Name: Ein Mausohrmodell zur Beurteilung der allergischen Kontaktdermatitis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-24T14:55:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie ein Mausohrmodell zur Induktion und Bewertung allergischer Kontaktdermatitis mit DNFB etablieren. Dieses effiziente Protokoll ermöglicht präklinische Studien zur Pathogenese und Therapieentwicklung.

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Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (NSFC) an N.-N. Y. (81904212); Wissenschafts- und Technologieprojekt für traditionelle chinesische Medizin in Jiangsu (YB201995); und das Sonderförderprojekt für Postdoktorandinnen und Postdoktoranden in China (2020T130562).

Die gesamte Pflege und Behandlung der Mäuse erfolgte in Übereinstimmung mit den Richtlinien des Institutional Animal Care and Use Committee der Universität Yangzhou und wurde vom Institutional Animal Care and Use Committee unter der Projektlizenz SYXK(SU)2022-0044 genehmigt. In dieser Studie wurden männliche und weibliche BALB/c-Mäuse im Alter von 6-8 Wochen verwendet. Jede Gruppe bestand aus sechs Mäusen (siehe Materialtabelle). Die Käfige wurden in eine temperaturkontrollierte Kammer (22 ± 2 °C, 12 h Hell-Dunkel-Zyklus) mit freiem Zugang zu Futter und Wasser gestellt. Ein experimentelles Flussdiagramm ist in Abbildung 1 dargestellt.
1. Vorbereitung der Tiere
<ol><li>Beginnen Sie mit der Modellierung nach 1 Woche der Akklimatisierung an die Umgebung.</li>
	<li>Verwenden Sie eine UV-Lampe und ein Desinfektionsmittel mit 75 % Alkohol, um die Umgebung und die Arbeitsplatten zu reinigen und zu desinfizieren, bevor Sie die Mäuse manipulieren. HINWEIS: Um den Einfluss äußerer Faktoren zu vermeiden, kann die Markierung der Mäuse zur Identifizierung nicht am Mausohr durchgeführt werden. Alternativ kann auch eine Färbung auf dem Rücken oder am Schwanz verwendet werden.</li>
	<li>Verwenden Sie ein kleines Wattestäbchen, um Seifenwasser auf den Bauch der Mäuse aufzutragen (ca. 1-2 cm2 groß). Rasieren Sie den Bereich zu Beginn der Modellierung (Tag 0) mit einer Klinge oder einem Rasierer (siehe Materialtabelle) in Haarwuchsrichtung (Tag 0; Abbildung 2A). Anmerkungen: Die Verwendung einer Rasierklinge zur Haarentfernung erfordert einen erfahrenen Bediener. Wenn es nicht richtig durchgeführt wird, kann es zu Hautreizungen kommen. Erwägen Sie die Verwendung von Enthaarungscreme, Haarschneidemaschine oder einem Rasierhobel zur Haarentfernung.</li>
	<li>Wiegen Sie die Maus und vergleichen Sie die Gewichtsänderungen zwischen den einzelnen Gruppen.</li>
</ol>2. Stimulation der Bauchsensibilisierung
<ol><li>Sorgen Sie für die vollständige Genesung von kleineren Verletzungen der Bauchhaut, die durch die Rasur verursacht wurden. Tragen Sie die Bauchsensibilisierung 2 Tage nach der Rasur (Tag 2) auf.</li>
	<li>Bereiten Sie die 0,5%ige DNFB-Lösung vor: DNFB mit einem Aceton-Olivenöl-Gemisch im Verhältnis 4:1 verdünnen (z. B. 400 μl Aceton gemischt mit 100 μl Olivenöl; siehe Materialtabelle). Verwenden Sie eine Pipettenpistole, um 20 Mal zu blasen und zu mischen, um die DNFB-Lösung gründlich zu mischen. Vor jeder Verabreichung der DNFB-Lösung an die Maus drei- bis fünfmal blasen und mischen. Anmerkungen: Bereiten Sie die Lösung vor Gebrauch vor und wickeln Sie sie in Alufolie ein, um sie vor direkter Sonneneinstrahlung zu schützen.</li>
	<li>Tragen Sie 25 μl der 0,5%igen DNFB-Lösung mit einer Pipette auf die Haut des rasierten Bereichs am Bauch der Mäuse auf (Abbildung 2B).</li>
	<li>Träufeln Sie die DNFB-Lösung über die Mitte des Bauchrasierbereichs und verteilen Sie sie leicht mit der glatten Seite der Pipettenspitze, um sie gleichmäßig zu verteilen.</li>
	<li>Setzen Sie die Mäuse 30 s nach der DNFB-Stimulation in leere Käfige ohne Einstreu, um zu verhindern, dass sie die DNFB-Lösung abreiben. Wenn die DNFB-Lösung vollständig getrocknet ist (ca. 2 Minuten), setzen Sie die Mäuse wieder in ihren ursprünglichen Käfig.</li>
	<li>Tragen Sie beim Umgang mit der DNFB-Lösung Handschuhe, da sie die menschliche Haut stark reizt.</li>
</ol>3. Stimulation der Ohrsensibilisierung
<ol><li>Bereiten Sie eine 0,2%ige DNFB-Lösung wie oben beschrieben, die Vehikellösung (eine 4:1-Mischung aus Aceton und Olivenöl) und reines Wasser vor.</li>
	<li>Richten Sie den Mauskörper aus und zeigen Sie den äußeren Rand der Ohrmuschel während der gesamten Operation nach unten, um zu verhindern, dass die Lösung während der DNFB-Stimulation in den Gehörgang gelangt.</li>
	<li>Tragen Sie an den Tagen 4, 6, 8 und 10 mit einer Pipette 20 μl der 0,2%igen DNFB-Lösung oder der Vehikellösung langsam und gleichmäßig auf die Innenfläche der linken Ohrmuscheln der Mäuse auf. Um zu verhindern, dass DNFB-Lösung in den Gehörgang gelangt, verwenden Sie die glatte Seite der Pipettorspitze, um die DNFB-Lösung während der Verabreichung vorsichtig zu verteilen. Lassen Sie die rechten Ohren unbehandelt (Abbildung 2C).</li>
	<li>Warten Sie, bis die DNFB-Lösung trocken ist, und setzen Sie die Mäuse wieder in den Käfig (ca. 30 s).</li>
	<li>Tragen Sie beim Umgang mit der DNFB-Lösung Handschuhe.</li>
</ol>4. Aufzeichnung des Mausgewichts und der ACD-Symptome
<ol><li>Wiegen Sie die Maus jeden Tag, beginnen Sie mit Tag 1 und vergleichen Sie sie mit dem entsprechenden Gewicht an Tag 0. die Wirkung von ACD auf das Körpergewicht von Mäusen als Gewichtsänderung (g) ± Standardfehler des Mittelwerts (REM) zu bewerten.</li>
	<li>Machen Sie hochauflösende Fotos von den Mäuseohren, um die klinischen Symptome der ACD alle 2 Tage aufzuzeichnen, beginnend mit Tag 1.</li>
</ol>5. Messung der Ohrmuscheldicke
<ol><li>Messen Sie die Ohrmuscheldicke alle 2 Tage, beginnend mit Tag 1. Messen und notieren Sie beide Ohren im Detail.</li>
	<li>Verwenden Sie Messschieber (siehe Materialtabelle), um die Ohrmuscheldicke jeden Tag zur gleichen Zeit zu messen, um genaue Ergebnisse zu erzielen (Abbildung 3A). Verhindern Sie, dass die Messschieber bei einer leichten Verstopfung weiter nach innen geklemmt werden, um Gewebeschäden am Mausohr zu vermeiden. Halten Sie die Position fest und zeichnen Sie die Daten auf.</li>
	<li>Sammeln Sie die Dicke an drei verschiedenen Stellen an jeder Ohrmuschel (Abbildung 3B). Notieren Sie den Durchschnitt der drei Daten als gültigen Wert. Bewerten Sie die Ohrschwellung in Mikrometern (μm) ± Standardfehler des Mittelwerts (REM).</li>
</ol>6. Beurteilung des Grades der entzündlichen Schwellung
<ol><li>Bereiten Sie 0,5%ige Evansblau-Farbstofflösung (siehe Materialtabelle) vor: Verdünnen Sie Evans-Blaufarbstoff an Tag 11 mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS). Tragen Sie immer einen Laborkittel und Handschuhe, da der blaue Farbstoff Evans für den Menschen leicht giftig ist.</li>
	<li>Immobilisieren Sie die Mäuse mit einem Fixateur: Öffnen Sie den Deckel des Fixateurs (siehe Materialtabelle), halten Sie den Mausschwanz fest, richten Sie den Kopf der Maus auf den Fixateur aus und lassen Sie die Maus instinktiv in den Fixateur klettern. Decken Sie den Deckel ab, lassen Sie den Mausschwanz aus dem Loch auf dem Deckel herausragen, und passen Sie die Länge des Fixateurs so an, dass der gesamte Mausschwanz freigelegt wird.</li>
	<li>Wischen Sie den Schwanz wiederholt mit einem Alkohol-Wattebausch ab oder weichen Sie ihn 30 Sekunden lang in warmem Wasser ein und drücken Sie die Schwanzwurzel vorsichtig zusammen, um die Venen auf beiden Seiten zu füllen und zu erweitern. Führen Sie die Injektion unter der Bestrahlung einer Kaltlichtquelle durch.</li>
	<li>Injizieren Sie die blaue Evans-Farbstofflösung langsam mit einer 1 mm Insulinnadel in die Mausschwanzvene. Warten Sie 15 Minuten und fotografieren Sie dann die Mäuseohren. HINWEIS: Legen Sie die Maus auf den Tisch und halten Sie sie vorsichtig, um die Ohrregion für die Bildaufnahme freizulegen. Kurz nach der Injektion mit der blauen Farbstofflösung von Evans und unter Beachtung entsprechender Indikationen wird die Maus durch Zervixluxation eingeschläfert.</li>
</ol>

<ol><li>Neale, H., Garza-Mayers, A. C., Tam, I., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+allergic+contact+dermatitis.+Part+I%3A+Clinical+features+and+common+contact+allergens+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Pediatric allergic contact dermatitis. Part I: Clinical features and common contact allergens in children.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 84 (2), 235-244 (2021).</li>
<li>Koppes, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+knowledge+on+biomarkers+for+contact+sensitization+and+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Current knowledge on biomarkers for contact sensitization and allergic contact dermatitis.</a> Contact Dermatitis. 77 (1), 1-16 (2017).</li>
<li>Martin, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+chemical-induced+innate+immunity+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of chemical-induced innate immunity in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 66 (9), 1152-1163 (2011).</li>
<li>Kimber, I., Basketter, D. A., Gerberick, G. F., Dearman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Allergic contact dermatitis.</a> International Immunopharmacology. 2 (2-3), 201-211 (2002).</li>
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<li>Gamradt, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+checkpoint+receptors+control+CD8%2B+resident+memory+T+cells+to+prevent+skin+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Inhibitory checkpoint receptors control CD8+ resident memory T cells to prevent skin allergy.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (6), 2147.e9-2157.e9 (2019).</li>
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<li>Knop, J., Riechmann, R., Neumann, C., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%3A+5.+Evidence+that+inhibition+of+suppressor+T+lymphocytes+by+Corynebacterium+parvum+is+mediated+by+interferon%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanisms in allergic contact dermatitis: 5. Evidence that inhibition of suppressor T lymphocytes by Corynebacterium parvum is mediated by interferon.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (6), 385-388 (1982).</li>
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<li>Rubic-Schneider, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPR91+deficiency+exacerbates+allergic+contact+dermatitis+while+reducing+arthritic+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">GPR91 deficiency exacerbates allergic contact dermatitis while reducing arthritic disease in mice.</a> Allergy. 72 (3), 444-452 (2017).</li>
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<li>Dhingra, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+profiling+of+contact+dermatitis+skin+identifies+allergen-dependent+differences+in+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Molecular profiling of contact dermatitis skin identifies allergen-dependent differences in immune response.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (2), 362-372 (2014).</li>
<li>Maguire Jr, H. C., Kaidbey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+photoallergic+contact+dermatitis%3A+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Experimental photoallergic contact dermatitis: a mouse model.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (3), 147-152 (1982).</li>
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<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+activities+of+Dictamnus+dasycarpus+Turcz.%2C+root+bark+on+allergic+contact+dermatitis+induced+by+dinitrofluorobenzene+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory activities of Dictamnus dasycarpus Turcz., root bark on allergic contact dermatitis induced by dinitrofluorobenzene in mice.</a> Journal of Ethnopharmacology. 149 (2), 471-477 (2013).</li>
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<li>Donglang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+different+skin+pruritus+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative study on different skin pruritus mouse models.</a> Frontiers in Medicine. 8, 630237(2021).</li>
<li>Yang, N., Shao, H., Deng, J., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+pharmacology-based+analysis+to+explore+the+therapeutic+mechanism+of+Cortex+Dictamni+on+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Network pharmacology-based analysis to explore the therapeutic mechanism of Cortex Dictamni on atopic dermatitis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 304, 116023(2023).</li>
</ol>

Die Autoren berichten über keine Interessenkonflikte in dieser Arbeit.

Das hier beschriebene Protokoll zur Induktion von ACD-ähnlichen Symptomen in den Ohren von Mäusen kann zur Untersuchung der Pathophysiologie von ACD und als Screening-Tool für die Entwicklung neuer Medikamente verwendet werden.
Es gibt zwei wichtige Schritte, um ein ACD-Modell zu etablieren: die anfängliche Sensibilisierung und die anschließende Stimulation. Das Abdomen ist in der Regel der Ort der Erstsensibilisierung, aber der anschließende Stimulationsort wurde etwas anders gewählt. Frühere...

Die allergische Kontaktdermatitis (ACD) ist eine häufige Hauterkrankung, die durch ekzemähnliche Symptome an der Kontaktstelle, Ödeme und Rötungen in mittelschweren Fällen und Papeln, Erosion, Exsudation oder sogar massive Narben in schweren Fällen gekennzeichnet ist1. Sie betrifft bis zu 20 % der Bevölkerung und kann Menschen jeden Alters betreffen2. ACD tritt häufig bei Personen auf, die wiederholt Allergenen ausgesetzt waren, und kann durch die Immunantwort der Person auf ein oder mehrere Allergene zu Hause oder am Arbeitsplatz verursacht werden3. Die verzögerte Typ-IV-Überempfindlichkeit gilt als Haupttyp der Immunantwort bei ACD4. In Hautarealen, die wiederholt Allergenen ausgesetzt waren, reichern sich zirkulierende Gedächtnis-T-Zellen in großer Zahl an und induzieren Immun- und Entzündungsreaktionen 3,5,6. Das Ziel dieser Arbeit ist es, eine zuverlässige Labortechnik für die weitere Untersuchung immunologischer und inflammatorischer Reaktionen bei der Entwicklung von ACD vorzuschlagen.
Das Auftreten von ACD ist in der Regel auf eine Kontaktüberempfindlichkeit zurückzuführen, die durch wiederholte Exposition gegenüber Chemikalien verursacht wird. Zahlreiche Forscher haben in den letzten Jahrzehnten verschiedene ACD-Tiermodelle bei Hausmäusen7,8, Meerschweinchen 9,10 und anderen Tieren entwickelt, um den Ausbruch der Krankheit zu simulieren. Die meisten experimentellen Methoden bestehen aus zwei Stufen: der Sensibilisierung des Abdomens (Induktion) und der Abgabe von Reizen am Rücken oder am Ohrläppchen (Stimulation). Zu den häufig verwendeten chemischen Substanzen gehören hauptsächlich 1-Fluor-2,4-dinitrobenzol (DNFB)/1-Chlor-2,4-dinitrobenzol (DNCB)8,9,11, Oxazolon 12, Urushiol 13 usw. Unter ihnen sind DNFB und DNCB die am weitesten verbreiteten und wurden erstmals im Oktober 1958 gemeldet10. Häufig werden auch das Nickelsensibilisierungsmodell14 und das photoallergische Kontaktdermatitis Modell15 eingesetzt.
Wir stellen eine experimentelle Methode zur Erstellung des ACD-Modells vor. Diese Methode wird auf der Grundlage früherer Studien und durch den Vergleich mit mehreren Experimenten zusammengefasst und optimiert. Im Vergleich zu anderen ACD-Modellen hat dieses Modell einige Vorteile, wie z.B. kleine individuelle Unterschiede, kurze Versuchszeiträume, eine geringe Menge an chemischer Stimulation usw. Darüber hinaus ist diese Studie auf Mäuse anwendbar, die nicht nur wirtschaftlich sind, sondern auch mehr Möglichkeiten für einen Gen-Knockout oder eine transgene Mäusepräparation bieten16. Wir beschreiben auch die verschiedenen Methoden, die zur Überwachung des ACD-Fortschritts im Experiment verwendet werden, wie z. B. die Messung der Ohrdicke, die Verwendung von Evans-Blaufarbstoff zur Messung der entzündlichen Exsudation usw. Dieses Modell kann nicht nur Ohren, Blut, Milz und andere Proben von Mäusen im Labor analysieren, um die Pathogenese der ACD zu erforschen, sondern ist auch für die präklinische Evaluierung neuer Therapiemethoden geeignet, was eine gewisse werbliche Bedeutung hat.

<table><tbody><tr><td>1-Fluor-2,4-dinitrobenzol (DNFB)</td><td>Merck</td><td>200-734-3</td><td>1-Fluor-2,4-dinitrobenzol, &ge; 99%</td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Sinopharm Chemisches Reagenz Co. Ltd</td><td>10000418</td><td>&ge; 99,5%</td></tr> <tr><td>Aluminiumfolie&nbsp;</td><td>Cleanwrap</td><td>CF-2</td><td></td></tr><tr><td>Evans blue dye</td><td>Solarbio</td><td>314-13-6</td><td>Farbstoffgehalt ca. 80%</td></tr><tr><td>Mausfixateur</td><td>ZHUYANBANG</td><td>GEGD-SM1830</td><td></td></tr><tr><td>Olivenöl</td><td>Solarbio</td><td>8001-25-0</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Pipettenspitze</td><td>Biofount</td><td>FT-200</td><td>10 - 200 &mu; l</td></tr><tr><td>Pipettierer</td><td>Eppendorf AG</td><td>3123000250 20</td><td>- 200 &mu; l</td></tr><tr><td>Rasierklinge</td><td>Shanghai Gillette Co. LTD</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>Messschieber</td><td>Delixi Electric</td><td>DECHOTVCS1200</td><td></td></tr></tbody></table>

ein mausohrmodell zur beurteilung der allergischen kontaktdermatitis

A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation

Die Haut ist die erste Verteidigungslinie des menschlichen Körpers und eines der Organe, die Umweltchemikalien am stärksten ausgesetzt sind. Allergische Kontaktdermatitis (ACD) ist eine häufige Hauterkrankung, die sich als lokaler Hautausschlag, Rötungen und Hautläsionen äußert. Das Auftreten und die Entwicklung von ACD werden sowohl von genetischen als auch von Umweltfaktoren beeinflusst. Obwohl viele Wissenschaftler in den letzten Jahren eine Reihe von Modellen von ACD konstruiert haben, sind die experimentellen Protokolle dieser Modelle alle unterschiedlich, was es für die Leser schwierig macht, sie gut zu etablieren. Daher ist ein stabiles und effizientes Tiermodell von großer Bedeutung, um die Pathogenese der atopischen Dermatitis weiter zu untersuchen. In dieser Studie beschreiben wir eine Modellierungsmethode, bei der 1-Fluor-2,4-dinitrobenzol (DNFB) verwendet wird, um ACD-ähnliche Symptome in den Ohren von Mäusen zu induzieren, und beschreiben verschiedene Methoden zur Beurteilung des Schweregrads der Dermatitis während der Modellierung. Dieses experimentelle Protokoll wurde in einigen Experimenten erfolgreich angewendet und hat eine gewisse Werberolle im Bereich der ACD-Forschung.

Unter wiederholter DNFB-Stimulation zeigten die Mausohren der DNFB-Gruppe offensichtliche klinische Symptome, die mit ACD vergleichbar waren, wobei empfindliche Bereiche die typischen Symptome von Rötung, Trockenheit und sogar Erosion und Exsudation zeigten. Die Verabreichung von reinem Wasser (Kontrollgruppe) oder Lösungsmittelkontrolle (Vehikelgruppe) führte jedoch nicht zu ähnlichen Symptomen (Abbildung 4).
Währenddessen nahm in der DNFB-Gruppe im Vergleich zum...

Hier beschreiben wir die Methoden zur Induktion einer allergischen Kontaktdermatitis in Mäuseohren durch 1-Fluor-2,4-dinitrobenzol (DNFB) und wie der Schweregrad der allergischen Kontaktdermatitis beurteilt werden kann.

Ein Mausohrmodell zur Beurteilung der allergischen Kontaktdermatitis

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a ...

Dieses Modell kann nicht nur zur Erforschung der Pathogenese der ACD verwendet werden, sondern ist auch für die präklinische Evolution neuer therapeutischer Methoden anwendbar, was eine wichtige Bedeutung hat. Dies ist ein stabiles und effizientes Tiermodell mit vielen Vorteilen, wie z. B. einer kurzen Versuchszeit, einfacher Bedienung, offensichtlichen Symptomen und einer hohen Erfolgsquote. Unser Versuchsprotokoll ist sehr detailliert und einfach zu bedienen.Stellen Sie sicher, dass Sie jeden Schritt des Protokolls korrekt befolgen. Bevor Sie mit der Modellierung beginnen, gewöhnen Sie die Mäuse eine Woche lang an die Umgebung mit freiem Zugang zu Nahrung und Wasser. Reinigen und desinfizieren Sie am Tag der Modellierung mit einer UV-Lampe und 75% Alkohol die Umgebung und die Arbeitsplatten.Tragen Sie Seifenwasser mit einem Wattestäbchen auf den Bauch der Mäuse auf und rasieren Sie den Bereich mit einer Klinge oder einem Rasierer in Haarwuchsrichtung. Wiegen Sie die Maus und vergleichen Sie die Gewichtsänderungen zwischen den einzelnen Gruppen. Bevor Sie eine Sensibilisierungsstimulation des Bauches durchführen, stellen Sie sicher, dass sich jede kleinere Verletzung der Bauchhaut der Maus, die durch die Rasur verursacht wurde, vollständig erholt hat.Bereiten Sie eine 0,5%ige DNFB-Lösung vor und verdünnen Sie sie mit einer Aceton-Olivenöl-Mischung im Verhältnis 4 zu 1. Blasen und mischen Sie mit einer Pipettenpistole 20 Mal, um die DNFB-Lösung gründlich zu mischen. Tragen Sie 25 Mikroliter der 0,5%igen DNFB-Lösung mit einem Pipetter auf die Mitte des Bauchrasierbereichs auf und verteilen Sie sie leicht mit der glatten Seite der Pipettenspitze, um sie gleichmäßig zu verteilen.Legen Sie die Maus nach 30 Sekunden DNFB-Stimulation in einen leeren Käfig ohne Einstreu, um zu verhindern, dass die Maus die DNFB-Lösung abreibt. Wenn die Lösung vollständig getrocknet ist, setzen Sie die Maus in ihren ursprünglichen Käfig mit freiem Zugang zu Futter und Wasser zurück. Um die Ohrsensibilisierung zu stimulieren, richten Sie den Mauskörper aus und richten Sie den äußeren Rand der Ohrmuschel nach unten aus, um zu verhindern, dass die Lösung während der DNFB-Stimulation in den Gehörgang gelangt.Tragen Sie an den Tagen 4 und 10 mit einem Pipetter 20 Mikroliter des Vehikels oder eine 0,2%ige DNFB-Lösung langsam und gleichmäßig auf die Innenfläche der linken Ohrmuschel auf und verteilen Sie die Lösung vorsichtig mit der glatten Seite des Pipettengebers. Lassen Sie das rechte Ohr unbehandelt. Warten Sie, bis die DNFB-Lösung trocken ist, und setzen Sie die Maus wieder in den Käfig ein.Nach der Sensibilisierung des Bauches und der Ohren werden die Mäuse ab dem ersten Tag alle zwei Tage gewogen. Vergleichen Sie das Gewicht jeder Maus mit dem Tag Null und bewerten Sie die Wirkung von ACD auf das Körpergewicht der Mäuse, wenn sich das Gewicht ändert. Nehmen Sie hochauflösende Fotos der Mausohren auf, um die klinischen Symptome der ACD alle zwei Tage aufzuzeichnen, beginnend mit dem ersten Tag.Messen Sie die Ohrmuscheldicke mit Messschiebern jeden Tag zur gleichen Zeit, um genaue Ergebnisse zu erzielen. Verhindern Sie, dass die Messschieber weiter nach innen geklemmt werden, wenn eine leichte Verstopfung vorliegt, um Gewebeschäden am Mausohr zu vermeiden. Halten Sie die Position fest und zeichnen Sie die Daten für beide Ohren auf.Erfassen Sie den Mittelwert der drei Daten und werten Sie die Ohrschwellung in Mikrometern aus. Um den Grad der entzündlichen Schwellung an Tag 11 zu beurteilen, bereiten Sie 0,5%ige Evans Blue-Farbstofflösung vor und verdünnen Sie sie mit PBS. Um die Maus mit einem Fixateur ruhigzustellen, öffnen Sie den Deckel, halten Sie den Mausschwanz fest, machen Sie den Kopf der Maus zum Fixateur und lassen Sie die Maus instinktiv in den Fixateur klettern.Decken Sie den Deckel ab. Lassen Sie den Mausschwanz aus dem Loch auf dem Deckel herausragen und passen Sie die Länge des Fixateurs an, um den gesamten Mausschwanz freizulegen. Wischen Sie den Schwanz wiederholt mit einem Alkohol-Wattebausch ab oder weichen Sie ihn 30 Sekunden lang in warmem Wasser ein und drücken Sie die Schwanzwurzel vorsichtig zusammen, um sie zu füllen und die Venen auf beiden Seiten zu erweitern.Injizieren Sie die Evans Blue Dye-Lösung langsam mit einer 1-mm-Insulinnadel unter der Bestrahlung einer Kaltlichtquelle in die Mausschwanzvene. Warten Sie 15 Minuten, um Fotos von den Mäuseohren zu machen. Mausohren der DNFB-Gruppe zeigten deutliche klinische Symptome, die mit ACD vergleichbar waren, wobei empfindliche Bereiche die typischen Symptome wie Rötung, Trockenheit, Erosion und Exsudation aufwiesen.Die Verabreichung von reinem Wasser oder Lösungsmittelkontrolle am Ohr führte jedoch zu keinen Symptomen, die denen der DNFB-Gruppe ähnelten. In der DNFB-Gruppe nahm die Dicke des linken Ohrs im Vergleich zum unbehandelten rechten Ohr nach DNFB-Stimulation signifikant zu. Es gab keinen signifikanten Unterschied in der Kontroll- und Fahrzeuggruppe.Das linke Ohr der Mäuse der DNFB-Gruppe färbte sich nach der Injektion des Farbstoffs Evans Blue dunkelblau, was sich optisch vom rechten Ohr unterschied. Das linke und rechte Ohr von Mäusen in Kontroll- und Fahrzeuggruppen hatten ungefähr die gleiche Farbe. Die Gewichtszunahme der Maus wurde durch DNFB oder einfache Vehikelstimulation leicht verlangsamt, führte aber nicht zu einem signifikanten Gewichtsverlust.Wiederholte DNFB-Stimulation im Mausohr führte zu einer Milzvergrößerung und einem Anstieg des Milzindexes. Im Gegensatz dazu veränderte sich der Milzindex der Mäuse in der Fahrzeuggruppe nicht signifikant. Stellen Sie sicher, dass die DINFB-Lösung vollständig gemischt und gleichmäßig auf das Mausohr aufgetragen wird, ohne in den Gehörgang zu fließen.Dies ist der Schlüssel zum Erfolg der Modellierung.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Experimentelle Mausmodellen von allergischem Asthma bieten neue Möglichkeiten zur Untersuchung von Krankheitsentstehung und die Entwicklung neuer Therapeutika. Diese Modelle sind gut, um Mess-Faktoren, die die allergische Immunantwort, Entzündung der Atemwege, Lungen-und Pathophysiologie geeignet.

Mausmodell von Allergen-induzierte Asthma

Dieses Video beschreibt eine Methode zur Messung der UV-Empfindlichkeit in einem humanisierten Mausmodell – einem Mausmodell, das die menschliche Haut nachahmt. Wir bestimmen die minimale erythematöse Dosis (MED) der UV-Strahlung, die Erytheme oder Ödeme auf der Haut verursachen kann. Die Methode kann helfen, die Wirksamkeit von Medikamenten herauszufinden, die zur Verringerung der UV-Empfindlichkeit eingesetzt werden.

Minimaler erythematöser Dosis-Assay: Eine Methode zur Messung der UV-Empfindlichkeit in Mausmodellen

Dieses Video demonstriert eine in vivo Technik zur Bewertung eines Testantigens durch Induktion einer Hautentzündung in einem Mausmodell. Das Testantigen – ein Hapten in einer Öl/Aceton-Lösung – wird topisch auf die Haut des Mausohrs aufgetragen, und die Entzündung der Haut wird nach einer angemessenen Zeit beurteilt.

Eine Technik zur Beurteilung der Immunantwort gegen ein Antigen durch Induktion einer Hautentzündung

Dieses Video zeigt Malassezia-induzierte Hautinfektionen bei Mäusen. Die Malassezia-Ölsuspension wird auf das verwundete Ohr aufgetragen und löst eine Entzündung und Schwellung des Ohrgewebes aus. Später werden die Ohren präpariert, homogenisiert und zum Wachstum auf einer Agarplatte ausgebreitet. Die Anzahl der Kolonien gibt die Pilzbelastung an, die durch Hautentzündungen entsteht.

Malassezia-induzierte Analyse von Hautentzündungen und Pilzbelastung in einem Mausmodell

Allergischen Reaktionen, gekennzeichnet durch die Aktivierung von Mastzellen und Basophilen, durch die Quervernetzung von IgE und Freisetzung von proinflammatorischen Mediatoren zurückzuführen. Eine quantitative Beurteilung von allergischen Reaktionen können mit Evans Blue-Farbstoff auf Veränderungen der vaskulären Permeabilität nach Allergenprovokation überwachen erreicht werden.

Mess Lokale Anaphylaxie bei Mäusen

Hier beschreiben wir ein hohe Auflösung vollständig-hängen bildgebende Verfahren in der gesamten erwachsenen Maus Ohr Haut, die was uns ermöglicht, verzweigte Morphogenese und Strukturierung der peripheren Nerven und Blutgefäße sowie Immunzelle Verteilung zu visualisieren.

Vollständig-hängen konfokalen Mikroskopie für Erwachsene Ohr Haut: ein Modellsystem, Neuro-vaskuläre Verzweigung Morphogenese und Immunzelle Verteilung zu studieren

Ein Ansatz ist für Echtzeit-Erkennung der angeborenen Immunantwort zu kutanen Verwundung und Staphylococcus Aureus Infektion der Mäuse beschrieben. Durch Vergleich LysM EGFP Mäuse (die fluoreszierenden Neutrophile besitzen) mit einem LysM EGFP immungeschwächte Maus Sorte gekreuzt, wir vorab unser Verständnis der Infektion und der Entwicklung von Ansätzen zur Bekämpfung der Infektion.

Ein Mausmodell zu beurteilen, angeborene Immunantwort auf Staphylococcus Aureus -Infektion

Kontaktüberempfindlichkeit (CHS) ist ein murines experimentelles Modell der allergischen Kontaktdermatitis (ACD). CHS basiert auf der Sensibilisierung mit reaktivem Hapten durch Lackieren der rasierten Haut von Brust und Bauch, mit einer anschließenden Ohrhautherausforderung mit einem verdünnten Hapten, was eine Schwellungsreaktion verursacht, die auf verschiedene Arten beurteilt wird.

Kontaktüberempfindlichkeit als murines Modell der allergischen Kontaktdermatitis

Dieses Protokoll beschreibt das Verfahren zur Induktion von Akneentzündungen in der Rattenhaut mit Ölsäure und Cutibacterium acnes.

Ein Rattenmodell für zusammengesetzte Akne

Die Studie zeigt die Rolle der Haut bei der Modulation der Immunantwort bei Mäusen durch epikutane (EC) Immunisierung. Die EC-Immunisierung mit einem Proteinantigen kann in Kombination mit erregerassoziierten molekularen Mustern Immunantworten bei Kontaktüberempfindlichkeit unterdrücken oder die hautinduzierte Suppression rückgängig machen. Die EC-Immunisierung ist vielversprechend und bietet einen wirksamen, nadelfreien Ansatz für die Immuntherapie.

Mausmodell der epikutan induzierten Immunmodulation

Erfahren Sie, wie Sie ein Mausohrmodell zur Induktion und Bewertung allergischer Kontaktdermatitis mit DNFB etablieren. Dieses effiziente Protokoll ermöglicht präklinische Studien zur Pathogenese und Therapieentwicklung.

Ein Mausohrmodell zur Beurteilung der allergischen Kontaktdermatitis

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