Name: Ein Workflow zur quantitativen Bestimmung altersbedingter Makuladegenerationsläsions-spezifischer Variationen in der Fundus-Autofluoreszenz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-26T12:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Lernen Sie die quantitative Fundus-Autofluoreszenzanalyse für die altersbedingte Makuladegeneration kennen. Diese Methode ermöglicht die vergleichende Messung spezifischer retinaler Regionen und liefert neue Erkenntnisse zur Pathophysiologie.

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Diese Arbeit wurde durch das Stipendium der Deutschen Ophthalmologischen Gesellschaft (DOG) für Doktoranden (MW) und das NIH/NEI 1R01EY027948 (TA) gefördert.

Erforschung der quantitativen Autofluoreszenz bei altersbedingter Makuladegeneration

<ol><li>Schmitz-Valckenberg, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+autofluorescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Fundus autofluorescence imaging.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 81, 100893(2021).</li>
<li>Bermond, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autofluorescent+granules+of+the+human+retinal+pigment+epithelium%3A+phenotypes%2C+intracellular+distribution%2C+and+age-related+topography%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Autofluorescent granules of the human retinal pigment epithelium: phenotypes, intracellular distribution, and age-related topography.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 61 (5), 35(2020).</li>
<li>Bermond, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autofluorescent+organelles+within+the+retinal+pigment+epithelium+in+human+donor+eyes+with+and+without+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Autofluorescent organelles within the retinal pigment epithelium in human donor eyes with and without age-related macular degeneration.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 63 (1), 23(2022).</li>
<li>Delori, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+measurements+of+autofluorescence+with+the+scanning+laser+ophthalmoscope%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative measurements of autofluorescence with the scanning laser ophthalmoscope.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (13), 9379-9390 (2011).</li>
<li>Fleckenstein, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> Nature Reviews Disease Primers. 7 (1), 31(2021).</li>
<li>Greenberg, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+healthy+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in healthy eyes.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 54 (8), 5684-5693 (2013).</li>
<li>Sparrow, J. R., Boulton, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RPE+lipofuscin+and+its+role+in+retinal+pathobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">RPE lipofuscin and its role in retinal pathobiology.</a> Experimental Eye Research. 80 (5), 595-606 (2005).</li>
<li>vonder Emde, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+of+quantitative+autofluorescence+in+intermediate+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Natural history of quantitative autofluorescence in intermediate age-related macular degeneration.</a> Retina. 41 (4), 694-700 (2021).</li>
<li>Reiter, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+changes+in+quantitative+autofluorescence+during+progression+from+intermediate+to+late+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Longitudinal changes in quantitative autofluorescence during progression from intermediate to late age-related macular degeneration.</a> Retina. 41 (6), 1236-1241 (2021).</li>
<li>Gliem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+early+and+intermediate+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in early and intermediate age-related macular degeneration.</a> JAMA Ophthalmology. 134 (7), 817-824 (2016).</li>
<li>Hussain, R. M., Gregori, N. Z., Ciulla, T. A., Lam, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacotherapy+of+retinal+disease+with+visual+cycle+modulators%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Pharmacotherapy of retinal disease with visual cycle modulators.</a> Expert Opinion on Pharmacotherapy. 19 (5), 471-481 (2018).</li>
<li>Ammar, M. J., Hsu, J., Chiang, A., Ho, A. C., Regillo, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration+therapy%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration therapy: a review.</a> Current Opinion in Ophthalmology. 31 (3), 215-221 (2020).</li>
<li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipofuscin+redistribution+and+loss+accompanied+by+cytoskeletal+stress+in+retinal+pigment+epithelium+of+eyes+with+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Lipofuscin redistribution and loss accompanied by cytoskeletal stress in retinal pigment epithelium of eyes with age-related macular degeneration.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (5), 3242-3252 (2015).</li>
<li>Zanzottera, E. C., Messinger, J. D., Ach, T., Smith, R. T., Curcio, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subducted+and+melanotic+cells+in+advanced+age-related+macular+degeneration+are+derived+from+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Subducted and melanotic cells in advanced age-related macular degeneration are derived from retinal pigment epithelium.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (5), 3269-3278 (2015).</li>
<li>Cao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperreflective+foci%2C+optical+coherence+tomography+progression+indicators+in+age-related+macular+degeneration%2C+include+transdifferentiated+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Hyperreflective foci, optical coherence tomography progression indicators in age-related macular degeneration, include transdifferentiated retinal pigment epithelium.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 62 (10), 34(2021).</li>
<li>Zanzottera, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Project+MACULA+retinal+pigment+epithelium+grading+system+for+histology+and+optical+coherence+tomography+in+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The Project MACULA retinal pigment epithelium grading system for histology and optical coherence tomography in age-related macular degeneration.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (5), 3253-3268 (2015).</li>
<li>Sparrow, J. R., Duncker, T., Schuerch, K., Paavo, M., de Carvalho, dR. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+learned+from+quantitative+fundus+autofluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Lessons learned from quantitative fundus autofluorescence.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 74, 100774(2020).</li>
<li>Schmitz-Valckenberg, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+the+area+of+increased+autofluorescence+surrounding+geographic+atrophy+and+disease+progression+in+patients+with+AMD%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Correlation between the area of increased autofluorescence surrounding geographic atrophy and disease progression in patients with AMD.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 47 (6), 2648-2654 (2006).</li>
<li>Ach, T., Bermond, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autofluorescence+of+the+human+retinal+pigment+epithelium+in+normal+aging+and+in+age-related+macular+degeneration%3A+histology+and+clinical+correlation%5BTitle%5D)+AND+%22Klinische+Monatsblatter+Fur+Augenheilkunde%22%5BJournal%5D)">Autofluorescence of the human retinal pigment epithelium in normal aging and in age-related macular degeneration: histology and clinical correlation.</a> Klinische Monatsblatter Fur Augenheilkunde. 236 (5), 672-681 (2017).</li>
<li>Pollreisz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+melanosomes%2C+lipofuscin%2C+and+melanolipofuscin+in+human+retinal+pigment+epithelium+using+serial+block+face+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Visualizing melanosomes, lipofuscin, and melanolipofuscin in human retinal pigment epithelium using serial block face scanning electron microscopy.</a> Experimental Eye Research. 166, 131-139 (2018).</li>
<li>Bernstein, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((meso-zeaxanthin%3A+The+basic+and+clinical+science+underlying+carotenoid-based+nutritional+interventions+against+ocular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">meso-zeaxanthin: The basic and clinical science underlying carotenoid-based nutritional interventions against ocular disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 50, 34-66 (2016).</li>
<li>Göbel, A. P., Fleckenstein, M., Heeren, T. F. C., Holz, F. G., Schmitz-Valckenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vivo+mapping+of+drusen+by+fundus+autofluorescence+and+spectral-domain+optical+coherence+tomography+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+Archive+for+Clinical+and+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">In-vivo mapping of drusen by fundus autofluorescence and spectral-domain optical coherence tomography imaging.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 254 (1), 59-67 (2016).</li>
<li>Pfau, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesopic+and+dark-adapted+two-color+fundus-controlled+perimetry+in+geographic+atrophy+secondary+to+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Mesopic and dark-adapted two-color fundus-controlled perimetry in geographic atrophy secondary to age-related macular degeneration.</a> Retina. 40 (1), 169-180 (2020).</li>
<li>vonder Emde, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesopic+and+dark-adapted+two-color+fundus-controlled+perimetry+in+choroidal+neovascularization+secondary+to+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Mesopic and dark-adapted two-color fundus-controlled perimetry in choroidal neovascularization secondary to age-related macular degeneration.</a> Translational Vision Science and Technology. 8 (1), 7(2018).</li>
<li>Aumann, S., Donner, S., Fischer, J., Müller, F. Optical coherence tomography (OCT): principle and technical realization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAumann%2C+S+%22High+Resolution+Imaging+in+Microscopy+and+Ophthalmology%3A+New+Frontiers+in+Biomedical+Optics%22">High Resolution Imaging in Microscopy and Ophthalmology: New Frontiers in Biomedical Optics</a>. , Cham (CH), Springer. 59-85 (2019).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FIJI%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">FIJI: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Kleefeldt, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence%3A+advanced+analysis+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence: advanced analysis tools.</a> Translational Vision Science and Technology. 9 (8), 2(2020).</li>
<li>Hong, I. H., Jung, W. H., Lee, J. H., Chang, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macular+pigment+optical+density+in+the+Korean+population%3A+a+cross+sectional+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Korean+Medical+Science%22%5BJournal%5D)">Macular pigment optical density in the Korean population: a cross sectional study.</a> Journal of Korean Medical Science. 35 (5), e30(2020).</li>
<li>Putnam, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+imaging+of+macular+pigment+optical+density+and+spatial+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Optometry%22%5BJournal%5D)">Clinical imaging of macular pigment optical density and spatial distribution.</a> Clinical and Experimental Optometry. 100 (4), 333-340 (2017).</li>
<li>Zweifel, S. A., Spaide, R. F., Curcio, C. A., Malek, G., Imamura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reticular+pseudodrusen+are+subretinal+drusenoid+deposits%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Reticular pseudodrusen are subretinal drusenoid deposits.</a> Ophthalmology. 117 (2), 303-312 (2010).</li>
<li>Curcio, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+drusenoid+deposits+in+non-neovascular+age-related+macular+degeneration%3A+morphology%2C+prevalence%2C+topography%2C+and+biogenesis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Subretinal drusenoid deposits in non-neovascular age-related macular degeneration: morphology, prevalence, topography, and biogenesis model.</a> Retina. 33 (2), 265-276 (2013).</li>
<li>Spaide, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outer+retinal+atrophy+after+regression+of+subretinal+drusenoid+deposits+as+a+newly+recognized+form+of+late+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Outer retinal atrophy after regression of subretinal drusenoid deposits as a newly recognized form of late age-related macular degeneration.</a> Retina. 33 (9), 1800-1808 (2013).</li>
<li>Reiter, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+lens+opacities+and+cataract+severity+on+quantitative+fundus+autofluorescence+as+a+secondary+outcome+of+a+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Influence of lens opacities and cataract severity on quantitative fundus autofluorescence as a secondary outcome of a randomized clinical trial.</a> Scientific Reports. 11 (1), 12685(2021).</li>
<li>Gliem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+pseudoxanthoma+elasticum%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in pseudoxanthoma elasticum.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (14), 6159-6165 (2017).</li>
<li>Burke, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+recessive+Stargardt+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in recessive Stargardt disease.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 55 (5), 2841-2852 (2014).</li>
<li>Armenti, S. T., Greenberg, J. P., Smith, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+for+the+evaluation+of+retinal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence for the evaluation of retinal diseases.</a> Journal of Visualized Experiments. (109), 53577(2016).</li>
<li>Pröbster, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+the+developing+and+maturing+healthy+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in the developing and maturing healthy eye.</a> Translational Vision Science and Technology. 10 (2), 15(2021).</li>
<li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+and+optical+coherence+tomography+in+PRPH2%2FRDS-+and+ABCA4-associated+disease+exhibiting+phenotypic+overlap%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence and optical coherence tomography in PRPH2/RDS- and ABCA4-associated disease exhibiting phenotypic overlap.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (5), 3159-3170 (2015).</li>
</ol>

Leon von der Emde berichtet, dass er Zahlungen von Heidelberg Engineering erhalten hat. Merten Mallwitz berichtet über keine finanziellen Angaben. Kenneth R. Sloan berichtet ebenfalls über keine finanziellen Offenlegungen. Frank G. Holz berichtet über Beratungs-/Privatzahlungen für Acucela, Alcon (C), Gyroscope Allergan Apellis, Bayer Bioeq/Formycon, CenterVue, Roche/Genentech, Geuder, Ivericbio, NightStarX, Novartis, Optos, Oxurion, Pixium Vision, Stealth BioTherapeutics, Zeiss und GRADE Reading Center. Thomas Ach berichtet über Consulting/Personal Payments für Bayer, Apellis, Roche und Novartis.

Dieser Arbeitsablauf bietet eine Schritt-für-Schritt-Anleitung zur Verwendung von Open-Source-FIJI-Plug-in-Tools zur Bestimmung und zum Vergleich von Vorhofflimmern von AMD-spezifischen Läsionen. Die Plug-ins bieten einfach zu bedienende Vorlagen, die keine Programmierkenntnisse erfordern und von Ärzten ohne technische Unterstützung angewendet werden können27. Unseres Wissens nach sind diese Werkzeuge einzigartig für die läsionsspezifische Quantifizierung von Vorhofflimmern.
Die QAF-Werte variieren auf natürliche Weise über die Netzhaut, wobei die Werte an der Peripherie höher und in der Makula niedriger sind, was auf eine ungleichmäßige Verteilung von Lipofuszin und Melanolipofuszin innerhalb der Netzhaut, den niedrigen AF der Gefäße und eine ungleichmäßige Verteilung der Makulapigmente zurückzuführen ist. Aufgrund der hohen Variation der natürlich vorkommenden QAF-Spiegel in der Netzhaut ist die direkte Analyse der absoluten QAF-Werte von Läsionen kein vielversprechender Ansatz. Zum Beispiel kann eine hypoautofluoreszierende Läsion in der Peripherie immer noch höhere absolute QAF-Werte aufweisen als physiologische Fluoreszenzwerte der Makula. Die Verwendung eines StandardRetina und die Verwendung von Z-Scores zur Messung der Fluoreszenzwerte von Drusen korrigieren diese natürlich auftretende Varianz der QAF-Werte.
Ein Z-Score ist ein numerisches Maß für die Beziehung eines Regions of Interest-Werts zum Mittelwert in der StandardRetina. Sie wird berechnet, indem der Mittelwert eines Individuums vom Mittelwert der StandardRetina an derselben Stelle subtrahiert und dann das Ergebnis durch die Standardabweichung dividiert wird. Diese Standardisierung ermöglicht den Vergleich verschiedener QAF-Bilder, da der Z-Score angibt, um wie viele Standardabweichungen ein Wert vom Mittelwert abweicht. Ein positiver Z-Wert gibt an, dass der Wert über dem Mittelwert liegt, während ein negativer Z-Wert angibt, dass er unter dem Mittelwert liegt.
Es ist wichtig zu beachten, dass es potenzielle Fallstricke geben kann, die berücksichtigt werden sollten. Obwohl diese Methode die unterschiedliche Anzahl von AF-Werten im gesamten Fundus berücksichtigt, ist sie möglicherweise immer noch nicht die genaueste Methode, um den AF eines RPE zu messen und zu vergleichen. Individuen haben unterschiedliche Konzentrationen und Topographien des Makula-Lutealpigments, und Läsionen können auch die Transluzenz der darüber liegenden Netzhaut beeinträchtigen28,29. Es ist daher plausibel, dass der gemessene reduzierte AF in Bereichen von SDDs (siehe repräsentative Ergebnisse) eher eine Folge von Abschattungseffekten als von verminderten Fluorophoren im RPEist 30,31,32.
Wir arbeiten derzeit an einem Workflow zur Berücksichtigung der retinalen Reflektivität, der Dicke und des quantifizierten Makulapigments (mit grünem und blauem AF) mit linearen Mischmodellen. Darüber hinaus verwendet QAF bisher einen altersabhängigen Korrekturfaktor zur Berücksichtigung der Lentikulartrübung, der interindividuelle Unterschiede in der Lentikulartrübung von Teilnehmern eines ähnlichen Alters von33 Jahren außer Acht lässt. Wir arbeiten daher derzeit an einem Workflow für einen personalisierten Korrekturfaktor der linsenförmigen Autofluoreszenz und Trübung. Um zuverlässig Informationen über Vorhofflimmern aus kleinen Läsionen zu extrahieren, ist eine angemessene Test-Retest-Reliabilität von QAF-Bildern erforderlich. Um diejenigen QAF-Bilder weiter zu differenzieren, bei denen eine detailliertere Analyse möglich ist, untersuchen wir "QAF-Bildzuverlässigkeitsindizes", die die Test-Retest-Reliabilität von QAF-Bildern vorhersagen können. Im gegenwärtigen Stadium besteht der vorsichtige Ansatz darin, doppelte Bilder aufzunehmen und die Reliabilität von läsionsspezifischem Vorhofflimmern zu untersuchen.
Die vorgestellte Methode zur zusätzlichen Analyse der Isohüllen von Läsionen war technisch schwierig umzusetzen, da Isohüllen benachbarter Läsionen verschmelzen. Bereiche mit verschmolzenen Iso-Hüllen konnten je nachdem, welche Läsion betrachtet wird, unterschiedlich charakterisiert werden. Unsere Lösung bestand darin, alle Läsionen eines Typs als eine Läsion zu betrachten und ihre Peripherie als gemeinsame Isohülle zu analysieren. Diese Methode reduziert jedoch drastisch die Fähigkeit, die Iso-Hüllen einzelner Drusen zu messen, und könnte als ein weiterer Fallstrick dieser Technik angesehen werden. Technisch ausgefeiltere Methoden zur Berücksichtigung von verschmolzenen Iso-Hüllen oder die ausgesetzte Meldung von Vorhofflimmern in Bereichen mit verschmolzenen Iso-Hüllen könnten in Zukunft die Analyse von Vorhofflimmern im Umfang von Läsionen erleichtern.
Für diese Studie haben wir AMD als Modellerkrankung verwendet. Der Arbeitsablauf kann auch für die Untersuchung von Läsionen bei anderen Krankheiten angepasst werden. Bisher wurde QAF bei vielen chorioretinalen Erkrankungen eingesetzt, darunter die rezessive Stargardt-Krankheit, Bestrophin-1-assoziierte Erkrankungen, verschiedene Formen der Retinitis pigmentosa, die akute zonale okkulte äußere Retinopathie, Pseudoxanthoma elasticum und andere 17,33,34,35,36,37 . Da für diesen Arbeitsablauf Open-Source-Software verwendet wird, ermutigen wir andere, diese Arbeit bei der Bestimmung von läsionsspezifischem Vorhofflimmern zu duplizieren und unser Wissen über Netzhauterkrankungen zu erweitern. Zusammenfassend stellen wir einen Arbeitsablauf vor, mit dem die AF-Konzentrationen verschiedener Netzhautläsionen in der gesamten Makula bestimmt und verglichen werden können. Dieser Arbeitsablauf ebnet den Weg für eine tiefergehende Analyse von Vorhofflimmern und könnte die Entwicklung neuer Biomarker bei AMD und darüber hinaus erleichtern.

Die Fundus-Autofluoreszenz-Bildgebung (FAF) ermöglicht eine nicht-invasive Kartierung von natürlich und pathologisch vorkommenden Fluorophoren des Augenhintergrundes1. Die häufigste blaue Autofluoreszenz (488 nm Anregung) (AF) erregt Lipofuszin- und Melanolipofuszin-Granula des retinalen Pigmentepithels (RPE)2,3,4. Die Verteilung und die Zunahme/Abnahme von Granula spielen eine zentrale Rolle beim normalen Altern und bei verschiedenen Netzhauterkrankungen, einschließlich der altersbedingten Makuladegeneration (AMD)5.
Eine Weiterentwicklung der FAF, die quantitative Fundusautofluoreszenz (QAF), ermöglicht nun die genaue Bestimmung topographisch aufgelöster retinaler AF-Intensitäten 4,6. Durch die Integration einer Referenz in den optischen Pfad des FAF-Bildgebungsgeräts können AF-Intensitäten zwischen Geräten, Zeitpunkten und Motiven verglichen werden. Diese Technik hat zu einem Paradigmenwechsel in Bezug auf einen vermuteten pathogenetischen Faktor bei der AMD geführt, der lange Zeit auf eine übermäßige Lipofuszin-Akkumulation in RPE-Zellen zurückgeführt wurde7. Die histologische und klinische Quantifizierung von Vorhofflimmern ergab jedoch eine Abnahme des Vorhofflimmerns bei AMD (aufgrund der Umverteilung und des Verlusts von autofluoreszierendem Lipofuszin und Melanolipofuszin-Granula) anstelle des vorgeschlagenen Anstiegs von Vorhofflimmern 8,9,10.
Die Überwachung von Vorhofflimmern hat klinische Auswirkungen. Von der Emde et al. und andere haben gezeigt, dass Vorhofflimmern nicht nur vermindert ist, sondern auch im Verlauf der AMD bei Hochrisiko-Augen mit intermediärer AMD weiter abnimmt 8,9. Darüber hinaus deuten histologische Studien darauf hin, dass die meisten AMD-betroffenen RPE-Zellen ein charakteristisches Verhalten mit Granulaaggregation und -extrusion vor dem Verlust von RPE-Zellen durch Subduktion, Supping, Migration oder Atrophie zeigen13,14,15,16. Dies deutet darauf hin, dass der Verlust von Vorhofflimmern ein Auslöser oder ein Surrogatsignal für ein bevorstehendes Fortschreiten der Krankheit sein könnte.
QAF-Studien haben AF bisher nur global am hinteren Pol unter Verwendung von vorgefertigten polaren Koordinatensystemen (z. B. QAF8/Delori-Gitter) untersucht17. Die Verwendung vorgefertigter Raster zur Messung des Autofokus führt zu mehreren AF-Werten in vordefinierten Bereichen pro Auge eines Motivs. Bei der Untersuchung von Vorhofflimmerwerten auf diese Weise könnten lokale Veränderungen in Bereichen mit pathologisch verändertem Vorhofflimmern übersehen werden, z. B. bei AMD auf oder in der Nähe von Drusen oder subretinalen Drusenoidablagerungen (SDDs). Drusen und in höherem Maße SDDs sind mit einem hohen Risiko für die Entwicklung einer späten AMD und eines Sehverlusts verbunden. Insbesondere Drusen haben einen typischen Zyklus, in dem sie über viele Jahre hinweg an Größe zunehmen und sich vor der Atrophie schnell verschlechtern können. Denkbar ist beispielsweise, dass das globale Vorhofflimmern bei AMD abnimmt, aber in und um diese spezifischen krankheitsbedingten fokalen Läsionen zunimmt oder sogar noch weiter reduziert wird.
Unterschiedliche lokale Vorhofflimmermuster könnten auch prognostische Relevanz für das Fortschreiten der Erkrankung haben. Zum Beispiel könnten Autofluoreszenzwerte verwendet werden, um zu beurteilen, ob Drusen an Größe zunehmen oder sich bereits in einer Regression zur Atrophie befinden. Es konnte bereits gezeigt werden, dass veränderte periläsionale Muster von Vorhofflimmern bei geografischer Atrophie das Fortschreiten der Atrophie im Laufe der Zeit maßgeblich beeinflussen18. Darüber hinaus könnten lokale Autofluoreszenzmuster weitere Details über den Zustand des RPE verraten. Die optische Kohärenztomographie (OCT) zeigt häufig eine Hyperreflexion in die Choriocapillaris, obwohl die RPE-Schicht intakt erscheint. Ein multimodaler Ansatz, der lokale QAF-Werte und OCT kombiniert, könnte helfen, Läsionen mit einem hohen Risiko für RPE-Störung und drohende Atrophie zu differenzieren.
Ein Grund, warum in Studien keine ortsaufgelösten Analysen durchgeführt wurden, liegt darin, dass die am häufigsten verwendete Software der Hersteller kein Werkzeug für diese Art von Analysen bereitstellt. Die Eigenschaften verschiedener Läsionen in Abhängigkeit vom AMD-Krankheitsstadium könnten die Pathogenese der AMD weiter erklären. Daher wäre ein Instrument zur Messung des regionalen, läsionsspezifischen Vorhofflimmerns wünschenswert. Um Läsionen, die sich in der gesamten Netzhaut befinden, genau vergleichen zu können, benötigt der Arbeitsablauf eine Möglichkeit, unterschiedliche Grade von Vorhofflimmern im menschlichen Fundus zu berücksichtigen19. Am zentralsten ist der Vorhofflimmern aufgrund der Abschattungseffekte des Makulapigments und der unterschiedlichen Körnchenzahlen charakteristisch niedriger20,21.
Der AF erreicht seinen Höhepunkt bei ~9° (Abstand zur Fovea in alle Richtungen) und nimmt peripher stärker ab4. Würde man also die absoluten Werte der AF-Pegel von weichen Drusen (in Bereichen mit niedrigem AF an der Fovea und Parafovea) und SDDs (in Bereichen mit hohem AF parazentral lokalisiert) vergleichen, wären die Ergebnisse nicht vergleichbar22. Inspiriert von der Arbeit von Pfau et al. und dem Konzept des Sensitivitätsverlusts (Korrektur der in AMD gemessenen Empfindlichkeit für den Sehhügel [abnehmende Netzhautempfindlichkeit mit Abstand zur Fovea] gesunder Kontrollen) für die funduskontrollierte Perimetrie wird Vorhofflimmern mit standardisierten Vorhofflimmerwerten in der gesamten Makula verglichen23,24. Die Ergebnisse werden als Z-Scores (numerische Messung der Beziehung eines Regions of Interest-Werts zum Mittelwert) angegeben.
Das Ziel dieser Studie ist es, den Einsatz eines neuen Instruments zur Messung der lokalen QAF-Spiegel bei verschiedenen Arten von Läsionen bei Patienten mit AMD zu evaluieren. Dieses Gerät wurde entwickelt, um den Autofluoreszenzgrad von Läsionen zu messen, die auf OCT-Scans identifiziert wurden. Dies ermöglicht die Beurteilung des lokalen Autofluoreszenzniveaus in Läsionen, wie z. B. weichen Drusen oder SDDs, und ermöglicht die Verfolgung von AF-Veränderungen von Läsionen im Laufe der Zeit. Der potenzielle Nutzen dieses Werkzeugs besteht darin, einen neuen strukturellen Biomarker zu ermöglichen, der den Zustand des RPE schätzt und möglicherweise einen prognostischen Wert für die untersuchten Läsionen hat.

<table><tbody><tr><td>BatchStandardRetina Plugin</td> n.a.n.a.n.a.FIJI <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>(Image J)</td><td>n.a.n.a.n.n.a.Mark_Bscans_OCT</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Plugin</td> n.a.n.a.n.a.Microspft <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>office</td><td>Microsoft</td><td>n.a.n.a.QAF_xml_reader</td><td></td></tr> <tr><td>Plugin</td><td>n.a.n.a.n.a.Register_OCT_2</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Plugin</td><td>n.a.</td><td>n.a.</td><td>n.a.</td></tr><tr><td>Spectralis</td><td>Heidelberg Engineering</td><td>n.a.QAF</td> <td>Erweiterung</td></tr><tr><td>StandardRetina Plugin</td> n.a.n.a.n.a<td></td><td>.</td><td></td></tr></tbody></table>

ein workflow zur quantitativen bestimmung altersbedingter makuladegenerationsläsions-spezifischer variationen in der fundus-autofluoreszenz

A Workflow to Quantitatively Determine Age-Related Macular Degeneration Lesion-Specific Variations in Fundus Autofluorescence

Die Fundus-Autofluoreszenz-Bildgebung (FAF) ermöglicht die nicht-invasive Kartierung von intrinsischen Fluorophoren des Augenhintergrundes, insbesondere des retinalen Pigmentepithels (RPE), das jetzt mit dem Aufkommen der konfokalen Scanning-Laser-Ophthalmoskopie-basierten quantitativen Autofluoreszenz (QAF) quantifiziert werden kann. Es hat sich gezeigt, dass die QAF bei altersbedingter Makuladegeneration (AMD) im Allgemeinen am hinteren Pol erniedrigt ist. Der Zusammenhang zwischen QAF und verschiedenen AMD-Läsionen (Drusen, subretinale Drusenoidablagerungen) ist noch unklar.
In diesem Artikel wird ein Arbeitsablauf zur Bestimmung der läsionsspezifischen QAF bei AMD beschrieben. Es wird ein multimodaler In-vivo-Bildgebungsansatz verwendet, einschließlich, aber nicht beschränkt auf optische Kohärenztomographie (SD-OCT) im Spektralbereich, Makulavolumen-Scanning und QAF. Mit Hilfe von kundenspezifischen FIJI-Plug-ins wird das entsprechende QAF-Bild mit dem Nahinfrarotbild aus dem SD-OCT-Scan abgeglichen (charakteristische Landmarken, d. h. Gefäßverzweigungen). Die Foveola und der Rand des Sehnervenkopfes werden in den OCT-Bildern markiert (und in das registrierte QAF-Bild übertragen), um eine genaue Positionierung der Analysegitter zu ermöglichen.
AMD-spezifische Läsionen können dann auf einzelnen OCT-BScans oder dem QAF-Bild selbst markiert werden. Normative QAF-Karten werden erstellt, um den variierenden Mittelwert und die Standardabweichung der QAF-Werte im gesamten Fundus zu berücksichtigen (QAF-Bilder aus einer repräsentativen AMD-Gruppe wurden gemittelt, um normative retinale QAF-AMD-Standardkarten zu erstellen). Die Plug-Ins zeichnen die X- und Y-Koordinaten, den Z-Score (eine numerische Messung, die den QAF-Wert im Verhältnis zum Mittelwert der AF-Maps in Bezug auf die Standardabweichung vom Mittelwert beschreibt), den mittleren Intensitätswert, die Standardabweichung und die Anzahl der markierten Pixel auf. Die Werkzeuge bestimmen auch Z-Scores aus der Randzone markierter Läsionen. Dieser Arbeitsablauf und die Analysewerkzeuge werden das Verständnis der Pathophysiologie und der klinischen AF-Bildinterpretation bei AMD verbessern.

Anzeigen der Ausgabe Um die Ergebnisse angemessen analysieren und Schlussfolgerungen daraus ziehen zu können, ist es wichtig, die Ausgabedatei von Mark_Bscans_OCT zu verstehen. Die ersten drei Spalten sind nach der Fall-ID, der Lateralität der Datei und der ausgewählten Imaging-Modalität beschriftet. Die vierte Spalte wird nach Modus bezeichnet und ist mit Z-Score beschriftet. Beachten Sie, dass Mark BScans zum Zeitpunkt des Schreibens dieses Textes nur alle Läsionen auf einmal berechnen kann. Die Zeilen beziehen sich auf ISO-Hüllen, deren Abstände vom äußeren Rand der Läsion in den unteren und oberen Spalten der Tabelle angegeben sind. Iso-Hüllen messen AF in z-Scores (im Falle von QAF) in einem bestimmten Umfang, der die Läsion umgibt. Beachten Sie, dass der Minimalwert eines Pixels in einer ISO-Hülle in den Spalten mit der Bezeichnung min zu finden ist, während die Spalten mit den Bezeichnungen median, max, mean und stdev jeweils den Median, das Maximum, den Mittelwert und die Standardabweichung des Mittelwerts der Pixelwerte in eineriso-Hülle enthalten. Die Spalte n enthält die Gesamtzahl der Pixel in einer Iso-Hülle. Abbildung 1 zeigt eine einzelne markierte weiche Drusen eines 84-jährigen männlichen Patienten mit intermediärer altersbedingter Makuladegeneration (iAMD).
Abbildung 2 zeigt das linke Auge eines repräsentativen Patienten mit SDDs, die mit dem QAF-Workflow-Tool markiert wurden (Abbildung 3). SDDs bei diesem Patienten waren mit einem reduzierten Vorhofflimmern assoziiert (Z-Score = -0,4 ± 0,2). In ähnlicher Weise zeigten die Iso-Hüllen um das SDD herum einen reduzierten AF (z. B. nächstgelegene Iso-Hülle = -0,3 ± 0,3) im Vergleich zur StandardRetina. Eine plausible Erklärung für dieses Phänomen könnten Abschattungseffekte (verminderte Transluzenz) von SDD-Läsionen auf dem RPE sein. Der Einsatz von SDDs war vorbildlich. Das Tool ermöglicht die Beurteilung des lokalen Vorhofflimmerns auch bei anderen Läsionen, wie z. B. Drusen. Darüber hinaus ermöglicht das Tool die Verfolgung von AF-Veränderungen von Läsionen im Laufe der Zeit.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65238/65238fig01.jpg"> Abbildung 1: Eine einzelne markierte weiche Drusen eines 84-jährigen männlichen Patienten mit intermediärer altersbedingter Makuladegeneration (iAMD). (A) Das QAF-Bild eines linken Auges mit dem markierten Drusen. (B) Nahaufnahme der Drusen: braune Mitte, die die markierten Drusen darstellt, und farbige Bänder, die die umgebenden Iso-Rümpfe darstellen. Die folgende Tabelle zeigt die Ausgabedatei. QAF-Drusen-Werte werden mit entsprechenden QAF-Werten der entsprechenden Exzentrizität aus der StandardRetina verglichen. Dies führt zu Z-Werten, die eine Abweichung vom Mittelwert der nicht betroffenen Bereiche darstellen. Das blaue Kästchen zeigt von links nach rechts: die Fall-ID, die Lateralität des Auges, die verwendete Modalität und die gewünschte Ausgabe (in diesem Fall Z-Scores). Spalten innerhalb des orangefarbenen Kastens zeigen die Grenzen der gemessenen Fläche in Millimetern an (untere = untere Grenze, obere = obere Grenze). Das grüne Kästchen beschriftet die Spalten mit den QAF-Messungen. Diese enthalten von links nach rechts das Minimum, den Median, das Maximum, die Anzahl der Pixel, den Mittelwert und die Standardabweichung des Mittelwerts. Jede Zeile stellt eine Iso-Hülle dar, Zeilen innerhalb des blauen Kästchens stellen Werte innerhalb der Läsion dar und Zeilen innerhalb des violetten Kästchens zeigen die Iso-Hüllen, die jede Läsion umgeben (von oben nach unten mit zunehmendem Abstand zur Läsion). Maßstabsleiste = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65238/65238fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65238/65238fig02.jpg"> Abbildung 2: Markierte SDDs in einem QAF-Bild einer 80-jährigen Patientin mit AMD im Frühstadium. (A) SDDs sind im QAF-Bild zu sehen. Das gleiche QAF-Bild wird mit aufgedruckten Annotationen von SDDs gezeigt. (B) Um jede markierte Läsion herum sind die Iso-Hüllen mit einer Farbkodierung (hellgrün, dunkelgrün und rot) dargestellt. (C) Eine vergrößerte Version des blauen Rechtecks. Der äußere Rand jedes SDD ist blau markiert. Abkürzungen: QAF = quantitative Autofluoreszenz; AMD = altersbedingte Makuladegeneration; SDD = subretinale Drusenoidablagerung. Maßstabsleiste = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65238/65238fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65238/65238fig03.jpg"> Abbildung 3: Arbeitsablauf zur Bestimmung des Vorhofflimmerns von Läsionen. Diese Abbildung visualisiert die Software-Plug-ins, die zur Bestimmung des läsionsspezifischen Vorhofflimmerns erforderlich sind. (A) Das Bild zeigt ein farbkodiertes QAF-Bild, das zur Visualisierung der Verteilung von QAF-Werten verwendet werden kann, aber nicht für weitere Analysen verwendet werden sollte. (B) Ein QAF-Bild im Vordergrund mit dem Infrarotbild des SD-OCT-Scans im Hintergrund. Damit soll die Ausrichtung anhand von Gefäßverzweigungen sichtbar gemacht werden. Dies kann mit dem Register_OCT_2-Plug-in erfolgen. (C) Ein StandardRetina, das zur Messung der Z-Score-Werte von Läsionen verwendet wird. StandardRetinas können mit StandardRetina/BatchStandardRetina erstellt werden. (D) Es wird ein BScan mit blauen Pfeilen dargestellt, die auf SDDs zeigen, die durch gelbe Linien hervorgehoben sind (Hinweis: Läsionen werden immer unterhalb des RPE markiert, unabhängig von der Lokalisation in z-Richtung). (E) Alle markierten Läsionen sind auf einem QAF-Bild aufgedruckt (siehe Abbildung 1). Die letzten beiden Schritte werden mit dem Mark_BScans_OCT-Plug-in ausgeführt. Abkürzungen: AF = Autofluoreszenz; QAF = quantitative Autofluoreszenz; SDD = subretinale Drusenoidablagerung; IR = Infrarot; RPE = retinales Pigmentepithel; SD-OCT = optische Kohärenztomographie im Spektralbereich. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65238/65238fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Diese Forschungsarbeit beschreibt einen Arbeitsablauf zur Bestimmung und zum Vergleich von Autofluoreszenzniveaus aus einzelnen interessierenden Regionen (z. B. Drusen- und subretinale Drusenoidablagerungen bei altersbedingter Makuladegeneration [AMD]) unter Berücksichtigung unterschiedlicher Autofluoreszenzniveaus im gesamten Fundus.

Ein Workflow zur quantitativen Bestimmung altersbedingter Makuladegenerationsläsions-spezifischer Variationen in der Fundus-Autofluoreszenz

Fundus autofluorescence (FAF) imaging allows the noninvasive mapping of intrinsic fluorophores of the ocular fundus, particularly the retinal pigment ...

Bisher war die quantitative Autofluoreszenzanalyse (QAF) auf vorgefertigte Gitter beschränkt, die die globale Autofluoreszenz des hinteren Pols des Auges analysieren. Unser Protokoll ermöglicht die Messung und den Vergleich von Autofluoreszenzintensitäten bestimmter Regionen von Interesse. Die QAF zeigte eine reduzierte Autofluoreszenzintensität bei altersbedingter Makuladegeneration.Tatsächlich widersprach dieser wichtige Befund der historischen Sichtweise der pathologischen Lipofuszin-Akkumulationen bei der AMD. Heute können die klinischen Befunde durch neue histologische Daten des retinalen Pigmentepithels auf zellulärer Ebene bestätigt werden. Die charakteristischen Autofluoreszenzwerte des Augenhintergrundes weisen starke regionale Unterschiede auf.Es scheint einen starken Zusammenhang zwischen Autofluoreszenz und Stäbchen-Photorezeptordichte zu geben. Für einen genauen Vergleich der Autofluoreszenz müssen regionale Unterschiede berücksichtigt werden, was eine Herausforderung darstellt. Wir konnten zum ersten Mal zeigen, dass die typischen AMD-Läsionen wie Drusen zusätzlich zu den allgemein reduzierten Autofluoreszenzwerten bei diesen Patienten weitere reduzierte Autofluoreszenzintensitäten aufweisen.Wir konzentrieren uns derzeit auf die Spektralanalyse des emittierten Lichts von Fluorophoren aus dem retinalen Pigmentepithel sowohl in vivo als auch in ex vivo Umgebungen. Mit diesem Ansatz erhoffen wir uns bessere Informationen über die Physiologie und Pathophysiologie der Photorezeptoren und des retinalen Pigmentepithels in gesunden und verstorbenen Augen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

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Ein Workflow zur quantitativen Bestimmung altersbedingter Makuladegenerationsläsions-spezifischer Variationen in der Fundus-Autofluoreszenz (Video) | JoVE Journal

Ein Workflow zur quantitativen Bestimmung altersbedingter Makuladegenerationsläsions-spezifischer Variationen in der Fundus-Autofluoreszenz

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