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Blutstillung von Punktionswunden und Vorbereitung von Proben für die Montage der großflächigen el...
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JoVE Journal Medicine
Puncture Wound Hemostasis and Preparation of Samples for Montaged Wide-Area Electron Microscopy Analysis

Blutstillung von Punktionswunden und Vorbereitung von Proben für die Montage der großflächigen elektronenmikroskopischen Analyse

Full Text
618 Views
05:41 min
May 24, 2024

DOI: 10.3791/66479-v

Kelly Ball1, Irina Pokrovskaya1, Brian Storrie1

1Department of Physiology and Cell Biology,University of Arkansas for Medical Sciences

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Hier wird ein Verfahren an einer Punktionswunde zur hämostatischen Thrombusbildung vorgestellt. Die gebildeten Thromben sind groß und haben einen Durchmesser von Hunderten von Mikrometern. Daher sind Volumenbildgebungsansätze geeignet. Wir empfehlen die montierte großflächige Transmissionselektronenmikroskopie als hochauflösenden Ansatz, der vielen zur Verfügung steht, und beschreiben ein präparatives Protokoll.

Wir sind ein Labor, das Volumen-EM macht, strukturelle Arbeit, um zu sagen, wie werden Blutplättchen aktiviert, wie aggregieren sie? Wie bilden sie einen Thrombus, der das Ausbleichen der Blutung bewirkt und wie bewirken sie im Falle einer Überstimulation eine okklusive Gerinnung? Dabei geht man davon aus, dass wir, wenn wir die Struktur kennen, Medikamente besser einsetzen und bessere Ergebnisse erzielen können.

Wir verwenden in unserer Forschung Mausmodelle, wie es viele Forscher tun, und wir alle stehen vor der Herausforderung herauszufinden, wie sich unsere Erkenntnisse bei Mäusen und in unserem Fall bei den Arterien und Venen von Mäusen auf die Mechanismen in den viel größeren Arterien und Venen beim Menschen übertragen lassen. Wir alle hoffen, dass die Prinzipien bei Mäusen und Menschen gleich sind. Wenn man unsere Arbeit und die Verwendung von Volumen-EM-Ansätzen nimmt, sind die wichtigsten Dinge, die wir beigetragen haben, eines, um zu sagen, dass Blutplättchen nicht nur Selbstmordattentäter sind.

Sie halten das Granulat zurück. Sie tun Dinge als Reaktion auf Signale. Sie haben stabile Zustände, und diese stabilen Zustände sind Teil eines normalen Thrombus und sie sind auch Teil eines inklusiven Gerinnsels.

Zweitens haben wir das Gefühl vermittelt, dass der Thrombus, der sich bildet, wirklich eine Struktur hat, es ist nicht einfach ein Haufen Ziegelsteine, sondern es ist eine geordnete Struktur, in der die Blutplättchen in Bezug auf ihre Aktivierung geordnet sind und so weiter. Und drittens haben wir das Gefühl vermittelt, dass man in der Lage sein sollte, aus der Struktur heraus anzuwenden und zu verstehen, was entweder stimuliert werden muss, um ein gutes Ergebnis zu erzielen, oder was unterdrückt werden muss, um ein Ergebnis zu erzielen, das die Menschen vor schlechten Ergebnissen schützt. Wir sammeln sequentielle Bilder im Nanometerbereich von nahe Millimeterabständen.

Wir fügen diese zu einem einzigen montierten Bild zusammen. Daher können wir jeden beliebigen Punkt innerhalb des Bildes auf einer Skala von nahe Nanometern bis nahe Millimetern beobachten, was ausreicht, um einzelne Merkmale innerhalb des gesamten Thrombus zu platzieren. Die Forscher haben jetzt ein mächtiges Werkzeug, und sie können die neue Frage stellen, wie Gerinnungskaskaden und zelluläre Signale oder Medikamente bei Thromben räumlich auf lokaler bis globaler Ebene wirken.

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Schlüsselwörter: Punktionswunde Blutstillung Thrombus Thrombozytenaggregation Elektronenmikroskopie Probenvorbereitung Weitbereichsbildgebung Thrombose Gefäßschäden Fixierung Einbettung Färbung

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