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Pseudotypisierte Viren als molekulares Werkzeug zur Überwachung humoraler Immunantworten gegen SA...
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JoVE Journal Immunology and Infection
Pseudotyped Viruses As a Molecular Tool to Monitor Humoral Immune Responses Against SARS-CoV-2 Via Neutralization Assay

Pseudotypisierte Viren als molekulares Werkzeug zur Überwachung humoraler Immunantworten gegen SARS-CoV-2 mittels Neutralisationsassay

Full Text
2,633 Views
05:49 min
November 21, 2023

DOI: 10.3791/65658-v

Tobia Fantoni*1, Michele Bissoli*1, Chiara Stefani1, Mauro Voi1, Alexandrina Dabija1, Rebecca Casula1, Domenico Luca Minafra1, Julys da Fonseca Palmeira2, Enrique Roberto Argañaraz2, Martin Mayora-Neto3, Nigel J. Temperton3, Donato Zipeto1, Alessandra Ruggiero1

1Department of Neuroscience, Biomedicine and Movement,University of Verona, 2Laboratory of Molecular Neurovirology, Faculty of Health Science,University of Brasília, 3Viral Pseudotype Unit, Medway School of Pharmacy,Universities of Kent and Greenwich at Medway

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

Pseudotyped viruses (PVs) are molecular tools used to study host-virus interactions and test neutralizing activity of serum samples. This article presents a methodology for producing SARS-CoV-2 pseudotyped viruses, providing a safer alternative to live viruses for research.

Key Study Components

Area of Science

  • Virology
  • Immunology
  • Vaccine research

Background

  • Pseudotyped viruses are replication-defective virions.
  • They allow for safer studies of pathogenic interactions.
  • Traditional Y type viruses are highly pathogenic and not suitable for BSL-2 labs.
  • Research aims to understand antibody roles in post-vaccination immunity.

Purpose of Study

  • To develop a protocol for producing SARS-CoV-2 pseudotyped viruses.
  • To assess the neutralizing ability of serum from vaccinated individuals.
  • To provide a safer alternative for studying virus-host interactions.

Methods Used

  • Production of pseudotyped viruses using a three-plasmid system.
  • Neutralization assays to evaluate serum samples.
  • Use of human embryonic kidney 293T cells for virus production.
  • Implementation of BSL-2 laboratory protocols.

Main Results

  • Successful production of SARS-CoV-2 pseudotyped viruses.
  • Demonstrated ability to test neutralizing antibodies in serum samples.
  • Highlighted the safety and efficacy of using PVs in research.
  • Identified potential for future studies on immunity maintenance.

Conclusions

  • Pseudotyped viruses provide a valuable tool for studying COVID-19.
  • They enable safer research on neutralizing antibodies post-vaccination.
  • This methodology can be applied to other viral studies.

Frequently Asked Questions

What are pseudotyped viruses?
Pseudotyped viruses are replication-defective virions used to study host-virus interactions safely.
How are pseudotyped viruses produced?
They are produced using a three-plasmid system in human embryonic kidney 293T cells.
Why are pseudotyped viruses important?
They allow researchers to study viral interactions without the risks associated with live viruses.
What is the purpose of neutralization assays?
To evaluate the neutralizing ability of antibodies in serum samples from vaccinated individuals.
What safety measures are in place when using pseudotyped viruses?
Pseudotyped viruses can be handled in BSL-2 laboratories, reducing risk compared to live viruses.

Pseudotypisierte Viren (PVs) sind replikationsdefekte Virionen, die verwendet werden, um Wirt-Virus-Interaktionen unter sichereren Bedingungen zu untersuchen als mit authentischen Viren. Hier wird ein detailliertes Protokoll vorgestellt, das zeigt, wie SARS-CoV-2-PVs verwendet werden können, um die neutralisierende Fähigkeit des Serums von Patienten nach einer COVID-19-Impfung zu testen.

Pseudotypisierte Viren sind molekulare Werkzeuge, die verwendet werden können, um Wirt-Virus-Interaktionen zu untersuchen und die neutralisierende Aktivität von Serumproben zu testen. In der Arbeit, die wir heute vorstellen, wird eine allgemeine Methodik zur Herstellung pseudotypisierter Viren auf der Basis von freiem Plasmid vorgestellt. Für Neutralisationsassays werden in der Regel Y-Typ-Viren verwendet, die jedoch hochpathogen sind und nicht in einem BSL-2-Labor gehandhabt werden können, so dass dieses System nur im großen Maßstab anwendbar ist.

Die Technologie der Pseudoviren kann im Vergleich zu lebenden Viren eine sicherere Alternative sein, um die Untersuchung der Interaktion zwischen Krankheitserregern und Wirten zu ermöglichen und die neutralisierende Aktivität von Antikörpern zu testen. In zukünftigen Experimenten wird die Rolle spezifischer Antikörper bei der Aufrechterhaltung der Immunität nach einer Impfung mit Hilfe der Technologie von Pseudoviren untersucht.

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