Bestimmung der gerinnungsfördernden Aktivität extrazellulärer Vesikel (EV) mittels EV-aktivierter Gerinnungszeit (EV-ACT)
4. August 2023
Dieses Protokoll untersucht die Verwendung von extrazellulärem Vesikel (EV)-reichem Plasma als Indikator für die Gerinnungsfähigkeit von EV. EV-reiches Plasma wird durch einen Prozess der Differenzzentrifugation und anschließenden Rekalkifizierung gewonnen.
Unser Hauptaugenmerk liegt auf Gerinnungsstörungen bei Patienten, die ein Schädel-Hirn-Trauma erlitten haben. In dieser Studie versuchen wir, Veränderungen in der Gerinnungsfunktion mit der extrazellulären vesikalen Aktivität und der Gerinnungszeit zu überwachen. Unsere Teams konzentrieren sich auf die Erforschung von Hirnverletzungen.
Und bei der Hirnverletzung handelt es sich um eine schwere Erkrankung, die wir als hyperkoagulierten Zustand bezeichnen. Das ist sehr schwer zu messen. Und wir finden im Blut des Patienten einige Mikrovesikel, die wir extrazelluläre Vesikel nennen, einschließlich des Apoptosekörpers, des Mikrovesikels und des Exosoms.
Und sie unterscheiden sich in der pro-koagulierten Fähigkeit. Wir müssen also eine Methode finden, um die Fähigkeit zu messen. Und mit dieser Methode können wir schnell den Unterschied der extrazellulären Vesikel finden.
Das ist sehr wichtig. Abhängig von dieser Maßnahme können wir viele Dinge tun. Wir haben sichergestellt, dass es bei den TPI-Mäusen und dem klinischen Patienten, insbesondere im peripheren Kreislauf, eine gewisse Embolisation kosten wird.
Das ist in der Klinik sehr, sehr ernst. Unser Protokoll bot aufgrund seiner Einfachheit, Kosteneffizienz und Geschwindigkeit einen erheblichen Vorteil gegenüber anderen Techniken. Es ermöglicht die Durchführung eines Blutgerinnungstests am Krankenbett, wodurch eine umfangreiche Laborverarbeitung entfällt.
Unsere Forschung hat eine neue Methode etabliert, mit der die hyperkoagulierten Zustände des peripheren Blutes gemessen werden können. Es kann nicht nur bei TPI eingesetzt werden, sondern auch bei anderen Erkrankungen wie Sepsis, Präeklampsie, Tumor und Hämatologie. Für die Zukunft haben wir geplant, das Scannen auf klinische Hyper zu untersuchen, eine Erkrankung, die das Risiko eines Blutgerinnsels erhöht.
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Übersicht
Diese Studie untersucht Gerinnungsstörungen bei Patienten mit Hirntrauma, indem die Gerinnungsfunktion über die Aktivität extrazellulärer Vesikel (EV) überwacht wird. Die Forschung konzentriert sich auf den hyperkoagulablen Zustand, der schwer messbar ist, und zielt darauf ab, eine Methode zur Beurteilung der prokoagulativen Fähigkeit von EVs in Blutproben zu entwickeln.
Wesentliche Studienkomponenten
Bereich der Wissenschaft
- Neurowissenschaften
- Gerinnungsstörungen
- Extrazelluläre Vesikel
Hintergrund
- Gerinnungsstörungen treten bei Patienten mit Hirntrauma häufig auf.
- Extrazelluläre Vesikel (EVs) spielen eine Rolle bei Gerinnungsprozessen.
- Die Messung des hyperkoagulablen Zustands ist komplex.
- Unterschiedliche Typen von EVs weisen unterschiedliche prokoagulante Fähigkeiten auf.
Zweck der Studie
- Um Veränderungen der Gerinnungsfunktion in Bezug auf die Aktivität von EVs zu überwachen.
- Um eine Methode zur Messung der gerinnungsfördernden Fähigkeit von EVs zu entwickeln.
- Um das Verständnis der Gerinnung bei Gehirnverletzungen zu vertiefen.
Verwendete Methoden
- Sammlung von EV-reichem Plasma durch Differenzialzentrifugation.
- Rekalzifizierung von Plasmaproben zur Analyse.
- Beurteilung der Gerinnungsfunktion mithilfe der EV-Aktivität.
- Überwachung von Mikrovesikeln, einschließlich Apoptosekörpern und Exosomen.
Hauptergebnisse
- Identifizierte Unterschiede in den prokoagulativen Fähigkeiten verschiedener EVs.
- Entwickelte eine schnelle Methode zur Beurteilung des Gerinnungsstatus.
- Zeigte die Bedeutung von EVs für das Verständnis von Gerinnungsstörungen auf.
- Lieferte Erkenntnisse über den Zusammenhang zwischen Hirnverletzung und Gerinnung.
Schlussfolgerungen
- Die Studie bietet einen neuen Ansatz zur Messung der Gerinnung bei Patienten mit Hirntrauma.
- Extrazelluläre Vesikel sind entscheidende Indikatoren für die Gerinnungsfähigkeit.
- Weitere Untersuchungen sind erforderlich, um die klinischen Implikationen dieser Befunde zu erforschen.
Häufig gestellte Fragen
Aussagekräftige Relevanz für die Industrie
Die Quantifizierung der prokoagulanten Aktivität von extrazellulären Vesikeln (EVs) schließt eine entscheidende Lücke bei der Früherkennung und Risikobewertung hyperkoagulabler Zustände in verschiedenen Krankheitskontexten. Der EV-Aktivierte Gerinnungszeit-Test (EV-ACT) ermöglicht eine schnelle, bettseitige Beurteilung der von EVs vermittelten Gerinnung und unterstützt die mechanistische Risikominderung sowie die Zielstruktur-Validierung in der translationellen Forschung. Diese Fähigkeit erhöht die Vorhersagesicherheit an entscheidenden Wendepunkten im Entdeckungs- und präklinischen Prozess.
Strategische Anwendungen in der Biopharma-Forschung und -Entwicklung
Frühe Entdeckung und Zielvalidierung
- Ermöglicht die Untersuchung von EV-vermittelten Gerinnungswegen, die für Krankheitsmechanismen relevant sind.
- Unterstützt die biologische Entlastung durch Quantifizierung der funktionellen prokoagulanten Aktivität von EVs.
- Erleichtert die Zielvalidierung für therapeutische Eingriffe, die die Freisetzung oder Aktivität von EVs modulieren.
Screening und Assay-Entwicklung
- Bietet einen standardisierten, quantitativen Test zur Beurteilung der prokoagulanten Funktion von EVs in Plasmaproben.
- Liefert reproduzierbare, echtzeitfähige Messungen der viskoelastischen Eigenschaften, die für die Optimierung von Tests geeignet sind.
- Ermöglicht eine schnelle Untersuchung von Proben aus verschiedenen Krankheitsmodellen hinsichtlich des Risikos einer Hyperkoagulabilität.
Translationale und präklinische Forschung
- Ermöglicht die Abstimmung mit krankheitsrelevanten Modellen, indem sie die durch extrazelluläre Vesikel vermittelte Hyperkoagulabilität in Proben aus Präeklampsie, Trauma und Krebserkrankungen nachweist.
- Unterstützt die kontinuierliche Übertragung von mechanistischen Erkenntnissen zur präklinischen Validierung von Biomarkern der Gerinnung.
- Gibt Hinweise für risikoadjustierte Entscheidungen über die Weiterentwicklung von Therapeutika-Kandidaten, die auf Signalwege extrazellulärer Vesikel abzielen.
Pipeline- und Workflow-Integration
Der EV-ACT-Test integriert sich in den Übergang von der Entdeckung zur präklinischen Phase, indem er die funktionelle Beurteilung von EVs sowohl in gesundem Zustand als auch bei Erkrankungen ermöglicht.
- Entdeckungsbioanalytik: Quantifiziert die EV-vermittelte prokoagulatorische Aktivität, um mechanistische Hypothesen zu klären.
- Screening: Bietet einen schnellen, reproduzierbaren Endpunkt zur Beurteilung der Hyperkoagulabilität von Proben.
- Analytik: Erzeugt quantitative Gerinnungszeitwerte für den Vergleich über verschiedene Bedingungen hinweg und für statistische Analysen.
- Translationale Forschung: Verbindet Erkenntnisse aus der Grundlagenforschung mit präklinischen Modellen durch krankheitsrelevante EV-Messungen.
- Unternehmensweite Wiederverwendung: Bietet eine skalierbare, standardisierte Plattform für laufende funktionelle EV-Studien über verschiedene Indikationen hinweg.
Operative und unternehmerische Auswirkungen
- Wissenschaftlicher Wert: Erhöht die Vorhersagesicherheit bezüglich der mit extrazellulären Vesikeln (EV) assoziierten Gerinnungsmechanismen und die Validierung von Zielstrukturen.
- Operativer Wert: Ermöglicht eine schnelle, standardisierte und reproduzierbare Point-of-Care-Testung.
- Strategischer Wert: Verbessert Entscheidungen über Fortführung oder Abbruch von Entwicklungsprojekten, indem frühzeitig handlungsrelevante Daten zu Gerinnungsrisiken bereitgestellt werden.
- Portfolio-Wirkung: Ermöglicht eine risikoadjustierte Priorisierung von Programmen, die auf EV-vermittelte Pathologien abzielen.
Durchführungsüberlegungen
- Erfordert Fachkenntnisse in der Gerinnungsbiologie und in Methoden zur Isolierung von extrazellulären Vesikeln.
- Benötigt Zugang zu viskoelastischen Analysesystemen und standardisierten Protokollen zur Plasmaaufbereitung.
- Setzt eine Abstimmung zwischen den Teams hinsichtlich der Assay-Parameter und der Standards zur Dateninterpretation voraus.
- Kann je nach Krankheitsmodell oder Probenart Anpassungen erfordern.
- Ist abhängig von der Qualität der Anreicherung und Entfernung von extrazellulären Vesikeln, um zuverlässige Ergebnisse zu erzielen.
