Name: Ein umfassender Ansatz zur Analyse der Zellbestandteile von zerebralen Blutgerinnseln (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-21T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Erfahren Sie eine neue Methode zur Analyse von Zellbestandteilen zerebraler Blutgerinnsel durch Fibrinolyse und Zellfärbung. Diese Technik ermöglicht die Freisetzung intakter Zellen für quantitative und qualitative Untersuchungen.

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Diese Forschung wurde vom Wissenschafts- und Technologiebüro der Stadt Xiamen (3502Z20227197) und dem Wissenschafts- und Technologiebüro der Provinz Fujian (Nr. 2019J01070, Nr. 2021Y0027) finanziert.

Die Forschung wurde in Übereinstimmung mit den institutionellen Richtlinien der medizinischen Ethikkommission der Universität Huaqiao durchgeführt. Die zerebralen Blutgerinnsel wurden chirurgisch entfernt und im Quanzhou First Hospital, das der Fujian Medical University angegliedert ist, mit dem Einverständnis der Patienten entnommen.
1. Vorbehandlung von Blutgerinnseln
<ol><li>Geben Sie die Gerinnsel auf eine saubere Schale, fügen Sie 5 ml physiologische Kochsalzlösung mit einer Pinzette hinzu, schütteln Sie die Schale vorsichtig und entfernen Sie die Kochsalzlösung mit einer Pipette. HINWEIS: Wiederholen Sie die Spülung dreimal.</li>
	<li>Die Gerinnsel mit einer Schere in kleinere Stücke (kleiner als 5 mm x 5 mm x 5 mm) schneiden. Fügen Sie 5 ml physiologische Kochsalzlösung hinzu, schütteln Sie die Schale vorsichtig und entfernen Sie die Kochsalzlösung mit einer Pipette. HINWEIS: Wiederholen Sie die Spülung dreimal. Stellen Sie sicher, dass während des Spülens keine Gerinnselstücke abgesaugt werden.</li>
	<li>Übertragen Sie die Gerinnsel auf eine andere saubere U-Platte. HINWEIS: Das Protokoll kann hier pausiert werden (Platte bei 2-8 °C lagern) und später neu gestartet werden.</li>
</ol>2. Thrombolyse
<ol><li>Bereiten Sie die sFE-Arbeitslösung vor, indem Sie die sFE-Konzentration mit physiologischer Kochsalzlösung auf 2000 U/ml einstellen. HINWEIS: Die sFE wurde nach den etablierten Protokollen von Tang Lab15 erstellt.</li>
	<li>Geben Sie 300 μl sFE-Arbeitslösung in die vorbehandelten Gerinnsel.</li>
	<li>Führen Sie die erste Abbaurunde durch.<ol><li>Das Gemisch aus sFE und Gerinnseln wird bei 37 °C für 0,5 h inkubiert. HINWEIS: Der mit physiologischer Kochsalzlösung behandelte Blot wurde als Negativkontrolle festgelegt. Drehen Sie die Probe nicht auf dem Schüttler.</li>
		<li>Mischen Sie die Probe vorsichtig. Füllen Sie den flüssigen Teil mit einer sauberen Pipette in ein anderes sauberes Röhrchen. HINWEIS: Die verbleibenden Gerinnsel wurden für eine weitere Abbaurunde verwendet.</li>
		<li>Der flüssige Teil wird bei 200 × g für 5 min bei 4 °C zentrifugiert.</li>
		<li>Den Überstand mit einer Pipette in ein anderes sauberes Röhrchen überführen, um die zurückgewonnene sFE-Lösung zu erhalten.</li>
		<li>Mischen Sie die Zellpräzipitation vorsichtig mit 50 μl physiologischer Kochsalzlösung. HINWEIS: Die Zellmischung wurde für die spätere Verwendung bei 2-8 °C gelagert.</li>
	</ol></li>
	<li>Führen Sie eine anschließende Verschlechterung durch.<ol><li>Die verbleibenden Gerinnsel (Schritt 2.3.2) werden mit der gewonnenen sFE-Lösung (Schritt 2.3.4) bei 37 °C für 0,5 h abgebaut. HINWEIS: Die Ruheschritte waren die gleichen wie bei der ersten Abbaurunde. Der Abbauprozess wurde beendet, bis die gesamten Gerinnsel abgebaut waren.</li>
	</ol></li>
	<li>Führen Sie die Zellsammlung durch.<ol><li>Bereiten Sie die Blutkörperchenprobe vor, indem Sie die Zellmischung jeder Abbaurunde sammeln.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Wright-Färbung
<ol><li>Führen Sie einen Zellabstrich durch.<ol><li>Stellen Sie die Zellen auf eine Dichte von 1 x 106 Zellen/ml ein.</li>
		<li>Geben Sie 5 μl der Zellen in den mit Poly-L-Lysin beschichteten Objektträger und schmieren Sie sie dann mit dem Deckglas ein.</li>
		<li>Verdampfen Sie die Flüssigkeit bei Raumtemperatur.</li>
	</ol></li>
	<li>Führen Sie die Färbung durch.<ol><li>Geben Sie 200 μl Wright-Farbstoff (siehe Materialtabelle) vorsichtig in den Zellabstrich und fügen Sie 600 μl Wright-Farbstoff B hinzu, um ihn gleichmäßig zu mischen.  10 min bei Raumtemperatur einfärben.</li>
		<li>Spülen Sie die Farbe vorsichtig mit klarem Wasser ab. HINWEIS: Der gefärbte Zellausstrich kann zur späteren Verwendung bei Raumtemperatur gelagert werden.</li>
	</ol></li>
	<li>Führen Sie mikroskopische Bildgebung durch.<ol><li>Untersuchen Sie die gefärbten Zellen mit einem Lichtmikroskop (siehe Materialtabelle).</li>
	</ol></li>
</ol>4. Routinemäßige Blutuntersuchung
<ol><li>Stellen Sie die Zellen auf eine Dichte von 1 x 106 Zellen/ml ein.</li>
	<li>Analysieren Sie die Zellbestandteile wie Blutplättchen, Erythrozyten, weiße Blutkörperchen, Lymphozyten, Neutrophile, Monozyten, Eosinophile, Basophile und unreife Granulozyten mit einem Autohämatologie-Analysegerät gemäß den Anweisungen des Herstellers (siehe Materialtabelle).</li>
</ol>

Eine auf fibrinolytischen Enzymen basierende Methode zur Untersuchung von zerebralen Thrombuszellbestandteilen

<ol><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR%3A+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li>
<li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought%3A+a+retrospective+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li>
<li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century%3A+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li>
<li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps%3A+villains+and+targets+in+arterial%2C+venous%2C+and+cancer-associated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis+Thrombosis+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li>
<li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity%2C+inflammation%2C+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li>
<li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation%3A+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li>
<li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li>
<li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+%28platelet+component%29+in+thromboelastometry+and+thrombelastography%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li>
<li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536(2021).</li>
<li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li>
<li>C W Francis, a, Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+clot+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li>
<li>Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en (2019).</li>
<li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers%3A+latest+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254(2015).</li>
<li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer%3A+What+we+have+vs.+what+we+need%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631(2023).</li>
<li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023(2018).</li>
<li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li>
<li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA%2C+2007-09%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.

sFE ist ein fibrinolytisches Mittel, das das Fibrin direkt und effektiv abbauen kann12,16. Hier wurde sFE eingesetzt, um das vernetzte Fibrin der zerebralen Blutgerinnsel abzubauen, die eingeschlossenen Zellen innerhalb der Gerinnsel freizusetzen und die Zellbestandteile der Gerinnsel qualitativ und quantitativ zu analysieren. Die mikroskopischen Daten und die routinemäßige Blutuntersuchung zeigten, dass die eingeschlossenen Zellen aus den Blutgerinnseln freigese...

Zerebrovaskuläre Erkrankungen sind eine von drei Hauptkrankheiten, die die menschliche Gesundheit bedrohen können, von denen die ischämische zerebrovaskuläre Erkrankung mehr als 80 % ausmacht. Hirnthrombosen und Hirnvenenthrombosen sind heute die am stärksten betroffenen ischämischen zerebrovaskulären Erkrankungen, die hauptsächlich durch zerebrale Blutgerinnsel verursacht werden 1,2. Wenn die Behandlung nicht richtig durchgeführt wird, führt sie zu einer hohen Behinderungs- und Mortalitätsrate und einer hohen Rezidivrate nach der Entlassung3.
In jüngster Zeit hat eine wachsende Zahl von Studien gezeigt, dass die Zellbestandteile von zerebralen Blutgerinnseln eng mit der Diagnose, Behandlung und Prognose der Hirnthrombose korrelieren 4,5,6. Daher ist die Verfügbarkeit von Daten zur Thrombuszusammensetzung, insbesondere der Zellbestandteile, wichtig für die klinische Diagnose und Behandlung. Leider können die derzeit verfügbaren Methoden die Blutgerinnselkomponente nicht umfassend quantitativ und qualitativ analysieren. Zum Beispiel kann die auf Martius Scarlett Blue basierende In-situ-Färbung nur die roten/weißen Blutkörperchen bestimmter Schnitte des Gerinnsels7 untersuchen. Die auf Immunhistochemie (IHC) basierende In-situ-Färbung kann nur begrenzte Blutbestandteile bestimmter Schnitte des Gerinnsels anhand ihrer Antikörper untersuchen8. Die mikroskopischen bildbasierten Methoden befassen sich nur mit der spezifischen Struktur des Gerinnsels9. Darüber hinaus sind all diese Methoden mühsam und zeitaufwändig10. Bisher wurden die Verfahren zur quantitativen und qualitativen Untersuchung von zerebralen Thrombenzellbestandteilen nicht beschrieben. Es ist allgemein anerkannt, dass das vernetzte Fibrin die Blutzellen fest in die Gerinnsel einwickelt11. Folglich ist der spezifische Abbau des vernetzten Fibrins und die Freisetzung der intakten Zellen entscheidend für die genaue Analyse von Zellbestandteilen.
In früheren Arbeiten wurde ein fibrinolytisches Enzym aus Sipunculus nudus (sFE) isoliert, das das Fibrin spezifisch und schnell abbauen kann12. In dieser Arbeit wurde eine Methode zur Analyse der Zellkomponenten der zerebralen Thromben basierend auf der einzigartigen Aktivität von sFE vorgeschlagen. Dieses Protokoll nutzte sFE, um zuerst das Fibrin von Gerinnseln abzubauen, und analysierte dann die Zellbestandteile durch Wright-Färbung und routinemäßige Blutuntersuchung13,14. Mit dieser Methode können die Zellbestandteile von Hirnthromben quantitativ und qualitativ untersucht werden. Dieses einfache und effektive Protokoll könnte für die Zellkomponentenanalyse anderer Blutgerinnsel angewendet werden.

<table><tbody><tr><td>Agglutinationsreaktionsplatte</td><td>ROTEST</td><td>RTB-4003</td><td></td></tr><tr><td>Automatischer Hämatologie-Analysator</td><td>SYSMEX</td><td>XNB2</td><td></td></tr><tr><td>Automatischer vertikaler Druckdampfsterilisator&nbsp;</td><td>SANYO</td><td>MLS-3750</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugenröhrchen (1,5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Reinbank</td><td>AIRTECH</td><td>BLB-1600</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator mit konstanter Temperatur</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Kulturschale (100 mm)</td><td>NEST</td><td>704001</td><td></td></tr><tr><td>DHG Serie Heiz- und Trockenofen&nbsp;</td><td>SENXIN</td><td>DGG-9140AD</td><td></td></tr><tr><td>Elektronische Analysenwaage</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Filtermembran (0,22 &Mikro; m)</td><td>Millex GP</td><td>SLGP033NK</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Kühlzentrifuge&nbsp;</td><td>Cence</td><td>H1650-W</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger</td><td>CITOGLAS</td><td>01-30253-50</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Referenz</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>normale Kochsalzlösung</td><td>CISEN</td><td>H37022337</td><td></td></tr><tr><td>Optisches Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE E100</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td></td></tr><tr><td>Pipettenspitze (1 mL</td>) <td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipettenspitze (200 & Mikro; L)</td><td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipettierer (1 mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>Pipettierer (200 & Mikro; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>Skalpell</td><td>MARTOR</td><td>23111</td><td></td></tr><tr><td>Kleinformatiger Vortex-Oszillator</td><td>Kylin-Bell</td><td>VORTEX KB3</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>Hystic</td><td>HKQS-180</td><td></td></tr><tr><td>Wright Färbelösung</td><td>Beyotime</td><td>C0135-500ml</td><td></td></tr></tbody></table>

ein umfassender ansatz zur analyse der zellbestandteile von zerebralen blutgerinnseln

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

Die Hirnthrombose, ein Blutgerinnsel in einer Hirnarterie oder -vene, ist die häufigste Art von Hirninfarkt. Die Untersuchung der Zellbestandteile von Blutgerinnseln im Gehirn ist wichtig für die Diagnose, Behandlung und Prognose. Die derzeitigen Ansätze zur Untersuchung der Zellbestandteile der Gerinnsel basieren jedoch hauptsächlich auf der In-situ-Färbung , die für die umfassende Untersuchung der Zellbestandteile ungeeignet ist, da die Zellen fest in die Gerinnsel eingewickelt sind. In früheren Studien ist es gelungen, ein fibrinolytisches Enzym (sFE) aus Sipunculus nudus zu isolieren, das das vernetzte Fibrin direkt abbauen und die Zellbestandteile freisetzen kann. In dieser Studie wurde eine umfassende Methode auf Basis der sFE etabliert, um die Zellkomponenten des zerebralen Thrombus zu untersuchen. Dieses Protokoll umfasst die Auflösung von Gerinnseln, die Zellfreigabe, die Zellfärbung und die routinemäßige Blutuntersuchung. Nach dieser Methode konnten die Zellbestandteile quantitativ und qualitativ untersucht werden. Die repräsentativen Ergebnisse von Experimenten mit dieser Methode werden gezeigt.

In der Anfangsphase des Abbauprozesses wurde festgestellt, dass die Blutgerinnsel eine rote, kompakte Struktur aufwiesen und die Arbeitslösung farblos war. Nach einer Inkubationszeit von 30 Minuten färbte sich die Arbeitslösung hellrot, was darauf hindeutete, dass die gekreuzten Blutzellen in die Arbeitslösung freigesetzt wurden. Die meisten Gerinnsel lösten sich auf, wenn die Inkubationszeit auf 5 h verlängert wurde, und die Arbeitslösung wurde hellrot. Im Gegenteil, es gab auch nach 10 h Inkubation keine signifikante V...

Diese Studie beschreibt eine schnelle und effektive Methode zur Zellkomponentenanalyse von zerebralen Blutgerinnseln durch Gerinnselauflösung, Zellfärbung und routinemäßige Blutuntersuchung.

Ein umfassender Ansatz zur Analyse der Zellbestandteile von zerebralen Blutgerinnseln

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...

Unsere Forschung konzentriert sich hauptsächlich auf Hirnthrombose. Viele Studien haben gezeigt, dass die Zellkomponente des zerebralen Blutgerinnsels mit der Diagnose, Behandlung und Prognose einer Hirnthrombose korreliert. In dieser Studie haben wir eine neuartige Methode zur Analyse von Zellbestandteilen von zerebralen Blutgerinnseln etabliert.Diese Herausforderung bei der Analyse von Zellbestandteilen von zerebralen Blutgerinnseln besteht darin, den gesamten Schaft von Blutgerinnseln zu befreien. Dies liegt daran, dass die Gerinnsel austraten, die Blutkörperchen in den Blutgerinnseln. Gezielte Ansätze zum Starten der Zellbestandteile der Gerinnsel erfolgen am besten im C2-Stehen, was für das umfassende Starten der Zellbestandteile ungeeignet ist.Im Gegenteil, unsere Methode ermöglicht sowohl quantitative als auch qualitative Aufschlüsse über die zerebralen Zellbestandteile. Unsere Methode verwendet ein fibrinolytisches Enzym, um die Faserbildung in Blutgerinnseln zu verzögern und die intakten Zellen freizusetzen. Die aus der Analyse der Zellbestandteile gewonnenen Daten werden es ermöglichen, die Mechanismen der Hirnthrombose auf molekularer Ebene zu untersuchen.Unser Team wird sich weiterhin auf die Untersuchung der Fibrinolyse und des Gerinnungssystems konzentrieren.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Quelle: Kim, D., et. al. Kombinierte Nahinfrarot-Fluoreszenzbildgebung und Mikrocomputertomographie zur direkten Visualisierung von zerebralen Thromboembolien. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video zeigt die Visualisierung des zerebralen Thrombus bei Mäusen mittels Mikro-Computertomographie (Mikro-CT). Einem zerebralen Thrombus-Mausmodell werden Fibrin-gezielte Goldnanopartikel injiziert, die als Kontrastmittel wirken. Die Maus wird auf dem Bett eines Mikro-CT-Geräts platziert, und die Bilder werden...

Visualisierung eines zerebralen Thrombus bei einer Maus mittels Mikro-Computertomographie

Gehirn Myeloidzellen Charakterisierung nach Schlaganfall kann durch Stereologie unter Verwendung des optischen Fraktionator Verfahren durchgeführt werden, oder durch eine durchflusszytometrische Analyse von Gehirn Leukozyten Suspensionen. Beide sind nützliche Techniken, um eine genaue phänotypische Unterscheidung der Haupt myeloischen Zellen-Untergruppen in der ischämischen Gehirn führen.

Stereo und Durchflusszytometrie Charakterisierung von Leukozyten-Subpopulationen in Models der vorübergehend oder bleibend zerebrale Ischämie

Entzündung spielt eine zentrale Rolle bei der Pathogenese des ischämischen Schlaganfalls. Immer mehr Hinweise deuten darauf hin, dass es wie ein zweischneidiges Schwert wirkt, das frühe Hirnverletzungen verschlimmert, aber auch zur späteren Reparatur beiträgt. Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung von Immunzellen aus dem ischämischen Gehirn und ihre anschließende durchflusszytometrische Phänotypisierung.

Isolation und Analyse über Durchflusszytometrie von Immunzellen aus dem ischämischen Gehirn der Maus

Dieses Protokoll beschreibt die Anwendung von kombinierten nahen Infrarot fluoreszierende (NIRF) Bildgebung und Mikrocomputertomographie (microCT) für zerebrale Thromboemboli zu visualisieren. Diese Technik ermöglicht die Quantifizierung von Thrombus Belastung und Evolution. Die NIRF-Bildgebungstechnik zur Visualisierung von Thrombus innerhalb lebenden Tieren unter Verwendung von Gold-Nanopartikeln Thrombus in exzidierten Gehirn fluoreszenzmarkierte, während die microCT Technik visualisiert.

Kombinierte Near-Infrarot-Fluoreszenz-Bildgebung und Mikrocomputertomographie für Direkt Visualizing Cerebral Thromboembolie

Das Ziel dieses Artikels ist es, eine Methode zu präsentieren, die ermöglicht eine 3-dimensionale Rekonstruktion des Baumes zerebrovaskuläre bei Mäusen nach Mikro berechnet, Tomographie und Ermittlung der Volumina der gesamte Behälter-Segmente, die verwendet werden können, zu quantifizieren, zerebralen Vasospasmus in Murine Modelle der Subarachnoidalblutung.

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Wir präsentieren ein In-vitro-Modell für Gefäßerkrankungen, um Vollblut-Wechselwirkungen mit patientenabgeleitetem Endothel zu untersuchen. Dieses System ermöglicht die Untersuchung der thrombogenen Eigenschaften der primären Endothelzellen unter verschiedenen Umständen. Das Verfahren eignet sich besonders zur Beurteilung der Thrombogenität und Antikoagulationstherapie in verschiedenen Phasen der Gerinnung.

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Fibrin ist verantwortlich für die Gerinnselbildung während der Hämostase und Thrombose. Trübungsassays und Thromboelastograhy (TEG) können als synergistische Werkzeuge eingesetzt werden, die eine komplementäre Bewertung eines Gerinnsels ermöglichen. Diese beiden Techniken zusammen können mehr Einblick in die Art und Weise geben, wie Gerinnungsbedingungen die Bildung von Fibringer beeinflussen.

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Traditionelle photothrombotische Schlaganfallmodelle (PTS) induzieren hauptsächlich dichte Thrombozytenaggregate mit einer hohen Resistenz gegen eine lytische Behandlung mit Gewebeplasminogenaktivator (tPA). Hier wird ein modifiziertes murines PTS-Modell durch Co-Injektion von Thrombin und lichtempfindlichem Farbstoff zur Photoaktivierung eingeführt. Das Thrombin-verstärkte PTS-Modell erzeugt gemischte Thrombozyten-Fibrin-Gerinnsel und ist hochempfindlich gegenüber tPA-Thrombolyse.

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Diese Arbeit beschreibt einen mikrofluidischen Assay, der Scherspannung nutzt, um die Thrombusbildung im Blut auszulösen, und charakterisiert den Thrombus anhand mehrerer Auswertungsdimensionen. Der Test kann die prothrombotische Tendenz von Blutproben messen und ist daher nützlich für die Krankheitsdiagnose, Arzneimittelentwicklung sowie grundlegende mechanistische Studien im Zusammenhang mit Thrombose.

Thrombusprofiling-Assay: Eine auf Mikrofluidik basierende Plattform zur umfassenden Charakterisierung biomechanischer Thrombogenese

Erfahren Sie eine neue Methode zur Analyse von Zellbestandteilen zerebraler Blutgerinnsel durch Fibrinolyse und Zellfärbung. Diese Technik ermöglicht die Freisetzung intakter Zellen für quantitative und qualitative Untersuchungen.

Ein umfassender Ansatz zur Analyse der Zellbestandteile von zerebralen Blutgerinnseln

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