Komplementäre Ansätze zur Untersuchung des Mitophagieflusses in β-Zellen der Bauchspeicheldrüse

Dieses Protokoll beschreibt zwei Methoden zur quantitativen Analyse der Mitophagie in β-Zellen der Bauchspeicheldrüse: erstens eine Kombination zellpermeabler Mitochondrien-spezifischer Farbstoffe und zweitens einen genetisch kodierten Mitophagie-Reporter. Diese beiden Techniken ergänzen sich und können je nach Bedarf eingesetzt werden, was Flexibilität und Präzision bei der quantitativen Qualitätskontrolle der Mitochondrien ermöglicht.

Unser Protokoll beschreibt zwei komplementäre Methoden zur Untersuchung des Betazell-Mitophagieflusses mit Einzelzellauflösung mittels Durchflusszytometrie. Das mt-Keima-Protokoll verwendet einen genetischen Mitophagie-Reporter, während das MtPhagy-Protokoll drei Fluoreszenzfarbstoffe kombiniert, was die Extrapolation auf schwer zu transfizierende Zellen in menschlichen Proben erleichtert. Die Beurteilung der Mitophagie mit traditionellen biochemischen Ansätzen und bildgebenden Verfahren ist sowohl zeitaufwändig als auch herausfordernd.

Daher ist es wichtig, neue, robuste und effektive Methoden zu entwickeln, um den Mitophagiefluss in Betazellen zu untersuchen. Sowohl die mt-Keima- als auch die MtPhagy-Methode sind quantitative Beurteilungen, die für die Untersuchung des Mitophagieflusses in Betazellen der Bauchspeicheldrüse effizient sind. Daher konzentriert sich das Soleimanpour-Labor auf die verschiedenen Mechanismen, die das Versagen von Betazellen der Bauchspeicheldrüse und Diabetes vorantreiben.

Und wir konzentrieren uns speziell auf die verschiedenen Aspekte des mitochondrialen Lebenszyklus, einschließlich der Mitophagie, um zu verstehen, wie Defekte in der mitochondrialen Funktion die Entwicklung von Diabetes vorantreiben.