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DOI: 10.3791/66275-v
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Intrinsisch ungeordnete Regionen (IDRs) sind flexible Proteindomänen, die ihre Konformation als Reaktion auf Umweltveränderungen verändern. Der Ensemble-Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer (FRET) kann Proteindimensionen unter verschiedenen Bedingungen abschätzen. Wir präsentieren einen FRET-Ansatz zur Bewertung der strukturellen IDR-Sensitivität in lebenden Saccharomyces cerevisiae-Zellen unter hyperosmotischem Stress.
Unser Ziel ist es zu verstehen, wie intrinsisch ungeordnete Regionen Veränderungen der physikalisch-chemischen Eigenschaften der Umwelt wahrnehmen und darauf reagieren. Wir kombinieren biophysikalische, biochemische, genetische und zellbiologische Techniken, um zu überwachen, wie sich das strukturelle Ensemble ungeordneter Regionen in lebenden Zellen verändert. Proteinbiophysikalische Techniken werden derzeit verwendet, um die Bestätigung von IVRs zu untersuchen.
Dazu gehören Kernspinresonanz, Zirkulardichroismus, Kleinwinkel-Röntgenstreuung und FRET. Die meisten dieser Techniken können nur in vitro angewendet werden. Die Untersuchung der Bestätigung von IVRs in einem zellulären Kontext ist eine Herausforderung mit hohen Kosten und zeitaufwändigen Techniken.
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