Eine modifizierte Methode zur intrathekalen Katheterisierung bei Ratten

Die intrathekale Katheterisierung wurde in Tierversuchen häufig angewendet, insbesondere bei neuropathischen Schmerzen. Die traditionellen Methoden weisen jedoch noch einige Einschränkungen auf. Obwohl einige Forscher versucht haben, die traditionellen Methoden zu verbessern, müssen die verfügbaren Methoden noch modifiziert werden.

In dieser Arbeit stellen wir eine modifizierte Methode zur intrathekalen Katheterisierung bei Ratten vor, die einen einfachen, bequemen und zuverlässigen Ansatz für die wiederholte intrathekale Verabreichung von Arzneimitteln darstellt. Bereiten Sie ein 15 Zentimeter langes PE10-Rohr vor. Führen Sie einen 20 Zentimeter langen Edelstahldraht mit zwei polierten Enden als Auflage in das PE10-Rohr ein und markieren Sie das Rohr zwei Zentimeter von einem Ende entfernt.

Schneiden Sie die scharfe Spitze einer 22G-Nadel ab und verschließen Sie das distale Ende mit einer Pinzette. Schneiden Sie einen Epiduralkatheter in einen Zentimeter große Fragmente. Führen Sie dann diese Fragmente in die spitzenfreie 22G-Nadel ein und verschließen Sie das distale Ende mit einer erhitzten geraden Pinzette.

Diese Vorrichtung wurde als Rohrverschlusskappe bezeichnet. Bereiten Sie mit einer Schere ein 0,3 Zentimeter mal 0,5 Zentimeter großes antiallergisches Band vor. Bereiten Sie die Instrumente für die intrathekale Katheterisierung vor, die vor der Operation sterilisiert wurde.

Im Lieferumfang enthalten waren eine Zahnzange, eine Schere, ein Sondengerät, ein Skalpellgriff und 10 Klingen. Sterilisieren Sie das PE10-Röhrchen und den Führungsdraht etwa zwei Stunden lang mit Ethanol. Betäuben Sie Ratten mit 3%Isofluran bei einer Durchflussrate von drei Litern pro Minute.

Man legte eine Ratte auf den Operationstisch und die Hinterpfote wurde mit einer Pinzette abgeschnitten. Das Fehlen einer Bewegung des Hinterpols als Reaktion auf die Stimulation bestätigte den Erfolg der Anästhesie. Adäquat und Analgesie wurde durch intramuskuläre Injektion von einem Milligramm pro Kilogramm Meloxicam vor der intrathekalen Katheterisierung verabreicht.

Entfernt die Haare im Bereich der Lendenwirbelsäule des Rückens und im Bereich zwischen zwei Ohren mit einem Rasierer. Legen Sie ein Zentrifugenröhrchen unter den Bauch der Ratte an der Hüfte. Sterilisieren Sie die Operationsstellen dreimal mit Povidoneiodlösung und Ethanollösung.

Decken Sie die Ratte mit einem aseptischen Verband ab und legen Sie die Operationsstellen frei. Und dann vor der Operation mit normaler Kochsalzlösung waschen. Bestimmen Sie die Lage des Zwischenwirbelraums zwischen L5 und L6, indem Sie den Wirbelfortsatz von L6 in der Mitte zwischen dem linken und dem rechten bilateralen Beckenkamm lokalisieren.

Fixieren Sie die Haut mit dem linken Daumen und dem Zeigefinger des Bedieners und machen Sie dann einen drei bis vier Zentimeter langen Mittellinienschnitt knapp über dem Dornfortsatz zwischen L4 und S1. Trennen Sie das Unterhautgewebe stumpf mit einer Schere. Lokalisieren Sie den Zwischenwirbelraum zwischen L5 und L6 wieder. Klemmen und heben Sie den dorsalen Fortsatz L5 mit einer gezahnten Pinzette an, um den Zwischenwirbelraum zu erweitern.

Dann trennt man stumpf die Muskeln um den Wirbelkörper mit einer Schere in die Oberseite des L6-Dorsalfortsatzes wurde vollständig freigelegt. Wenn der dorsale Fortsatz L5 mit einer gezahnten Pinzette angehoben und der Zwischenwirbelraum durch eine weitere Pinzette erweitert wird, reinigen Sie den Zwischenwirbelraum L5 bis sechs mit einem Wattebausch, bis der umgekehrte V-Bereich vollständig freigelegt ist. Punktieren Sie die Wirbelsäule mit einer 23G-Nadel im umgekehrten V-Bereich, direkt unter der Spitze des dorsalen Fortsatzes L6.

Führen Sie den PE10-Schlauch mit Edelstahldraht vorsichtig in einen Spinalkanal an der Einstichstelle ein, der um 30 Grad zum Schwanz hin geneigt ist. Der Einführwinkel wurde so lange angepasst, bis das PE10-Rohr ohne Widerstand erfolgreich eingeführt werden konnte. Wenn der markierte Bereich der PE10-Sonde den hinteren Muskel erreicht, wird die Katheterisierung gestoppt.

Entfernt langsam den rostfreien Draht vom PE10-Schlauch und verbindet den PE10-Schlauch mit einer Spritze, durch die 20 Mikroliter normale Kochsalzlösung injiziert werden. Nach dem Entfernen der Spritze ist möglicherweise kontinuierlich Kochsalzlösung aus dem PE10-Schlauch geflossen, was darauf hindeutet, dass der PE10-Schlauch erfolgreich in den Subarachnoidalraum eingeführt wurde. Sobald bestätigt wurde, dass PE10 zwei frei ist, vernähen Sie die Muskeln auf einer Seite des Wirbelkörpers mit einer Vier-Null-Naht und machen Sie einen Knoten.

Binden Sie dann die Naht um den PE10-Schlauch und machen Sie einen weiteren Knoten. Schneiden Sie nicht die Naht und die Naht die Muskeln auf der anderen Seite. Binden Sie die Naht wieder um den PE10-Schlauch.

Machen Sie einen dritten Knoten und schneiden Sie die Naht durch. Machen Sie einen 0,5 Zentimeter langen Schnitt bei einem Zentimeter knapp unter dem Mittelpunkt zwischen den Ohren. Trennen Sie das Unterhautgewebe stumpf mit einer Schere.

Und führen Sie den Metallsondenschlauch durch den Schnitt in Richtung Schwanz ein. Bis die Spitze im Lendenschnitt sichtbar ist. Führen Sie das distale Ende des PE10-Schlauchs in den Sondenschlauch ein, bis der PE10-Schlauch am anderen Ende des Sondenschlauchs austritt.

Dann zieht sich die Sonde sanft zurück. Wenn bestätigt wird, dass der PE10-Schlauch wieder frei ist, vernähen Sie die verbleibenden Muskeln um den Lendenwirbelschnitt mit einer Vier-Null-Naht. Binden Sie die Naht um den PE10-Schlauch und machen Sie einen weiteren Knoten.

Befestigen Sie den PE10-Schlauch wieder. Vernähen Sie die Haut, um eine Beschädigung des PE10-Schlauchs zu vermeiden, und nähen Sie dann die Halshaut mit einer Vier-Null-Naht. Binden Sie die Naht um den PE10-Schlauch und machen Sie einen Knoten, um den PE10-Schlauch zu fixieren.

Sobald das PE10-Rohr wieder frei ist, verschließen Sie das extrakorporale Ende des PE10-Rohrs mit einer Verschlusskappe. Das PE10-Röhrchen wurde mit einem Stück Gewebe getrocknet und ein antiallergisches Band mehrmals um das PE10-Röhrchen gebunden, um ein Zurückziehen des PE10-Röhrchens während der Bewegung der Ratte zu verhindern. Nach der Operation bringen Sie die Ratte in ihren Käfig zurück und überwachen Sie sie während der Genesung von der Narkose genau, bis sie das Bewusstsein wiedererlangt.

Nachdem die Ratte vollständig wach ist, entfernen Sie die Verschlusskappe und injizieren Sie 20 Mikroliter 2%iges Lidocain mit einer Geschwindigkeit von 0,2 Mikrolitern pro Sekunde über eine Hamilton-Spritze in das PE10-Röhrchen, gefolgt von der Injektion von 10 Mikrolitern normaler Kochsalzlösung. PE10-Rohr mit einer Verschlusskappe verschließen. Setze eine Ratte auf den Tisch und beobachte sie genau.

Eine Lähmung der unteren Gliedmaßen nach intrathekaler Injektion von Lidocain deutet auf eine erfolgreiche Katheterisierung hin. Die Lähmung der Hintergliedmaßen dauert in der Regel etwa 30 Minuten. Überwachen Sie die Ratte während der Erholungsphase engmaschig, bis die Funktion der Gliedmaßen vollständig wiederhergestellt ist.

Eine vollständige Querschnittslähmung beider unterer Gliedmaßen der Ratten nach intrathekaler Injunktion von Lidocain deutete auf eine erfolgreiche Katheterisierung hin. Vergleich der Rate der erfolgreichen Katheterisierung zwischen unseren modifizierten Methoden und der zuvor berichteten Methode. Die Rate der erfolgreichen intrathekalen Katheterisierung für unsere modifizierte Methode betrug 95 % und war damit höher als die 88 %, die mit der von Hou et al. berichteten Methode erreicht wurde.

Vergleich der Katheterrate mit langer Verweilzeit zwischen unserer modifizierten Methode und der zuvor berichteten Methode. In einer Studie von Storkson et al. lag die Katheterrate mit langer Verweildauer an den Tagen zwei, fünf und sieben nach der intrathekalen Katheterisierung bei 94 %, 81 % bzw. 65 %. Die Katheterrate mit langer Verweildauer zwei, fünf und sieben Tage nach der intrathekalen Katheterisierung betrug bei unserer Methode 95 %, 90 % bzw. 85 %.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass das modifizierte Verfahren zur intrathekalen Katheterisierung als nützliches Werkzeug für die wiederholte intrathekale und Verabreichung von Arzneimitteln dienen kann und eine einfache, bequeme und zuverlässige Möglichkeit darstellt, die Dauer der Experimente zu verkürzen.