Name: Untersuchung von retinalen Schaltkreisen und molekularer Lokalisierung durch Voreinbettung der Immunelektronenmikroskopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 15 s
Description: Lernen Sie die präembeddierende Immunelektronenmikroskopie zur Untersuchung retinaler Synapsen und Neurotransmitter-Lokalisierung in Mäusen. Diese Methode liefert ultrastrukturelle Erkenntnisse über synaptische Schaltkreise.

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<meta charset="utf8"></head><body>Analyse synaptischer Schaltkreise und Proteinlokalisierung in der Netzhaut der Maus

<ol><li>Chua, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complete+reconstruction+of+the+early+visual+system+of+an+adult+insect%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A complete reconstruction of the early visual system of an adult insect.</a> Curr Biol. 33 (21), 4611-4623.e4614 (2023).</li>
<li>Ravi Chander, P., Hanson, L., Chundekkad, L., Awatramani, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+circuits+underlying+multi-feature+extraction+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural circuits underlying multi-feature extraction in the retina.</a> J Neurosci. , JN-RM-0910-23 (2023).</li>
<li>Sirivisoot, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+mouse+anti-canine+PD-L1+monoclonal+antibodies+and+their+expression+in+canine+tumors+by+immunohistochemistry+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Q%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of mouse anti-canine PD-L1 monoclonal antibodies and their expression in canine tumors by immunohistochemistry in vitro.</a> Vet Q. 43 (1), 1-9 (2023).</li>
<li>Raeisi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+phage+display-derived+anti-toxin+antibodies+neutralizing+TcdA+and+TcdB+of+Clostridioides+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of phage display-derived anti-toxin antibodies neutralizing TcdA and TcdB of Clostridioides difficile.</a> Microbiol Spectr. 11 (5), e0531022(2023).</li>
<li>Ryschich, A., Dong, Y., Schäfer, M., Ryschich, E., Karakhanova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DWH24%3A+A+new+antibody+for+fluorescence-based+cell+death+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Appl+Fluoresc%22%5BJournal%5D)">DWH24: A new antibody for fluorescence-based cell death analysis.</a> Methods Appl Fluoresc. 11 (4), (2023).</li>
<li>Jastrzebska, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterization+of+rhodopsin+monomers+and+dimers+in+detergents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Functional characterization of rhodopsin monomers and dimers in detergents.</a> J Biol Chem. 279 (52), 54663-54675 (2004).</li>
<li>Huang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+Shenfu+injection+in+suppressing+inflammation+and+preventing+sepsis-induced+apoptosis+in+murine+cardiomyocytes+based+on+network+pharmacology+and+experimental+validation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Mechanism of Shenfu injection in suppressing inflammation and preventing sepsis-induced apoptosis in murine cardiomyocytes based on network pharmacology and experimental validation.</a> J Ethnopharmacol. 322, 117599(2024).</li>
<li>Maheshwari, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inorganic+phosphate+exporter+heterozygosity+in+mice+leads+to+brain+vascular+calcification%2C+microangiopathy%2C+and+microgliosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Inorganic phosphate exporter heterozygosity in mice leads to brain vascular calcification, microangiopathy, and microgliosis.</a> Brain Pathol. 33 (6), e13189(2023).</li>
<li>Mackiewicz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+gravity+in+long-term+vitreous+tamponade%3A+In+vivo+investigation+using+perfluorocarbon+liquids+and+semi-fluorinated+alkanes%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Effect of gravity in long-term vitreous tamponade: In vivo investigation using perfluorocarbon liquids and semi-fluorinated alkanes.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 245 (5), 665-675 (2007).</li>
<li>Luján, R., Rubio, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Editorial%3A+Immunoelectron+microscopy%3A+Placing+molecular+functions+within+a+neuronal+context%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Editorial: Immunoelectron microscopy: Placing molecular functions within a neuronal context.</a> Front Neuroanat. 16, 1043371(2022).</li>
<li>Xu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+changes+and+the+response+of+microglia+in+a+light-induced+photoreceptor+degeneration+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Synaptic changes and the response of microglia in a light-induced photoreceptor degeneration model.</a> Mol Vis. 27, 206-220 (2021).</li>
<li>Chadha, A., Volland, S., Baliaouri, N. V., Tran, E. M., Williams, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+route+of+the+visual+receptor+rhodopsin+along+the+cilium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The route of the visual receptor rhodopsin along the cilium.</a> J Cell Sci. 132 (10), jcs.229526(2019).</li>
<li>Huang, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+nucleocapsid+structural+forms+of+shrimp+white+spot+syndrome+virus+suggests+a+novel+viral+morphogenetic+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiple nucleocapsid structural forms of shrimp white spot syndrome virus suggests a novel viral morphogenetic pathway.</a> Int J Mol Sci. 24 (8), 7525(2023).</li>
<li>Tissarinen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+human+placental+heat+shock+protein+5+is+associated+with+spontaneous+preterm+birth%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Elevated human placental heat shock protein 5 is associated with spontaneous preterm birth.</a> Pediatr Res. 94 (2), 520-529 (2023).</li>
<li>Huang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neural+tract+tracing+study+on+synaptic+connections+for+cortical+glutamatergic+terminals+and+cervical+spinal+calretinin+neurons+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">A neural tract tracing study on synaptic connections for cortical glutamatergic terminals and cervical spinal calretinin neurons in rats.</a> Front Neural Circuits. 17, 1086873(2023).</li>
<li>Zhang, J., Petralia, R. S., Wang, Y. X., Diamond, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+quantitative+immunogold+analysis+of+membrane+receptors+at+retinal+ribbon+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution quantitative immunogold analysis of membrane receptors at retinal ribbon synapses.</a> J Vis Exp. 108, e53547(2016).</li>
<li>Ottersen, O. P., Landsend, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+glutamate+receptors+at+the+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organization of glutamate receptors at the synapse.</a> Eur J Neurosci. 9 (11), 2219-2224 (1997).</li>
<li>Greferath, U., Grünert, U., Wässle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+bipolar+cells+in+the+mammalian+retina+show+protein+kinase+C-like+immunoreactivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rod bipolar cells in the mammalian retina show protein kinase C-like immunoreactivity.</a> J Comp Neurol. 301 (3), 433-442 (1990).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+and+synaptic+organization+of+substance+P-like+immunoreactive+neurons+in+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Distribution and synaptic organization of substance P-like immunoreactive neurons in the mouse retina.</a> Brain Struct Funct. 228 (7), 1703-1724 (2023).</li>
<li>van Opbergen, C. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((34%3BOrphan%26%2334%3B+Connexin43+in+Plakophilin-2+deficient+hearts+revealed+by+volume+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">34;Orphan&#34; Connexin43 in Plakophilin-2 deficient hearts revealed by volume electron microscopy.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 843687(2022).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safe+and+efficient+oral+allergy+immunotherapy+using+one-pot-prepared+mannan-coated+allergen+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Safe and efficient oral allergy immunotherapy using one-pot-prepared mannan-coated allergen nanoparticles.</a> Biomaterials. 303, 122381(2023).</li>
<li>Yamashita, K., Kusakabe, M., Sano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+rapid+method+of+dissociating+hepatocytes+from+fixed+liver+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Stain+Technol%22%5BJournal%5D)">A simple and rapid method of dissociating hepatocytes from fixed liver of the mouse.</a> Stain Technol. 56 (1), 29-33 (1981).</li>
<li>Tanabe, T., Shin, M., Fujiwara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoelectron+microscopy+study+of+polyamines+using+a+newly+prepared+monoclonal+antibody+against+spermidine%3A+use+of+a+mixture+of+glutaraldehyde+and+paraformaldehyde+as+a+cross-linking+agent+in+the+preparation+of+the+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Immunoelectron microscopy study of polyamines using a newly prepared monoclonal antibody against spermidine: use of a mixture of glutaraldehyde and paraformaldehyde as a cross-linking agent in the preparation of the antigen.</a> J Biochem. 135 (4), 501-507 (2004).</li>
<li>Xiao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+bipolar+cells+receive+cone+photoreceptor+inputs+through+both+invaginating+synapses+and+flat+contacts+in+the+mouse+and+guinea+pig+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rod bipolar cells receive cone photoreceptor inputs through both invaginating synapses and flat contacts in the mouse and guinea pig retinas.</a> J Comp Neurol. 531 (11), 1184-1197 (2023).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+%CE%B1-Synuclein+in+the+mouse+retina+is+confined+to+inhibitory+presynaptic+elements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Expression of α-Synuclein in the mouse retina is confined to inhibitory presynaptic elements.</a> J Comp Neurol. 531 (10), 1057-1079 (2023).</li>
<li>Yazulla, S., Studholme, K. M., Zucker, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+organization+of+substance+P-like+immunoreactive+amacrine+cells+in+goldfish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Synaptic organization of substance P-like immunoreactive amacrine cells in goldfish retina.</a> J Comp Neurol. 231 (2), 232-238 (1985).</li>
<li>Sassoè-Pognetto, M., Wässle, H., Grünert, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycinergic+synapses+in+the+rod+pathway+of+the+rat+retina%3A+cone+bipolar+cells+express+the+alpha+1+subunit+of+the+glycine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glycinergic synapses in the rod pathway of the rat retina: cone bipolar cells express the alpha 1 subunit of the glycine receptor.</a> J Neurosci. 14 (8), 5131-5146 (1994).</li>
<li>Hartveit, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+and+developmental+expression+of+the+NMDA+receptor+subunit+NR2A+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Localization and developmental expression of the NMDA receptor subunit NR2A in the mammalian retina.</a> J Comp Neurol. 348 (4), 570-582 (1994).</li>
<li>Perkins, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+miniSOG+in+the+localization+of+mitochondrial+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">The use of miniSOG in the localization of mitochondrial proteins.</a> Methods Enzymol. 547, 165-179 (2014).</li>
<li>Shu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+tag+for+correlated+light+and+electron+microscopy+of+intact+cells%2C+tissues%2C+and+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded tag for correlated light and electron microscopy of intact cells, tissues, and organisms.</a> PLoS Biol. 9 (4), e1001041(2011).</li>
<li>Kar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volume+electron+microscopy+reveals+human+retinal+mitochondria+that+align+with+reflective+bands+in+optical+coherence+tomography+%5BInvited%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Volume electron microscopy reveals human retinal mitochondria that align with reflective bands in optical coherence tomography [Invited].</a> Biomed Opt Express. 14 (10), 5512-5527 (2023).</li>
<li>Johnson, J. E. Jr, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+regulation+of+ATP+and+Ca2%2B+dynamics+in+vertebrate+rod+and+cone+ribbon+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal regulation of ATP and Ca2+ dynamics in vertebrate rod and cone ribbon synapses.</a> Mol Vis. 13, 887-919 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL Spritzennadel</td><td>Kangdelai</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1% OsO4</td><td>Elektronenmikroskopie Wissenschaft</td><td>19100</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-Tribromethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td></td></tr><tr><td>8% Glutaraldehyd</td><td>Elektronenmikroskopie Wissenschaft</td><td>16020</td><td></td></tr><tr><td>8% Paraformaldehyd</td><td>Elektronenmikroskopie Wissenschaft</td><td>157-8</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Elektronenmikroskopie Wissenschaft</td><td>10000</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Kaninchen PKC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4334</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Kaninchen SP</td><td>Abcam</td><td>ab67006</td><td></td></tr><tr><td>DAB Substrat Kit</td><td>MXB Biotechnologies</td><td>KIT-9701/9702/9703</td><td></td></tr><tr><td>Ellbogenschere</td><td>Suzhou66 Vision Company</td><td>54010</td><td></td></tr><tr><td>Elektronenmikroskop</td><td>Phillips</td><td>CM120</td><td></td></tr><tr><td>Epon-Harz</td><td>Elektronenmikroskopie Wissenschaft</td><td>14910</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>Suzhou66 Vision Unternehmen</td><td>S101A</td><td></td></tr><tr><td>Millipore Filterpapier</td><td>Merck Millipore&nbsp;</td><td></td><td></td>PR05538</tr><tr><td>Na2HPO4&middot; 12H2O</td><td>Sigma</td><td>71650</td><td>Eine Komponente des Phosphatpuffers</td></tr><tr><td>NaH2PO4&middot; H2</td><td>O Sigma</td><td>71507</td><td>Ein Bestandteil des Phosphatpuffers</td></tr><tr><td>Pikrinsäure</td><td>Elektronenmikroskopie Wissenschaft</td><td>19550</td><td></td></tr><tr><td>Natriumborhydrid (NaBH4)</td><td>Sigma</td><td>215511</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Solarbio</td><td>917R071</td><td></td></tr><tr><td>Ultramikrotom</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Uranylacetat</td><td>Elektronenmikroskopie Science</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>VACTASTAIN ABC Kit, Peroxidase (Kaninchen IgG)</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-4001</td><td></td></tr></tbody></table>

untersuchung von retinalen schaltkreisen und molekularer lokalisierung durch voreinbettung der immunelektronenmikroskopie

Investigating Retinal Circuits and Molecular Localization by Pre&#45;Embedding Immunoelectron Microscopy

Abbildung 1 zeigt Beispiele für Kontrollexperimente ohne Inkubation von Primärantikörpern gegen Proteinkinase C alpha (PKCα) oder SP, in denen keine Immunreaktivität (IR) gefunden wurde.
Abbildung 2 zeigt das PKCα-IR in der Netzhaut der Maus. PKCα dient als Marker für alle Stäbchen-Bipolarzellen (RBC) in der Netzhaut18. Auf der Ebene der Elektronenmikroskopie (EM) können Erythrozyten durch PKCα-IR identifiziert werden, sichtbar gemacht durch das Reaktionsprodukt Diaminobenzidin (DAB) mit hoher Elektronendichte. Abbildung 2A zeigt einen PKCα-positiven RBC-Dendriten, der eine Synapse mit einem Stäbchenanschluss in der äußeren plexiformen Schicht (OPL) bildet, während Abbildung 2B eine Kegel-Erythrozyten-Synapse zeigt, bei der ein PKCα-positiver Erythrozyten-Dendrit postsynaptisch zu einem Kegelterminal ist. Darüber hinaus hilft das DAB-Reaktionsprodukt bei der Identifizierung von Erythrozytenterminals (Abbildung 2C) und axonalen Prozessen (Abbildung 2D) in der inneren plexiformen Schicht (IPL).
Abbildung 3 zeigt die Expression der Substanz P (SP) sowohl in prä- als auch in postsynaptischen Verbindungen im IPL der Netzhaut der Maus. SP-IR-Amakrinzellen sind präsynaptisch zu SP-negativen Amakrinzellen (Abbildung 3A) sowie SP-IR-Amakrinprozesse (Daten nicht gezeigt). Darüber hinaus sind SP-IR-Amakrinzellen postsynaptische bis bipolare Terminals in den Ebenen der Subschicht 3 (S3) bzw. der Unterschicht 5 (S5) des IPL (Abbildung 3B,C). Unsere bisherige Forschung befasst sich mit der Analyse von Synapsen, bei denen SP-IR-Amakrinzellprozesse synaptische Ausgänge für andere Prozesse im IPL19 bilden. Bemerkenswert ist, dass die subzelluläre Lokalisation von SP hauptsächlich in synaptischen Vesikeln in den präsynaptischen Enden zu finden ist (Abbildung 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66543/66543fig01v2.jpg"> Abbildung 1: Immunelektronenmikroskopische Aufnahmen aus Kontrollexperimenten. Sowohl der Zapfenstiel (CP) mit zwei Bändern (Pfeilspitze) (A) als auch die Stabshülse (RS) mit einem Band im OPL (B) zeigten keine Färbung. Maßstabsleisten: 500 nm (A), 200 nm (B). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66543/66543fig01largev2.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66543/66543fig02.jpg"> Abbildung 2: Immunelektronenmikroskopische Aufnahmen, die mit PKCα-Antikörpern in der Netzhaut der Maus markiert sind. (A) RS verbindet sich mit einer PKCα-positiven Erythrozyten (Pfeile zeigen Immunreaktivität) und zwei horizontalen Zellen (H) in der OPL. (B) CP verbindet sich mit PKCα-positivem RBC im OPL. (C) und (D) zeigen den PKCα-positiven RBC-terminalen bzw. axonalen Prozess im IPL. Maßstabsleisten: 200 nm (A), 500 nm (B), 500 nm (C), 500 nm (D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66543/66543fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66543/66543fig03.jpg"> Abbildung 3: Mit SP-Antikörper markierte Immunelektronenmikroskopische Aufnahmen im IPL der Netzhaut der Maus. (A) Die SP-IR-Amakrinzelle (A+) ist präsynaptisch zu einer SP-negativen Amakrinzelle (A-). SP-IR-Amakrinzellen erhielten Eingaben von bipolaren Terminals in den Stufen S3 (B) bzw. S5 (C) des IPL. Maßstabsleisten: 200 nm (A), 200 nm (B), 200 nm (C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66543/66543fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Untersuchung von retinalen Schaltkreisen und molekularer Lokalisierung durch Voreinbettung der Immunelektronenmikroskopie

The retina comprises numerous cells forming diverse neuronal circuits, which constitute the first stage of the visual pathway. Each circuit is ...

investigating-retinal-circuits-molecular-localization-pre-embedding

Research

Forschung

JoVE Journal

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Neurowissenschaften

Die Neugeborenen Mausretina bietet eine gut charakterisiert physiologisches Modell der Angiogenese, die Untersuchungen der Rolle der verschiedenen Gene oder Medikamente, die Angiogenese modulieren in eine...

Ganze Berge Immunfluoreszenzfärbung der Neonatal Maus Retina zu untersuchen Angiogenese<em&gt; In vivo</em

Das hier beschriebene Protokoll dient zur strukturellen Bewertung eines Wholemount-Netzhautpräparats. Dazu gehören Beschreibungen der Gewebedissektion, der Montage auf einem hydrophilisierten Membraneinsatz aus Polytetrafluorethylen (PTFE), der Bolusbeladung mit fluoreszierenden Markern und ein Vergleich der Fixierung mit Carbodiimid und Paraformaldehyd für die immunhistochemische Analyse zellulärer und synaptischer Komponenten.

Optimiertes Protokoll für die retinale Wholemount-Vorbereitung für Bildgebung und Immunhistochemie

Die Postembedding-Immunogold-Methode ist eine der effektivsten Methoden, um hochauflösende Analysen der subzellulären Lokalisation spezifischer Moleküle zu liefern. Hier beschreiben wir ein Protokoll zur quantitativen Analyse von Glutamatrezeptoren an retinalen Bandsynapsen.

Hochauflösende Quantitative Immungold-Analyse von Membranrezeptoren auf der Netzhaut Ribbon Synapsen

Wir führen drei verschiedene Gewebe Vorbereitung Techniken für immunhistochemische Visualisierung der Ratte retinalen mikrovaskuläre perizyten, d. h. Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone Isolierung des vaskulären-Netzes.

Netzhaut Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone isoliert Gefäßsystem Vorbereitungen für immunhistochemische Visualisierung von Mikrovaskulären Perizyten

Dieser Bericht beschreibt umfassende Methoden zur Vorbereitung von gefrorenen Mausnetzteilen für die Immunhistochemie (IHC).  Die beschriebenen Methoden umfassen die Zerlegung des okularen posterioren Bechers, die Paraformaldehydfixierung, die Einbettung in die Medien der optimalen Schnitttemperatur (OCT) und die Gewebeorientierung, die Schnitt- und Immunfärbung.

Vorbereitung von Maus-Retinal-Cryo-Sektionen für die Immunhistochemie

Methanol kann als fixes Hilfsmedium für retinale Whole-Mount-Präparate und die Langzeitlagerung verwendet werden, was für die Untersuchung von retinalen Ganglienzellen nützlich ist.

Methanol-basiertes Whole-Mount-Präparat zur Untersuchung retinaler Ganglienzellen

Dieses Protokoll beschreibt die detaillierten Schritte zur Vorbereitung von Netzhautproben für die Volumenelektronenmikroskopie, wobei der Schwerpunkt auf den strukturellen Merkmalen retinaler Photorezeptorterminalien liegt.

Präparation von Netzhautproben für die Volumenelektronenmikroskopie

Dieses Protokoll bietet ein optimiertes und aufwändiges Präparationsverfahren für retinale Organoidproben für die Transmissionselektronenmikroskopie. Es eignet sich für Anwendungen, die die Analyse von Synapsen in reifen retinalen Organoiden beinhalten.

Vorbereitung von retinalen Organoidproben für die Transmissionselektronenmikroskopie

Es wird ein Protokoll zur Vorbereitung von Kryoschnitten der Maus-Netzhaut und zur Durchführung von Immunfärbungen an Photorezeptoren beschrieben. Dieser Artikel ermöglicht es Forschern, konsistente Schnellschnitte der Netzhaut von Mäusen mit gut erhaltener Morphologie und qualitativ hochwertigen Immunfärbeergebnissen zu erstellen.

Kryosektion und Immunfärbung der Netzhaut der Maus

Die Netzhaut weist eine komplexe räumliche Organisation über ihre laminare Struktur auf. Moderne räumliche Transkriptomik- und Sequenzierungstechniken erfordern Gewebeschnitte mit einer Dicke von &lt; 20 μm, was ihre Anwendbarkeit in der Netzhautforschung einschränkt. Diese frisch gefrorene Kryosektionsmethode erzeugt dünne Gesichtsabschnitte der Netzhaut von Mäusen unter Beibehaltung planarer räumlicher Beziehungen und ermöglicht so eine umfassende molekulare Kartierung über Laminae hinweg.

En face Kryosektion der Netzhaut der Maus für die hochdimensionale räumliche molekulare Analyse

Lernen Sie die präembeddierende Immunelektronenmikroskopie zur Untersuchung retinaler Synapsen und Neurotransmitter-Lokalisierung in Mäusen. Diese Methode liefert ultrastrukturelle Erkenntnisse über synaptische Schaltkreise.

Untersuchung von retinalen Schaltkreisen und molekularer Lokalisierung durch Voreinbettung der Immunelektronenmikroskopie

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