Dissektion, histologische Verarbeitung und Genexpressionsanalyse von murinem supraklavikulärem braunem Fettgewebe
29. März 2024
Hier bieten wir ein praktisches Verfahren zur Präparierung und Durchführung histologischer und Genexpressionsanalysen von murinem supraklavikulärem braunem Fettgewebe.
1 Unser Labor konzentriert sich auf die Etablierung von2 supraklavikulärem braunem Fettgewebe 3 oder SCBAT als wertvolles Depot 4 für die Analyse von braunem Fett aufgrund seiner anatomischen Ähnlichkeiten 5 mit menschlichem braunem Fettgewebe. 6 Dieses Protokoll zielt darauf ab, die Zugänglichkeit7 der SCBAT-Forschung zu verbessern. 8 Dieses Depot kann aufgrund seiner geringen Größe 9 und der Nähe zu großen Venen im Hals einschüchternd wirken. 10 Daher ist es zwingend erforderlich, 11 ein einfaches Verfahren zum Extrahieren und Verarbeiten von SCBAT bereitzustellen.
12 Unsere Methodik zeichnet sich13 erstens durch die Verwendung eines Präpariermikroskops 14 bei der Extraktion von SCBAT aus. 15 Dies erhöht die Präzision 16 und die Extraktionseffizienz 17, die beide entscheidend sind, wenn 18 mit einem so kleinen Gewebedepot gearbeitet wird. 19 Zweitens homogenisierten wir die gefrorenen SCBAT-Proben 20, bevor wir eine Genexpressionsanalyse 21 durchführten, um die RNA-Ausbeute zu erhöhen und 22 eine so geringe Menge an verfügbarem Gewebe zu kompensieren.
23 Wir konzentrieren uns derzeit auf die Definition24 der genetischen Auskleidungskante von SCBAT, 25 auf die Identifizierung der Verklärungsnetzwerke 26, die seine Entwicklung regulieren, 27 und die Entwicklung eines zerebralen Modells 28 zur Erforschung seiner physiologischen Funktion beim Menschen.
Übersicht
Diese Studie stellt ein detailliertes Protokoll für die Dissektion des supraclaviculären braunen Fettgewebes (scBAT) von Mäusen bereit, das aufgrund seiner anatomischen Ähnlichkeiten zum menschlichen braunen Fettgewebe als wertvolles Modell zur Analyse des braunen Fettgewebes angesehen wird. Der Schwerpunkt liegt darauf, die Zugänglichkeit der scBAT-Forschung durch präzise Dissektion sowie anschließende histologische und Genexpressionsanalysen zu verbessern.
Wesentliche Studienkomponenten
Forschungsbereich
- Supraklavikuläres braunes Fettgewebe (scBAT)
- Genexpressionsanalyse
- histologische Techniken
Hintergrund
- scBAT wird aufgrund seiner potenziellen Bedeutung für die Stoffwechselforschung anerkannt.
- Die anatomische Nähe zu großen Venen stellt eine Herausforderung bei der Dissektion dar.
- Es besteht Bedarf an zugänglichen und präzisen Extraktionsmethoden.
Verwendete Methoden
- Präzise Dissektion unter Verwendung eines Mikroskops.
- Analyse der Genexpression nach Homogenisierung des Gewebes.
- Färbung mit Hämaluminium und Eosin zur histologischen Beurteilung.
Hauptergebnisse
- Das beschriebene Protokoll verbessert die Extraktionseffizienz und die Qualität der Genexpressionsdaten.
- scBAT zeigt charakteristische Gewebestrukturen des braunen Fettgewebes.
- Die Studie legt die Grundlage für das Verständnis der genetischen Herkunft und physiologischen Funktionen von scBAT.
Schlussfolgerungen
- Dieses Protokoll ermöglicht eine effektivere Erforschung der Rolle von scBAT im Stoffwechsel.
- Die Ergebnisse tragen zum weiteren Verständnis der Biologie des Fettgewebes bei.
Häufig gestellte Fragen
Ausschlaggebende Bedeutung für die Industrie
Präzise Dissektion und molekulare Analyse des murinen supraclaviculären braunen Fettgewebes (scBAT) ermöglichen translationale Einblicke in die menschliche Stoffwechselregulation. Dieses Protokoll fördert die frühe Entdeckungsforschung, indem es Zugang zu einem Depot bietet, das anatomisch dem menschlichen BAT entspricht, und unterstützt so die Aufklärung von Wirkmechanismen, das Absichern von Risiken sowie die Validierung von Zielstrukturen in der Stoffwechselerkrankungsforschung. Verbesserte Extraktions- und Genexpressionsabläufe erhöhen die Vorhersagegenauigkeit für nachgelagerte Portfolioentscheidungen.
Strategische Anwendungen in der Biopharma-Forschung und -Entwicklung
Frühe Entdeckung und Zielvalidierung
- Ermöglicht die Untersuchung der Biologie des braunen Fettgewebes in einem Depot, das für die menschliche Physiologie relevant ist.
- Unterstützt die funktionelle Zielvalidierung, indem sie Genexpressions- und morphologische Analysen erleichtert.
- Verbessert die mechanistische Entwicklungsrisikominimierung durch präzise Gewebeisolierung und molekulare Charakterisierung.
- Bietet eine Plattform zur Aufklärung regulatorischer Netzwerke und entwicklungsgenetischer Signalwege im braunen Fettgewebe (BAT).
Screening und Assay-Entwicklung
- Liefert standardisierte Gewebeprotektion für reproduzierbare Genexpressions- und histologische Analysen.
- Optimiert die Probenaufschlüsselung, um die RNA-Ausbeute aus kleinen Gewebeproben zu maximieren.
- Erleichtert die quantitative Beurteilung der Markergenexpression für die Assay-Entwicklung.
- Ermöglicht zuverlässige Vergleiche zwischen scBAT und anderen BAT-Gewebepartien für die Wirkstoffbewertung.
Translationale und präklinische Forschung
- Ermöglicht die Abstimmung muriner scBAT-Studien mit der menschlichen BAT-Biologie zur translationellen Erforschung von Biomarkern.
- Unterstützt die Kontinuität von der Entdeckung bis zur präklinischen Validierung in Modellen metabolischer Erkrankungen.
- Bietet eine Grundlage für die ex-vivo-Modellierung der BAT-Funktion, die für die menschliche Physiologie relevant ist.
- Ermöglicht die risikoadjustierte Weiterentwicklung metabolischer Zielstrukturen basierend auf depotspezifischen Daten.
Pipeline- und Workflow-Integration
Dieses Protokoll integriert sich in den Übergang von der Entdeckung zur präklinischen Phase, indem es präzise Hypothesentests und die molekulare Charakterisierung eines krankheitsrelevanten BAT-Depots ermöglicht.
- Entdeckungsbiologie: Unterstützt die Aufklärung von Signalwegen und die biologische Risikominderung durch gezielte Genexpressionsanalyse.
- Screening: Bietet reproduzierbare, quantitative Ergebnisse für die Bereitschaft von Assays und den Vergleich zwischen verschiedenen Depots.
- Analytik: Liefert robuste molekulare und histologische Endpunkte, um bedingungsspezifische Analysen zu unterstützen.
- Translationale Forschung: Verbindet murine und humane BAT-Studien, um Biomarker abzugleichen und die präklinische Kontinuität sicherzustellen.
- Unternehmensweite Wiederverwendung: Etabliert einen wiederverwendbaren Workflow für die Gewinnung und Analyse von scBAT in verschiedenen Programmen der Stoffwechselforschung.
Operative und unternehmerische Auswirkungen
- Wissenschaftlicher Wert: Erhöht die Vorhersagesicherheit und verringert mechanistische Unschärfen in der BAT-Forschung.
- Operationaler Wert: Standardisiert die Gewebeprozessierung und molekulare Analyse, um Reproduzierbarkeit und Skalierbarkeit zu gewährleisten.
- Strategischer Wert: Ermöglicht fundierte Go/No-Go-Entscheidungen und kapitaleffiziente Portfoliofortschritte in der Entwicklung von Stoffwechselerkrankungen.
- Portfolio-Implikation: Unterstützt die risikoadjustierte Priorisierung von Targets und Modellen basierend auf depotspezifischen Daten.
Durchführungsaspekte
- Benötigt Fachkenntnisse in muriner Sektion und molekularbiologischen Techniken.
- Erfordert Zugang zu Präparationsmikroskopen, histologischen Einrichtungen und qPCR-Infrastruktur.
- Setzt eine standardisierte Vorgehensweise über mehrere Arbeitsgruppen hinweg bei der Gewebehandlung und Datenauswertung voraus.
- Kann Anpassungen je nach Alter oder genetischem Hintergrund der Mäuse erfordern.
- Eingeschränkt durch die geringe Größe und anatomische Komplexität des scBAT, was eine präzise Technik notwendig macht.
Biopharma-Häufige Fragen
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:24
Dissection of Supraclavicular Brown Adipose Tissue in Mice
2:54
Supraclavicular Brown Adipose Tissue Processing for Hematoxylin and Eosin Staining
4:49
Total RNA Isolation from Supraclavicular Brown Adipose Tissue for Gene Expression Analysis
![Visualisierung und Quantifizierung von braunem und beigem Fettgewebe in Mäusen mittels [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fcloudfront.jove.com%2FCDNSource%2Fteasers%2F62460.jpg%3Fv%3D2026-08-11T08%253A27%253A22.161Z&w=384&q=75)
