Etablierung eines experimentellen Mausmodells des Endometrioms zur Untersuchung der damit verbundenen Unfruchtbarkeit

Der Schwerpunkt unserer Forschung liegt auf dem Verständnis der Mechanismen, die der Endometriom-assoziierten Unfruchtbarkeit zugrunde liegen. Unser Ziel ist es, die Wissenslücke zu schließen, indem wir ein Mausmodell entwickeln, das Endometriome simuliert, und dessen Auswirkungen auf die Fertilität untersuchen. Zu den jüngsten Entwicklungen auf dem Gebiet der Endometrioseforschung gehören die Fortschritte im Verständnis der molekularen Mechanismen, die der Endometriose zugrunde liegen, die Identifizierung neuer Marker für Diagnose und Behandlung sowie die Entwicklung innovativer Modelle zur Untersuchung spezifischer Subtypen wie des Endometrioms. Diese Entwicklungen tragen dazu bei, das Wissen und die möglichen Therapiestrategien für Endometriose zu verbessern. Zu den aktuellen experimentellen Herausforderungen in der Endometriomforschung gehören das Fehlen eines zuverlässigen Tiermodells, das begrenzte Verständnis der Pathogenese und der Auswirkungen auf die Fruchtbarkeit sowie der Bedarf an Rezidivstudien und diagnostischen Tests. Das Endometriom-Mausmodell und die Einbeziehung der Ergebnisse gehen diese Herausforderungen an und bringen das Feld voran.

Unser Protokoll bietet deutliche Vorteile im Vergleich zu anderen Techniken. Es konzentriert sich speziell auf die Nachahmung von Endometriomen, während mit dieser Methode keine anderen Subtypen etabliert wurden. Mit einer hohen Erfolgsquote ermöglicht es genetische Veränderungen und repliziert Fortpflanzungsmerkmale, die denen des Menschen ähneln, was es zu einem wertvollen Werkzeug für die Untersuchung von endometriombedingter Unfruchtbarkeit macht. Unsere Erkenntnisse ebneten den Weg für eine neue Ära der Endometrioseforschung. Indem es eine langjährige Lücke schließt, verspricht unser Modell transformative Erkenntnisse, die unser Verständnis, unsere Behandlung und möglicherweise auch unsere Prävention von Endometriomen revolutionieren. Durch die Integration von Erkenntnissen aus Rezidiv- und Diagnosestudien erweitert unsere Forschung den breiteren Kontext der Endometrioseforschung und der Patientenversorgung.

[Erzähler] Nachdem Sie Einstreu mit männlichen Pheromonen gesammelt haben, führen Sie sie 48 Stunden lang in den weiblichen Mauskäfig ein. Gießen Sie 10 Milliliter PBS in eine Petrischale und tauchen Sie ein Ende eines Wattestäbchens hinein, um die Flüssigkeit aufzunehmen. Nehmen Sie eine Maus vorsichtig aus dem Käfig und setzen Sie sie auf den Deckel. Führen Sie das angefeuchtete Wattestäbchen vorsichtig in die Vagina ein und drehen Sie das Tupfer vorsichtig um 45 Grad zur Längsachse des Tierkörpers. Nachdem Sie die Zellen von den vaginalen Leuchtwänden gesammelt haben, ziehen Sie den Tupfer vorsichtig zurück. Rollen Sie die Tupferspitze vorsichtig auf einen sauberen, vorbeschrifteten Objektträger, um die gesammelten Zellen zu übertragen. Untersuchen Sie den Objektträger unter dem Mikroskop auf das Vorhandensein von verhornten Epithelzellen, die auf das Brunststadium hinweisen. Desinfizieren Sie zunächst den Bauchbereich der weiblichen Maus im Donator-euthanasierten Brunststadium mit 70 % Ethanol. Machen Sie mit einer sterilen chirurgischen Schere einen einen Zentimeter großen Schnitt entlang der Mittellinie des Bauchfells, wodurch die Muskelschicht freigelegt wird. Verwenden Sie dann eine andere Schere, um die Muskelschicht zu durchtrennen und die Beckenhöhle freizulegen. Schließen Sie die Spitzen der Pinzette und heben Sie den Darm vorsichtig mit dem stumpfen Mittelteil an. Nachdem Sie die Gebärmutter lokalisiert haben, präparieren Sie das gesamte Gebärmutterhorn steril und stellen Sie sicher, dass beide Gebärmutterhörner entfernt werden. Legen Sie das herausgeschnittene Gewebe in eine Petrischale, die PBS enthält, und entfernen Sie das überschüssige Fettgewebe. Präparieren Sie das Gewebe mit einem sterilen Skalpell minutiös in ein Millimeter große Würfel. Fügen Sie regelmäßig PBS hinzu, um das Gewebe feucht zu halten. Legen Sie die anästhesierte Empfängermaus in Rückenlage auf eine sterile OP-Platte. Identifizieren Sie die Operationsstelle, indem Sie die Hinterbeine vorsichtig manipulieren, um einen knöchernen Vorsprung unter der Haut zu spüren. Desinfizieren Sie den Operationsbereich mit einem 70%igen Ethanoltupfer und anschließend mit Betadine. Machen Sie an der gewählten Stelle einen präzisen seitlichen Schnitt zwischen drei und fünf Millimetern. Stabilisieren Sie den Eierstock mit einer nicht-dominanten Handzange und injizieren Sie 100 Mikroliter PBS in die Schleimbeutel der Eierstöcke, wobei Sie eine leichte Trennung beobachten. Machen Sie einen kleinen Schlitz in den Schleimbeutel und transplantieren Sie mit einer Mikrozange die ein Millimeter großen gewürfelten Fragmente des Gebärmuttergewebes. Nach der Operation vernähen Sie die Muskelschichten mit resorbierbaren Nähten und die Haut mit nicht resorbierbaren Nähten. Nach vier Wochen nehmen Sie die transplantierte Empfängermaus aus dem Käfig. Machen Sie einen Mittellinienschnitt an der euthanasierten Empfängermaus und legen Sie die Bauchhöhle für die Organinspektion frei. Untersuchen Sie die Bauchhöhle gründlich auf fremde endometriotische Läsionen. Extrahieren Sie dann die Eierstöcke mit sichtbaren Läsionen für die Fotografie. Fixieren Sie die Eierstöcke mit Läsionen in 10% neutralem gepuffertem Formalin. Nachdem Sie die Gewebeschnitte geschnitten und auf einem Objektträger montiert haben, geben Sie die Xylollösung des Objektträgers, um das Paraffin zu entfernen. Rehydrieren Sie die Gewebeabschnitte, indem Sie den Objektträger in eine Reihe von abnehmenden Ethanolkonzentrationen legen. Behandeln Sie Gewebeschnitte fünf bis 10 Minuten lang bei Raumtemperatur mit 1 % periodischer Säure. Spülen Sie dann den Objektträger gründlich mit destilliertem Wasser ab, um alle Reste periodischer Säure zu entfernen. Färben Sie nun die Gewebeschnitte 15 Minuten lang mit einer Schichtlösung. Spülen Sie den Objektträger in heißem Leitungswasser ab, um überschüssige Flecken zu entfernen, und dann in destilliertem Wasser. Die Gewebeschnitte werden zwei bis drei Minuten lang mit Mayer-Hämatoxylin gegengefärbt. Spülen Sie den Objektträger unter fließendem Leitungswasser ab, bevor Sie das Bläuereagenz 30 Sekunden lang auftragen. Nachdem Sie den Objektträger in destilliertem Wasser gespült haben, dehydrieren Sie die Abschnitte in zunehmender Ethanolkonzentration. Tauchen Sie die Abschnitte in Xylol, um sie transparent zu machen. Tragen Sie ein Eindeckmedium auf die Partien auf und platzieren Sie vorsichtig einen Deckglas, um Luftblasen zu vermeiden. Untersuchen Sie den Objektträger nach dem Trocknen unter einem Lichtmikroskop auf das Vorhandensein von Endometriumdrüsen, Stroma und hämorrhagischen Zysten, die eine Endometriose im Eierstock bestätigen. Im Vergleich zur Schein-Kontrollgruppe war in der Endometriumgruppe vier Wochen nach der Transplantation ein ektopisches endometriumzystisches Wachstum in Verbindung mit der Ovarialmorphologie sichtbar. Weitere histopathologische Untersuchungen bestätigten die erfolgreiche Implantation des ektopischen Endometriumgewebes in die Endometriumgruppe.