Optimierter intravitaler Bildgebungsansatz für die Langzeitüberwachung der Dynamik des Epithelgewebes auf einem inversen konfokalen Mikroskop
June 30th, 2023
Das Protokoll stellt ein neues Werkzeug zur Vereinfachung der intravitalen Bildgebung mittels invertierter konfokaler Mikroskopie dar.
Wir haben ein Werkzeug entwickelt, um intravitale Bildgebung an lebenden Mäusen mit einem inversen konfokalen Mikroskop durchzuführen. Dies ermöglicht es uns, die Dynamik der Hautzellen während der gesamten Homöostase zu verfolgen und das Zellverhalten während des Krankheitsbeginns und -fortschreitens zu vergleichen. Die Multiphotonenmikroskopie ist der primäre Ansatz, um eine intravitale Zellverfolgung zu erreichen.
Zu den Nachteilen dieser Mikroskope gehören jedoch die begrenzte Vielseitigkeit der täglichen Bildgebung, die hohen Kosten und die technische Komplexität. Unser neues Tool ermöglicht den Einsatz vielseitiger inverser konfokaler Mikroskope für die In-vivo-Intravital-Bildgebung. Durch Modifikation der Designdatei können die Abmessungen des Tischeinsatzes an jedes inverse Mikroskop angepasst werden.
Das Objektivloch kann in der Größe geändert und neu positioniert werden, um es an jedes Tiermodell und Gewebe Ihrer Wahl anzupassen.
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Überblick
Diese Studie stellt ein neuartiges Werkzeug für die Durchführung von Intravital-Bildgebung mittels invertierter konfokaler Mikroskopie an lebenden Mäusen vor, das es Forschern ermöglicht, die Dynamik von Hautzellen während der Homöostase und des Krankheitsverlaufs zu verfolgen. Das neue Werkzeug adressiert die Einschränkungen der Multiphotonenmikroskopie und macht die Intravital-Bildgebung zugänglicher und vielseitiger.
Wichtige Studienkomponenten
Forschungsbereich
- Intravital-Bildgebung
- Dynamik von Hautzellen
- Mikroskopie-Techniken
Hintergrund
- Die aktuellen Einschränkungen der Multiphotonenmikroskopie umfassen hohe Kosten und technische Komplexität.
- Invertierte konfokale Mikroskope bieten vielseitige Bildgebungsoptionen für lebende Gewebe.
- Das angepasste Design ermöglicht die Anpassung an verschiedene Tiermodelle.
Verwendete Methoden
- Invertierte konfokale Mikroskopie mit kundenspezifischen 3D-gedruckten Einsätzen
- Lebende Mäuse als biologisches System
- Anpassbares Bildgebungs-Setup für verschiedene Gewebe
Hauptergebnisse
- Erfolgreiche Aufnahme von Z-Stacks von fluoreszenzmarkiertem Ohrgewebe mit minimaler Drift.
- Kontinuierliche Bildgebung von Hautzellen (mCherry und GFP positiv) über längere Zeiträume.
- Validierung der Effektivität der 3D-gedruckten Live-Bildgebungseinsätze für stabile Bildgebung.
Schlussfolgerungen
- Diese Studie demonstriert einen innovativen Ansatz zur Verbesserung der Intravital-Bildgebungsmöglichkeiten.
- Das Werkzeug verbessert die Fähigkeit, zelluläre Dynamiken in lebenden Modellen zu untersuchen und treibt die zellbiologische Forschung voran.
