Name: Isolierung von Endothelzellen der Bauchspeicheldrüse der Maus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-21T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Lernen Sie die Isolierung von Endothelzellen aus der Bauchspeicheldrüse der Maus mit schonender Dissoziation und magnetischer Zellsortierung. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Gefäßbiologie und Krankheitsmechanismen.

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<meta charset="utf8"></head><body>Rationalisierung der Extraktion von Pankreas-Endothelzellen der Maus für Krankheitsstudien

<table><tbody><tr><td>1,5 mL eppendorf</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>10 cm Schale</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>25G Nadeln</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>2X Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Q712-03-AA</td><td></td></tr><tr><td>5 mL eppendorf</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td></td><td></td>14282300</tr><tr><td>6-Well-Platte</td><td>Greiner Bio-One</td><td>07-000-208</td><td></td></tr><tr><td>70 &micro; m Sieb</td><td>Fisher</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD31-Biotin</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>REA784</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserum Albumin Hitzeschock behandelt</td><td>Fisher</td><td>BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher</td><td>BP510</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kollagen Typ 1, aus Kalbsleder</td><td>Sigma Aldrich& nbsp;</td><td>C9791</td><td>Attachment-Reagenz im Protokoll</td></tr><tr><td>Kollagenase Typ 1&nbsp;</td><td>Worthington Bio</td><td>LS004197</td><td></td></tr><tr><td>Countess Automatischer Zellzähler</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td>D1306</td><td></td>Immunfluoreszenz-Einweg-Sicherheitsskalpelle</tr><tr><td></td><td>Myco Instrumentation</td><td>6008TR-10</td><td></td></tr><tr><td>DNAse I&nbsp;</td><td>Roche</td><td>260913&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS (Ca2+,Mg2+)</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td></td><td></td>14080055</tr><tr><td>Ethanol</td><td>Fisher</td><td>BP2818-4</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Fisher</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td></td><td></td><td>Gehalten bei 37 > C 5% CO2</td></tr><tr><td>LS Säulen</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>M199</td><td>Sigma</td><td>M2520-1L</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand mit dem QuadroMACS Separator&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;</td><td>M2520-10X</td><td></td></tr><tr><td>Mikrokügelchen Anti-Biotin</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-090-485</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Leica</td><td></td><td>Zur Beurteilung der Zellmorphologie</td></tr><tr><td>Molekulares Wasser</td><td>Corning</td><td>46-000-CM</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S271-1</td><td></td></tr><tr><td>New Brunswick Innova 44/44R Orbitalschüttler&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PECAM1 (CD31) Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab56299</td><td>Immunfluoreszenz</td></tr><tr><td>PECAM1 (CD31) Antikörper</td><td>R& D Systems</td><td>AF3628</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (10X) (kein Ca2+, kein Mg2+)</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-507-XB</td><td></td></tr><tr><td>Primer 36B4 Vorwärtsmaus</td><td>IDT</td><td></td><td>AGATTCGGGATATGCTGTTGGC</td></tr><tr><td>Primer 36B4 Revese Maus&nbsp;</td><td>IDT</td><td></td><td>TCGGGTCCTAGACCAGTGTTC</td></tr><tr><td>Primer Kdr Forward Maus&nbsp;</td><td>IDT</td><td></td><td>TCCAGAATCCTCTTCCATGC</td></tr><tr><td>Primer Kdr Reverse Maus</td><td>IDT</td><td></td><td>AAACCTCCTGCAAGCAAATG</td></tr><tr><td>Primer Nkx6.1 Reverse Maus&nbsp;</td><td>IDT</td><td></td><td>CACGGCGGACTCTGCATCACTC</td></tr><tr><td>Primer Nxk6.1 Vorwärtsmaus</td><td>IDT</td><td></td><td>CTCTACTTTAGCCCCAGCG</td></tr><tr><td>Primer PECAM1 Vorwärtsmaus</td><td>IDT</td><td></td><td>ACGCTGGTGCTCTATGCAAG</td></tr><tr><td>Primer PECAM1 Rückwärtsmaus</td><td>IDT</td><td></td><td>TCAGTTGCTGCCCATTCATCA</td></tr><tr><td>RNase ZAP</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>RNasefreies Wasser</td><td>Takara</td><td>RR036B</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 12" lange Pinzette</td><td>F.S.T</td><td>91100-16</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Feinzange</td><td>F.S.T</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Feinschere</td><td>F.S.T</td><td>14061-11</td><td></td></tr><tr><td>Gewebekulturschalen 2cm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-260</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagenz</td><td>Fisher</td><td>15596018</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Corning</td><td>MT25900CI</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-Inhibitor</td><td>Roche</td><td>10109886001</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>VE-Cadherin-Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab33168</td><td>Immunfluoreszenz-Wasserbad</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolierung von endothelzellen der bauchspeicheldrüse der maus

Isolation of Mouse Pancreatic Endothelial Cells

Nach diesem Protokoll können etwa 2 x 106 lebende Zellen gewonnen werden, wenn 3 Maus-Bauchspeicheldrüsen gepoolt werden, und 750.000 Zellen aus einer einzigen Maus-Bauchspeicheldrüse. Um die Anreicherung von EC zu validieren, führten wir die folgenden Analysen durch: 1) quantitative PCR: Im Vergleich zu den Flow-Through-Proben (d.h. den nicht-CD31-Antikörper-gebundenen Fraktionen) wiesen die EC-Fraktionen signifikant höhere Spiegel von Pecam1 (kodiert für CD31) und Kdr (kodierend für VEGFR2)...

Isolierung von Endothelzellen der Bauchspeicheldrüse der Maus

The pancreas is a vital organ for maintaining metabolic balance within the body, in part due to its production of metabolic hormones such as insulin and ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Pankreasinseln, auch Langerhans-Inseln genannt, sind eine Ansammlung von endokrinen Zellen, die Hormone für die Glukoseregulierung und andere wichtige biologische Funktionen produzieren. Dieses Protokoll erklärt eine Methode zur Isolierung von Pankreasinseln, indem zuerst Kollagenase über Ampulla von Vater perfundiert wird, um das exokrine Pankreasgewebe zu verdauen, und eine vereinfachte Dichtegradientenzentrifugation, um die Inselzellen von Mäusen zu reinigen.

Isolierung von Pankreasinseln durch Kollagenase-Perfusion: Eine enzymatische Methode zur Isolierung von Pankreas-Inselzellen

In dieser Veröffentlichung beschreiben wir eine schnelle und bequeme Verfahren zur Isolierung und Kultivierung von primären Azinuszellen des Pankreas von dem murinen Bauchspeicheldrüse. Diese Methode stellt einen wertvollen Ansatz, um die Physiologie der frischen primären normal / transformierten exokrinen Pankreas-Zellen zu studieren.

Isolierung und Kultivierung von primären Maus Azinuszellen des Pankreas

Wir präsentieren hier ein Protokoll für die Isolierung von Inselzellen aus dem Mausmodell für Typ-2-Diabetes, Leprdb und Details eines Lebendzell-Assays zur Messung der Insulinsekretion von intakten Inseln, der 2-Photonenmikroskopie verwendet.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Mausmodell des Typ-2-Diabetes: Pancreatic Islet Isolation und Live-cell 2-Photonen-Imaging von intakten Inseln

Dieses Protokoll wurde erstellt, um unsere Methode zur Isolierung von koronaren Endothelzellen von Mäusen zum Zwecke der Bildgebung oder zur Durchführung molekularbiologischer Experimente zu teilen.

Isolierung von Maus-Koronar-Endothelzellen

Dieses Inselisolierungsprotokoll beschrieb einen neuartigen Weg der Kollagenase-Injektion zur Verdauung des Exokringewebes und ein vereinfachtes Gradientenverfahren, um die Inseln von Mäusen zu reinigen. Es beinhaltet enzymatische Verdauung, Gradiententrennung/Reinigung und Islet-Handpicking. Eine erfolgreiche Isolierung kann 250–350 hochwertige und voll funktionsfähige Inselchen pro Maus ergeben.

Ein einfaches Hocheffizienzprotokoll für die Isolierung von Pankreas-Isleten von Mäusen

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Maus pankreatische Inselzellen für das screening von ROS Induktionen durch die XENOBIOTIKA Ermittlung der potenziellen diabetogene XENOBIOTIKA Chemikalien zu isolieren.

Ein murinen Pancreatic Islet Cell-basierte Screening für diabetogene Umweltchemikalien

Hier stellen wir ein Protokoll zur Abbildung und Quantifizierung der Calciumdynamik in heterogenen Zellpopulationen wie Pankreas-Isletzellen vor. Fluoreszierende Reporter werden in die periphere Zellschicht innerhalb der Islet geliefert, die dann immobilisiert und abgebildet wird, und es wird eine pro-Zell-Analyse der Dynamik der Fluoreszenzintensität durchgeführt.

Bildgebende Calciumdynamik in Subpopulationen von Maus-Pankreas-Islet-Zellen

Hier skizzieren und demonstrieren wir ein Protokoll für die Isolierung primärer Lebersinuszellen (LSEC) in der Mausleber. Das Protokoll basiert auf der Perfusion der Leberkollagenase, der nichtparenchymalen Zellreinigung durch Zentrifugation mit niedriger Geschwindigkeit und der Auswahl magnetischer CD146-Perlen. Wir phänotypisieren und charakterisieren diese isolierten LSECs auch mittels Durchflusszytometrie und Rasterelektronenmikroskopie.

Isolierung und Charakterisierung von primären Leber-Sinus-Endothelzellen der Maus

In diesem Artikel wurden primäre Lungenendothelzellen aus neonatalen Mäusen isoliert und kultiviert.

Isolierung von primären Lungenendothelzellen der Maus

Diese Studie entwickelte eine vereinfachte Methode, um funktionelle primäre Inselchen und Acinarzellen effizient aus der Bauchspeicheldrüse der Maus zu extrahieren, was ein wertvolles Werkzeug zur Untersuchung der interzellulären Kommunikation in der Pathogenese des akuten Pankreatitis-induzierten Diabetes bietet.

Eine einfache und schnelle Methode zur gleichzeitigen Isolierung von primären Inselchen und primären Pankreas-Acinarzellen von Mäusen

Ein Protokoll wird für die Isolierung und Primärkultur von mikrovaskulären Endothelzellen (BMEC) aus neonatalem Maus-Hirngewebe vorgestellt, um ein robustes In-vitro-Modell zur Untersuchung der Blut-Hirn-Schrankfunktion unter physiologischen und pathologischen Bedingungen zu erstellen.

Isolierung und Kultur mikrovaskulärer Endothelzellen im Maushirn

Lernen Sie die Isolierung von Endothelzellen aus der Bauchspeicheldrüse der Maus mit schonender Dissoziation und magnetischer Zellsortierung. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Gefäßbiologie und Krankheitsmechanismen.

Isolierung von Endothelzellen der Bauchspeicheldrüse der Maus

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