Name: Postmortale Diagnose von Tollwut bei Tieren mit dem aktualisierten, multiplexierten LN34 Echtzeit-Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktionsassay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:35:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Erfahren Sie die postmortale Tollwutdiagnose bei Tieren mit dem aktualisierten multiplex LN34 RT-PCR-Assay. Diese Methode verbessert die diagnostische Genauigkeit und unterstützt die Tollwutprävention durch validierte Testverfahren.

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<ol><li>Meechan, P. J., Potts, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMeechan%2C+PJ+%22Biosafety+in+Microbiological+and+Biomedical+Laboratories%22">Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories</a>. , Centers for Disease Control and Prevention. (2020).</li>
<li>Terrestrial Manual 2023. , World Organization for Animal Health. At
 <a target="_blank" href="https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals">https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals</a> (2023).</li>
<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/handle/10665/310836">https://iris.who.int/handle/10665/310836</a> (2018).</li>
<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 2, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1">https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1</a> (2019).</li>
<li>Genevie, R., et al. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States. , At
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<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22WHO+Expert+Consultation+on+Rabies%3A+Third+Report%22">WHO Expert Consultation on Rabies: Third Report</a>. , World Health Organization. Geneva. (2018).</li>
<li>Gigante, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-site+evaluation+of+the+LN34+pan-lyssavirus+real-time+RT-PCR+assay+for+postmortem+rabies+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Multi-site evaluation of the LN34 pan-lyssavirus real-time RT-PCR assay for postmortem rabies diagnostics.</a> PLoS One. 13 (5), e0197074(2018).</li>
<li>Wadhwa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Pan-Lyssavirus+Taqman+Real-Time+RT-PCR+assay+for+the+detection+of+highly+variable+rabies+virus+and+other+lyssaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">A Pan-Lyssavirus Taqman Real-Time RT-PCR assay for the detection of highly variable rabies virus and other lyssaviruses.</a> PLoS Negl Trop Dis. 11 (1), e0005258(2017).</li>
<li>Gigante, C. M., Wicker, V., Wilkins, K., Seiders, M., Zhao, H., Patel, P., Orciari, L., Condori, R. E., Dettinger, L., Yager, P., Xia, D., Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+pan-lyssavirus+LN34+assay+for+streamlined+rabies+diagnostics+by+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of pan-lyssavirus LN34 assay for streamlined rabies diagnostics by real-time RT-PCR.</a> Journal Virological Methods. , In press (2024).</li>
<li>Rao, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+modified+preexposure+prophylaxis+vaccination+schedule+to+prevent+human+rabies%3A+recommendations+of+the+advisory+committee+on+immunization+practices-United+States%2C+2022%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Use of a modified preexposure prophylaxis vaccination schedule to prevent human rabies: recommendations of the advisory committee on immunization practices-United States, 2022.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 71 (18), 619(2022).</li>
<li>Condori, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+LN34+Pan-Lyssavirus+Real-Time+RT-PCR+assay+for+rabies+diagnosis+and+rapid+genetic+typing+from+formalin-fixed+human+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Using the LN34 Pan-Lyssavirus Real-Time RT-PCR assay for rabies diagnosis and rapid genetic typing from formalin-fixed human brain tissue.</a> Viruses. 12 (1), 120(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7500 Fast</td><td>Angewandte Biosysteme</td><td>N/A</td><td>Ersetzen Sie nicht ohne Validierung</td></tr><tr><td>7500 schnelle DX&nbsp;</td><td>Angewandte Biosysteme</td><td>N/A</td><td>Ersetzen Sie nicht ohne Validierung</td></tr><tr><td>ABI VIIA 7</td><td>Angewandte Biosysteme</td><td>N/A</td><td>Ersetzen Sie nicht ohne Validierung</td></tr><tr><td>AgPath-ID One-Step RT-PCR Kit&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>AM1005</td><td>Ersetzen Sie nicht ohne Validierung</td></tr><tr><td>Beadbug6</td><td>Benchmark Scientific</td><td>D1036</td><td></td></tr><tr><td>Direct-Zol RNA MiniPrep Kit&nbsp;</td><td>Zymo-Forschung</td><td>R2052</td><td></td></tr><tr><td>MagNA Lyser grüne Perlen&nbsp;</td><td>Roche</td><td>3358941001</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifuge</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>5425 R</td><td></td></tr><tr><td>Optische 96-Well-Reaktionsplatten</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>Optische Klebstoffabdeckungen</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>4311971</td><td>Alternative: Kappen</td></tr><tr><td>Applikator-Tupfer mit Polyesterfaserspitzen;</td><td>BD BBL Polyesterfaser-Applikationsabstrich</td><td>220690</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 6Flex</td><td>Angewandte Biosysteme</td><td>4485691</td><td>Ersetzen Sie nicht ohne Validierung</td></tr><tr><td>Quartäres Ammoniumdesinfektionsmittel (1:256)</td><td>LYSOL</td><td>WBB56939</td><td>Ersetzen Sie nicht ohne Validierung</td></tr><tr><td>RNase WEG</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>7002PK</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>Einwegskalpell, ein Skalpell mit Sicherheitsmechanismus&nbsp;</td><td>Integra Miltex&nbsp;</td><td>4-510</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Polyproylen-Mikrozentrifugenröhrchen (1,5 ml), nukleasefrei</td><td>Sarstedt</td><td>72.692.405</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Polyproylen-Mikrozentrifugenröhren (2 ml), nukleasefrei</td><td>Sarstedt</td><td>72.694.600</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol-Reagenz</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>15596026</td><td>Ersetzen Sie nicht ohne Validierung</td></tr></tbody></table>

postmortale diagnose von tollwut bei tieren mit dem aktualisierten, multiplexierten ln34 echtzeit-reverse-transkriptase-polymerase-kettenreaktionsassay

Postmortem Diagnosis of Rabies in Animals by the Updated, Multiplexed LN34 Real-Time Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction Assay

Postmortale Diagnose von Tollwut bei Tieren mit dem aktualisierten, multiplexierten LN34 Echtzeit-Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktionsassay

Rabies is a fatal zoonotic disease caused by Lyssavirus rabies (RABV) and related negative strand RNA viruses from the Lyssavirus genus (family ...

postmortem-diagnosis-rabies-animals-updated-multiplexed-ln34-real

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Der direkte schnelle immunhistochemische Test (DRIT) bietet eine anerkannte Alternative zur direkten fluoreszierenden Antikörper-Diagnose (World Organization for Animal Health and World Health Organization(Who). Dieser Test ermöglicht feldbasierte Anwendungen, die bei Hirnabdrücken mit Hilfe der Lichtmikroskopie in ca. 1 h durchgeführt werden können.

Verbesserte Tollwutüberwachung mit einem direkten schnellen immunhistochemischen Test

Ein Pan-Lysavirus verschachtete Umkehr-Transkription Polymerase-Kettenreaktion wurde entwickelt, um speziell alle bekannten Lyssaviren zu erkennen. Die Validierung mit Tollwut-Hörnproben verschiedener Tierarten ergab, dass diese Methode eine Empfindlichkeit und Spezifität hat, die dem Gold-Standard-Fluoreszenz-Antikörper-Test entspricht und für die routinemäßige Tollwutdiagnostik verwendet werden könnte.

Bewertung einer universellen, veralteten Transcription Polymerase Chain Reaction zur Erkennung von Lyssaviren

Ziel dieses Protokolls ist es, sichere Nekropsietechniken bei kleinen und großen Tieren zu demonstrieren, um zufriedenstellende Gewebeproben für Tollwuttests zu erhalten.

Tollwut-Nekropsie-Techniken bei großen und kleinen Tieren

Diese Echtzeit-RT-PCR mit dsDNA interkalierenden Farbstoff ist geeignet, Lyssavirus-Infektionen zu diagnostizieren. Die Methode beginnt mit RNA, die aus Tollwut-Verdachtsproben für Ante-Mortem- oder Post-Mortem-Proben extrahiert wird, detaillierung der Master-Mix-Vorbereitung, RNA-Addition, Einrichtung der Echtzeitmaschine und korrekte Interpretation der Ergebnisse.

Pan-lyssavirus Echtzeit RT-PCR für Tollwut-Diagnose

Wir präsentieren ein vollständiges Protokoll zur postmortalen Diagnose von Tiertollwut unter Feldbedingungen mit Hilfe eines schnellen immunchromatographischen diagnostischen Tests (RIDT), von der Probenahme der Hirnbiopsie bis zur endgültigen Interpretation. Wir beschreiben auch weitere Anwendungen mit dem Gerät für molekulare Analyse und virale Genotypisierung.

Field Postmortem Rabies Rapid Immunochromatographischer Diagnostischer Test für ressourcenbegrenzte Einstellungen mit weiteren molekularen Anwendungen

Hier stellen wir ein immunhistochemisches Testprotokoll zum Nachweis von Tollwutvirus-Antigen als alternativen diagnostischen Test für formalinfixierte Gewebe vor.

Immunhistochemischer Test für den Lyssavirus-Antigennachweis aus formalinfixierten Geweben

Dieses Protokoll stellt einen qRT-PCR-basierten Ansatz zur Bestimmung der Virus-Nukleoprotein (N)-Genkopienummer innerhalb verschiedener anatomischer Rinderhirnstrukturen unter Verwendung von In-vitro-Transkription dar.

Quantifizierung des Tollwutvirus in verschiedenen Rinderhirnstrukturen

Die Solaris qPCR Gene Expression Assays sind neuartige pre-designed qPCR Primer / Sonden-Kombinationen entwickelt, um die qPCR-Prozess, ohne die Spezifität und Robustheit des Tests zu vereinfachen.

Quantitative Real-Time PCR unter Verwendung der Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) ist ein wirksames Instrument zur mRNA-Spiegel in verschiedenen Insekten-Geweben und Entwicklungsstadien zu diagnostizieren. In diesem Bericht zeigen wir die Verwendung von qRT-PCR, um festzustellen mRNA-Spiegel in verschiedenen Larvenstadien Geweben und Entwicklungsstadien der invasiven Insektenarten, Smaragd Asche borer.

Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer ( Agrilus planipennis) Mittels quantitativer Real Time-PCR

PCR hat sich als eine übliche Technik in vielen molekularbiologisch arbeitenden Labors entstanden. Vorausgesetzt ist hier eine Kurzanleitung, um mehrere konventionelle PCR-Protokolle. Da jede Reaktion ist ein einzigartiges Experiment, optimale Voraussetzungen, um ein Produkt liefern zu variieren. Das Verständnis der Variablen in einer Reaktion ermöglicht eine wesentlich bessere Effizienz Fehlerbehebung, wodurch die Möglichkeit, das gewünschte Ergebnis zu erhalten.

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Fehlersuche und Optimierungsstrategien

Erfahren Sie die postmortale Tollwutdiagnose bei Tieren mit dem aktualisierten multiplex LN34 RT-PCR-Assay. Diese Methode verbessert die diagnostische Genauigkeit und unterstützt die Tollwutprävention durch validierte Testverfahren.

Postmortale Diagnose von Tollwut bei Tieren mit dem aktualisierten, multiplexierten LN34 Echtzeit-Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktionsassay (Video) | JoVE Journal

Postmortale Diagnose von Tollwut bei Tieren mit dem aktualisierten, multiplexierten LN34 Echtzeit-Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktionsassay

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