Präparation und Immunfluoreszenzfärbung von Bündeln und Einzelfaserzellen aus der Hirnrinde und dem Zellkern der Augenlinse

Die Linse ist ein transparentes ellipsoides Organ in der vorderen Augenkammer und ist für die feine Fokussierung des Lichts auf die Netzhaut verantwortlich, um ein klares Bild zu erzeugen. Die Funktion der Linse beruht auf ihren biomechanischen Eigenschaften, komplexe Verflechtungen zwischen den Linsenfaserzellen haben sich kürzlich als wichtig für die Linsensteifigkeit erwiesen. Während die spezialisierte Morphologie von Linsenfaserzellen bisher elektronenmikroskopisch beschrieben wurde, ist nur wenig über die Proteine bekannt, die für diese ineinandergreifenden Membranen benötigt werden.

Bisherige Studien stützten sich auf Linsengewebeschnitte, die keine eindeutige Visualisierung der komplexen Zellarchitektur ermöglichen. Wir haben eine neuartige Technik entwickelt und perfektioniert, um die komplexen Membranverflechtungen zwischen Linsenfaserzellen für die Färbung und konfokale mikroskopische Bildgebung spezifischer Proteine originalgetreu zu erhalten. In diesem Protokoll gibt es auch eine neue Methode zur Färbung der Faserzellen aus der Mitte der Linse, die auch als Linsenkern bezeichnet wird.

Diese Methode öffnet die Tür zum Verständnis der Differenzierung und Reifung von Faserzellen, indem sie die Mechanismen der Bildung und Veränderungen in der Membraninterdigitation untersucht.