Name: Etablierung eines experimentellen Mausmodells des Endometrioms zur Untersuchung der damit verbundenen Unfruchtbarkeit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Lernen Sie die Etablierung eines experimentellen Mausmodells des Endometrioms zur Untersuchung der damit verbundenen Unfruchtbarkeit. Diese Methode nutzt C57BL/6J-Mäuse, um pathophysiologische Mechanismen zu erforschen und die Reproduktionsmedizin voranzubringen.

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<meta charset="utf8"></head><body>Entwicklung eines neuartigen Endometriom-simulierenden Mausmodells

<table><tbody><tr><td>1 cc Spritze mit 25 G Nadel</td><td>BD Biowissenschaften</td><td>301320</td><td></td></tr><tr><td>10 mm Gewebekulturschale</td><td>FALKE</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>10% gepuffertes Formalin</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>10x Puffer mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AM9625</td><td></td></tr><tr><td>30 G Nadel</td><td>BD Biowissenschaften</td><td>305107</td><td></td></tr><tr><td>5-0 schwarzes geflochtenes Seidennaht</td><td>Ethicon Inc.</td><td>W500H</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Selbstklebende Objektträger für Mikroskope</td><td>Marienfeld</td><td>810401</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphin Injektion&nbsp;</td><td>Med-Vet International</td><td>RXBUPRENOR5</td><td></td></tr><tr><td>Doppelköpfiges Wattestäbchen</td><td>SANYO Co., LTD.</td><td>HUBY-340</td><td></td></tr><tr><td>Feine Pinzette</td><td>Werkzeuge für die Feinwissenschaft</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Alfasan International b.v</td><td>2203095-08</td><td></td></tr><tr><td>Mikroröhrchen</td><td>Corning&nbsp;</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Excelta Corporation</td><td>2827-NH-35-SE-ND</td><td></td></tr><tr><td>Augensalbe</td><td>Wichtige Pharmazeutika</td><td>10033691</td><td></td></tr><tr><td>Periodisches Säureschiff (PAS) Färbeset&nbsp;</td><td>Abcam (Englisch)</td><td>Artikel-Nr.: 150680</td><td></td></tr><tr><td>Puderfreie, sterile Handschuhe</td><td>Fisher Scientific</td><td>19020558</td><td></td></tr><tr><td>Verarbeitung/Einbettung von Kassetten</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-197-700A</td><td></td></tr><tr><td>Skalpell Größe 3</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-079-657</td><td></td></tr><tr><td>Kleine gezackte, halbgekrümmte Pinzette</td><td>Roboz Chirurgische Instrumente Co.</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Kleine chirurgische Schere</td><td>Roboz Chirurgische Instrumente Co.</td><td>RS-5850</td><td></td></tr><tr><td>Standard-Lichtmikroskop</td><td></td><td></td><td>Zur Auswertung von vaginalzytologischen Abstrichen und histologischen Analysen.</td></tr><tr><td>Skalpellklingen aus Stahl #10</td><td>B.Braun</td><td>BB510</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Gaze</td><td>MEDICOM</td><td>HMWS 077</td><td></td></tr><tr><td>Petrischalen aus sterilisiertem Pyrexglas</td><td>Corning</td><td>70160-101</td><td></td></tr><tr><td>Thermogeregelter elektrischer Belag</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>VICRYL RAPIDE (Polyglactin 910) resorbierbares Nahtmaterial</td><td>Ethicon Inc.</td><td>Nr. W9918</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin&nbsp;</td><td>Alfasan International b.v</td><td>2110333-10</td><td></td></tr></tbody></table>

etablierung eines experimentellen mausmodells des endometrioms zur untersuchung der damit verbundenen unfruchtbarkeit

Establishment of an Experimental Mouse Model of Endometrioma to Study its Related Infertility

Die erfolgreiche Etablierung von OMA Von den 12 Mäusen, die dem Transplantationsprotokoll unterzogen wurden, wiesen 10 charakteristische OMA-Läsionen auf, sowohl auf grobanatomischer als auch auf histologischer Ebene, was einer Erfolgsrate von 83% entspricht. Die grobe Untersuchung ergab flüssigkeitsgefüllte Läsionen, die an den Eierstöcken anhafteten und an klinische OMA-Präsentationen erinnerten (Abbildung 2). Die histopathologische Untersuchung, wie in Abbildung 3 dargestellt, bestätigte die erfolgreiche Implantation des ektopischen Endometriumgewebes. Darüber hinaus führte die Infiltration von endometriotischen Läsionen zu einer massiven Atresie der Follikel neben den Implantaten, was auf eine Beeinträchtigung des ovariellen Milieus hinweist.
Modellspezifität Entscheidend für die Validität des Modells war seine Spezifität für die ovarielle Endometriose. Bei einer gründlichen Untersuchung wurden keine fremden endometriotischen Implantate in einem anderen Becken- oder Bauchorgan identifiziert, was die Präzision des Modells und sein Potenzial als robustes Werkzeug zur Untersuchung des Endometrioms und der damit verbundenen Unfruchtbarkeit unterstreicht.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Generierung des Endometriommodells. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Grobanatomie des Endometrioms. Im Vergleich zur Scheinkontrollgruppe war in der OMA-Gruppe in der Morphologie 4 Wochen nach der Transplantation ein ektopisches Endometriumzystenwachstum in Verbindung mit der Ovarialmorphologie sichtbar. Blau gestrichelter Umriss: endometriotische Läsion. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig03.jpg"> 
Abbildung 3: Histologisch gefärbter Schnitt einer Endometriumläsion aus dem Mausmodell. Im Vergleich zur Schein-Kontrollgruppe war in der OMA-Gruppe in der Histologie 4 Wochen nach der Transplantation ein ektopisches endometriumzystisches Wachstum in Assoziation mit dem Ovar sichtbar. Schwarze Pfeile zeigen atretische Follikel an. Maßstabsleisten = 0,5 mm. Abkürzung: OMA = Endometriom. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Etablierung eines experimentellen Mausmodells des Endometrioms zur Untersuchung der damit verbundenen Unfruchtbarkeit

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals ...

Der Schwerpunkt unserer Forschung liegt auf dem Verständnis der Mechanismen, die der Endometriom-assoziierten Unfruchtbarkeit zugrunde liegen. Unser Ziel ist es, die Wissenslücke zu schließen, indem wir ein Mausmodell entwickeln, das Endometriome simuliert, und dessen Auswirkungen auf die Fertilität untersuchen. Zu den jüngsten Entwicklungen auf dem Gebiet der Endometrioseforschung gehören die Fortschritte im Verständnis der molekularen Mechanismen, die der Endometriose zugrunde liegen, die Identifizierung neuer Marker für Diagnose und Behandlung sowie die Entwicklung innovativer Modelle zur Untersuchung spezifischer Subtypen wie des Endometrioms. Diese Entwicklungen tragen dazu bei, das Wissen und die möglichen Therapiestrategien für Endometriose zu verbessern. Zu den aktuellen experimentellen Herausforderungen in der Endometriomforschung gehören das Fehlen eines zuverlässigen Tiermodells, das begrenzte Verständnis der Pathogenese und der Auswirkungen auf die Fruchtbarkeit sowie der Bedarf an Rezidivstudien und diagnostischen Tests. Das Endometriom-Mausmodell und die Einbeziehung der Ergebnisse gehen diese Herausforderungen an und bringen das Feld voran.Unser Protokoll bietet deutliche Vorteile im Vergleich zu anderen Techniken. Es konzentriert sich speziell auf die Nachahmung von Endometriomen, während mit dieser Methode keine anderen Subtypen etabliert wurden. Mit einer hohen Erfolgsquote ermöglicht es genetische Veränderungen und repliziert Fortpflanzungsmerkmale, die denen des Menschen ähneln, was es zu einem wertvollen Werkzeug für die Untersuchung von endometriombedingter Unfruchtbarkeit macht. Unsere Erkenntnisse ebneten den Weg für eine neue Ära der Endometrioseforschung. Indem es eine langjährige Lücke schließt, verspricht unser Modell transformative Erkenntnisse, die unser Verständnis, unsere Behandlung und möglicherweise auch unsere Prävention von Endometriomen revolutionieren. Durch die Integration von Erkenntnissen aus Rezidiv- und Diagnosestudien erweitert unsere Forschung den breiteren Kontext der Endometrioseforschung und der Patientenversorgung.[Erzähler] Nachdem Sie Einstreu mit männlichen Pheromonen gesammelt haben, führen Sie sie 48 Stunden lang in den weiblichen Mauskäfig ein. Gießen Sie 10 Milliliter PBS in eine Petrischale und tauchen Sie ein Ende eines Wattestäbchens hinein, um die Flüssigkeit aufzunehmen. Nehmen Sie eine Maus vorsichtig aus dem Käfig und setzen Sie sie auf den Deckel. Führen Sie das angefeuchtete Wattestäbchen vorsichtig in die Vagina ein und drehen Sie das Tupfer vorsichtig um 45 Grad zur Längsachse des Tierkörpers. Nachdem Sie die Zellen von den vaginalen Leuchtwänden gesammelt haben, ziehen Sie den Tupfer vorsichtig zurück. Rollen Sie die Tupferspitze vorsichtig auf einen sauberen, vorbeschrifteten Objektträger, um die gesammelten Zellen zu übertragen. Untersuchen Sie den Objektträger unter dem Mikroskop auf das Vorhandensein von verhornten Epithelzellen, die auf das Brunststadium hinweisen. Desinfizieren Sie zunächst den Bauchbereich der weiblichen Maus im Donator-euthanasierten Brunststadium mit 70 % Ethanol. Machen Sie mit einer sterilen chirurgischen Schere einen einen Zentimeter großen Schnitt entlang der Mittellinie des Bauchfells, wodurch die Muskelschicht freigelegt wird. Verwenden Sie dann eine andere Schere, um die Muskelschicht zu durchtrennen und die Beckenhöhle freizulegen. Schließen Sie die Spitzen der Pinzette und heben Sie den Darm vorsichtig mit dem stumpfen Mittelteil an. Nachdem Sie die Gebärmutter lokalisiert haben, präparieren Sie das gesamte Gebärmutterhorn steril und stellen Sie sicher, dass beide Gebärmutterhörner entfernt werden. Legen Sie das herausgeschnittene Gewebe in eine Petrischale, die PBS enthält, und entfernen Sie das überschüssige Fettgewebe. Präparieren Sie das Gewebe mit einem sterilen Skalpell minutiös in ein Millimeter große Würfel. Fügen Sie regelmäßig PBS hinzu, um das Gewebe feucht zu halten. Legen Sie die anästhesierte Empfängermaus in Rückenlage auf eine sterile OP-Platte. Identifizieren Sie die Operationsstelle, indem Sie die Hinterbeine vorsichtig manipulieren, um einen knöchernen Vorsprung unter der Haut zu spüren. Desinfizieren Sie den Operationsbereich mit einem 70%igen Ethanoltupfer und anschließend mit Betadine. Machen Sie an der gewählten Stelle einen präzisen seitlichen Schnitt zwischen drei und fünf Millimetern. Stabilisieren Sie den Eierstock mit einer nicht-dominanten Handzange und injizieren Sie 100 Mikroliter PBS in die Schleimbeutel der Eierstöcke, wobei Sie eine leichte Trennung beobachten. Machen Sie einen kleinen Schlitz in den Schleimbeutel und transplantieren Sie mit einer Mikrozange die ein Millimeter großen gewürfelten Fragmente des Gebärmuttergewebes. Nach der Operation vernähen Sie die Muskelschichten mit resorbierbaren Nähten und die Haut mit nicht resorbierbaren Nähten. Nach vier Wochen nehmen Sie die transplantierte Empfängermaus aus dem Käfig. Machen Sie einen Mittellinienschnitt an der euthanasierten Empfängermaus und legen Sie die Bauchhöhle für die Organinspektion frei. Untersuchen Sie die Bauchhöhle gründlich auf fremde endometriotische Läsionen. Extrahieren Sie dann die Eierstöcke mit sichtbaren Läsionen für die Fotografie. Fixieren Sie die Eierstöcke mit Läsionen in 10% neutralem gepuffertem Formalin. Nachdem Sie die Gewebeschnitte geschnitten und auf einem Objektträger montiert haben, geben Sie die Xylollösung des Objektträgers, um das Paraffin zu entfernen. Rehydrieren Sie die Gewebeabschnitte, indem Sie den Objektträger in eine Reihe von abnehmenden Ethanolkonzentrationen legen. Behandeln Sie Gewebeschnitte fünf bis 10 Minuten lang bei Raumtemperatur mit 1 % periodischer Säure. Spülen Sie dann den Objektträger gründlich mit destilliertem Wasser ab, um alle Reste periodischer Säure zu entfernen. Färben Sie nun die Gewebeschnitte 15 Minuten lang mit einer Schichtlösung. Spülen Sie den Objektträger in heißem Leitungswasser ab, um überschüssige Flecken zu entfernen, und dann in destilliertem Wasser. Die Gewebeschnitte werden zwei bis drei Minuten lang mit Mayer-Hämatoxylin gegengefärbt. Spülen Sie den Objektträger unter fließendem Leitungswasser ab, bevor Sie das Bläuereagenz 30 Sekunden lang auftragen. Nachdem Sie den Objektträger in destilliertem Wasser gespült haben, dehydrieren Sie die Abschnitte in zunehmender Ethanolkonzentration. Tauchen Sie die Abschnitte in Xylol, um sie transparent zu machen. Tragen Sie ein Eindeckmedium auf die Partien auf und platzieren Sie vorsichtig einen Deckglas, um Luftblasen zu vermeiden. Untersuchen Sie den Objektträger nach dem Trocknen unter einem Lichtmikroskop auf das Vorhandensein von Endometriumdrüsen, Stroma und hämorrhagischen Zysten, die eine Endometriose im Eierstock bestätigen. Im Vergleich zur Schein-Kontrollgruppe war in der Endometriumgruppe vier Wochen nach der Transplantation ein ektopisches endometriumzystisches Wachstum in Verbindung mit der Ovarialmorphologie sichtbar. Weitere histopathologische Untersuchungen bestätigten die erfolgreiche Implantation des ektopischen Endometriumgewebes in die Endometriumgruppe.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Eine Beschreibung der chirurgischen Induktion von Endometriose bei Mäusen und Ratten durch auto-Transplantation von Gebärmutter-Gewebe auf die arterielle Kaskade der Darm Mesenterium.

Maus-Modell der chirurgisch-induzierten Endometriose durch Auto-Transplantation von Gebärmutter-Gewebe

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll für live-Aufnahmen von Eindringmittel beschriftete menschliche endometrialen Fragmente bei Mäusen verpflanzt. Die Methode ermöglicht das untersuchen die Auswirkungen der Medikamente der Wahl auf die Größe der nichtmalignem Läsion durch Überwachung und Quantifizierung der Fluoreszenz emittiert von fluoreszierenden Reporter in...

Nicht-invasive Überwachung der Größe der Läsion in einer heterologen Mausmodell der Endometriose

Viele Nagetiermodelle der Endometriose sind durch technische Komplexität, Reproduzierbarkeit und/oder den Bedarf an immungeschwächten Tieren oder speziellen Reportermäusen begrenzt. Wir präsentieren ein vereinfachtes System der Läsionsinduktion mit jeder experimentellen Maus mit einem unabhängig überprüfbaren, objektiven Scoring-System und ohne Notwendigkeit für Ovariektomie oder Überlebensoperation.

Ein syngenes Murinmodell der Endometriose mit natürlich radfahrenden Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Etablierung von Endometrium-Epithel-Organoiden der Maus für die Genexpression und histologische Analysen.

Etablierung von 3D-Endometrium-Organoiden aus der Gebärmutter der Maus

Die Etablierung einer Schwangerschaft ist ein dynamischer Prozess, bei dem es zu komplexen Wechselwirkungen zwischen Embryo und Gebärmutter kommt. Der genaue Beitrag der mütterlichen Gebärmutterumgebung zu diesen Prozessen ist nach wie vor ein aktives Forschungsgebiet. Hier werden detaillierte Protokolle zur Verfügung gestellt, die bei der Entwicklung von In-vivo-Tiermodellen helfen, um diese Forschungsfragen zu beantworten.

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Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Erstellung eines einfachen und effizienten In-vitro-Modells für die Embryoimplantation zur Bewertung der relevanten Moleküle, die den Einnistungsprozess des Embryos beeinflussen.

Etablierung eines Embryoimplantationsmodells in vitro

Dieser Artikel beschreibt ein detailliertes Protokoll zur Herstellung eines zuverlässigen und reproduzierbaren dünnen Endometriums mit einer sehr niedrigen Mortalitätsrate und minimalen intrauterinen Adhäsionen durch Injektion von 95% Ethanol in die Gebärmutter der Maus innerhalb von 1-3 Minuten.

Etablierung eines Mausmodells für dünnes Endometrium

Verlust von peritonealen Integrität bietet ein neues Paradigma zu verstehen und zu behandeln chronischen Beckenschmerzen bei Frauen mit leichten Formen von Endometriose und kann leicht nachgewiesen werden unter Verwendung intraoperative Instillation von Farbstoff zum Zeitpunkt der Laparoskopie.

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In Standardkulturverfahren, Zellen aus ihrer physiologischen Umgebung genommen und auf die Kunststoffoberfläche einer Schale gezüchtet. Um das Verhalten von primären humanen Knochenmarkzellen untersuchen wir eine 3-D-Kultur-System, wo Zellen unter Bedingungen rekapituliert die native Mikroumgebung des Gewebes gewachsen erstellt.

Eine dreidimensionale Zellkulturmodell zu primären humanen Knochenmark und seine Malignome Studieren

Wir haben eine neue Ex-vivo-Modell, um die Hormonwirkung in der menschlichen Brust zu studieren entwickelt. Es wird auf das Gewebe Mikrostrukturen von chirurgischen Brustgewebeproben, die Gewebearchitektur, interzellulären Wechselwirkungen und parakrine Signal bewahren isoliert basiert.

Ein<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Modell um die Hormonwirkung in der menschlichen Brust Studieren

Lernen Sie die Etablierung eines experimentellen Mausmodells des Endometrioms zur Untersuchung der damit verbundenen Unfruchtbarkeit. Diese Methode nutzt C57BL/6J-Mäuse, um pathophysiologische Mechanismen zu erforschen und die Reproduktionsmedizin voranzubringen.

Etablierung eines experimentellen Mausmodells des Endometrioms zur Untersuchung der damit verbundenen Unfruchtbarkeit

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