiologische Studien. Diese Technik liefert hochwertige RPE-Proben mit erhaltener RNA-Integrität.

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Diese Studie wird von der Japan Society for the Promotion of Science Overseas Research Fellowships (S.G.), einem Loris and David Rich Postdoctoral Scholar (S.G.) und einem Stipendium des National Eye Institute of the National Institutes of Health (R01EY012392; C.F.W.).

Alle Tierpflege- und -behandlungen, die in dieser Studie verwendet wurden, entsprachen der ARVO-Erklärung für den Einsatz von Tieren in der Augen- und Sehforschung. Die Versuchsprotokolle wurden vom Animal Care and Use Committee der University of California, Berkeley, genehmigt.
1. Enukleation des Meerschweinchenauges
<ol><li>Euthanasieren Sie ein Meerschweinchen mit einer intrakardialen Injektion von Natrium-Pentobarbital, das unter Narkose verabreicht wird (5% Isofluran in Sauerstoff).</li>
	<li>Entkernen Sie die Augen mit Hilfe einer Pinzette und einer Schere und geben Sie sie sofort zum Waschen in eine 10-cm-Petrischale mit steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS). Übertragen Sie die Augen auf frische PBS-Lösung. HINWEIS: Eine 6-Well-Platte mit 4 ml Lösung pro Well wird empfohlen.</li>
</ol>2. Isolierung der hinteren Augenmuschel und des RPE/Aderhaut/Sklera-Komplexes
<ol><li>Verwenden Sie mit Hilfe eines Präpariermikroskops eine 18-G-Nadel, um einen ersten kleinen Schnitt in der Sklera zu machen, etwa 1,0 mm hinter der Limbusgrenze (d. h. zwischen Hornhaut und Sklera) (Abbildung 1A); Entfernen Sie dann mit einer Schere das vordere Segment, einschließlich der Hornhaut, der Iris, des Ziliarkörpers und der Augenlinse.</li>
	<li>Als nächstes lösen Sie mit der verbleibenden Augenmuschel des hinteren Augensegments die Netzhaut vom RPE / Aderhaut / Sklera-Komplex. Verwenden Sie eine Pinzette, um zuerst die Zonule von Zinn zu greifen und dann sanft daran zu ziehen und dann die Netzhaut schrittweise ohne Fragmentierung abzuziehen (Abbildung 1B). HINWEIS: Die Netzhaut darf nicht direkt erfasst werden, um eine Fragmentierung der Netzhaut und eine unvollständige Isolierung des Netzhautgewebes zu vermeiden. Die Verwendung eines Mikroskops ist für diesen Dissektionsschritt unerlässlich.</li>
</ol>3. Isolierung des RPE von der Aderhaut
<ol><li>Nachdem die Netzhaut vollständig entfernt wurde, tauchen Sie die verbleibende hintere Augenmuschel, die das RPE, die Aderhaut und die Sklera enthält, 5 Minuten lang in ein Gewebespeicherreagenz ein (siehe Materialtabelle). HINWEIS: Verwenden Sie eine 12-Well-Platte mit identifizierten Wells, die jeweils mit 2 ml des Gewebespeicherreagenzes gefüllt sind.</li>
	<li>Übertragen Sie die Augenmuschel für 10 s in eine andere Vertiefung, die mit 4 ml PBS gefüllt ist, bevor Sie sie in eine dritte Vertiefung bringen, die mit 2 ml PBS gefüllt ist.</li>
	<li>Befestigen Sie eine 30-G-Nadel an einer mit PBS gefüllten 1-ml-Spritze für den letzten RPE-Isolationsschritt. Drücken Sie vorsichtig auf die Spritze, um einen Jetstream von PBS zu erzeugen; Richten Sie diesen Strom zuerst auf das RPE, um einen kleinen Riss oder ein Loch darin zu machen, und leiten Sie dann den Strom von PBS in die erzeugte Öffnung, um das RPE als Blatt von der Aderhaut zu lösen (Abbildung 1C). HINWEIS: Die Ablösung des RPE als Blatt ergibt die größte RPE-Probe. Auch hier ist die Verwendung eines Mikroskops für diesen Schritt unerlässlich.</li>
	<li>Nachdem Sie das RPE von der Aderhaut gelöst haben (Abbildung 1D), sammeln Sie das RPE-Gewebe in einer nadellosen 1-ml-Spritze und übertragen Sie die gesammelte Probe dann in ein 1,5-ml-Röhrchen.</li>
	<li>Zentrifugieren Sie das 1,5-ml-Röhrchen mit dem gesammelten RPE bei 8.000 × g für 1 Minute, um ein RPE-Pellet zu erhalten (Abbildung 2A).</li>
	<li>Verwerfen Sie die PBS-Lösung und ersetzen Sie sie durch 350 ml Lysepuffer, wie sie in RNA-Isolationskits enthalten sind (siehe Materialtabelle). Pipettieren Sie 20x, um zu mischen und so die Qualität der Probe zu erhalten. Zur längerfristigen Lagerung und Konservierung werden die Proben in einen Gefrierschrank mit einer Temperatur von −80 °C überführt. HINWEIS: Der Lysepuffer ist eine proprietäre Komponente des RNA-Isolationskits für die Zell- und Gewebelyse vor der RNA-Isolierung und der gleichzeitigen RNA/DNA/Protein-Isolierung. Um die RNAsen im Lysat zu inaktivieren, muss dem Lysepuffer unbedingt β-Mercaptoethanol zugesetzt werden (10 μl β-Mercaptoethanol pro 1 ml Lysepuffer).</li>
</ol>4. RPE-RNA-Extraktion
<ol><li>Verwenden Sie ein RNA-Isolationskit (siehe Materialtabelle), um die RNA aus den RPE-Proben gemäß den Anweisungen des Herstellers zu isolieren und zu sammeln. Bewerten Sie die Qualität der Probe mittels Elektrophorese. HINWEIS: Das beschriebene Protokoll ergab ein qualitativ hochwertiges Produkt (d. h. RNA-Integritätszahl [RIN] über 8,0).</li>
</ol>

<ol><li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological Reviews. 85 (3), 845-881 (2005).</li>
<li>Amram, B., Cohen-Tayar, Y., David, A., Ashery-Padan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+pigmented+epithelium+-+from+basic+developmental+biology+research+to+translational+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The retinal pigmented epithelium - from basic developmental biology research to translational approaches.</a> The International Journal of Developmental Biology. 61 (3-4-5), 225-234 (2017).</li>
<li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+retina-specific+Aldh1a1+controls+dorsal+choroidal+vascular+development+via+Sox9+expression+in+retinal+pigment+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Neural retina-specific Aldh1a1 controls dorsal choroidal vascular development via Sox9 expression in retinal pigment epithelial cells.</a> Elife. 7, 32358(2018).</li>
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<li>Jager, R. D., Mieler, W. F., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> New England Journal of Medicine. 358 (24), 2606-2617 (2008).</li>
<li>McLeod, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+RPE+and+choriocapillaris+in+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Relationship between RPE and choriocapillaris in age-related macular degeneration.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 50 (10), 4982(2009).</li>
<li>Bhutto, I., Lutty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+age-related+macular+degeneration+%28AMD%29%3A+Relationships+between+the+photoreceptor%2Fretinal+pigment+epithelium%2FBruch%27s+membrane%2Fchoriocapillaris+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Aspects+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex.</a> Molecular Aspects of Medicine. 33 (4), 295-317 (2012).</li>
<li>Shelton, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+analysis+of+choroid%2FRPE+gene+expression+in+marmoset+eyes+undergoing+changes+in+ocular+growth+and+refraction%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Vision%22%5BJournal%5D)">Microarray analysis of choroid/RPE gene expression in marmoset eyes undergoing changes in ocular growth and refraction.</a> Molecular Vision. 14, 1465-1479 (2008).</li>
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<li>Nickla, D. L., Wallman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multifunctional+choroid%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The multifunctional choroid.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 29 (2), 144-168 (2010).</li>
<li>Zhang, Y., Liu, Y., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional%2C+optical+sign-dependent+regulation+of+BMP2+gene+expression+in+chick+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Bidirectional, optical sign-dependent regulation of BMP2 gene expression in chick retinal pigment epithelium.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 53 (10), 6072-6080 (2012).</li>
<li>Xin-Zhao Wang, C., Zhang, K., Aredo, B., Lu, H., Ufret-Vincenty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+method+for+the+rapid+isolation+of+RPE+cells+specifically+for+RNA+extraction+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Novel method for the rapid isolation of RPE cells specifically for RNA extraction and analysis.</a> Experimental Eye Research. 102 (1), 1-9 (2012).</li>
<li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+signatures+of+contact+lens-induced+myopia+in+guinea+pig+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Gene expression signatures of contact lens-induced myopia in guinea pig retinal pigment epithelium.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 63 (9), 25(2022).</li>
<li>De Schaepdrijver, L., Simoens, P., Lauwers, H., De Geest, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vascular+patterns+in+domestic+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Retinal vascular patterns in domestic animals.</a> Research in Veterinary Science. 47 (1), 34-42 (1989).</li>
<li>Araki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Base-resolution+methylome+of+retinal+pigment+epithelial+cells+used+in+the+first+trial+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-based+autologous+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Base-resolution methylome of retinal pigment epithelial cells used in the first trial of human induced pluripotent stem cell-based autologous transplantation.</a> Stem Cell Reports. 13 (4), 761-774 (2019).</li>
<li>Sonoda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+culture+and+differentiation+of+highly+polarized+human+retinal+pigment+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">A protocol for the culture and differentiation of highly polarized human retinal pigment epithelial cells.</a> Nature Protocols. 4 (5), 662-673 (2009).</li>
<li>Fernandez-Godino, R., Garland, D. L., Pierce, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture+and+characterization+of+primary+mouse+RPE+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture and characterization of primary mouse RPE cells.</a> Nature Protocols. 11 (7), 1206-1218 (2016).</li>
</ol>

Die Autoren erklären keine konkurrierenden finanziellen Interessen.

In diesem Artikel beschreiben wir eine Methode zur Isolierung von RPE, die für RPE-Genexpressionsanalysen geeignet ist, aus den Augen junger, pigmentierter Meerschweinchen. Die Vorteile dieses Protokolls bestehen darin, dass es qualitativ hochwertige RPE-Proben liefert, die relativ frei von Kontaminationen sind, wobei die RNA für RNA-spezifische Analysen geeignet konserviert ist und dennoch relativ einfach und effizient ist. Während in dem hier gezeigten Beispiel die RPE-Proben aus den Augen eines jungen (2 Wochen alten)...

Das RPE besteht aus einer einzigartigen Monoschicht pigmentierter Zellen, die sich zwischen der neuralen Netzhaut und der vaskulären Aderhaut befinden, und die RPE spielt eine anerkannte Rolle bei der Entwicklung und Aufrechterhaltung einer normalen Netzhautfunktion, einschließlich der Phototransduktion 1,2. In jüngerer Zeit wurde dem RPE eine zusätzliche Schlüsselrolle bei der Regulation des Augenwachstums3 und damit bei der Entwicklung von Myopie4 zugewiesen. Diese Zuordnung basiert auf der kritischen Lokalisation des RPE, die zwischen Netzhaut und Aderhaut liegt, und der mittlerweile weit verbreiteten Akzeptanz, dass das Augenwachstum und damit die Brechungsfehler lokal reguliert werden5. Es wird angenommen, dass das RPE eine Schlüsselrolle als Signalrelais spielt, das die Netzhaut, die angenommene Quelle wachstumsmodulatorischer Signale, mit der Aderhaut und der Sklera, den beiden Zielen der weitergeleiteten Signale 6,7,8, verbindet.
Die Zunahme der axialen Länge, die für die meisten Myopien charakteristisch ist, kann nicht als gutartig angesehen werden, wobei pathophysiologische Veränderungen der Netzhaut, der Aderhaut und/oder der Sklera unvermeidliche und inzwischen allgemein anerkannte Folgen einer übermäßigen Augendehnung darstellen 7,9. In diesem Zusammenhang ist das RPE vielleicht am anfälligsten, da es als nichtmitotisches Gewebe nur durch Dehnung und Ausdünnung einzelner Zellen in der Lage ist, die expandierende Glaskörperkammer aufzunehmen. Während seine Rolle bei Myopie-bedingten Pathologien, wie der myopischen Makuladegeneration, noch nicht vollständig verstanden ist, wurde das RPE in die Pathogenese einer Reihe anderer Netzhauterkrankungen verwickelt, einschließlich der geografischen Atrophie, einer der Hauptursachen für Erblindung, die mit dokumentierten Anomalien in der Netzhaut, RPE und Aderhaut verbunden ist10,11, 12. Sonstiges
Die erfolgreiche Isolierung von RPE-Zellen, die frei von Verunreinigungen aus benachbarten Augengeweben sind, eröffnet potenziell viele Forschungsmöglichkeiten, um neue Einblicke in die Mechanismen zu gewinnen, die einer Vielzahl von Augen-/Netzhauterkrankungen zugrunde liegen. Die Isolierung des RPE hat sich jedoch als schwierig erwiesen, da viele veröffentlichte Studien aus diesem Grund kombinierte Netzhaut/RPE- oder RPE/Aderhautproben verwenden13,14,15. Studien, die die erfolgreiche Isolierung des RPE in einer für molekularbiologische Studien geeigneten Qualität beinhalteten, beschränkten sich auf Küken- und Mäuseaugen16,17. Zum Beispiel die von Wang et al.18 beschriebene Methode der simultanen RPE-Isolierung und RNA-Stabilisierung (SRIRS). Die Isolierung von RPE-Zellen in Mäusen scheint in Meerschweinchenaugen nicht gut zu funktionieren. Das hier beschriebene Protokoll stellt eine Verfeinerung eines Ansatzes dar, der ursprünglich von einem der Autoren (M.F.) mit Baumspitzmausaugen prototypisiert wurde und nachweislich qualitativ hochwertige RPE-Proben aus den Augen junger pigmentierter Meerschweinchen liefert, die für RNA- und andere molekularbiologische Analysen geeignet sind19.

<table><tbody><tr><td>1-ml-Spritze mit Gleitspitze</td><td>Bd Vacutainer Labware Medical</td><td>22-253-260</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Invitrogen</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>6-Well-Gewebekulturplatte mit Deckel, flacher Boden, steriles</td><td>Pektrum Chemical Mfg. Corp</td><td>970-95008</td><td></td></tr><tr><td>12-Well-Gewebekulturplatte mit Deckel, individuell, steril</td><td>Thomas Scientific LLC</td><td>1198D72</td><td></td></tr><tr><td>Agilent 2100 Bioanalyzer</td><td></td><td></td><td>automatisierte Elektrophorese zur Überprüfung der RNA-Qualität</td></tr><tr><td>Balanced Salt Solutions</td><td>Gibco</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>Bonn Mikropinzette, gerade glatt, 0,3 mm Spitze, 7 cm</td><td>Fine Science Tools, Inc.</td><td>11083-07</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Pinzette Nr. 5</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>Injektionsnadeln zum Einmalgebrauch</td><td>Exelint International, Co.</td><td>26419</td><td></td></tr><tr><td>Injektionsnadeln zum Einmalgebrauch</td><td>Exelint International, Co.</td><td>26437</td><td></td></tr><tr><td>MiniSpin Mikrozentrifugen</td><td>Eppendorf</td><td>540108</td><td>Max. Geschwindigkeit: 8.000 g</td></tr><tr><td>RNAlater Stabilisierungslösung</td><td>Invitrogen</td><td>AM7020</td><td>Reagenz zur Gewebeaufbewahrung</td></tr><tr><td>RNeasy Mini Kits</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td>RNA-Isolationskit</td></tr><tr><td>Student Vannas Federschere</td><td>Fine Science Tools, Inc.</td><td>Artikel-Nr.: 91500-09</td><td></td></tr></tbody></table>

isolierung von retinalen pigmentepithelzellen aus meerschweinchenaugen

Isolation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Guinea Pig Eyes

Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung von Zellen des retinalen Pigmentepithels (RPE) aus den Augen junger pigmentierter Meerschweinchen für eine mögliche Anwendung in molekularbiologischen Studien, einschließlich Genexpressionsanalysen. Im Zusammenhang mit der Regulation des Augenwachstums und der Myopie spielt das RPE wahrscheinlich eine Rolle als zelluläres Relais für wachstumsmodulatorische Signale, da es sich zwischen der Netzhaut und den beiden Wänden des Auges, wie der Aderhaut und der Sklera, befindet. Während Protokolle zur Isolierung des RPE sowohl für Küken als auch für Mäuse entwickelt wurden, haben sich diese Protokolle als nicht direkt auf das Meerschweinchen übertragbar erwiesen, das zu einem wichtigen und weit verbreiteten Myopiemodell für Säugetiere geworden ist. In dieser Studie wurden molekularbiologische Werkzeuge verwendet, um die Expression bestimmter Gene zu untersuchen, um zu bestätigen, dass die Proben frei von Verunreinigungen aus den angrenzenden Geweben waren. Der Wert dieses Protokolls wurde bereits in einer RNA-Seq-Studie zu RPE von jungen pigmentierten Meerschweinchen nachgewiesen, die einer Myopie-induzierenden optischen Defokussierung ausgesetzt waren. Neben der Regulierung des Augenwachstums hat dieses Protokoll weitere potenzielle Anwendungen in Studien zu Netzhauterkrankungen, einschließlich der myopischen Makulopathie, einer der Hauptursachen für Erblindung bei Myopen, an der das RPE beteiligt ist. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie relativ einfach ist und nach ihrer Perfektionierung qualitativ hochwertige RPE-Proben liefert, die für molekularbiologische Studien, einschließlich RNA-Analysen, geeignet sind.

Die Analyse der RPE-Proben, die mit dem obigen Protokoll gesammelt wurden, zeigte eine gut erhaltene RNA (RIN &gt;8.0, Abbildung 2B) mit 240,2 ng ± 35,1 ng pro Auge (n = 8, NanoDrop, Abbildung 2B). Um die Qualität der isolierten RPE-Proben, insbesondere das Fehlen von Aderhaut- und Sklerakontaminanten, weiter zu bewerten, untersuchten wir die Expression repräsentativer Gene für jedes der letztgenannten Gewebe in den RPE-Proben19. Die RPE...

Wir beschreiben eine einfache und effiziente Methode zur Isolierung von Zellen der retinalen Pigmentepithelzellen (RPE) aus den Augen junger pigmentierter Meerschweinchen. Dieses Verfahren ermöglicht molekularbiologische Folgeuntersuchungen am isolierten RPE, einschließlich Genexpressionsanalysen.

Isolierung von retinalen Pigmentepithelzellen aus Meerschweinchenaugen

This protocol describes the isolation of cells of the retinal pigment epithelium (RPE) from the eyes of young pigmented guinea pigs for potential ...

Retinales Pigmentepithel oder RPE ist entscheidend für die Gesundheit der Netzhaut. Und die Untersuchung des isolierten RPE ist entscheidend für die Netzhauterkrankung. Diese Methode der RPE-Isolierung aus dem Meerschweinchen, ein beliebtes Myopiemodell, hilft bei der Lösung des herausfordernden Problems.Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie relativ einfach ist und qualitativ hochwertige RPE-Proben liefert, die für die biologischen molekularen Studien einschließlich der RPE-Analyse geeignet sind. Wenn man die demonstrierte Technik perfekt befolgt und beobachtet, wie man die Sezierwerkzeuge manipuliert, kann man dieses Verfahren mit etwas Übung schnell beherrschen. Nachdem Sie das Meerschweinchen human eingeschläfert und die Augen des Tieres enukleiert haben, waschen Sie die Augen sofort, indem Sie sie in eine 10-Zentimeter-Petrischale geben, die sterile phosphatgepufferte Kochsalzlösung oder PBS enthält.Übertragen Sie die Augen nach dem Waschen in eine frische PBS-Lösung. Verwenden Sie nun unter einem Präpariermikroskop eine 18-Gauge-Nadel, um eine erste kleine Öffnung in der Sklera eines Auges zu machen, etwa einen Millimeter hinter der Limbusgrenze zwischen Horn

isolation-of-retinal-pigment-epithelial-cells-from-guinea-pig-eyes

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In diesem Video zeigen wir ein Verfahren zur Gewinnung von okulären Pigmentepithelzellen aus einem Kaninchenmodell. Die Zellen sind hilfreich bei der Entwicklung von Therapiestrategien für degenerative Erkrankungen der Netzhaut.

Isolierung von IPE- und RPE-Zellen: Eine Technik zur Gewinnung von okulären Pigmentepithelzellen aus Kaninchenauge

In diesem Video beschreiben wir eine Technik zur Isolierung von Iris- und retinalen Pigmentepithelzellen aus Schweineaugen, um ihre Primärkulturen für in vivo und ex vivo Studien zu erhalten. Diese Pigmentzellen könnten genetisch verändert werden, um regenerative Ansätze zur Behandlung von Augenerkrankungen zu untersuchen.

Isolierung von IPE- und RPE-Zellen: Eine Technik zur Gewinnung pigmentierter Epithelzellen aus isoliertem Schweineauge

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Isolierung der retinalen Pigmentepithelzellen (RPE) und der Irispigmentepithelzellen (IPE) aus geernteten Rinderaugen. Die isolierten Zellen können kultiviert werden, um ihre Rolle bei der Behandlung von Augenerkrankungen zu untersuchen.

Isolierung von RPE- und IPE-Zellen aus Rinderauge: Ein Verfahren zur Gewinnung und Kultivierung von primären Pigmentepithelzellen von Rindern

Hier wird ein Protokoll zur Isolierung und Transinfektion primärer Iris- und retinaler Pigmentepithelzellen aus verschiedenen Säugetieren (Mäuse, Ratten, Kaninchen, Schweine und Rinder) vorgestellt. Die Methode eignet sich ideal, um okuläre Gentherapieansätze in verschiedenen Setups für Ex-vivo-Analysen und auf den Menschen übertragbare In-vivo-Studien zu untersuchen.

Isolierung, Kultur und Gentechnik von primären Pigmentepithelzellen von Säugetieren für die nicht-virale Gentherapie

Dieses Manuskript beschreibt ein vereinfachtes Protokoll zur schrittweisen Isolierung von retinalen pigmentierten Epithelzellen (RPE) aus Mausaugen. Das Protokoll umfasst die Enukleation und Dissektion von Mausaugen, gefolgt von der Isolierung, Aussaat und Kultivierung von RPE-Zellen.

Isolierung von primären retinalen pigmentierten Epithelzellen der Maus

Dieses Protokoll beschreibt das Verfahren zur Gewinnung und Kultivierung von primären retinalen Pigmentepithelzellen (RPE) aus lokal gewonnenen Schweineaugen. Diese Zellen dienen als hochwertige Alternative zu Stammzellen und eignen sich für die In-vitro-Netzhautforschung .

Isolierung von primären retinalen Pigmentepithelzellen von Schweinen für die In-vitro-Modellierung

Das retinale Pigmentepithel (RPE) fungiert als entscheidende Barriere zwischen Aderhaut und Netzhaut und fördert die Gesundheit und Funktion von retinalen Zelltypen, wie z. B. Photorezeptoren. Darin beschreiben wir ein einfaches und effektives Protokoll zur Isolierung und Kultivierung adulter muriner RPE.

Eine vereinfachte Methode zur Isolierung und Kultivierung von retinalen Pigmentepithelzellen aus erwachsenen Mäusen

In diesem Video zeigen wir Ihnen, wie Sie retinalen Stammzellen aus dem Ciliarepithels der Maus Auge zu isolieren und zu wachsen sie in Kultur zu klonalen Netzhaut Kugeln zu bilden. Die Kugeln, die isoliert besitzen den Kardinal Eigenschaften von Stammzellen: Selbsterneuerung und multipotentiality.

Isolierung von Retinal Stammzellen aus der Maus Eye

Eine schnelle und robuste Lösung zur Isolierung von lebensfähigen Erwachsenen epithelialen Stammzellen aus menschlicher Haut beschrieben wird. Das Verfahren nutzt enzymatische Verdauung der Haut Kollagen-Matrix, durch Zupfen der Haarfollikel und Isolierung von einzelnen Zellsuspensionen oder Gewebestücke für die Zellkultur gefolgt.

Isolierung und Kultivierung von Adult epithelialen Stammzellen aus menschlicher Haut

Die microRNA (miRNA)-Profile der menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS-Zellen), retinale Pigmentepithel (RPE) aus menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS-Zellen) (iPS-RPE) und fetale RPE abgeleitet, wurden verglichen.

MicroRNA Expressionsprofile der Menschen iPS-Zellen, Retinapigmentepithel Abgeleitet aus iPS und Fetal Retinapigmentepithel

Lernen Sie eine effiziente Methode zur Isolierung von retinalen Pigmentepithelzellen aus Meerschweinchenaugen für molekularbiologische Studien. Diese Technik liefert hochwertige RPE-Proben mit erhaltener RNA-Integrität.

Isolierung von retinalen Pigmentepithelzellen aus Meerschweinchenaugen

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