Name: Verwendung von Referenzreagenzien zur Bestätigung der Robustheit von Zytokin-Freisetzungsassays für die Vorhersage der Sicherheit monoklonaler Antikörper (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-15T14:55:00.000+00:00
Duration: 6 min 37 s
Description: Erfahren Sie, wie Referenzreagenzien die Reproduzierbarkeit von Zytokin-Freisetzungsassays verbessern, um die Sicherheit monoklonaler Antikörper zu bewerten. Diese standardisierte Methode wurde in elf Laboren validiert und unterstützt die Harmonisierung von Sicherheitstests.

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<ol><li>Suntharalingam, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+storm+in+a+phase+1+trial+of+the+anti-CD28+monoclonal+antibody+TGN1412%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cytokine storm in a phase 1 trial of the anti-CD28 monoclonal antibody TGN1412.</a> The New England Journal of Medicine. 355 (10), 1018-1028 (2006).</li>
<li>Hünig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+storm+has+cleared%3A+lessons+from+the+CD28+superagonist+TGN1412+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">The storm has cleared: lessons from the CD28 superagonist TGN1412 trial.</a> Nature Reviews Immunology. 12 (5), 317-318 (2012).</li>
<li>Wing, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+first-dose+cytokine-release+syndrome+by+CAMPATH+1-H%3A+involvement+of+CD16+%28FcgammaRIII%29+and+CD11a%2FCD18+%28LFA-1%29+on+NK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mechanism of first-dose cytokine-release syndrome by CAMPATH 1-H: involvement of CD16 (FcgammaRIII) and CD11a/CD18 (LFA-1) on NK cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 98 (12), 2819-2826 (1996).</li>
<li>Gaston, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OKT3+first-dose+reaction%3A+Association+with+T+cell+subsets+and+cytokine+release%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">OKT3 first-dose reaction: Association with T cell subsets and cytokine release.</a> Kidney International. 39 (1), 141-148 (1991).</li>
<li>Riechmann, L., Clark, M., Waldmann, H., Winter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reshaping+human+antibodies+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reshaping human antibodies for therapy.</a> Nature. 332 (6162), 323-327 (1988).</li>
<li>Kung, P., Goldstein, G., Reinherz, E. L., Schlossman, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+defining+distinctive+human+T+cell+surface+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies defining distinctive human T cell surface antigens.</a> Science. 206 (4416), 347-349 (1979).</li>
<li>Ball, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+C+region+influences+TGN1412-like+functional+activity+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antibody C region influences TGN1412-like functional activity in vitro.</a> Journal of Immunology. 189 (12), 5831-5840 (2012).</li>
<li>Vessillier, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+first+reference+antibody+panel+for+qualification+and+validation+of+cytokine+release+assay+platforms+-+Report+of+an+international+collaborative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%3A+X%22%5BJournal%5D)">Development of the first reference antibody panel for qualification and validation of cytokine release assay platforms - Report of an international collaborative study.</a> Cytokine: X. 2 (4), 100042(2020).</li>
<li>Findlay, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+in+vitro+methods+to+predict+the+in+vivo+toxicity+in+man+of+therapeutic+monoclonal+antibodies+including+TGN1412%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Improved in vitro methods to predict the in vivo toxicity in man of therapeutic monoclonal antibodies including TGN1412.</a> Journal of Immunological Methods. 352 (1-2), 1-12 (2010).</li>
<li>oVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Science+Education+Database.+Basic+Methods+in+Cellular+and+Molecular+Biology.+Using+a+Hemacytometer+to+Count+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Science Education Database. Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. Using a Hemacytometer to Count Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2023).</li>
<li>Lehmann, J. S., Zhao, A., Sun, B., Jiang, W., Ji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+Cytokine+Profiling+of+Stimulated+Mouse+Splenocytes+Using+a+Cytometric+Bead-based+Immunoassay+Platform%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Multiplex Cytokine Profiling of Stimulated Mouse Splenocytes Using a Cytometric Bead-based Immunoassay Platform.</a> Journal of Visualized Experiments. (129), e56440(2017).</li>
<li>Murthy, H., Iqbal, M., Chavez, J. C., Kharfan-Dabaja, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+Release+Syndrome%3A+Current+Perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Immunotargets+Therapy%22%5BJournal%5D)">Cytokine Release Syndrome: Current Perspectives.</a> Immunotargets Therapy. 8, 43-52 (2019).</li>
<li>Vidal, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cytokine+release+assays+for+predicting+cytokine+release+syndrome%3A+the+current+state-of-the-science.+Report+of+a+European+Medicines+Agency+Workshop%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">In vitro cytokine release assays for predicting cytokine release syndrome: the current state-of-the-science. Report of a European Medicines Agency Workshop.</a> Cytokine. 51 (2), 213-215 (2010).</li>
<li>Grimaldi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+release%3A+A+workshop+proceedings+on+the+state-of-the-science%2C+current+challenges+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Cytokine release: A workshop proceedings on the state-of-the-science, current challenges and future directions.</a> Cytokine. 85, 101-108 (2016).</li>
<li>Vessillier, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+release+assays+for+the+prediction+of+therapeutic+mAb+safety+in+first-in+man+trials+-+Whole+blood+cytokine+release+assays+are+poorly+predictive+for+TGN1412+cytokine+storm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Cytokine release assays for the prediction of therapeutic mAb safety in first-in man trials - Whole blood cytokine release assays are poorly predictive for TGN1412 cytokine storm.</a> Journal of Immunological Methods. 424, 43-52 (2015).</li>
<li>Chu, J. W. K., Sharom, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycophorin+A+interacts+with+interleukin-2+and+inhibits+interleukin-2-dependent+T-lymphocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Glycophorin A interacts with interleukin-2 and inhibits interleukin-2-dependent T-lymphocyte proliferation.</a> Cellular Immunology. 145 (2), 223-239 (1992).</li>
<li>Stebbings, R., Eastwood, D., Poole, S., Thorpe, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((After+TGN1412%3A+recent+developments+in+cytokine+release+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunotoxicology%22%5BJournal%5D)">After TGN1412: recent developments in cytokine release assays.</a> Journal of Immunotoxicology. 10 (1), 75-82 (2013).</li>
<li>Hanke, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+from+TGN1412%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Lessons from TGN1412.</a> Lancet. 368 (9547), author reply 1570 1569-1570 (2006).</li>
<li>Stebbings, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%2334%3BCytokine+storm%26%2334%3B+in+the+phase+I+trial+of+monoclonal+antibody+TGN1412%3A+better+understanding+the+causes+to+improve+preclinical+testing+of+immunotherapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">#34;Cytokine storm&#34; in the phase I trial of monoclonal antibody TGN1412: better understanding the causes to improve preclinical testing of immunotherapeutics.</a> Journal of Immunology. 179 (5), 3325-3331 (2007).</li>
<li>Bartholomaeus, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+contact-dependent+priming+and+Fc+interaction+with+CD32%2B+immune+cells+contribute+to+the+TGN1412-triggered+cytokine+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cell contact-dependent priming and Fc interaction with CD32+ immune cells contribute to the TGN1412-triggered cytokine response.</a> Journal of Immunology. 192 (5), 2091-2098 (2014).</li>
<li>Hussain, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+Fc%CE%B3RIIb+on+monocytes+is+necessary+to+promote+the+superagonist+activity+of+TGN1412%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Upregulation of FcγRIIb on monocytes is necessary to promote the superagonist activity of TGN1412.</a> Blood. 125 (1), 102-110 (2015).</li>
<li>Reed, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+autologous+endothelial+cell%3Aperipheral+blood+mononuclear+cell+assay+that+detects+cytokine+storm+responses+to+biologics%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">An autologous endothelial cell:peripheral blood mononuclear cell assay that detects cytokine storm responses to biologics.</a> The FASEB Journal. 29 (6), 2595-2602 (2015).</li>
<li>Eastwood, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severity+of+the+TGN1412+trial+disaster+cytokine+storm+correlated+with+IL-2+release%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Severity of the TGN1412 trial disaster cytokine storm correlated with IL-2 release.</a> British Journal of Clinical Pharmacology. 76 (2), 299-315 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 ml&nbsp; Mikrozentrifugenröhrchen, natürlich (steril)</td><td>Starlab</td><td>S1615-5510</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum, qualifiziert, hitzeinaktiviert</td><td>ThermoFisher</td><td>10500064</td><td></td></tr><tr><td>Heparinisierte Röhrchen</td><td>ThermoFisher</td><td>12967676</td><td></td></tr><tr><td>Heracell 150i CO2-Inkubator</td><td>ThermoFisher</td><td>16406639</td><td></td></tr><tr><td>MESO QuickPlex SQ 120 Proinflammatorisches Panel für den Menschen 1 V-PLEX Kit&nbsp;</td><td>Meso Scale Discovery</td><td>K15049</td><td></td></tr><tr><td>MESO QuickPlex SQ 120MM</td><td>Meso Scale Discovery</td><td>AI1AA-0</td><td></td></tr><tr><td>Neubauer Verbessertes Hämozytometer Zählkammer</td><td>Hawksley</td><td>AS1000</td><td></td></tr><tr><td>Panel mit lyophilisierten rekombinanten Antikörperkontrollen für Zytokin-Freisetzungsassays</td><td>NISBC</td><td>19/156</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Mikrotiterplatte aus Polypropylen</td><td>Corning</td><td>3879</td><td></td></tr><tr><td>Polystyrol 96-Well-Mikrotiterplatte</td><td>Corning</td><td>3799</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>ThermoFisher</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall ST 40 Zentrifuge</td><td>ThermoFisher</td><td>75004525</td><td></td></tr><tr><td>Sterilwasser</td><td>ThermoFisher</td><td>15230162</td><td></td></tr></tbody></table>

verwendung von referenzreagenzien zur bestätigung der robustheit von zytokin-freisetzungsassays für die vorhersage der sicherheit monoklonaler antikörper

Using Reference Reagents to Confirm Robustness of Cytokine Release Assays for the Prediction of Monoclonal Antibody Safety

Die Ergebnisse des SP-Assays sollten eine Freisetzung von IL-2, IFN-γ, IL-6 und TNF-α12 im pg/ml-Bereich von allen positiven Kontrollantikörpern nach 48 h zeigen und statistisch signifikant höher sein als bei Kontrollen mit übereinstimmenden Isotypen. Unsere repräsentativen Ergebnisse zeigen, dass die Positivkontroll-Antikörper αCD28, αCD3 und αCD28SA im Vergleich zu angepassten Isotyp-Kontrollen signifikant hohe Spiegel an IFN-γ , IL-6 und TNF-α induzieren, wenn sie im PBMC SP-Assay durchgeführt werden (Abbildung 1). Dieser Assay zeichnet sich auch durch eine hohe Faltungsänderung der IL-2-Freisetzung durch Stimulation mit αCD28SA im Vergleich zu seinem angepassten Isotyp (859,0) aus. Während αCD3 und αCD52 zwar immer noch die IL-2-Expression induzieren, führen sie zu geringeren Faltungsänderungen als αCD28SA (6,2 bzw. 3,3 für αCD3 bzw. αCD52, Abbildung 2).
Im WB AQ-Assay (Abbildung 3) ist der Gehalt an nachweisbaren Zytokinen deutlich geringer als im PBMC SP-Assay, zeichnet sich jedoch durch eine höhere Empfindlichkeit gegenüber der Stimulation durch αCD52-Antikörper aus (Abbildung 2 und Abbildung 3) mit mittleren Faltungsänderungen von IL-2, IFN-γ und IL-6 über 100.
Ein Testantikörper, bei dem bei einer zukünftigen Erstdosierung beim Menschen davon ausgegangen werden kann, dass er im Vergleich zu relevanten Isotypkontrollen keine unvorhergesehenen signifikanten Erhöhungen der Zytokinfreisetzung verursacht. Anstatt die Entwicklung eines neuen therapeutischen mAb zu stoppen, sollte ein positives Ergebnis einer CRA jedoch als Teil des Nutzen-Risiko-Managements betrachtet werden13. Bei der Entwicklung einer neuen CRA-Plattform sollte der Assay mit einer anderen Gruppe von Spendern wiederholt werden, um die Reproduzierbarkeit der Plattform zu gewährleisten. Es sollte auch darauf geachtet werden, die Variabilität der Reaktion zwischen den Spendernzu berücksichtigen 14, und daher wird ein gut durchgeführtes Experiment empfohlen15. Um die Breite des Ansprechens zu verstehen und eine vollständige Darstellung der Variabilität zu erhalten, die bei den Spenderreaktionen beobachtet werden könnte, sollte der Assay idealerweise mit mehreren einzelnen Spendern durchgeführt werden, zusätzlich zum Assay des Therapeutikums in Replikatexperimenten.
<img alt="Diagramm der PBMC-SP-Zytokinsekretion; logarithmische Skala; IFN-γ, IL-Varianten; CD-Marker; Immunologische Studie." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65087/65087fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 
Abbildung 1: Zytokinfreisetzung aus dem PBMC-SP-Experiment. Repräsentative Ergebnisse der Freisetzung von IFN-γ, IL-2, IL-6 und TNF-α aus PBMC-SP-Zytokinfreisetzungsassays (3 unabhängige Experimente mit jeweils 5-8 Spendern pro Experiment; n=8, n=10, n=5 [von oben nach unten]) nach 48 h bei Verwendung von Referenzreagenzantikörpern. Abkürzungen: PBMC = mononukleäre Zellen des peripheren Blutes; SP = feste Phase; IFN-γ = Interferon-Gamma; IL-2 = Interleukin 2; IL-6 = Interleukin 6; TNF-α = Tumornekrosefaktor alpha. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65087/65087fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Balkendiagramm; Zytokinspiegel (IFN-γ, IL-2, IL-6, TNF-α); PBMC-SP, WB-AQ; Antikörper-Analyse." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65087/65087fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 
Abbildung 2: Zunahme der Zytokinfaltungsänderung aus PBMC-SP- und WB-AQ-Experimenten. Verfaltung der Freisetzung von IFN-γ, IL-2, IL-6 und TNF-α von CRS-induzierenden Antikörper-Referenzreagenzien im Vergleich zu ihren übereinstimmenden Isotypkontrollen, erhalten aus PBMC-SP- und WB-AQ-Zytokinfreisetzungsassays nach 48 h. Abkürzungen: PBMC = mononukleäre Zellen des peripheren Blutes; SP = feste Phase; WB = Vollblut; AQ = wässrig (Phase); IFN-γ = Interferon-Gamma; IL-2 = Interleukin 2; IL-6 = Interleukin 6; TNF-α = Tumornekrosefaktor alpha; CRS = Zytokinfreisetzungssyndrom. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65087/65087fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Zytokin-Response-Diagramm, WB-AQ-Experimente, αCD28 vs. Ig-Marker, Analyse der Zytokinspiegel." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65087/65087fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 
Abbildung 3: Zytokinfreisetzung aus dem WB-AQ-Experiment. Repräsentative Ergebnisse der Freisetzung von IFN-γ, IL-2, IL-6 und TNF-α aus WB-AQ-Zytokinfreisetzungsassays (3 unabhängige Experimente mit jeweils 5-8 Spendern pro Experiment; n=8, n=10, n=5 [von oben nach unten]) nach 48 h bei Verwendung von Referenzreagenzantikörpern. Abkürzungen: WB = Vollblut; AQ = wässrig (Phase); IFN-γ = Interferon-Gamma; IL-2 = Interleukin 2; IL-6 = Interleukin 6; TNF-α = Tumornekrosefaktor alpha. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65087/65087fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Verwendung von Referenzreagenzien zur Bestätigung der Robustheit von Zytokin-Freisetzungsassays für die Vorhersage der Sicherheit monoklonaler Antikörper

New immunostimulatory antibody drugs designed to either directly stimulate specific immune cells or indirectly enhance the immune response by blocking or ...

using-reference-reagents-to-confirm-robustness-cytokine-release

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Papier beschreibt eine einfache Technik, um Alloantigen-spezifische Anergie in humanen peripheren mononukleären Zellen zu induzieren. Die Technik kann klinisch angewendet werden, um nicht alloreaktive Spenderzellen zu generieren. Infusion dieser Zellen verbessern könnte Immunrekonstitution und reduzieren Toxizität nach allogener Stammzelltransplantation.

Induktion von Alloantigen-spezifische Anergie in humanen peripheren mononukleären Zellen durch Alloantigen Stimulation mit Co-stimulatorische Signal Blockade

Dieses Video zeigt einen Multiplex-Bead-basierten Immunoassay zur Quantifizierung mehrerer Zytokinziele in einer Probe. Eine Mischung aus unterschiedlichen Mikrosphären, die an zytokinspezifische Antikörper konjugiert sind, wird verwendet, um die in der Probe vorhandenen Zytokine zu binden. Streptavidin-markierte Reporter werden mit biotinylierten Nachweisantikörpern an den gebundenen Zytokinen immobilisiert. Die Durchflusszytometrie identifiziert die gebundenen Zytokine anhand der...

Ein Multiplex-Bead-basierter Immunoassay zur Quantifizierung mehrerer Zytokinziele

Wir entwickelten ein in vitro Assay, um die Rolle von immunWege in der Regulation der Zytokin-Sekretion von HIV-spezifischen CD4 + T-Zellen zu untersuchen.

In vitro-Test, um die Auswirkungen von immun Pathways auf die HIV-spezifischen CD4 T-Zell-Effektor-Funktion auswerten

Ein Protokoll für die Bestimmung der relativen Anti-apoptotische Aktivität eine Anti-TNF-MAB WEHI 164 Zellen eine Neutralisation Mechanismus mit wird hier vorgestellt. Dieses Protokoll eignet sich für die Neutralisation Stärke der verschiedenen Moleküle mit der gleichen biologischen Funktionen zu vergleichen.

Bestimmung der relativen Potenz von einer Anti-TNF monoklonaler Antikörper (mAb) durch neutralisieren TNF mit einer In Vitro bioanalytische Methode

Dieses Protokoll beschreibt den in vitro - Vergleich von zwei wichtigen funktionellen Eigenschaften von Rituximab: Zielbindungs und Komplement-abhängige Zytotoxizität (CDC) Induktion. Die Verfahren wurden für eine Seite-an-Seite-Vergleich zwischen Referenz Rituximab und einem Rituximab biosimilar eingesetzt. Diese Assays kann während der Biosimilar Entwicklung oder als Qualitätskontrolle in der Produktion eingesetzt werden.

In - vitro - Methoden zum Vergleich der Zielbindungs und CDC Induktion zwischen Therapeutische Antikörper: Anwendungen in Biosimilarity Analyse

Analyse der Tränenfilm hilft Zytokine in verschiedene augenfällige Krankheiten zu studieren. Wulst basierte Multiplex-Assays sind einfach und empfindlich und ermöglichen das Testen von mehreren Zielen in Proben mit kleinen Volumina. Hier beschreiben wir ein Protokoll für Tear Film Zytokin Profilierung eines mit Wulst basierte Multiplex-Assays.

Wulst basierte Multiplex-Assays für die Analyse der Träne Cytokine Profile

Dieses Protokoll beschreibt die Quantifizierung der mehrere Zytokin Ziele gleichzeitig in Gewebekultur Überstände von stimulierten Maus Splenocyten Multiplex-Perle-basierte Immunoassay-Plattform mit einem Durchflusszytometer gesammelt.

Multiplex-Zytokin Profilierung der stimulierten Maus Splenocyten mit Hilfe einer durchflusszytometrischen Bead-basierte Immunoassay-Plattform

Hier präsentieren wir eine zellbasierte Flow-zytometrie-Methode zur Erkennung neutralisierende Antikörper oder andere Faktoren, die die zelluläre Aufnahme von Enzym-Ersatz-Therapien in einer menschlichen Matrix wie zerebralen spinalen Flüssigkeit (CSF) oder Humanserum stören.

Nachweis von Antikörpern, die die zelluläre Aufnahme von Enzym-Ersatz-Therapien mit einem zellbasierte Assays neutralisieren

Das Protokoll beschreibt eine fortschrittliche mikrofluidische Plattform zur quantitativen Messung der Zytokinsekretionsdynamik einzelner mononukleärer Zellen des menschlichen peripheren Blutes. Die Plattform misst bis zu drei Zytokine parallel (IL-6, TNFα und IL-1β) für jede einzelne Zelle, die beispielsweise mit Lipopolysaccharid stimuliert wird.

Mikrofluidischer Ansatz zur Auflösung der gleichzeitigen und sequentiellen Zytokinsekretion einzelner polyfunktioneller Zellen 

Vollblutbasierte Immunoassays bieten ein einfaches und ressourceneffizientes Werkzeug zur Analyse der antigenspezifischen Immunität für Diagnose- und Forschungszwecke. Dieser Artikel bietet ein optimiertes Vollblut-basiertes Protokoll mit dualer Co-Stimulation für eine umfassende Analyse der Immunität des Wirts gegen pilzliche und virale Krankheitserreger, einschließlich einer Version mit geringem Volumen für pädiatrische Patienten und Kleintiere.

Vollblutassay mit dualer Co-Stimulation zur antigenspezifischen Analyse der Immunität des Wirts gegen pilzliche und virale Krankheitserreger

Erfahren Sie, wie Referenzreagenzien die Reproduzierbarkeit von Zytokin-Freisetzungsassays verbessern, um die Sicherheit monoklonaler Antikörper zu bewerten. Diese standardisierte Methode wurde in elf Laboren validiert und unterstützt die Harmonisierung von Sicherheitstests.

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Verwendung von Referenzreagenzien zur Bestätigung der Robustheit von Zytokin-Freisetzungsassays für die Vorhersage der Sicherheit monoklonaler Antikörper

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