Name: Dioszin-vermittelte Linderung der IgA-Nephropathie durch Hemmung der B-Zell-Aktivierung in vivo und Verringerung der Galaktose-defizienten IgA1-Produktion in vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-13T14:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 18 s
Description: Erfahren Sie, wie Dioscin die IgA-Nephropathie durch Hemmung der B-Zell-Aktivierung in vivo und Verringerung der galaktose-defizienten IgA1-Produktion in vitro lindert. Diese Methode eröffnet neue Therapieansätze.

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<meta charset="utf8"></head><body>Behandlung der Immunglobulin-A-Nephropathie (IgAN) mit Dioscin im Mausmodell

<ol><li>Knoppova, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+and+activities+of+IgA1-containing+immune+complexes+in+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">The origin and activities of IgA1-containing immune complexes in IgA nephropathy.</a> Frontiers in Immunology. 7, 117(2016).</li>
<li>Suzuki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+The+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of IgA nephropathy.</a> Journal of The American Society of Nephrology. 22 (10), 1795-1803 (2011).</li>
<li>He, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+double-stranded+RNA+poly%28I%3AC%29+aggravates+IgA+nephropathy+by+triggering+IgA+class+switching+recombination+through+the+TLR3-BAFF+axis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Synthetic double-stranded RNA poly(I:C) aggravates IgA nephropathy by triggering IgA class switching recombination through the TLR3-BAFF axis.</a> American Journal of Nephrology. 42 (3), 185-197 (2015).</li>
<li>Zhao, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+level+of+galactose-deficient+IgA1+in+the+sera+of+patients+with+IgA+nephropathy+is+associated+with+disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">The level of galactose-deficient IgA1 in the sera of patients with IgA nephropathy is associated with disease progression.</a> Kidney International. 82 (7), 790-796 (2012).</li>
<li>Xing, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C1GALT1+expression+is+associated+with+galactosylation+of+IgA1+in+peripheral+B+lymphocyte+in+immunoglobulin+a+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Nephrology%22%5BJournal%5D)">C1GALT1 expression is associated with galactosylation of IgA1 in peripheral B lymphocyte in immunoglobulin a nephropathy.</a> BMC Nephrology. 21 (1), 18(2020).</li>
<li>Qin, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((External+suppression+causes+the+low+expression+of+the+Cosmc+gene+in+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">External suppression causes the low expression of the Cosmc gene in IgA nephropathy.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 23 (5), 1608-1614 (2008).</li>
<li>Sakai, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+gasseri+SBT2055+induces+TGF-%CE%B2+expression+in+dendritic+cells+and+activates+TLR2+signal+to+produce+IgA+in+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus gasseri SBT2055 induces TGF-β expression in dendritic cells and activates TLR2 signal to produce IgA in the small intestine.</a> PLoS One. 9 (8), 105370(2014).</li>
<li>Gutzeit, C., Magri, G., Cerutti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+IgA+production+and+its+role+in+host-microbe+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Intestinal IgA production and its role in host-microbe interaction.</a> Immunological Reviews. 260 (1), 76-85 (2014).</li>
<li>Serino, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+a+retrospective+international+study%2C+circulating+miR-148b+and+let-7b+were+found+to+be+serum+markers+for+detecting+primary+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">In a retrospective international study, circulating miR-148b and let-7b were found to be serum markers for detecting primary IgA nephropathy.</a> Kidney International. 89 (3), 683-692 (2016).</li>
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<li>Wang, W., Xu, L., Zhou, L., Wan, S., Jiang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Network+pharmacology+approach+to+reveal+the+underlying+mechanisms+of+Rhizoma+Dioscoreae+Nipponicae+in+the+treatment+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative+Medicine%3A+eCAM%22%5BJournal%5D)">A Network pharmacology approach to reveal the underlying mechanisms of Rhizoma Dioscoreae Nipponicae in the treatment of asthma.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2022, 4749613(2022).</li>
<li>Tian, W. W., Wei, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Professor+TONG+Xiaolin+used+the+experience+of+Dioscoreae+Nipponicae%5BTitle%5D)+AND+%22Jilin+Journal+of+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Professor TONG Xiaolin used the experience of Dioscoreae Nipponicae.</a> Jilin Journal of Chinese Medicine. 40 (05), 589-592 (2020).</li>
<li>Rao, X. R., Bai, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Das+Xiwen%27s+experience+in+treating+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Beijing+Journal+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Das Xiwen's experience in treating IgA nephropathy.</a> Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine. 9, 691-693 (2008).</li>
<li>Si, Y., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+data+mining+study+on+the+pattern+of+medication+use+in+the+treatment+of+IgA+nephropathy+by+Professor+Zhang+Yu%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chinese+Physician%22%5BJournal%5D)">A data mining study on the pattern of medication use in the treatment of IgA nephropathy by Professor Zhang Yu.</a> Journal of Chinese Physician. 20 (01), 109-111 (2018).</li>
<li>Jiang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+enzymatic+extraction+technology+of+Diosgenin+from+Dioscorea+nipponica%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+Patent+Medicine%22%5BJournal%5D)">Optimization of the enzymatic extraction technology of Diosgenin from Dioscorea nipponica.</a> Chinese Traditional Patent Medicine. 39 (03), 621-624 (2017).</li>
<li>Qi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dioscin+alleviates+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+kidney+injury+via+the+microRNA+let-7i%2FTLR4%2FMyD88+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Dioscin alleviates lipopolysaccharide-induced inflammatory kidney injury via the microRNA let-7i/TLR4/MyD88 signaling pathway.</a> Pharmacological Research. 111, 509-522 (2016).</li>
<li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+pharmacological+activities+of+Dioscin%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the pharmacological activities of Dioscin.</a> BioMed Research International. 2019, 5763602(2019).</li>
<li>Nal Zou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+4+signaling+pathway+in+the+protective+effect+of+Pioglitazone+on+experimental+immunoglobulin+A+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 4 signaling pathway in the protective effect of Pioglitazone on experimental immunoglobulin A nephropathy.</a> Chinese Medical Journal. 130 (8), 906-913 (2017).</li>
<li>Xu, S. Y., Bian, R. L., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+experiments+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Pharmacological+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Pharmacological experiments methodology.</a> Chinese Pharmacological Bulletin. 1, 19(1992).</li>
<li>Shen, J. C., Ren, Y., Rao, X. R., You, Y., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+pharmacology%2C+molecular+docking%2C+and+in+vitro+experiments+to+explore+the+molecular+mechanism+of+Dioscorea+Nipponica+Makion+in+the+treatment+of+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Integrated+Traditional+and+Western+Medicine%22%5BJournal%5D)">Network pharmacology, molecular docking, and in vitro experiments to explore the molecular mechanism of Dioscorea Nipponica Makion in the treatment of IgA nephropathy.</a> World Journal of Integrated Traditional and Western Medicine. 16 (12), 2246-2254 (2021).</li>
<li>Mestecky, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgA+nephropathy%3A+molecular+mechanisms+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">IgA nephropathy: molecular mechanisms of the disease.</a> Annual Review of Pathology. 8, 217-240 (2013).</li>
<li>Novak, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgA1-containing+immune+complexes+in+IgA+nephropathy+differentially+affect+proliferation+of+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">IgA1-containing immune complexes in IgA nephropathy differentially affect proliferation of mesangial cells.</a> Kidney International. 67 (2), 504-513 (2005).</li>
<li>Nihei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+IgA+autoantibodies+targeting+mesangial+cells+redefines+the+pathogenesis+of+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Identification of IgA autoantibodies targeting mesangial cells redefines the pathogenesis of IgA nephropathy.</a> Science Advances. 9 (12), (2023).</li>
<li>Raska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+CMP-NeuAc%3A+GalNAc-IgA1+alpha2%2C6-sialyltransferase+in+IgA1-producing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of CMP-NeuAc: GalNAc-IgA1 alpha2,6-sialyltransferase in IgA1-producing cells.</a> Journal of Molecular Biology. 369 (1), 69-78 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anti-CD20/MS4A1 Antikörper</td><td>Boster Biotechnology Company</td><td>A03780-3</td><td></td></tr><tr><td>Antifade Einbettmedium</td><td>Beyotime, Shanghai, China</td><td>P0128S</td><td></td></tr><tr><td>Balb/c Mäuse</td><td>Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>110322220101424000</tr><tr><td>blockierendes Serum</td><td>Solarbio, Peking, China</td><td>SL038</td><td></td></tr><tr><td>Rinder-Gammaglobulin</td><td>ShangHai YuanYe Biotechnology Company</td><td>S12031</td><td></td></tr><tr><td>C1GALT1 polyklonaler Antikörper</td><td>Proteintech Group, Inc, USA</td><td>27569-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Citrat-Antigen-Rückhollösung (50-fach;)</td><td>Phygene Biotechnology Company</td><td>PH0422</td><td></td></tr><tr><td>COSMC polyklonaler Antikörper</td><td>Proteintech Group, Inc,USA</td><td>19254-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Zytotoxizitätsnachweiskit</td><td>Roche Company</td><td>4744926001</td><td></td></tr><tr><td>Dako REAL EnVision Nachweissystem, Peroxidase / DAB +</td> <td>Dako</td><td>K5007</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Dioscin</td><td>Nationales Institut für Lebensmittel- und Arzneimittelkontrolle</td><td>111707-201703</td><td></td></tr><tr><td>DIO-Tabletten</td><td>Chengdu Nr. 1 Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>H51023866</tr><tr><td>ECL-Arbeitslösung</td><td>Merck Biotechnology, Inc</td><td>WBKLS0100&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Enhanced cell counting kit-8</td><td>Beyotime, Shanghai, China</td><td>C0043</td><td></td></tr><tr><td>Fasking One-Step Removal of Gene cDNA Erststrangsynthese Premix</td><td>TIANGEN, Beijing, China</td><td>KR118-02</td><td></td></tr><tr><td>Glykogen Periodische Säure Schiff (PAS) Färbekit&nbsp;</td><td>BaSO Biotechnology Company</td><td>BA4080A</td><td></td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus IgA-AF488</td><td>SouthernBiotech</td><td>1040-30</td><td></td></tr><tr><td>Ziege Anti-Kaninchen-IgG-Antikörper (H+L), HRP konjugiert</td><td>BeiJing Bioss Biotechnology Company</td><td>BS-0295G-HRP</td><td></td></tr><tr><td>Humanes Gd-IgA1 ELISA-Kit</td><td>IBL</td><td>27600</td><td></td></tr><tr><td>Human-IgA-ELISA-Kit</td><td>MultiSciences (LiankeBio)</td><td>70-EK174-96</td><td></td></tr><tr><td>Pierce BCA-Protein-Assay-Kit</td><td>Thermo Scientific</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>PMSF-Lösung</td><td>Beyotime, Shanghai, China</td><td>ST507</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K&nbsp;</td><td>Phygene Biotechnology Company</td><td>PH1521</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen-Anti-CXCR5 polyklonaler Antikörper&nbsp;</td><td>Beijing Bioss Biotechnology Company</td><td>bs-23570R</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Lysepuffer</td><td>Beyotime, Shanghai, China</td><td>P0013B</td><td></td></tr><tr><td>RNAeinfaches Gesamt-RNA-Extraktionskit</td><td>TIANGEN, Peking, China</td><td>DP419</td><td></td></tr><tr><td>RPMI Medium 1640</td><td>Solarbio, Peking, China</td><td>31800</td><td></td></tr><tr><td>Super-Bradford-Protein-Assay-Kit</td><td>CWBIO, Peking, China</td><td>CW0013</td><td></td></tr><tr><td>Triton&nbsp; X-100</td><td>Beyotime, Shanghai, China</td><td>ST795</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Aktin Kaninchen mAb</td><td>Abklonal, Wuhan, China</td><td>AC026</td><td></td></tr></tbody></table>

dioszin-vermittelte linderung der iga-nephropathie durch hemmung der b-zell-aktivierung in vivo und verringerung der galaktose-defizienten iga1-produktion in vitro

Dioscin Mediated IgA Nephropathy Alleviation by Inhibiting B Cell Activation In Vivo and Decreasing Galactose-Deficient IgA1 Production In Vitro

Wirkung von DIO auf das Nierengewebe im IgAN-Mausmodell
Im Vergleich zur Kontrollgruppe wies das mukosale immuninduzierte IgAN-Mäusemodell (Modellgruppe) einen signifikanten Anstieg der Proteinurie auf (Ergänzende Abbildung 2), die IgA-Ablagerung war in der Mesangialregion sichtbar, die Fluoreszenz war gleichmäßig in Clustern über die gesamte Mesangialregion verteilt (Abbildung 1A), die PAS-Färbung des Nierengewebes zeigte eine Proliferation der Mesangialzellen und eine Stromahyperplasie (Abbildung 1B), die in der DIO-Sondengruppe (DIO-Gruppe) reduziert wurde.
Wirkung von DIO auf B-Lymphozyten im Peyer-Pflaster
Das Peyer-Pflaster ist die führende Stelle für die Umwandlung von B-Lymphozyten in IgA-sezernierende Zellen. Wir nahmen Peyers Pflaster als Forschungsobjekt, um die Wirkung von DIO auf B-Lymphozyten zu beobachten, indem wir die Expression der B-Zell-Marker CD20 und CXCR5 nachweisen konnten. Immunhistochemische Ergebnisse zeigten, dass die Expression von CD20 und CXCR5 in der Modellgruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant höher war. DIO könnte die Expression der oben genannten molekularen Marker hemmen (Abbildung 2A,B).
Der sichere Konzentrationsbereich von DIO auf DAKIKI-Zellen
LDH ist ein Marker für die Integrität der Plasmamembran und ein Indikator für den Zelltod, wobei höhere LDH-Freisetzungsraten auf schwerere Zellschäden hinweisen. Der LDH-Release-Assay wurde verwendet, um den sicheren Konzentrationsbereich von DIO zu bestimmen. Die maximale sichere Konzentration von DIO wurde durch eine LDH-Freisetzungsrate von unter 10 % bestimmt. Die Ergebnisse (Abbildung 3) zeigten keine signifikante Zytotoxizität, die durch DIO bei Konzentrationen von 0,25 bis 1,0 μg/ml induziert wurde. Daher wurde in der folgenden Studie 0,25, 0,5 und 1,0 μg/ml DIO als Dosierungsniveau verwendet.
Auswirkungen von DIO auf die Proliferation von DAKIKI-Zellen
Die experimentellen Ergebnisse (Abbildung 4) zeigten, dass DIO im Vergleich zur Modellgruppe (LPS-stimulierte Gruppe) die LPS-induzierte DAKIKI-Zellproliferation konzentrationsabhängig hemmte. DIO in Konzentrationen von 0,5 und 1,0 μg/ml hemmte signifikant die LPS-induzierte DAKIKI-Zellproliferation (P &lt; 0,01).
Auswirkungen von DIO auf die sekretorische Funktion von DAKIKI-Zellen
Die Gd-IgA1-Spiegel stehen in engem Zusammenhang mit dem pathologischen Prozess von IgAN, und das Gesamt-IgA wird zusammen als Indikator für die zelluläre sekretorische Funktion getestet. Ein ELISA-Assay wurde verwendet, um den IgA- und Gd-IgA1-Gehalt im Überstand der DAKIKI-Zellkultur nachzuweisen. Die Ergebnisse zeigten (Abbildung 5A,B), dass DAKIKI-Zellen, die durch LPS stimuliert wurden, im Vergleich zur Kontrollgruppe mehr IgA sezernierten (P &lt; 0,01). Im Vergleich dazu hemmte DIO DAKIKI-Zellen signifikant an der konzentrationsabhängigen Sekretion von IgA (P &lt; 0,01). Im Vergleich zur Kontrollgruppe sezernierten DAKIKI-Zellen, die durch LPS stimuliert wurden, mehr Gd-IgA1 mit statistischer Tendenz (P &lt; 0,10), und DIO hemmte die Gd-IgA1-Sekretion von LPS-stimulierten DAKIKI-Zellen konzentrationsabhängig (P &lt; 0,05 und P &lt; 0,01), wobei DIO mit 1,0 μg/ml die Sekretion von Gd-IgA1 mit der gehemmten Rate von 25% signifikant hemmte.
Der Mechanismus von DIO hemmt die Gd-IgA1-Sekretion durch DAKIKI-Zellen
Um den möglichen Mechanismus der Hemmung der übermäßigen Gd-IgA1-Sekretion durch DAKIKI-Zellen weiter zu untersuchen, wurden die Spiegel der glykosylierten Transferase C1GALT1 und des Chaperonproteins Cosmc mRNA in DAKIKI-Zellen mittels qRT-PCR nachgewiesen, und die Ergebnisse zeigten (Abbildung 6A,B), dass die relative mRNA-Expression von C1GALT1 und Cosmc in DAKIKI-Zellen in der Modellgruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe herunterreguliert war (P &lt; 0,01). DIO regulierte die relative mRNA-Expression von C1GALT1 und Cosmc im Vergleich zur Modellgruppe unterschiedlich stark hoch, wobei DIO 1,0 μg /ml die relative mRNA-Expression von C1GALT1 und Cosmc signifikant hochregulierte (P &lt; 0,05).
Gleichzeitig wurde die WB-Methode verwendet, um die Wirkung von DIO auf die Proteinexpression von C1GALT1 und Cosmc in DAKIKI-Zellen nachzuweisen. Im Vergleich zur Kontrollgruppe nahm die Proteinexpression von C1GALT1 und Cosmc in DAKIKI-Zellen in der Modellgruppe deutlich ab (P &lt; 0,05). Im Vergleich zur Modellgruppe war die Proteinexpression von C1GALT1 und Cosmc nach DIO-Intervention hochreguliert. Die Proteinexpression von C1GALT1 und Cosmc wurde durch DIO bei einer Konzentration von 1,0 μg/ml (P &lt; 0,05) signifikant hochreguliert (Abbildung 7A-C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig1.jpg"> Abbildung 1: Histopathologie der Nieren. (A) Immunfluoreszenzmikroskop. Nierenschnitte von Mäusen in jeder Gruppe wurden mit Anti-IgA (grün) und DAPI (blau) gefärbt. Der obige Bildmaßstab = 200 μm. Der Maßstabsbalken unten = 50 μm. n = 6 pro Gruppe. (B) Repräsentative Bilder der PAS-Färbung von Nierengewebe von Mäusen in den Kontroll-, Modell- und DIO-Gruppen. Maßstabsleiste = 30 μm. Der Pfeil nach unten zeigt die Mesangialzellen und der Pfeil nach oben zeigt das Stroma. Maßstabsleiste = 30 μm. n = 6 pro Gruppe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig2.jpg"> Abbildung 2: Wirkung von DIO auf B-Lymphozytenmarker. (A) Die Expression von CD20 im Peyer-Pflaster. Maßstabsleiste = 200 μm. n = 6 pro Gruppe. (B) Die Expression von CXCR5 im Peyer-Pflaster. Die Maßstabsleisten befinden sich in der unteren rechten Ecke des Bildes. Maßstabsleiste = 200 μm. n = 6 pro Gruppe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig3.jpg"> Abbildung 3. Screening der sicheren Konzentration von DIO auf DAKIKI-Zellen. Die statistischen Werte werden als Mittelwert ± SD aus drei unabhängigen Experimenten ausgedrückt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig4.jpg"> Abbildung 4. Unterschiedliche Konzentrationen von DIO beeinflussen die Proliferation von DAKIKI-Zellen. Die Daten wurden als mittlerer ±SD ausgedrückt. Im Vergleich zur Kontrollgruppe betrug **P &lt; 0,01; verglichen mit der Modellgruppe, #P &lt; 0,05' ##P &lt; 0,01; Die Ergebnisse aller Experimente wurden dreimal wiederholt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig5.jpg"> Abbildung 5. DIO hemmt die IgA- und Gd-IgA1-Sekretion durch DAKIKI-Zellen. (A) Die ELISA-Methode wies die Expression von IgA in jeder Gruppe nach. (B) Mit der ELISA-Methode wurde die Expression von Gd-IgA1 in jeder Gruppe nachgewiesen. Die Daten wurden als Mittelwert ± SD ausgedrückt. Im Vergleich zur Kontrollgruppe betrug **P &lt; 0,01; im Vergleich zur Modellgruppe #P &lt; 0,05, ##P &lt; 0,01; Alle experimentellen Ergebnisse wurden dreimal wiederholt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig6.jpg"> Abbildung 6. Der Mechanismus von DIO hemmt die übermäßige Gd-IgA1-Sekretion durch DAKIKI-Zellen. (A) Die QRT-PCR detektierte die mRNA-Expression von C1GALT1. (B) Die QRT-PCR detektierte die mRNA-Expression von Cosmc. Die Daten wurden als mittlere ± SD ausgedrückt. Im Vergleich zur Kontrollgruppe wurden **P&lt;0,01; verglichen mit der Modellgruppe #P &lt; 0,05, ##P &lt; 0,01; Alle experimentellen Ergebnisse wurden dreimal wiederholt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig6large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig7.jpg"> Abbildung 7. DIO beeinflusst die Proteinexpression von C1GALT1 und Cosmc in DAKIKI-Zellen. (A) WB verifizierte die Hochregulierung der Proteinexpression von C1GALT1 und Cosmc durch DIO. (B) Die semiquantitative Analyse der C1GALT1 Expression wurde unter Verwendung von Bild J durchgeführt. (C) Die semiquantitative Analyse der Cosmc-Expression wurde unter Verwendung von Bild J durchgeführt. Die Daten wurden als mittlerer ±SD ausgedrückt. Im Vergleich zur Kontrollgruppe*P &lt; 0,05; verglichen mit der Modellgruppe #P &lt; 0,05, ##P &lt; 0,01 wurden alle experimentellen Ergebnisse dreimal wiederholt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig7large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Ergänzende Abbildung 1. Das Schema für das In-vivo-Modell . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/Supplementary_Figure_1.pdf" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Abbildung herunterzuladen.</a>
Ergänzende Abbildung 2. Veränderungen der Proteinurie. Die Daten wurden als Mittelwert ± SD ausgedrückt; n = 6 pro Gruppe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/Supplementary_Figure_2.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Abbildung herunterzuladen.</a>

Dioszin-vermittelte Linderung der IgA-Nephropathie durch Hemmung der B-Zell-Aktivierung in vivo und Verringerung der Galaktose-defizienten IgA1-Produktion in vitro

The increase of circulating galactose-deficient IgA1 (Gd-IgA1) is caused by excessive activation of IgA-positive secretory cells in the process of mucosal ...

dioscin-mediated-iga-nephropathy-alleviation-inhibiting-b-cell

Research

Forschung

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Medicine

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Hier beschreiben wir eine einfache konfokale Bildgebungsmethode, um die In-situ-Lokalisierung von Zellen zu visualisieren, die das Zytokin Interferon-Gamma in murinen sekundären Lymphorganen absondern. Dieses Protokoll kann für die Visualisierung anderer Zytokine in verschiedenen Geweben erweitert werden.

Bildgebung der In Situ Interferon Gamma Produktion in der Maus Milz nach Listeria monocytogenes Infektion

Dieses Protokoll verwendet G6PI gemischte Peptide, um rheumatoide Arthritis-Modelle zu konstruieren, die näher an denen der menschlichen rheumatoiden Arthritis in CD4+ T-Zellen und Zytokinen sind. Hochreine invariante natürliche Killer-T-Zellen (hauptsächlich iNKT2) mit spezifischen Phänotypen und Funktionen wurden durch In-vivo-Induktion und In-vitro-Reinigung zur Adoptivimmuntherapie erhalten.

Adoptive Immuntherapie von iNKT-Zellen in Glucose-6-Phosphat-Isomerase (G6PI)-Induzierte RA-Mäuse

Hier stellen wir ein Protokoll zur In-vivo-Augmentation der Darmhoming-regulatorischen T-Zell-Induktion vor. In diesem Protokoll werden dendritische Zellen entwickelt, um lokal hohe Konzentrationen des aktiven Vitamin D (1,25-Dihydroxyvitamin D oder 1,25[OH]2D) und des aktiven VitaminS A (Retinoinsäure oder RA) de novo zu produzieren.

In Vivo Augmentation der Gut-Homing Regulatory T Cell Induction

microRNAs sind an der Pathogenese der IgA-Nephropathie beteiligt. Wir haben eine zuverlässige Methode zum Nachweis der microRNA-Expression in den Nieren eines IgA-Nephropathie-Mausmodells (HIGA-Mäuse) entwickelt. Diese neue Methode wird es erleichtern, die Beteiligung von miRNAs an der IgA-Nephropathie zu überprüfen.

Nachweis der MicroRNA-Expression in den Nieren von Immunglobulin A nephropathischen Mäusen

Eine Entzündung der Augenoberfläche schädigt das Augenoberflächengewebe und beeinträchtigt lebenswichtige Funktionen des Auges. Das vorliegende Protokoll beschreibt eine Methode zur Induktion einer Augenentzündung und zur Sammlung von kompromittiertem Gewebe in einem Mausmodell der Meibom-Drüsendysfunktion (MGD).

Induktion der Augenoberflächenentzündung und Ansammlung von betroffenen Geweben

Hier schlagen wir einfache Methoden zu testen und auszuwerten Anwesenheit von reaktiven Sauerstoffspezies in den Zellen.

Produktion und Nachweis von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) in Cancers

Wir beschreiben eine allgemeine Protokoll für die in-vivo-Zellortung mittels MRT in einem Mausmodell mit Ex-vivo-markierten Zellen. Ein typisches Protokoll für die Zellmarkierung, Bildaufnahme und Verarbeitung Quantifizierung ist inbegriffen.

In-vivo-19 F-MRT für die Zellverfolgung

Der Dünndarm wird häufig Giftstoffe, die den Blutfluss zu beeinflussen, und kann sich negativ auf die Nährstoffabsorption ausgesetzt. Mit Hilfe eines multimyograph und A. und V. mesenterica isoliert, Verbindungen oder Giftstoffe von Interesse für Vasoaktivität abgeschirmt werden.

Isolierung und Verwendung von Rinder Abschnitte A. und V. mesenterica als Bioassay für Vasoaktivität im Dünndarm Testen

Dieses Manuskript bietet ein Protokoll für die Implantation von Telemetern in die Maus zum Zwecke der Messung des intrauterinen Drucks während der Schwangerschaft.

Intrauterine Telemetrie zur Maus Kontraktionsdruck messen<em&gt; In-vivo-</em

Mikroglia-Aktivierung und Mikrogliose sind zentrale Antworten auf chronische Neurodegeneration. Hier stellen wir Verfahren zur in-vivo-Langzeit-Visualisierung der Netzhaut CX3CR1-GFP + Mikroglia-Zellen durch konfokale Ophthalmoskopie und zum Schwellenwert und morphometrische Analysen zur Identifizierung und Quantifizierung von deren Aktivierung. Wir überwachen Mikroglia Veränderungen während der frühen Stadien der altersbedingten Glaukom.

In Vivo Dynamics of Retinal Mikrogliaaktivierung Während Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoskopische Imaging and Cell Morphometrie in Maus Glaucoma

Erfahren Sie, wie Dioscin die IgA-Nephropathie durch Hemmung der B-Zell-Aktivierung in vivo und Verringerung der galaktose-defizienten IgA1-Produktion in vitro lindert. Diese Methode eröffnet neue Therapieansätze.

Dioszin-vermittelte Linderung der IgA-Nephropathie durch Hemmung der B-Zell-Aktivierung in vivo und Verringerung der Galaktose-defizienten IgA1-Produktion in vitro (Video) | JoVE Journal

Dioszin-vermittelte Linderung der IgA-Nephropathie durch Hemmung der B-Zell-Aktivierung in vivo und Verringerung der Galaktose-defizienten IgA1-Produktion in vitro

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