Name: Intravitale Zwei-Photonen-Mikroskopie der transplantierten Mauslunge (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: Erfahren Sie die intravitalen Zwei-Photonen-Mikroskopie der transplantierten Mauslunge. Diese Methode ermöglicht Echtzeit-Analyse immunologischer Mechanismen bei Ischämie-Reperfusionsverletzung und Transplantatabstoßung.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Echtzeit-Überwachung der zellulären Dynamik bei der Lungentransplantation von Mäusen

<table><tbody><tr><td>0,75 % Povidon-Jod</td><td>Aplicare</td><td>NDC 52380-0126-2</td><td>Für Desinfektionsmittel</td></tr><tr><td>1-Zoll 20G IV-Katheter</td><td>Terumo</td><td>SROX2025CA</td><td>Für Endotrachealtubus (ETT)</td></tr><tr><td>1-Zoll-Seidenband</td><td>Durapore</td><td>3M ID 7100057168</td><td>Zur Fixierung der Maus in Position</td></tr><tr><td>20x Wasserimmersion lange Objektivlinse</td><td>Olympus</td><td>N20X-PFH</td><td></td></tr><tr><td>3M Vetbond-Kleber</td><td>Medi-Vet.com</td><td>10872</td><td>Zum Aufkleben von Deckglas auf die Lunge</td></tr><tr><td>655 nm nicht zielgerichtete Quantenpunkte</td><td>ThermoFisher</td><td>Q21021MP</td><td>Zur Markierung von Blutgefäßen</td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>EX0281</td><td>Zum Desinfektionsmittel</td></tr><tr><td>Argent High Temp Fine Tip Cautery Pen</td><td>McKesson</td><td>231</td><td></td></tr><tr><td>Schwarzer O-Ring (2 cm)</td><td>Baumarkt</td><td>N/A</td><td>Für maßgeschneiderte Bildgebung </td></tr><tr><td>Kammer Bolzen (2)</td><td>Baumarkt</td><td>N/A</td><td>Für maßgefertigte Bildgebungskammer</td></tr><tr><td>Messing Rändelmutter (2)</td><td>Baumarkt</td><td>N/A</td><td>Für maßgefertigte Bildgebungskammer</td></tr><tr><td>Buprenorphin 1,3 mg/mL</td><td>Fidelis Animal Health</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>Zur Schmerzkontrolle</td></tr><tr><td>Chamäleon Titan-Saphir Femtosekunden-gepulster Laser</td><td>Coherent</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Deckglas (24 mm x 50 mm)</td><td>Thomas Scientific</td><td>1202F63</td><td>Für speziell angefertigte Bildgebungskammer</td></tr><tr><td>Gebogene Moskitoklemme (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Zweikanal-Heizungssteuerung</td><td>Warner Instruments</td><td>TC-344B</td><td></td></tr><tr><td>Feine Schere (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15040-11</td><td></td></tr><tr><td>Festtischmikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td><td></td></tr><tr><td>Gaze (geschnitten auf 1 cm x 3 cm)</td><td>McKesson</td><td>476709</td><td>Zum Platzieren unter der linken Lunge</td></tr><tr><td>Hochvakuumfett</td><td>Dow Corning N</td><td>/A</td><td>Zum Aufkleben von Deckglas auf die Deckplatte</td></tr><tr><td>Isofluran 1%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>26675-46-7</td><td>Für die Anästhesie</td></tr><tr><td>Ketaminhydrochlorid 100 mg/mL</td><td>Vedco</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>Für die Anästhesie</td></tr><tr><td>Metallblech (3 cm x 7 cm)</td><td>Baumarkt</td><td>N/A</td><td>Für maßgefertigte Bildgebungskammer</td></tr><tr><td>Spitze Applikatoren mit Wattespitze</td><td>Solon</td><td>56225</td><td>Zur Manipulation der Lunge und zum stumpfen Sezieren</td></tr><tr><td>Power Pro Ultra Clipper</td><td>Oster</td><td>078400-020-001</td><td></td></tr><tr><td>Puralube Vet Augensalbe</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>Zur Vorbeugung von Augenaustrocknung</td></tr><tr><td>Beatmungsgerät für Kleintiere</td><td>Harvard Apparatur</td><td>55-0000</td><td></td></tr><tr><td>Gerade Pinzette (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>91113-10</td><td></td></tr><tr><td>Dreikanal-Shutter-Treiber</td><td>Uniblitz</td><td>VMM-D3</td><td>Resonanzscanner</td></tr><tr><td>x.y.z Optischer Schrittmotor</td><td>Prior Scientific</td><td>OptiScan II</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin 20 mg/mL</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>Zur Schmerzkontrolle</td></tr></tbody></table>

intravitale zwei-photonen-mikroskopie der transplantierten mauslunge

Intravital Two-Photon Microscopy of the Transplanted Mouse Lung

Nach 1 h kalter ischämischer Lagerung bei 4 °C transplantierten wir orthotopisch die linke Lunge von einer B6-Maus in eine B6-Maus. LysM-GFP-Maus4 und dann wurde eine intravitale Zwei-Photonen-Bildgebung durchgeführt, wie oben beschrieben. Wir führten die Bildgebung zu zwei Zeitpunkten nach der Transplantation durch - 2 h (Abbildung 3A) und 24 h (Abbildung 3B). Die Blutgefäße werden durch die Q-Punkte, die unmittelbar vor der Bildgebung injiziert werden, rot markiert. Zusätzlich können wir Monozyten sichtbar machen, die bei 24 h4 Q-Punkte aufgenommen haben. Im entsprechenden Video ist zu sehen, wie grün markierte Neutrophile des Empfängers 24 Stunden nach der Transplantation in das Lungentransplantat infiltrieren (Ergänzendes Video 1). Alveolen können aufgrund von SHG aus Kollagen als dunkle Krater dargestellt werden (weiße Pfeile in Abbildung 3). Wir beobachten, dass 24 Stunden nach der Transplantation mehr Neutrophile in der Lunge vorhanden sind als 2 Stunden nach der Transplantation (Abbildung 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig01.jpg"> Abbildung 1: Vorbereitung der Maus für die Zwei-Photonen-Bildgebung. (A) Wiedereröffnung der Haut über der linken Thorakotomie. (B) Haut und Weichgewebe über der linken Brust exzidiert. (C,D) Die Rippen werden vor dem Teilen 10 s lang geklemmt. (E) Die linken 3rd-5 Rippen wurden reseziert, um ein Fenster mit den Maßen ~0,8 cm kraniokaudal x 1,0 cm anteroposterior zu schaffen. (F) Linke Lunge aus der linken Brust herausgehoben und auf einen Gazestreifen gelegt. (G) Eine Bildgebungskammer mit einem Bildgebungsfenster liegt über der linken Lunge. (H) Die Bildgebungskammer wird auf den Mikroskoptisch gestellt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig02.jpg"> Abbildung 2: Aufbau der Bildgebungskammer. (A) Die Bildgebungskammer wird auf den Mikroskoptisch gestellt. (B) Vergrößerte Ansicht des federbelasteten Bolzenmechanismus zur Sicherung der oberen Platte über der linken Lunge. (C) Vorder- und Rückseite der Deckplatte mit aufgebrachtem O-Ring und Deckglas. Weiße Linien stellen den Bereich dar, auf den Vakuumfett aufgetragen wird, um das Deckglas auf der Deckplatte zu haften. Der graue Kreis stellt einen Ring aus Klebstoff dar, der auf das Deckglas aufgetragen wird. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig03.jpg"> Abbildung 3: Intravitale Zwei-Photonen-Bildgebung eines Maus-Transplantats der linken Lunge von B6 auf B6. LysM-GFP Maus mit 1 h kalter ischämischer Lagerung. Die Bildgebung erfolgt bei (A) 2 h und (B) 24 h nach der Transplantation. Rot steht für q-Punkte. Grün steht für Neutrophile von B6. LysM-GFP-Empfänger. Blau steht für SHG aus kollagenreichen Lungenbläschen. Weiße Pfeile zeigen alveoläre Lufträume. Der Maßstabsbalken stellt 20 μm dar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Ergänzende Abbildung 1: Obere Platte mit zwei angebrachten Widerständen zur zusätzlichen Erwärmung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Figure%201.zip" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzendes Video 1: Zwei-Photonen-Zeitraffer-Bildgebung der transplantierten linken Lunge einer Maus von B6 auf B6. LysM-GFP-Maus mit 1 h kalter ischämischer Lagerung, durchgeführt 24 h nach der Transplantation. Rot steht für q-Punkte. Grün stellt die Neutrophilen des LysM-GFP-Empfängers dar. Blau repräsentiert die zweite harmonische Generation aus kollagenreichen Lungenbläschen. Der Maßstabsbalken steht für 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Video%201.zip" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>

Intravitale Zwei-Photonen-Mikroskopie der transplantierten Mauslunge

Complications after lung transplantation are largely related to the host immune system responding to the graft. Such immune responses are regulated by ...

intravital-two-photon-microscopy-of-the-transplanted-mouse-lung

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Wir haben neuartige Labormethoden und Protokolle zur intravitale Bildgebung des Thymus entwickelt. Unsere Technik sollte bei der Identifizierung von „Nischen“ im Thymus helfen, in denen die Entwicklung von T-Zellen stattfindet.

Intravital Imaging of the Mouse Thymus mittels 2-Photonen-Mikroskopie

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung der Multiphotonenmikroskopie zur Durchführung einer langfristigen hochauflösenden Einzelzellbildgebung der intakten Lunge in Echtzeit unter Verwendung eines vakuumstabilisierten Bildgebungsfensters.

Langfristige High-Resolution Intravitalmikroskopie in der Lunge mit einem Vakuum-Stabilisierte Imaging-Fenster

Dieses Protokoll beschreibt die intravitalen Bildgebung von transgenen Mäusen zellspezifische fluoreszierenden Marker zum Ausdruck zu bringen. Intravitalen Bildgebung stellt eine nicht-invasive Methode für hochauflösende Beobachtungen an lebenden Tieren mit implantierbaren Windows durch die mikroskopische Visualisierung von Prozessen möglich ist. Diese Methode ist besonders nützlich, um längs Prozesse zu studieren.

Intravitalen Mikroskopie von Tumor-assoziierten Gefäßsystem mit erweiterten dorsalen Hautfalte Fenster Kammern an transgenen Mäusen fluoreszierende

In dieser Studie stellen wir ein Protokoll zur zwei-Photon intravitalen Bildgebung und Zelle Interaktionsanalyse in der murinen trachealen Schleimhaut nach Infektion mit Influenza-Virus führen. Dieses Protokoll wird für Forscher Immunzelle Dynamik bei Atemwegsinfektionen relevant sein.

Bildgebung Zelle Interaktion in Trachealen Schleimhaut während der Influenza-Virus-Infektion mit Intravitalen zwei-Photonen-Mikroskopie

Die hier vorgestellte Protokoll ermöglicht Charakterisierung von homing Lungenkapazität von primären menschlichen Lymphozyten unter in-vivo entzündlichen Erkrankungen. Pulmonale Infiltration der adoptively übertragenen menschlichen Immunzellen in einem Mausmodell der allergische Entzündung kann abgebildet und durch Licht-Blatt Fluoreszenzmikroskopie von chemisch ausgeglichenen Lungengewebe quantifiziert werden.

Erweiterte Bildgebung der Lunge Homing menschlichen Lymphozyten in einem experimentellen In Vivo Modell der allergische Entzündung basierend auf Licht-Blatt Mikroskopie

In-vivo-Bildgebung ist ein leistungsfähiges Werkzeug für das Studium der Biologie in Gesundheit und Krankheit. Dieses Protokoll beschreibt die transpupille Bildgebung der Netzhaut der Maus mit einem Standard-Zwei-Photonen-Mikroskop. Es zeigt auch verschiedene In-vivoimaging-Methoden, um mehrere zelluläre Kohorten der Netzhaut fluoreszierend zu markieren.

Transpupille Zwei-Photonen-In-vivo-Bildgebung der Netzhaut der Maus

Hier stellen wir ein Protokoll zur operativen Implantation eines dauerhaft verweilbaren optischen Fensters für den murinen Thorax vor, das eine hochauflösende, intravitale Bildgebung der Lunge ermöglicht. Die Permanenz des Fensters macht es gut geeignet für die Untersuchung dynamischer zellulärer Prozesse in der Lunge, insbesondere solcher, die sich langsam entwickeln, wie z.B. das metastatische Fortschreiten von disseminierten Tumorzellen.

Ein permanentes Fenster zur Untersuchung von Krebsmetastasen in der Lunge

Wir beschreiben die intraparenchymale Transplantation von humanen neuralen Vorläuferzellen, die mit einem dualen Reportervektor transduziert werden, der Luciferase-grün fluoreszierendes Protein (GFP) im Gehirn der Maus exprimiert. Nach der Transplantation wird das Luciferase-Signal wiederholt mit In-vivo-Biolumineszenz und GFP-exprimierenden transplantierten Zellen gemessen, die in Hirnschnitten mittels Fluoreszenzmikroskopie identifiziert wurden.

Intracerebrale Transplantation und In Vivo Biolumineszenz-Tracking von menschlichen neuralen Vorläuferzellen im Gehirn der Maus

Das Manuskript beschreibt eine Methodik für die Etablierung sowie das longitudinale Wachstumsmonitoring von spontanen Lungenmetastasen von orthotopisch injizierten Brusttumoren, die in allen Stadien der Metastasierungskaskade interveniert werden kann.

Im lebenden Organismus Bildgebung zur Messung der spontanen Lungenmetastasierung von orthotopisch injizierten Brusttumorzellen

Die Zelltherapie bietet eine vielversprechende Intervention bei Lungenfibrose, indem Vorläuferzellen verwendet werden, um geschädigtes Gewebe zu reparieren und die Lungenfunktion zu verbessern. Da die Bildgebung eine zentrale Rolle bei der Verfolgung der Zellintegration spielt, beschreiben wir hier die durch Magnetpartikelbildgebung gesteuerte in vivo-Verfolgung der Zelltherapie bei Lungenfibrose in einem Mausmodell.

Bildgestützte In-vivo-Verfolgung von transplantierten distalen Lungenepithel-Vorläuferzellen für Lungenfibrose mittels Magnetpulver-Bildgebung

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die intravitale Bildgebung einer abgeschwächten, BSL-2-zugelassenen Mycobacterium tuberculosis. Spannung in der Mauslunge unter Verwendung eines permanenten Lungenfensters. Dieser Ansatz ermöglicht eine longitudinale, einzelzellige Auflösungsanalyse früher Wirts-Pathogen-Interaktionen, einschließlich bacillärer Lokalisation, vaskulärer Dynamik und Makrophagenaufnahme innerhalb derselben Lungenmikroumgebung.

Intravitale Bildgebung der abgeschwächten auxotrophen Mycobacterium tuberculosis in der Mauslunge während früher intravaskulärer Infektion

Erfahren Sie die intravitalen Zwei-Photonen-Mikroskopie der transplantierten Mauslunge. Diese Methode ermöglicht Echtzeit-Analyse immunologischer Mechanismen bei Ischämie-Reperfusionsverletzung und Transplantatabstoßung.

Intravitale Zwei-Photonen-Mikroskopie der transplantierten Mauslunge

Weitere Videos entdecken