Name: Präparation und Analyse histologischer Objektträger von Augäpfeln von Ratten und Mäusen zur Beurteilung der Netzhaut (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Lernen Sie die histologische Präparation von Ratten- und Mäuseaugen zur Beurteilung der Netzhaut. Diese Methode ermöglicht die detaillierte Visualisierung der inneren Retina und liefert wertvolle Einblicke für die Augenheilkunde.

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<meta charset="utf8"></head><body>Beurteilung der Netzhautdicke und der Anzahl der Ganglienzellschichten in Augäpfeln von Nagetieren

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<li>Igarashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+triple+mutated+aav2-bdnf+gene+therapy+in+a+rat+model+of+transient+iop+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Tyrosine triple mutated aav2-bdnf gene therapy in a rat model of transient iop elevation.</a> Mol Vis. 22, 816-826 (2016).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Aceton&nbsp;</td><td>Chempur&nbsp;</td><td></td><td></td>111024800</tr><tr><td>Dumont Pinzette #5, 11cm, 0,05 x 0,01mm Spitzen</td><td>World Precision Instruments</td><td>14095</td><td>kleine, mikrochirurgische Pinzette</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Mar-Four</td><td>4P.05.2001/L</td><td>Wässrige Lösung</td></tr><tr><td>Ethylalkohol 96 %</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>CH.ET. AL.96%CZDA. </td><td></td>CH</tr><tr><td>Ethylalkohol 99,9 %</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>Ch. ETYL. ALK.99,9%BW</td><td>Zur Herstellung von 70%igen und 80%igen Lösungen von EtOH</td></tr><tr><td>Glacier - 86 &deg; C Ultratiefkühlschrank NU-9483E</td><td>NuAire</td><td>13027D0034</td><td>Gefriertemperatur - 80 &Grad; C</td></tr><tr><td>Glas-Objektträger</td><td></td><td>Mar-Four MI.15.01673</td><td>Mattglas-Objektträger mit beidseitig mattem Feld für Beschreibung</td></tr><tr><td>Leica CV5030 Vollautomatischer Glas-Deckschuh</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td>14,04,78,80,101</td><td>Automatisierte Gleitversiegelung&nbsp;</td></tr><tr><td>Mayer-Hämatoxylin</td><td>Chempur&nbsp;</td><td></td><td></td>124687402</tr><tr><td>Formen auf Metallbasis 15 mm x 15 mm</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td>3803081</tr><tr><td>Microme HM 340 E</td><td>Thermo Scientific</td><td>90-519-0</td><td>Mikrotom</td></tr><tr><td>Mikrotom Rasierklingen</td><td>Mar-Four</td><td>HI. N.35</td><td>Schnittwinkel 35°;</td></tr><tr><td>Mikro-Twin-Biopsiekassette</td><td>Mar-Four</td><td>LN.13874550</td><td></td></tr><tr><td>Mikrowellen-Hybridgewebeprozessor</td><td>Milestone</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multistainer Leica ST5020</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td></td><td>Automatisierter Objektträgerfärbemaschinen&nbsp;</td></tr><tr><td>NanoZoomer 2.0-HT Diascanner</td><td>Hamamatsu</td><td>C9600</td><td>Histopathologischer Diascanner</td></tr><tr><td>NDP.view2 Bildbetrachtungssoftware</td><td>Hamamatsu</td><td>U12388-01</td><td>Bildbetrachtungssoftware</td></tr><tr><td>Paraffin Pathowax Plus</td><td>Mar-Four</td><td>4P. PWP.010</td><td>Schmelztemperatur 56 &deg; C - 58 &Grad; C</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>441244-1KG</td><td>Bereiten Sie eine 4%ige Lösung in PBS</td></tr><tr><td>PBS Tabletten</td><td>vor Merck Millipore</td><td>524650-1EA</td><td>Zur Herstellung einer Lösung von Phosphatpuffer-Kochsalzlösung gemäß den Anweisungen des Herstellers</td></tr> verwenden <tr><td>Mikrozentrifugenröhrchen durchstechen, 1,5 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>69715</td><td></td></tr><tr><td>Kühl-/Gefrierkombination EN14000AW</td><td>Electrolux</td><td>925032562-00</td><td>Kühlung 4 &Grad; C</td></tr><tr><td>Skalpellklinge</td><td>Swann-Morton</td><td>T.OST. SKAL00.024</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Chempur&nbsp;</td><td></td><td></td>427720906</tr><tr><td>SuperCut Federschere, 12,5 cm, gebogen</td><td>World Precision Instruments</td><td>501925</td><td>gebogene, kleine mikrochirurgische Schere</td></tr><tr><td>Klebeband für automatische Versiegelungsgeräte</td><td>Mar-Four</td><td>KP-3020/SMRH001</td><td></td></tr><tr><td>Xylol</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>Ch. KSYL.5l.METALL.OP&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

präparation und analyse histologischer objektträger von augäpfeln von ratten und mäusen zur beurteilung der netzhaut

Preparation and Analysis of Histological Slides of Rat and Mouse Eyeballs to Evaluate the Retina

Mit Hilfe des vorgestellten Protokolls kann die Anatomie und Morphologie spezifischer Strukturen des Augapfels detailliert beurteilt werden. Unser Team konzentriert sich auf die Erforschung der Pathomechanismen der Neurodegeneration bei Netzhauterkrankungen wie dem Glaukom, der diabetischen Retinopathie und der hypertensiven Retinopathie. Um die Merkmale der Neurodegeneration in der Netzhaut zu beurteilen, untersuchten wir die RT (Maus-Augapfel -Abbildung 2, Ratten-Augapfel -Abbildung 3), ONL, OPL, INL und IPL (Maus-Augapfel -Abbildung 4, Ratten-Augapfel -Abbildung 5) und die Anzahl der Zellen der GCL (Maus-Augapfel -Abbildung 6, Ratten-Augapfel -Abbildung 7). Es wird erwartet, dass die RT und die Zellen der GCL in der zentralen Netzhaut am höchsten und in der Peripherie am niedrigsten sind. Durch den Schnitt des Augapfels auf Höhe der Pupille werden Querschnitte durch die zentrale (am hinteren Pol des Augapfels) und die periphere (nahe dem Ziliarkörper) Netzhaut auf einem Objektträger erzielt.
Während die Zählung von GCL-Zellen als recht objektiv angesehen werden kann, kann eine Verzerrung, die durch schiefe Schnitte verursacht wird, die Ergebnisse der Messung der spezifischen Netzhautschichten beeinflussen. Um Verzerrungen zu vermeiden, können die Messungen als Verhältnis der Dicke einer bestimmten Schicht zum RT-Wert dargestellt werden: ONL/RT, OPL/RT, INL/RT und IPL/RT.
<img alt="Anatomiediagramm des Auges mit beschrifteten Teilen: Netzhaut, Sklera, Linse, Hornhaut, Sehnerv, Makula." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 
Abbildung 1: Anatomie des Augapfels. Sagittaler Querschnitt eines Augapfels mit der Beschriftung seiner größten Strukturen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Mikroskopische Aufnahme eines Netzhautquerschnitts mit Gewebeschichten, Dickenmessung 125 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 
Abbildung 2: Dicke der Netzhaut bei einer Maus. Messung der Netzhautdicke (RT) von der äußeren Grenzmembran bis zur inneren Grenzmembran an der breitesten Stelle, markiert mit dem grünen Balken. Maus-Augapfel (Stamm: C57Bl/6, Alter: 44 Wochen). Der Maßstabsbalken in der linken Ecke zeigt die Länge von 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Histologischer Schnitt mit Netzhautschichten, 53,4 μm dick; Mikroskopiebild, Gewebestudie." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 
Abbildung 3: Netzhautdicke bei einer Ratte. Messung der Netzhautdicke (RT) von der äußeren Grenzmembran bis zur inneren Grenzmembran an der breitesten Stelle, markiert mit dem grünen Balken. Rattenaugapfel (Stamm: Lewis, Alter: 16 Wochen). Der Maßstabsbalken in der linken Ecke zeigt die Länge von 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Querschnittsdiagramm des Netzhautgewebes; Gemessene Schichten: IPL, INL, OPL, ONL; Mikroskopische Analyse." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> 
Abbildung 4: Netzhautschichten in einer Maus. Messung der Dicke der einzelnen Netzhautschichten: äußere Kernschicht (ONL), äußere plexiforme Schicht (OPL), innere Kernschicht (INL) und innere plexiforme Schicht (IPL), markiert mit grünen Balken. Maus-Augapfel (Stamm: C57Bl/6, Alter: 44 Wochen). Der Maßstabsbalken in der linken Ecke zeigt die Länge von 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Mikroskopische Aufnahme des Netzhautquerschnitts mit markierten Schichten: OPL, ONL, IPL, INL; Maßstabsleiste 100 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig05.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> 
Abbildung 5: Netzhautschichten bei einer Ratte. Messung der Dicke der einzelnen Netzhautschichten: äußere Kernschicht (ONL), äußere plexiforme Schicht (OPL), innere Kernschicht (INL) und innere plexiforme Schicht (IPL), markiert mit grünen Balken. Rattenaugapfel (Stamm: Lewis, Alter: 16 Wochen). Der Maßstabsbalken in der linken Ecke zeigt die Länge von 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Histologie-Sektion mit Schichtzellstruktur, Mikroskopbild, Gewebeanalyse, 500 μm Skala." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig06.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> 
Abbildung 6: Zählen von Zellen der Ganglienzellschicht in einer Maus. Die Methode zur Zählung der Zellen der Ganglienzellschicht (GCL) entlang der Netzhaut auf einer Länge von 500 μm. Einzelzellkörper wurden als runde, hämatoxylingefärbte Körper identifiziert, die sich innerhalb der Ganglienzellschicht befinden. Die Zellen sind mit schwarzen Kreisen markiert. Maus-Augapfel (Stamm: DBA/2, Alter: 44 Wochen). Der Maßstabsbalken in der linken Ecke zeigt die Länge von 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig06large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Histologie-Objektträger, Netzhautquerschnitt; sichtbare Gewebeschichten; Mikroskopische Untersuchung, 100 μm Maßstab." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig07.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> 
Abbildung 7: Zählen von Zellen der Ganglienzellschicht bei einer Ratte. Die Methode zum Zählen der Zellen der Ganglienzellschicht (GCL) entlang der Netzhaut auf einer Länge von 100 μm. Einzelzellkörper wurden als runde, hämatoxylingefärbte Körper identifiziert, die sich innerhalb der Ganglienzellschicht befinden. Die Zellen sind mit schwarzen Kreisen markiert. Rattenaugapfel (Stamm: Lewis, Alter: 16 Wochen). Der Maßstabsbalken in der linken Ecke zeigt die Länge von 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig07large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Präparation und Analyse histologischer Objektträger von Augäpfeln von Ratten und Mäusen zur Beurteilung der Netzhaut

A rodent eyeball is a powerful tool for researching the pathomechanisms of many ophthalmic diseases, such as glaucoma, hypertensive retinopathy, and many ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Das hier beschriebene Protokoll dient zur strukturellen Bewertung eines Wholemount-Netzhautpräparats. Dazu gehören Beschreibungen der Gewebedissektion, der Montage auf einem hydrophilisierten Membraneinsatz aus Polytetrafluorethylen (PTFE), der Bolusbeladung mit fluoreszierenden Markern und ein Vergleich der Fixierung mit Carbodiimid und Paraformaldehyd für die immunhistochemische Analyse zellulärer und synaptischer Komponenten.

Optimiertes Protokoll für die retinale Wholemount-Vorbereitung für Bildgebung und Immunhistochemie

Das Nagetier Retina wurde lange als eine zugängliche Fenster zum Gehirn erkannt. In diesem Fachbeitrag stellen wir ein Protokoll, das die Maus-Modell der Sauerstoff-induzierten Retinopathie, die Mechanismen, die zum Versagen der vaskulären Regeneration im zentralen Nervensystem nach einem ischämischen Verletzungen führen studieren beschäftigt. Das beschriebene System kann auch genutzt werden, um Strategien zu erkunden, um das Nachwachsen der funktionellen Blutgefäße in der Netzhaut und ZNS zu...

Beurteilung der Gefäß Regeneration im ZNS Verwenden der Maus Retina

Wir führen drei verschiedene Gewebe Vorbereitung Techniken für immunhistochemische Visualisierung der Ratte retinalen mikrovaskuläre perizyten, d. h. Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone Isolierung des vaskulären-Netzes.

Netzhaut Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone isoliert Gefäßsystem Vorbereitungen für immunhistochemische Visualisierung von Mikrovaskulären Perizyten

Dieser Bericht beschreibt umfassende Methoden zur Vorbereitung von gefrorenen Mausnetzteilen für die Immunhistochemie (IHC).  Die beschriebenen Methoden umfassen die Zerlegung des okularen posterioren Bechers, die Paraformaldehydfixierung, die Einbettung in die Medien der optimalen Schnitttemperatur (OCT) und die Gewebeorientierung, die Schnitt- und Immunfärbung.

Vorbereitung von Maus-Retinal-Cryo-Sektionen für die Immunhistochemie

Diabetische Retinopathie ist eine der Hauptursachen für Blindheit. Histologie, Blut-Netzhaut-Schranken-Abbauassay und Fluoreszenzangiographie sind wertvolle Techniken, um die Pathophysiologie der Netzhaut zu verstehen, was das effiziente Arzneimittelscreening gegen diabetische Retinopathie weiter verbessern könnte.

Retinale pathophysiologische Bewertung in einem Rattenmodell

Das Ziel dieses Protokolls ist es, ein neuartiges Modell der glaukomatösen Neurodegeneration zu charakterisieren, das auf einer thermischen 360°-Kauterisierung des limbalen Gefäßplexus basiert und eine subakute okuläre Hypertonie induziert.

Vollkreiskauterisierung des limbalen Gefäßplexus bei chirurgisch induziertem Glaukom bei Nagetieren

In diesem Artikel wird ein Protokoll für die okuläre Mikrodissektion bei Nagetieren vorgestellt. Der Prozess beinhaltet die Enukleation des Augapfels zusammen mit der Nickhaut (d.h. dem dritten Augenlid). Es folgt die Trennung der hinteren und vorderen Augenmuscheln.

Mikrodissektion des Nagetierauges

Mausmodelle können nützliche Werkzeuge sein, um die Biologie des retinalen pigmentierten Epithels (RPE) zu untersuchen. Es wurde festgestellt, dass Mäuse eine Reihe von RPE-Pathologien entwickeln können. In dieser Arbeit beschreiben wir ein Phänotypisierungsprotokoll zur Aufklärung und Quantifizierung von RPE-Pathologien in Mäusen mittels Licht-, Transmissionselektronen- und konfokaler Mikroskopie.

Ein Protokoll zur Bewertung und Quantifizierung von retinalen pigmentierten Epithelpathologien in Mausmodellen der altersbedingten Makuladegeneration

Es wird ein Protokoll zur Vorbereitung von Kryoschnitten der Maus-Netzhaut und zur Durchführung von Immunfärbungen an Photorezeptoren beschrieben. Dieser Artikel ermöglicht es Forschern, konsistente Schnellschnitte der Netzhaut von Mäusen mit gut erhaltener Morphologie und qualitativ hochwertigen Immunfärbeergebnissen zu erstellen.

Kryosektion und Immunfärbung der Netzhaut der Maus

B7-H1 (PD-L1) und seine Bindung an PD-1 einen großen tumorinduzierte immunsuppressiven Signal in Mikroumgebung des Tumors. Eine immunhistochemische Färbetechnik, die Expression und Lokalisation von B7-H1 in Pankreaskarzinom zu charakterisieren ist hier beschrieben.

Immunhistochemische Färbung von B7-H1 (PD-L1) auf Paraffin-embedded Slides der Pankreaskarzinom Tissue

Lernen Sie die histologische Präparation von Ratten- und Mäuseaugen zur Beurteilung der Netzhaut. Diese Methode ermöglicht die detaillierte Visualisierung der inneren Retina und liefert wertvolle Einblicke für die Augenheilkunde.

Präparation und Analyse histologischer Objektträger von Augäpfeln von Ratten und Mäusen zur Beurteilung der Netzhaut

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