Name: Eine effiziente und reproduzierbare Methode zur Herstellung von Kompositpflanzen durch Agrobacterium rhizogenes-basierte Haarwurzeltransformation (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-30T14:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 9 s
Description: Lernen Sie eine effiziente Methode zur Herstellung von Kompositpflanzen durch Agrobacterium rhizogenes-basierte Haarwurzeltransformation. Diese Technik ermöglicht verbesserte Studien zur Pflanzengenfunktion und mikrobiellen Interaktionen.

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Diese Arbeit wurde vom Forschungsfonds der Universität Liaocheng (318012028) und der Natural Science Foundation der Provinz Shandong (ZR2020MC034) unterstützt.

1. Pflanzenwachstumsbedingungen und Kultur von A. rhizogenes 
<ol><li>Aussaat von Saatgut HINWEIS: Wilde Sojabohnensamen wurden im Kreis Yanggu, Liaocheng, China, gesammelt. Samen von S. americanum und der lokalen Kürbissorte Yinsu wurden auf einem Markt gekauft.<ol><li>Samen von wilder Sojabohne, S. americanum und der lokalen Kürbissorte sammeln, 1 cm tief in Vermiculit säen und gründlich gießen. Pflanzen Sie 20 Samen in 8 cm x 11 cm x 9 cm große Plastikboxen. Kultivieren Sie die Pflanzen in einer Wachstumskammer bei 24 ± 2 °C mit einem Zyklus von 16 Stunden Licht / 8 Stunden Dunkelheit bei ca. 70 % relativer Luftfeuchtigkeit. HINWEIS: Die Hüllen von wilden Sojabohnensamen müssen vor der Aussaat gebrochen werden. Konzentriert sich die Forschungsfrage auf Wechselwirkungen zwischen Pflanzen und Mikroorganismen, müssen Saatgut, Vermiculit, Kunststoffboxen und Wasser vor der Verwendung sterilisiert werden.</li>
		<li>Aktivierung und Kultur von A. rhizogenes K599 HINWEIS: Der Stamm A. rhizogenes K599 hatte einen binären Vektor pRed13052 , der ein rot fluoreszierendes Reportergen DsRed2 trug.
		<ol><li>Den A. rhizogenes-Stamm K599 aus dem Gefrierschrank bei -80 °C nehmen und die Bakterien auf festem LB-Medium (mit 50 mg/l Kanamycin und 50 mg/l Streptomycin) bei 28 °C für 48 h aktivieren.</li>
			<li>Wählen Sie einen einzelnen Klon des Stammes K599 aus und kultivieren Sie ihn 12 Stunden lang in 1 ml flüssigem, antibiotikahaltigem LB-Medium.</li>
			<li>500 μl der Bakteriensuspension werden gleichmäßig auf festem, antibiotikahaltigem LB-Medium verteilt, gefolgt von einer Inkubation bei 28 °C für 24 h.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>2. Einstufige A. rhizogenes-vermittelte Haarwurzel-Transformationsmethode
<ol><li>Hypokotyl-Inzision<ol><li>Nach 7 Tagen (definieren Sie die Aussaat der Samen als Tag 0), haben sich die Keimblätter der Sämlinge gerade entfaltet (Abbildung 1A), schneiden Sie mit einem sterilisierten, scharfen Skalpell etwa 0,5-1 cm des Hypokotyls ab (Abbildung 1B). Verwerfen Sie die Primärwurzel und einen Teil des partiellen Hypokotyls. HINWEIS: Verwenden Sie das Skalpell mit Vorsicht.</li>
	</ol></li>
	<li>K599 Impfung<ol><li>Beschichten Sie den Hypokotylschnitt mit K599-Bakterien (Abbildung 1C).</li>
		<li>Pflanzen Sie die Sämlinge in feuchten Vermiculit (Abbildung 1D).</li>
		<li>Infizieren Sie 30 Pflanzen jeder Art über die A. rhizogenes-vermittelte Haarwurzeltransformation. Gießen Sie jede Pflanze mit 5 ml resuspendierter K599-Bakteriensuspension (OD600 = 0,5-0,6) in einem viertel starken (0,25x) Gamborg B-5-Basismedium (Abbildung 1E).</li>
		<li>Decken Sie die Töpfe mit einem hochtransparenten Plastikbeutel ab (Abbildung 1F) und stellen Sie sie in eine Wachstumskammer.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Behaarte Wurzelproduktion
<ol><li>Lassen Sie die Pflanzen ~12 Tage nach der Inokulation wachsen, neue behaarte Wurzeln werden induziert und an der Inzisionsstelle erzeugt. Nach 15 Tagen erreichen die behaarten Wurzellängen typischerweise 2-5 cm (Abbildung 2).</li>
	<li>Um festzustellen, ob die produzierten Haarwurzeln transgen sind, untersuchen Sie die Expression von Reportergenen, die vom transformierten Vektor in K599 abhängig sind.<ol><li>Nachweis der Expression des Reportergens DsRed2 mit einem Chemilumineszenz-Bildgebungssystem mit grünem Anregungslicht bei 540 nm und Emission bei 600 nm (Abbildung 2B, Abbildung 2D und Abbildung 2F).</li>
	</ol></li>
</ol>

Einstufige Methode zur Transformation der haarigen Wurzel zur Weiterentwicklung der wurzelbezogenen Biologie

<ol><li>Chilton, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium+rhizogenes+inserts+T-DNA+into+the+genome+of+the+host+plant+root+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium rhizogenes inserts T-DNA into the genome of the host plant root cells.</a> Nature. 295, 432-434 (1982).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fast%2C+simple%2C+high+efficient+and+one-step+generation+of+composite+cucumber+plants+with+transgenic+roots+by+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%2C+Tissue+and+Organ+Culture+%28PCTOC%29%22%5BJournal%5D)">A fast, simple, high efficient and one-step generation of composite cucumber plants with transgenic roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation.</a> Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC). 141, 207-216 (2020).</li>
<li>Du, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+targeted+mutagenesis+in+soybean+by+TALENs+and+CRISPR%2FCas9%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Efficient targeted mutagenesis in soybean by TALENs and CRISPR/Cas9.</a> Journal of Biotechnology. 217, 90-97 (2016).</li>
<li>Nguyen, D. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+hairy+root+system+for+validation+of+plant+transformation+vector+and+CRISPR%2FCas+construct+activities+in+cucumber+%28Cucumis+sativus+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">An efficient hairy root system for validation of plant transformation vector and CRISPR/Cas construct activities in cucumber (Cucumis sativus L.).</a> Frontiers in Plant Science. 12, 770062(2022).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AtGCS+promoter-driven+clustered+regularly+interspaced+short+palindromic+repeats%2FCas9+highly+efficiently+generates+homozygous%2Fbiallelic+mutations+in+the+transformed+roots+by+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">AtGCS promoter-driven clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9 highly efficiently generates homozygous/biallelic mutations in the transformed roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation.</a> Frontiers in Plant Science. 13, 952428(2022).</li>
<li>Irigoyen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+hairy+roots+enable+high+throughput+identification+of+antimicrobials+against+Candidatus+Liberibacter+spp%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Plant hairy roots enable high throughput identification of antimicrobials against Candidatus Liberibacter spp.</a> Nature Communications. 11 (1), 5802(2020).</li>
<li>Plasencia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eucalyptus+hairy+roots%2C+a+fast%2C+efficient+and+versatile+tool+to+explore+function+and+expression+of+genes+involved+in+wood+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Biotechnology+Journal%22%5BJournal%5D)">Eucalyptus hairy roots, a fast, efficient and versatile tool to explore function and expression of genes involved in wood formation.</a> Plant Biotechnology Journal. 14 (6), 1381-1393 (2016).</li>
<li>Gutierrez-Valdes, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hairy+root+cultures-a+versatile+tool+with+multiple+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Hairy root cultures-a versatile tool with multiple applications.</a> Frontiers in Plant Science. 11, 33(2020).</li>
<li>Stougaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium+rhizogenes+as+a+vector+for+transforming+higher+plants.+Application+in+Lotus+corniculatus+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium rhizogenes as a vector for transforming higher plants. Application in Lotus corniculatus transformation.</a> Methods in Molecular Biology. 49, 49-61 (1995).</li>
<li>Kereszt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation+of+soybean+to+study+root+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of soybean to study root biology.</a> Nature Protocols. 2 (4), 948-952 (2007).</li>
<li>Ho-Plágaro, T., Huertas, R., Tamayo-Navarrete, M. I., Ocampo, J. A., García-Garrido, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation+of+tomato+suitable+for+the+study+of+arbuscular+mycorrhizal+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">An improved method for Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of tomato suitable for the study of arbuscular mycorrhizal symbiosis.</a> Plant Methods. 14, 34(2018).</li>
<li>Yu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+phosphatidylserine+synthase+IbPSS1+affords+cellular+Na%2B+homeostasis+and+salt+tolerance+by+activating+plasma+membrane+Na%2B%2FH%2B+antiport+activity+in+sweet+potato+roots%5BTitle%5D)+AND+%22Horticulture+Research%22%5BJournal%5D)">Overexpression of phosphatidylserine synthase IbPSS1 affords cellular Na+ homeostasis and salt tolerance by activating plasma membrane Na+/H+ antiport activity in sweet potato roots.</a> Horticulture Research. 7, 131(2020).</li>
<li>Boisson-Dernier, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium+rhizogenes-transformed+roots+of+Medicago+truncatula+for+the+study+of+nitrogen-fixing+and+endomycorrhizal+symbiotic+associations%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant-Microbe+Interactions%3A+MPMI%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium rhizogenes-transformed roots of Medicago truncatula for the study of nitrogen-fixing and endomycorrhizal symbiotic associations.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions: MPMI. 14 (6), 695-700 (2001).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-step+generation+of+composite+soybean+plants+with+transgenic+roots+by+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">One-step generation of composite soybean plants with transgenic roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation.</a> BMC Plant Biology. 20 (1), 208(2020).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthocyanin%2C+a+novel+and+user-friendly+reporter+for+convenient%2C+non-destructive%2C+low+cost%2C+directly+visual+selection+of+transgenic+hairy+roots+in+the+study+of+rhizobia-legume+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Anthocyanin, a novel and user-friendly reporter for convenient, non-destructive, low cost, directly visual selection of transgenic hairy roots in the study of rhizobia-legume symbiosis.</a> Plant Methods. 16, 94(2020).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+AtMYB75+as+a+reporter+gene+in+the+study+of+symbiosis+between+tomato+and+Funneliformis+mosseae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycorrhiza%22%5BJournal%5D)">Application of AtMYB75 as a reporter gene in the study of symbiosis between tomato and Funneliformis mosseae.</a> Mycorrhiza. 33 (3), 181-185 (2023).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+set+of+novel+binary+expression+vectors+for+plant+gene+function+analysis+and+genetic+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Development of a set of novel binary expression vectors for plant gene function analysis and genetic transformation.</a> Frontiers in Plant Science. 13, 1104905(2023).</li>
<li>Li, Q. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phytochrome+B+inhibits+darkness-induced+hypocotyl+adventitious+root+formation+by+stabilizing+IAA14+and+suppressing+ARF7+and+ARF19%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journal%3A+For+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Phytochrome B inhibits darkness-induced hypocotyl adventitious root formation by stabilizing IAA14 and suppressing ARF7 and ARF19.</a> The Plant Journal: For Cell and Molecular Biology. 105 (6), 1689-1702 (2021).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte zu deklarieren.

Die einstufige A. rhizogenes-vermittelte Haarwurzelmethode ist eine einfachere und effizientere Methode zur Herstellung von Mischpflanzen als die Hypokotyl-Injektionsmethode. Die einstufige ARM-Methode verbessert die Effizienz der Haarwurzeltransformation erheblich, verkürzt die Zeit bis zur Herstellung von Haarwurzeln, erhöht die Anzahl der Haarwurzeln und reduziert den Arbeitsaufwand. Das verbesserte Transformationsprotokoll ist optimal für Studien zu Symbiosen zwischen Leguminosen und Rhizobien sowie zwischen...

Agrobacterium rhizogenes ist ein gramnegatives Bodenbakterium aus der Familie der Rhizobiaceae. A. rhizogenes kann fast alle Dikotyledonen, einige wenige Monokotyledonen und einzelne Gymnospermen durch Wunden infizieren und behaarte Wurzeln in infizierten Pflanzen produzieren. Das Bakterium trägt das Ri-Plasmid (wurzelinduzierend), und die T-DNA des Ri-Plasmids trägt das Gen für die Oppinsynthese und die Rollengene (Gene des Wurzellocus). Nachdem die T-DNA des Ri-Plasmids in eine Pflanzenzelle eingedrungen und in ein Wirtschromosom integriert wurde, induziert die Expression der Rollengene die Produktion von Haarwurzeln1. Ein binärer Expressionsvektor einer Pflanze, der ein Zielgen trägt, wird in A. rhizogenes umgewandelt, und der transformierte A. rhizogenes wird verwendet, um eine Pflanze zu infizieren. Transgene Wurzeln können in infizierten Pflanzen induziert werden, wodurch zusammengesetzte Pflanzen entstehen, die transgene Wurzeln und nicht-transgene Stängel und Knospen enthalten. Im Allgemeinen kann eine zusammengesetzte Pflanze innerhalb von 14-20 Tagen erhalten werden. Die A. rhizogenes-vermittelte Haarwurzeltransformation ist bei zweikeimblättrigen Pflanzen im Allgemeinen nicht durch den Genotyp begrenzt2. Die behaarten Wurzeln, die von A. rhizogenes-infizierten Pflanzen produziert werden, zeichnen sich durch eine schnelle Wachstumsrate, eine stabile Vererbung und eine einfache Bedienung aus. Die Transformation von Haarwurzeln, die durch A. rhizogenes vermittelt wird, wird derzeit häufig zur Untersuchung der wurzelbezogenen Biologie verwendet. Darüber hinaus kann die Transformation von Haarwurzeln auch dazu verwendet werden, die Effizienz des CRISPR/Cas9-Systems 3,4,5 und der subzellulären Lokalisierung von Proteinen zu validieren und zu optimieren. Daher ist die Transformation von Haarwurzeln ein wichtiges Werkzeug in der Erforschung der Funktion von Pflanzengenen, des Metabolic Engineering und der Wechselwirkungen zwischen Wurzeln und Mikroorganismen der Rhizosphäre 6,7,8.
Kompositpflanzen mit transgenen Wurzeln, die durch Haarwurzeltransformation gewonnen werden, sind in zweikeimblättrigen Pflanzen, insbesondere in Hülsenfrüchten, weit verbreitet. Die traditionelle Methode der Injektion von A. rhizogenes in das Hypokotyl wurde verwendet, um zusammengesetzten Lotus corniculatus9, Sojabohnen10, Tomaten11, Süßkartoffeln12 und viele andere Pflanzen zu produzieren 5,8. Die Hypokotyl-Injektionsmethode ist ineffizient und führt wahrscheinlich zum Absterben junger oder winziger Hypokotylpflanzen. Daher wurde die Methode verbessert, indem die embryonalen Wurzeln abgeschnitten, der Keimlingsschnitt mit A. rhizogenes beschichtet und dann das Hypokotyl auf steriles Nährmedium für die Bewurzelungskultivierung gelegtwurde 13. Diese Schritte werden jedoch in einer sterilen Umgebung durchgeführt, und die Operationsschritte sind relativ umständlich. Insbesondere die entstehenden Mischpflanzen müssen umgepflanzt werden, was den Arbeitsaufwand erhöht. In früheren Arbeiten wurde eine einstufige A. rhizogenes-vermittelte (ARM) Haarwurzeltransformation in Gurken, Sojabohnen, Lotus japonicus, Medicago truncatula und Tomaten etabliert 2,14,15,16,17. Die Primärwurzel und ein Teil des Hypokotyls wurden entfernt, die Inzisionsstelle des verbleibenden Hypokotyls wurde mit transformiertem A. rhizogenes beschichtet und der Keimling wurde dann in feuchten, sterilen Vermiculit gepflanzt. Nach 12 Tagen Kultivierung wurden an der Inzisionsstelle behaarte Wurzeln gebildet. Die einstufige ARM-Methode ist hocheffizient und benötigt weniger Zeit, um behaarte Wurzeln zu produzieren. Auch ein Umtopfen nach der Bildung von Haarwurzeln ist nicht notwendig. Da eine mikrobielle Kontamination ohne Transplantation vermieden werden kann, kann die einstufige ARM-Methode besonders nützlich sein, wenn es darum geht, Wechselwirkungen zwischen Pflanzen und Mikroorganismen zu untersuchen, wie z. B. die symbiotische Stickstofffixierung zwischen Leguminosen und Rhizobien sowie Symbiosen zwischen Pflanzen und arbuskulären Mykorrhizapilzen. In dieser Arbeit wird ein detailliertes einstufiges A. rhizogenes-vermitteltes Haarwurzel-Transformationsprotokoll mit Beispielen von Kompositpflanzen aus wilder Sojabohne, Solanum americanum und Kürbis vorgestellt. Mit dem Protokoll können Forscher die einstufige ARM-Transformation reibungslos durchführen.

<table><tbody><tr><td>Verifizierter</td><td>Lieferant - Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A506636</tr><tr><td>LB medium</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>B540113</tr><tr><td>Kunststoffdose</td><td>LiaoSu</td><td></td><td>8 cm x 11 cm x 9 cm</td></tr><tr><td>Kürbis</td><td></td><td></td><td>lokale Sorte Yinsu</td></tr><tr><td>Streptomycin</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A610494&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tanon-5200Multi-Maschine</td><td>Tanon Co., Ltd., China</td><td>5200Multi</td><td>Chemilumineszenz-Bildgebungssystem</td></tr><tr><td>Tomate</td><td></td><td></td><td>lokale Sorte Zhongshu4</td></tr><tr><td>wilde Sojabohne</td><td></td><td></td><td>, gesammelt im Yanggu County, Liaocheng, China</td></tr></tbody></table>

eine effiziente und reproduzierbare methode zur herstellung von kompositpflanzen durch agrobacterium rhizogenes-basierte haarwurzeltransformation

An Efficient and Reproducible Method for Producing Composite Plants by Agrobacterium rhizogenes-Based Hairy Root Transformation

Die Produktion von Kompositpflanzen mit transgenen Wurzeln und nicht-transgenen Stängeln und Knospen unter Verwendung der durch Agrobacterium rhizogenes vermittelten haarigen Wurzeltransformation ist ein leistungsfähiges Werkzeug zur Untersuchung der wurzelbezogenen Biologie. Die Haarwurzeltransformation ist bei einer Vielzahl von Dikotyledonen und bei mehreren Monokotyledonenarten etabliert und nahezu unabhängig vom Genotyp. Die traditionelle Methode der Hypokotylinjektion mit A. rhizogenes zur Gewinnung von Mischpflanzen ist ineffizient, zeitaufwändig, mühsam und führt häufig zum Absterben zarter und winziger Hypokotylpflanzen. Zuvor wurde eine hocheffiziente, einstufige Haarwurzeltransformation etabliert, die durch A. rhizogenes vermittelt wird und die ein Umtopfen nach der Produktion von Haarwurzeln überflüssig macht. In dieser Studie wurden ein Teil der Hypokotyl- und Primärwurzel entfernt, die Hypokotyl-Inzisionsstelle wurde mit A. rhizogenes beschichtet und dann wurden Hypokotyle in sterilen Vermiculit gepflanzt. Nach 12 Tagen Kultivierung dehnte sich der Hypokotylschnitt aus und es wurden neue behaarte Wurzeln induziert. Dieser Artikel enthält das detaillierte Protokoll einer einstufigen Transformationsmethode, die durch A. rhizogenes vermittelt wird und deren Wirksamkeit durch die Herstellung von Mischpflanzen aus wilder Sojabohne, Solanum americanum und Kürbis nachgewiesen wurde.

Hocheffiziente einstufige A. rhizogenes-vermittelte Haarwurzeltransformation Behaarte Wurzeln wurden 12 Tage nach der Inokulation mit künstlich hergestelltem K599 an der Hypokotyl-Inzisionsstelle produziert. Transgene Haarwurzeln wurden anhand der Expression des im binären Vektor enthaltenen Reportergens bestimmt. Transgene Wurzeln, die mit dem Reportergen DsRed2 von zusammengesetzten wilden Sojabohnen, S. americanum und Kürbis transformiert wurden, wurden unter natürlichem ...

Hier stellen wir das detaillierte Protokoll einer einstufigen Transformationsmethode zur Verfügung, die durch Agrobacterium tumefaciens zur Herstellung von Mischpflanzen vermittelt wird.

Eine effiziente und reproduzierbare Methode zur Herstellung von Kompositpflanzen durch Agrobacterium rhizogenes-basierte Haarwurzeltransformation

Producing composite plants with transgenic roots and nontransgenic stems and buds using Agrobacterium rhizogenes-mediated hairy root transformation is a ...

Unser Team konzentriert sich auf die auf Agrobacterium rhizogenes basierende Haarwurzeltransformation. Die Transformation von Haarwurzeln ist entscheidend für die Untersuchung der Funktion von Pflanzengenen, des Stoffwechsels und der Wechselwirkungen zwischen Wurzeln und Mikroorganismen der Rhizosphäre. In diesem Artikel wird eine einstufige Transformationsmethode vorgestellt, die durch Agrobacterium rhizogenes vermittelt wird.Die Haarwurzeltransformation ist bei verschiedenen Dikotyledonen und Monokotyledonen etabliert und nahezu unabhängig vom Genotyp. Die von Agrobacterium rhizogenes vermittelte einstufige Methode zur Induktion behaarter Wurzeln ist im Vergleich zur Hypokotyl-Injektionsmethode einfacher und effizienter für die Herstellung von Kompositpflanzen. Die Hypokotyl-Injektionsmethode ist ineffizient und führt wahrscheinlich zum Tod junger oder winziger Hypokotylpflanzen.Die einstufige Agrobacterium rhizogenes-vermittelte Methode ist hocheffizient und benötigt weniger Zeit, um behaarte Wurzeln zu produzieren. Darüber hinaus ist es nicht erforderlich, über die Bildung von Haarwurzeln hinaus umzupflanzen. Alpha-Zeichen-Regulationsgene und Beta-Zeichen-Synthese-Gene wurden a

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Biologie

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Verwendung von DNA-Baugruppe können mehrere CRISPR Vektoren parallel in einem einzigen Reaktions Klonierung konstruiert werden, wodurch die Konstruktion einer großen Anzahl von CRISPR Vektoren eine einfache Aufgabe. Tomato Haarwurzeln sind ein ausgezeichnetes Modellsystem CRISPR Vektoren zu validieren und mutierten Materialien erzeugen.

High-throughput CRISPR Vector Konstruktion und Charakterisierung von DNA-Modifikationen durch Erzeugung von Tomaten Hairy Roots

Hier präsentieren wir Ihnen zwei Protokolle, Kartoffelpflanzen zu verwandeln. Die Agrobacterium Tumefaciens Transformation führt zu einer kompletten transgenen Pflanze Agrobacterium Rhizogenes transgenen behaarte Wurzeln in einem Wildtyp-Shooting produziert, die selbst propagiert werden kann. Wir erkennen dann Promotoraktivität von GUS Färbung in den transformierten Wurzeln.

Agrobacterium Tumefaciens und Agrobacterium Rhizogenes-vermittelte Umwandlung der Kartoffel und die Promotoraktivität eines Suberin-Gens durch GUS Staining

Wir beschreiben eine Methode zur Induktion haariger Wurzeln von Agrobacterium rhizogenes-vermittelte Transformation in Tartary Buchweizen (Fagopyrum tataricum). Dies kann verwendet werden, um Genfunktionen und die Produktion von sekundären Metaboliten in Tartary Buchweizen zu untersuchen, für jede genetische Transformation angenommen werden, oder für andere Heilpflanzen nach Verbesserung verwendet werden.

Induzieren hairy Roots von Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation in Tartary Buchweizen (Fagopyrum tataricum)

Hier stellen wir ein Protokoll für die hocheffiziente Produktion von transgenen Sojabohnen-Haarwurzeln vor.

Sojabohnen-Haarwurzeltransformation zur Analyse der Genfunktion

Das Protokoll beschreibt die Induktion der Haarwurzel unter Verwendung von primären Arabidopsis-Blütenstandsstämmen und Brassica napus-Hypokotylen . Die Haarwurzeln können kultiviert und als Explantate zur Regeneration transgener Pflanzen verwendet werden.

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Kaposi-Sarkom (KS) ist ein Tumor induziert durch eine Infektion mit onkogenen Viren menschliche Herpesvirus-8/KS Herpesvirus (HHV-8/KSHV). Die Endothelzellen Kultur Modell hier beschriebenen eignet sich eindeutig für die Untersuchung der Mechanismen, mit denen KSHV Wirtszellen verwandelt.

Ein In-vitro- Modell für die Erforschung der zellulären Transformation von Kaposi-Sarkom-Herpesvirus

Hier beschreiben wir ein schnelles und flexibles Protokoll für die Bildung von 3D-Zellsphäroiden durch Zellaggregation. Dies lässt sich leicht an mehrere Zelltypen anpassen und eignet sich für den Einsatz in einer Vielzahl von Anwendungen, einschließlich Zellmigrations-, Invasions- oder Anoikis-Assays sowie für die Bildgebung und Quantifizierung von Zell-Matrix-Interaktionen.

Eine effiziente und flexible Zellaggregationsmethode für 3D-Sphäroid-Produktion

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode, um stabile Integration eines Gens von Interesse des menschlichen Genoms durch das transcriptionally regulierte Dornröschen -System zu erreichen. Vorbereitung der Integration von defekten Lentivirale Vektoren, die in-vitro- Transduktion von menschlichen Zellen und molekulare Tests auf Zellen ausgestrahlt werden gemeldet.

Eine effiziente In-vitro- Umsetzung-Methode durch eine Transcriptionally geregelten Schönheit Schlafsystem verpackt in eine Integration defekt Lentivirale Vektor

Lernen Sie eine effiziente Methode zur Herstellung von Kompositpflanzen durch Agrobacterium rhizogenes-basierte Haarwurzeltransformation. Diese Technik ermöglicht verbesserte Studien zur Pflanzengenfunktion und mikrobiellen Interaktionen.

Eine effiziente und reproduzierbare Methode zur Herstellung von Kompositpflanzen durch Agrobacterium rhizogenes-basierte Haarwurzeltransformation (Video) | JoVE Journal

Eine effiziente und reproduzierbare Methode zur Herstellung von Kompositpflanzen durch Agrobacterium rhizogenes-basierte Haarwurzeltransformation

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