Name: Messung der mitochondrialen Funktion von naiven und Effektor-CD8-T-Zellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Erfahren Sie, wie der Mito Stress Test die mitochondriale Funktion von naiven und Effektor-CD8-T-Zellen misst. Diese Methode ermöglicht Echtzeitanalysen zur Untersuchung von T-Zell-Rezeptor-Signalwegen und metabolischer Flexibilität.

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<table><tbody><tr><td>Antimycin A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD28</td><td>Biolegend</td><td>102116</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD3/CD28 Dynabeads</td><td>ThermoFisher</td><td>11456D</td><td></td></tr><tr><td>Biotinyliertes Anti-CD3</td><td>Biolegend</td><td>317320</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108321-42-2</td><td></td></tr><tr><td>CD8a+ T-Zell-Isolationskit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>Zellsiebe (100 & Mikro; m)</td><td>CELL TREAT</td><td>229485</td><td></td></tr><tr><td>Ethylendiamintetraessigsäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>26873-85-8</td><td>Dichtegradient Medium&nbsp;</td></tr><tr><td>FCCP ((4-(trifluormethoxy)phenyl)carbonohydrazonoyldicyanid)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Glukose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-6152</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>LS Säulen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>Säulen mit positiver Selektion</td></tr><tr><td>Magnetische Zelltrennsäule</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-301</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotiterplatte</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75351</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>113-24-6</td><td></td></tr><tr><td>Recobinant IL-2</td><td>PeproTech</td><td>200-02</td><td></td></tr><tr><td>Rotenon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Seepferdchen-Medium</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td></td></tr><tr><td>Sensorkartusche</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9275</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 6-Well-Platte</td><td>CELL TREAT</td><td>230601</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 24-Well-Platte</td><td>CELL TREAT</td><td>229524</td><td></td></tr><tr><td>XF Calibrant</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr></tbody></table>

messung der mitochondrialen funktion von naiven und effektor-cd8-t-zellen

Measuring Mitochondrial Function of Na&#239;ve and Effector CD8 T Cells

Die glykolytischen und oxidativen metabolischen Kapazitäten können mit einem mitochondrialen funktionellen Assay gemessen werden, der die Kapazitäten bewertet, indem Komponenten der Elektronentransportkette zu bestimmten Zeitpunkten angegriffen werden (Abbildung 2A). Verschiedene Injektionsschemata können auf die Anschlüsse der Sensorkartuschen geladen werden, um den herkömmlichen Assay zu modifizieren und die akute TCR-Stimulation zu beurteilen (Abbildung 2B,C<...

Messung der mitochondrialen Funktion von naiven und Effektor-CD8-T-Zellen

Understanding how immunometabolism impacts the function, differentiation, and fate of lymphocytes has garnered significant interest and attention. ...

measuring-mitochondrial-function-of-nave-and-effector-cd8-t-cells

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Zell-vermittelten Lymphozytotoxizität (CML)-Assays können verwendet werden, um autoreaktive Reaktionen und Studium Mechanismen des Zelltods in vitro zu testen. Allerdings kann die Verwendung lebender Zellen konfokale mikroskopische Bildgebung mit Fluoreszenzfarbstoffen, die Art und Kinetik der Zelltod als auch die Wege genutzt näher untersucht werden.

Methoden zur Beta Cell Death vermittelt durch zytotoxische T-Lymphozyten Beurteilung

Dieses Video zeigt die Beurteilung der mitochondrialen Funktion von zerebralen vaskulären endothelialen (CVE) Zellen mit Hilfe eines extrazellulären Flux-Assays. CVE-Zellen werden in einer extrazellulären Flussmittel-Zellkulturplatte plattiert. Extrazelluläre Flusssensoren werden hydratisiert, bevor sie in den Bioanalysator geladen und kalibriert werden. Die Platte mit den Zellen wird dann zur Analyse geladen.

Beurteilung der mitochondrialen Funktion in zerebralen vaskulären Endothelzellen

Dieses Protokoll beschreibt einen sensitiven, zellbasierten Zytotoxizitätstest. Durch die Aufzählung der Abnahme der Häufigkeit von lebenden CD4+ T-Zielzellen in Gegenwart einer zunehmenden Anzahl von Effektor-CD8+ T-Zellen ermöglicht dieser Assay die direkte Beurteilung der zytolytischen Aktivität von antigenspezifischen CD8+ T-Zellen.

Zellbasierter Durchflusszytometrie-Assay zur Messung der zytotoxischen Aktivität

Beschrieben wird hier ein Verfahren zur Detektion und Quantifizierung der mitochondrialen Außenmembran-Proteine ​​durch Immunmarkierung von Mitochondrien aus Nagetiergewebe und Analyse durch Durchflusszytometrie Strom isoliert. Diese Methode kann erweitert werden, um funktionale Aspekte der mitochondrialen Subpopulationen zu bewerten.

Immundetektion von Außenmembranproteinen mittels Durchflusszytometrie von isolierten Mitochondrien

Dieser Artikel beschreibt eine leistungsfähige Methode zur Quantifizierung von Mitochondrien oder Lysosomen in lebenden Zellen. Die Kombination aus Lysosomen oder Mitochondrien-spezifische Farbstoffe mit Gewebekulturen konjugierten Antikörpern gegen Oberflächenmarker ermöglicht die Quantifizierung dieser Organellen in gemischten Zell-Populationen, wie primäre Zellen mithilfe von Gewebeproben, geerntet Multicolor Durchflusszytometrie.

Multicolor Flow Cytometry-basierte Quantifizierung der Mitochondrien, Lysosomen in T-Zellen

Wir beschreiben hier einen in vivo tötenden Assay basierenden Strömungszysam, der die Untersuchung der Immunodominanz in zytotoxischen T-Lymphozyten (CTL) auf ein Modell-Tumor-Antigen ermöglicht. Wir stellen Beispiele dafür zur Verfügung, wie dieser elegante Test für mechanistische Studien und für die Wirksamkeit von Medikamenten eingesetzt werden kann.

Schneider In Vivo Cytotoxicity Assays zur Untersuchung von Immunodominanz in modularspezifischen CD8+ T Cell-Reaktionen

Hier beschreiben wir eine zuverlässige Methode zur Messung des mitochondrialen Massen- und Membranpotenzials in ex vivo kultivierten hämatopoetischen Stammzellen und T-Zellen.

Messung des mitochondrialen Masse- und Membranpotenzials in hämatopoetischen Stammzellen und T-Zellen durch Durchflusszytometrie

Die metabolische Anpassung ist für T-Zellen von grundlegender Bedeutung, da sie Differenzierung, Persistenz und Zytotoxizität bestimmt. Hier wird ein optimiertes Protokoll zur Überwachung der mitochondrialen Atmung in ex vivo Zytokin-differenzierten humanen primären T-Zellen vorgestellt.

Echtzeitüberwachung der mitochondrialen Atmung in zytokindifferenzierten humanen primären T-Zellen

Es wird ein Verfahren zur Untersuchung der Dynamik des mitochondrialen DNA-Stoffwechsels (mtDNA) in Zellen unter Verwendung eines Multi-Well-Plattenformats und automatisierter Immunfluoreszenzbildgebung zum Nachweis und zur Quantifizierung der mtDNA-Synthese und -Verteilung beschrieben. Dies kann weiter genutzt werden, um die Auswirkungen verschiedener Inhibitoren, zellulärer Belastungen und Genstilllegung auf den mtDNA-Stoffwechsel zu untersuchen.

Bildbasierte Hochdurchsatz-Quantifizierung der mitochondrialen DNA-Synthese und -Verteilung

Diese Technik beschreibt einen effektiven Arbeitsablauf zur Visualisierung und quantitativen Messung des mitochondrialen Membranpotentials und des Superoxidspiegels in HeLa-Zellen mittels fluoreszenzbasierter Live-Bildgebung.

Fluoreszenzbasierte Quantifizierung des mitochondrialen Membranpotentials und des Superoxidspiegels mittels Live-Bildgebung in HeLa-Zellen

Die Methoden zur Untersuchung der mitochondrialen Bioenergetik unter physiologisch relevanten Substratkonzentrationen in Immunzellen sind begrenzt. Wir stellen ein detailliertes Protokoll zur Verfügung, das hochauflösende Fluorespirometrie verwendet, um Veränderungen in der Reaktion des mitochondrialen Membranpotentials auf den Energiebedarf in menschlichen T-Zellen, Monozyten und peripheren mononukleären Zellen zu bewerten.

Hochauflösende Fluorespirometrie zur Beurteilung dynamischer Veränderungen des mitochondrialen Membranpotentials in menschlichen Immunzellen

Erfahren Sie, wie der Mito Stress Test die mitochondriale Funktion von naiven und Effektor-CD8-T-Zellen misst. Diese Methode ermöglicht Echtzeitanalysen zur Untersuchung von T-Zell-Rezeptor-Signalwegen und metabolischer Flexibilität.

Messung der mitochondrialen Funktion von naiven und Effektor-CD8-T-Zellen

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