Real-Time Polymerase Chain Reaction-Based Detection and Quantification of Hepatitis B Virus DNA

Satyabrata Bag; Santanu Ghosh; Roopa Lalwani; Pratishtha Vishnoi; Sudheer Gupta; Dhirendra Dubey

doi:10.3791/66249

Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktions-basierter Nachweis und Quantifizierung von Hepatitis-B-Virus-DNA

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Biology

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Real-Time Polymerase Chain Reaction-Based Detection and Quantification of Hepatitis B Virus DNA

Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktions-basierter Nachweis und Quantifizierung von Hepatitis-B-Virus-DNA

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04:11 min

December 15, 2023

DOI: 10.3791/66249-v

Satyabrata Bag¹, Santanu Ghosh¹, Roopa Lalwani¹, Pratishtha Vishnoi¹, Sudheer Gupta¹, Dhirendra Dubey¹

¹3B BlackBio Biotech India Limited

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a real-time PCR-based protocol for the detection and quantification of hepatitis B virus (HBV) DNA, which is essential for accurate diagnosis and monitoring of HBV infections. The method is recognized as the gold standard due to its sensitivity and specificity in identifying HBV viral loads.

Key Study Components

Research Area

Hepatitis B virus (HBV) detection
Viral load quantification
Clinical diagnostics

Background

Importance of accurate HBV detection in clinical settings
Challenges in identifying low viral loads and occult infections
Comparison of PCR with other diagnostic techniques

Methods Used

Real-time polymerase chain reaction (PCR)
Samples include HBV positive controls
Use of WHO international standard for calibration

Main Results

Successful quantification of HBV DNA using a standard curve
Identification of samples with significant amplification
Parameter calibration ensuring high accuracy and reproducibility

Conclusions

This study provides a reliable protocol for HBV DNA detection and viral load measurement.
The method’s high sensitivity makes it a valuable tool in hepatitis research and clinical diagnostics.

Frequently Asked Questions

What is the significance of detecting HBV DNA?

Detecting HBV DNA is crucial for diagnosing HBV infections and monitoring treatment effectiveness.

How does real-time PCR work?

Real-time PCR amplifies DNA and simultaneously quantifies it using fluorescent dyes during the PCR cycle.

What challenges exist in HBV detection?

Challenges include detecting low viral loads and accommodating various HBV genotypes.

How is the accuracy of PCR results ensured?

Accuracy is ensured by standardizing threshold settings across samples and validating with controls.

What role do quantification standards play?

Quantification standards provide a reference for measuring unknown samples, ensuring reliable results.

Can this protocol detect new mutations?

While the protocol is sensitive, emerging mutations may still pose challenges in accurate detection.

Is this method suitable for clinical use?

Yes, this real-time PCR method is fast, sensitive, and suited for clinical diagnostics.

Der auf der Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) basierende Nachweis und die Quantifizierung der DNA des Hepatitis-B-Virus (HBV) ist eine empfindliche und genaue Methode zur Diagnose und Überwachung von HBV-Infektionen. Hier stellen wir ein Protokoll für den HBV-DNA-Nachweis und die Viruslastmessung einer Probe vor.

In diesem Video zeigen wir Ihnen ein Schritt-für-Schritt-Protokoll zum Nachweis von HBV-DNA und zur Quantifizierung ihrer Viruslast mit unserem IVD-zugelassenen Echtzeit-PCR-Abfall durch das PCR-HBV-Viruslast-Kit. Die HBV-Diagnostikforschung verwendet Echtzeit-PCR, digitale PCR, NGS und serologische Tests. Die Realtime-PCR ist der Goldstandard für den HBV-DNA-Nachweis und die Quantifizierung der Viruslast.

Die digitale PCR quantifiziert die absolute Viruslast. NGS identifiziert neue Mutationen und serologische Tests weisen Antigene oder Antikörper nach. Es gibt mehrere experimentelle Herausforderungen bei der Erkennung von Fällen mit niedriger Viruslast und okkulten HBV-Infektionen.

Einige Assays fallen möglicherweise nicht bei allen HBV-Genotypen gut ab, und neu auftretende Mutationen können zu falsch negativen Ergebnissen führen. Im Vergleich zu anderen Techniken ist das realtime PCR-basierte Protokoll die sensitivste, spezifischste und quantitativste Methode, die für den HBV-Nachweis verfügbar ist. Es ist auch eine relativ schnelle Technik, was sie ideal für den klinischen Einsatz macht.

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