October 27th, 2023
Das vorliegende Protokoll enthält detaillierte Beschreibungen für die effiziente Isolierung von extrazellulären Vesikeln im Urin unter Verwendung funktionalisierter magnetischer Beads. Darüber hinaus umfasst es nachfolgende Analysen, einschließlich Western Blotting, Proteomik und Phosphoproteomik.
Wir arbeiten an der Entdeckung von extrazellulären Vesikel-basierten Biomarkern. Ein wichtiger Schritt besteht darin, sie effizient und selektiv zu isolieren. EVtrap, das auf der magnetischen Kügelchen-basierten Trennung basiert, kann uns wirklich helfen, indem es einen hohen Durchsatz bietet, einfach zu bedienen und insbesondere für klinische Anwendungen einfach ist.
Wir haben dieses Protokoll für die Entdeckung von Proteinen und Phosphoprotein-Biomarkern für verschiedene Krankheiten wie Brustkrebs, Nierenkrebs und Parkinson verwendet. Dieser Biomarker wird aus Bioflüssigkeit gewonnen. EVs können potenziell für Flüssigbiopsien verwendet werden, was die klinische Diagnose und die Behandlung weiter verbessern kann.
Derzeit sind die am häufigsten verwendeten Ansätze zur Isolierung extrazellulärer Vesikel die Ultrazentrifugation und die Fällung, aber diese Methoden sind auf die Co-Isolierung von Verunreinigungen beschränkt und haben auch eine geringe Effizienz. Unsere EVtrap-Methode wird also eine effektivere Möglichkeit zur Isolierung von Elektrofahrzeugen bieten, was eine reproduzierbarere und empfindlichere Methode ermöglicht und auch der nachgelagerten Analyse zugute kommt. Wir arbeiten an zwei Dingen.
Erstens entwickeln wir die Methoden und Protokolle für die Isolierung von Elektrofahrzeugen und eine nachgelagerte Analyse, insbesondere eine auf Massensicherungen basierende Analyse, weiter. Zweitens untersuchen wir aufgrund des Vorteils der EVtrap verschiedene Anwendungen im klinischen Bereich.
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Dieses Protokoll beschreibt die effiziente Isolierung von extrazellulären Vesikeln (EVs) aus Urin mittels funktionalisierter magnetischer Perlen. Es detailliert auch nachfolgende Analysen wie Western Blotting, Proteomik und Phosphoproteomik, die für die Biomarker-Entdeckung wesentlich sind.
Efficient and selective isolation of extracellular vesicles (EVs) from biofluids is a critical inflection point for proteomics-driven biomarker discovery in biopharma R&D. This chemical affinity-based magnetic bead protocol enables high-yield, reproducible EV isolation, directly supporting quantitative proteomic and phosphoproteomic analyses essential for early disease detection and target validation. The method enhances predictive confidence in translational biomarker pipelines and supports risk-adjusted portfolio advancement.
This EV isolation protocol integrates at the interface of early discovery and translational research, bridging sample preparation with quantitative proteomics and phosphoproteomics analysis.