Name: Ein Rattenmodell der Pouchitis nach Proktokolektomie und ilealer Pouch-Analanastomose unter Verwendung von Dextransulfat-Natrium (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 5 s
Description: Erfahren Sie die Etablierung eines Rattenmodells der Pouchitis mittels IPAA-Chirurgie und Dextransulfat-Natrium-Behandlung. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Pathogenese und Therapieansätzen.

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<meta charset="utf8"></head><body>Experimentelles Rattenmodell der Pouchitis zur Untersuchung der Pathogenese und Behandlung von Colitis ulcerosa

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Wasserfreies Ethanol</td><td>Tianjin Fengchuan Chemical Reagent Technology Co., Ltd</td><td>China</td><td>Hämatoxin-Eosin-Färbung</td></tr><tr><td>Dextransulfat Natrium&nbsp;</td><td>&nbsp; Ja, nbsp;</td><td>60316ES76</td><td>Wird verwendet, um Beutelentzündungen zu induzieren</td></tr><tr><td>Formaldehydlösung</td><td>Tianjin Zhiyuan Reagenzien Unternehmen China</td><td></td><td>Hämatoxin-Eosin-Färbegaze</td></tr><tr><td></td><td>Jiangxi Zhonggan Medical Equipment Company</td><td>China</td><td>Verwendet für Tiermikrochirurgie</td></tr><tr><td>Hämatoxylin</td><td>Peking Zhongshan Jinqiao Unternehmen</td><td>China</td><td>Hämatoxin-Eosin-Färbung</td></tr><tr><td>Interferon & Gamma; &nbsp; Nachweis-Reagenzkit</td><td>Cloud-Klon</td><td>SEA049Ra</td><td>Nachweis von Entzündungsfaktoren</td></tr><tr><td>Interleukin-10-Nachweiskit</td><td>Cloud-Klon</td><td>SEA056Ra</td><td>Nachweis von Entzündungsfaktoren</td></tr><tr><td>Interleukin-17-Nachweiskit</td><td>Cloud-Klon</td><td>SEA063Ra</td><td>Nachweis von Entzündungsfaktoren</td></tr><tr><td>Interleukin-6-Nachweiskit</td><td>Cloud-Klon</td><td>SEA079Ra</td><td>Nachweis von Entzündungsfaktoren</td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Tangpai Medical Equipment Co., Ltd</td><td>China</td><td>Verwendet für die Mikrochirurgie</td></tr><tr><td>von Tieren Mikroskopische Manipulationsinstrumente</td><td>Aesculap</td><td>Deutschland</td><td>Verwendet für die Mikrochirurgie von</td></tr><tr><td>Tieren Occludin</td><td>abcam</td><td>ab216327</td><td>Immunhistochemische Tests</td></tr><tr><td>Nähnadel</td><td>Yangzhou Fuda Medical Equipment Co., Ltd</td><td>China</td><td>Verwendet für die Mikrochirurgie von Tieren</td></tr><tr><td>Tumornekrosefaktor &Alpha; Detektionsreagenzkit</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA133Ra</td><td>Erkennung von Entzündungsfaktoren</td></tr><tr><td>Binokulares Operationsmikroskop für zwei Personen</td><td>OPTON</td><td>Deutschland</td><td>Wird für die Mikrochirurgie von Tieren verwendet</td></tr><tr><td>Xylol</td><td>Tianjin Yingda Seltene und wertvolle Reagenzienfabrik</td><td>China</td><td>Hämatoxin-Eosin-Färbung</td></tr></tbody></table>

ein rattenmodell der pouchitis nach proktokolektomie und ilealer pouch-analanastomose unter verwendung von dextransulfat-natrium

A Rat Model of Pouchitis Following Proctocolectomy and Ileal Pouch-Anal Anastomosis Using Dextran Sulfate Sodium

Allgemeine Zustandsbewertung von Ratten mit Ileumbeutelmodellen nach der Etablierung Nachdem der Bediener die chirurgische Lernkurve der IPAA durchlaufen hatte, vertrugen die Ratten die Operation gut, mit einer Operationsdauer von 192,94 min ± 27,15 min, und es traten weniger postoperative Komplikationen auf. Während der frühen postoperativen Phase kam es bei Ratten zu einer Abnahme der Nahrungsaufnahme, aber ihr präoperativer Appetit wurde innerhalb von 10 Tagen bis 14 Tagen nach der Operation wiederhergestellt. Die frühe postoperative Aktivität nahm leicht ab, und es gab keine offensichtlichen Sekrete aus Augen und Nase. Der Gewichtsverlust vor und nach der Operation betrug 21,17 g ± 1,59 g. Das anfängliche postoperative Gewicht zeigte einen rückläufigen Trend, mit einer maximalen Reduktion von 69,58 g ± 33,19 g. Das stabile Wachstum begann am 8.25. Tag ± 2.53 Tag nach der Operation, und am 31. Tag nach der Operation überstieg das Gewicht 9,35 % ± 4,7 % des Gewichts am Tag nach der Operation. Die Ratten waren in der Lage, innerhalb von 24 Stunden nach der Operation ihren Stuhl zu verrichten, mit losem Stuhl, aber ohne blutigen Stuhl. Die Bildung von weichem Stuhl trat am 9. bis 12. Tag nach der Operation auf.
Kompensatorische Zunahme des Ileumbeutels Am 35. Tag nach der Operation wurde die Bauchhöhle der Ratte unter Narkose geöffnet, wobei eine starke Adhäsion zwischen dem Ileumbeutel und der Beckenhöhle sichtbar wurde. Nach sorgfältiger Trennung der Adhäsion zwischen dem Beutel und dem umgebenden Gewebe wurde eine kompensatorische Vergrößerung des Ileumbeutels, eine Verdickung der Darmwand und eine leichte Erweiterung des distalen Dünndarms beobachtet (Abbildung 1). Die Länge des Ileumbeutels betrug zum Zeitpunkt der Operation 2,89 cm ± 0,28 cm, während er am 35. Tag nach der Operation 3,86 cm ± 0,87 cm betrug, was einen signifikanten statistischen Unterschied von P = 0,000 zeigt. Auch die Schleimhautfläche (cm 2) des Ileumbeutels war im Vergleich zur chirurgischen Messung signifikant vergrößert (6,46 ± 0,85 vs. 17,02 ± 4,61, P = 0,000). Es gab keinen signifikanten Unterschied zwischen der IPAA-Gruppe und der Gruppe mit ilealer Pouchitis (P &gt; 0,05).
Bewertung des Allgemeinzustands und Kot-Score von Ratten mit ilealer Pouchitis Am 31. Tag nach der Operation wurde der Gruppe mit ilealer Pouchitis DSS verabreicht. Zu Beginn der Verabreichung hatten sowohl die IPAA-Gruppe als auch die Ileumpouchitis-Gruppe das gleiche Körpergewicht (352,00 g ± 30,03 g vs. 352,00 g ± 25,92 g, P = 1) und waren im Allgemeinen in gutem Zustand. Die Menge an Nahrung und Wasser, die in der Gruppe mit ilealer Pouchitis konsumiert wurde, nahm jedoch ab, was zu geistiger Müdigkeit, glanzlosem Haar, Sekret in Augen und Nase, verminderter Beweglichkeit und in der IPAA-Gruppe zu keinen signifikanten Veränderungen führte. Am 35. Tag nach der Operation war das Gewicht der Gruppe mit ilealer Pouchitis signifikant niedriger als das der IPAA-Gruppe (322,83 g ± 29,24 g vs. 364,83 g ± 30,13 g, P = 0,028) (Abbildung 2).
Die Gruppe mit ilealer Pouchitis erlebte am ersten Tag nach der DSS-Verabreichung erheblichen Durchfall, und am zweiten Tag nach der DSS-Verabreichung hatten sie Schleim, Eiter und blutigen Stuhl (Abbildung 3). Am 35. Tag nach der Operation betrugen die Stuhlwerte11 der IPAA-Gruppe und der Ileumpouchitis-Gruppe (4,33 ± 0,82 vs. 2,17 ± 0,75, P = 0,001). Die Ratten der IPAA-Gruppe hatten einen sauberen und schadstofffreien Anus, während die Ratten mit ilealer Pouchitis eine Schwellung des Anus aufwiesen, begleitet von Schleim, Eiter und blutigem Stuhlansatz.
Histopathologische Veränderungen des Ileumbeutels
Makroskopische Betrachtung von Exemplaren aus Ileumbeuteln In der IPAA-Gruppe verdickte sich die Darmwand des Ileumbeutels, und es wurde keine Erosion, kein Geschwür oder Blutungspunkt beobachtet. In der Gruppe der ilealen Pouchitis werden die Blutgefäße im Mesenterium des Vorratsbeutels dicker, und die Schleimhaut des Ileumbeutels ist großflächig oder lokal entzündet, mit sichtbarer Erosion, Geschwüren und Blutungspunkten, von denen einige von einer signifikanten distalen Dünndarmerweiterung begleitet werden (Abbildung 4).
Mikroskopische Betrachtung des ilealen Beutelgewebes In der IPAA-Gruppe von Ratten wurde die Spitze einiger Darmzotten im Pouchgewebe stumpf, begleitet von einer kleinen Menge neutrophiler Infiltration, und gelegentlich wurde eine geringe Menge Exsudation auf der Schleimhautoberfläche beobachtet.
Im Gegensatz dazu war die Anordnung der Darmzotten im ilealen Pouchgewebe von Ratten in der Gruppe der ilealen Pouchitis extrem gestört. Einige Darmzotten fehlten, und es waren ausgedehnte Erosionen und mehrere fleckige Geschwüre sichtbar, ohne dass die Muskelschicht beteiligt war. Dies ging einher mit einer großen Anzahl von Neutrophilen und Lymphozyteninfiltrationen, übermäßiger Exsudation und sichtbarer Kryptenentzündung. Der pathologische Score des ilealen Pouchgewebes in der Gruppe mit ilealer Pouchitis war signifikant höher als in der IPAA-Gruppe, wobei ein signifikanter statistischer Unterschied beobachtet wurde (8,50 ± 1,76 vs. 1,33 ± 0,52, P = 0,000) (Abbildung 5).
Expressionsniveau des funktionellen Proteins der Darmbarriere Occludin Occludin, ein wichtiges funktionelles Protein der Darmbarriere, wird sowohl in der IPAA- als auch in der Ileumpouchitis-Gruppe von Ratten auf der Zellmembran des ilealen Pouchgewebes exprimiert11. Das Expressionsniveau des Occludin-Proteins in der Gruppe mit ilealer Pouchitis war jedoch signifikant niedriger als in der IPAA-Gruppe (0,25 ± 0,03 vs. 0,15 ± 0,02, P = 0,000) (Abbildung 6).
Nachweis von Entzündungsfaktoren im Ileumbeutel Die Expressionsniveaus von IL-6, IL-17, TNF-α und INF-γ im ilealen Pouchgewebe von Ratten in der Gruppe mit ilealer Pouchitis waren signifikant höher als in der IPAA-Gruppe (wie durch den ELISA-Testbestimmt 16). Umgekehrt zeigte IL-10 die gegenteiligen Ergebnisse, wobei statistische Unterschiede beobachtet wurden (P = 0,000) (Tabelle 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig01.jpg"> Abbildung 1: Der Zustand des Ileumbeutels. Der Pfeil zeigt den Ileumbeutel (A) zum Zeitpunkt der Operation und (B) die kompensatorische Vergrößerung des Ileumbeutels am 35. Tag nach der Operation (während der Probenentnahme). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig02.jpg"> Abbildung 2: Trend der Körpergewichtsveränderungen bei Ratten nach einer IPAA-Operation. Der Fehlerbalken bezieht sich auf die Standardabweichung, n = 6 in jeder Gruppe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig03.jpg"> Abbildung 3: Foto des Kots von Ratten. (A) IPAA-Gruppe. (B) Gruppe der ilealen Pouchitis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig04.jpg"> Abbildung 4: Makroskopische Betrachtung von Proben aus Ileumbeuteln. (A) IPAA-Gruppe. (B) Gruppe der ilealen Pouchitis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig05.jpg"> Abbildung 5: Pathologische Veränderungen des ilealen Pouchgewebes der Ratte. (A) IPAA-Gruppe. (B) Gruppe der ilealen Pouchitis. Maßstabsstäbe: 60 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig06.jpg"> Abbildung 6: Immunhistochemischer Nachweis der Expression von Occludin-Proteinen in ilealem Pouchgewebe von Ratten. (A) IPAA-Gruppe. (B) Gruppe der ilealen Pouchitis. Maßstabsstäbe: 60 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig06large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Gruppe</td>
			<td>n</td>
			<td>IL-6</td>
			<td>IL-10</td>
			<td>IL-17</td>
			<td>TNF-α</td>
			<td>INF-γ</td>
		</tr><tr><td>IPAA-Gruppe</td>
			<td>6</td>
			<td>2,60 ± 0,36</td>
			<td>5,81 ± 0,66</td>
			<td>17.48 ± 4.81</td>
			<td>86,94 ± 24,06</td>
			<td>4,08 ± 0,56</td>
		</tr><tr><td>Gruppe Pouchitis</td>
			<td>6</td>
			<td>6,94 ± 1,18</td>
			<td>2,77 ± 0,60</td>
			<td>34,82 ± 2,41</td>
			<td>213.00 ± 26.11 Uhr</td>
			<td>9,67 ± 1,70</td>
		</tr><tr><td>P</td>
			<td>0</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
		</tr></tbody></table>Tabelle 1: Expressionsniveau von Entzündungsfaktoren im ilealen Pouchgewebe der Ratte (pg/ml).

Ein Rattenmodell der Pouchitis nach Proktokolektomie und ilealer Pouch-Analanastomose unter Verwendung von Dextransulfat-Natrium

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Dieses Protokoll beschreibt ein Ratten-basiertes Darmtransplantationsmodell mit Ileostomie zur zeitlichen Beurteilung der medikamentösen Intervention bei der Abstoßung von Transplantaten.

Ein Modell zur Abstoßung von Rattentransplantaten bei der Darmtransplantation mit exteriorisierter Ileostomie zur Beurteilung der Längsschnittprognose

Erstellen experimentellen Netzhautablösungen mit einer reproduzierbaren und anhalt Höhe Ablösung, und ohne subretinalen Blutung, ist wichtig für die Erforschung der Pathophysiologie der Photorezeptorzellverlust in der Netzhauterkrankungen und Bewertung potenzieller therapeutischer Interventionen. Hier ist ein solches Verfahren im Detail beschreiben wir.

Modell Netzhautablösung in Nagetiere durch subretinale Injektion von Natriumhyaluronat

Erfahren Sie die Etablierung eines Rattenmodells der Pouchitis mittels IPAA-Chirurgie und Dextransulfat-Natrium-Behandlung. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Pathogenese und Therapieansätzen.

Ein Rattenmodell der Pouchitis nach Proktokolektomie und ilealer Pouch-Analanastomose unter Verwendung von Dextransulfat-Natrium (Video) | JoVE Journal

Ein Rattenmodell der Pouchitis nach Proktokolektomie und ilealer Pouch-Analanastomose unter Verwendung von Dextransulfat-Natrium

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