Name: Messung des Kohlenstoffgehalts in Makrophagen der Atemwege, die kohlenstoffhaltigen Partikeln ausgesetzt sind (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Erfahren Sie eine nicht-invasive Methode zur Messung des Kohlenstoffgehalts in Atemwegsmakrophagen als Biomarker für die Exposition gegenüber kohlenstoffhaltigen Partikeln. Dieses standardisierte Protokoll ermöglicht präzise individuelle Expositionsbewertungen.

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<meta charset="utf8"></head><body>Quantifizierung von Kohlenstoff in Lungenmakrophagen mittels induzierter Sputumanalyse

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</ol>

<table><tbody><tr><td>3 mL sterile Halme</td><td>Shanghai YEASEN Biotechnology Co., LTD</td><td>84202ES03</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Zentrifugenröhrchen</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>Absoluter Ethylalkohol</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LTD</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Zedernöl</td><td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., LTD</td><td>C805296</td><td></td></tr><tr><td>Diff-schnelle Färbung Lösung</td><td>Shanghai YEASEN Biotechnology Co., LTD</td><td>40748ES76</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Solebo Bio Co., LTD</td><td>D8220</td><td></td></tr><tr><td>Duchennephosphat-Puffer (DPBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopkamera</td><td>Olympus Corporation of Japan</td><td>DP72</td><td></td></tr><tr><td>Neutralbaumgummi</td><td>Solebo Bio Co., LTD</td><td>G8590</td><td></td></tr><tr><td>Nylon-Filtermembran 70um</td><td>BD Falcon Bioscience, USA</td><td>211755</td><td></td></tr><tr><td>Optisches Mikroskop</td><td>Olympus Corporation of Japan</td><td>BX60</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylenglykol</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. Ltdd</td><td>25322-68-3</td><td></td></tr><tr><td>Ultrazentrifuge</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td>SL40R</td><td></td></tr><tr><td>Viskoser Objektträger</td><td>Jiangsu SHitAI EXPERIMENTAL Equipment Co. Ltd</td><td></td><td></td>188105</tr></tbody></table>

messung des kohlenstoffgehalts in makrophagen der atemwege, die kohlenstoffhaltigen partikeln ausgesetzt sind

Measuring Carbon Content in Airway Macrophages Exposed to Carbon-Containing Particulate Matters

Das mit der Fixierlösung konservierte und verarbeitete Sputum zeigte während der morphologischen Untersuchung unter einem Lichtmikroskop eine intakte Makrophagenmorphologie. Die Makrophagen wiesen klare, runde oder nierenförmige, leicht färbbare Zellkerne auf. Nach der Färbung erschienen die Zellkerne bläulich-violett, während das Zytoplasma hellrosa oder hellblau war. Das mikroskopische Feld wies minimale Verunreinigungen auf, was eine einfache Zellidentifizierung ermöglichte. Innerhalb der Zellen waren schwarze Kohlenstoffpartikel in kleinen Aggregaten deutlich sichtbar, was eine quantitative Analyse der Kohlenstoffpartikel ermöglichte.
In Abbildung 1 sind repräsentative Bilder von Sputum-Makrophagen dargestellt, die eine unterschiedliche Anzahl von Kohlenstoffpartikeln in verschiedenen Zellen darstellen. So zeigt Abbildung 1A keine Kohlenstoffpartikel, während Abbildung 1D die höchste Konzentration aufweist. Die CCAM-Werte wurden mit 0,00 %, 2,24 %, 6,64 % bzw. 34,61 % für Makrophagen (A-D) gemessen. Während des CCAM-Parameterbestimmungsprozesses wurde eine quantitative Bewertung des Kohlenstoffgehalts in jedem Makrophagen durchgeführt, um Verzerrungen zu mildern, die sich aus Variationen in der Makrophagengröße und der Überlappung von Kohlenstoffpartikeln mit Zellkernen ergeben. Die CCAM-Berechnung und -Analyse wurde für 50 Makrophagen pro Studienteilnehmer durchgeführt, wie in Abbildung 2 dargestellt.
Die Studie wählte Rußverpacker (CBP) aus einer bestimmten Acetylen-Rußfabrik als exponierte Gruppe aus und rekrutierte als Kontrollgruppe (Nicht-CBP) Wasserpumpenarbeiter aus lokalen Wasserwerken, die offensichtlich beruflich keinen schädlichen Faktoren ausgesetzt waren. Die in Abbildung 2 dargestellten Ergebnisse deuten auf eine höhere CCAM bei Arbeitern in der Rußverpackung im Vergleich zur Kontrollgruppe hin.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66781/66781fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Optisches mikroskopisches Bild, das Kohlenstoffpartikel in Makrophagen der Atemwege zeigt. Die schwarze Farbe im Zytoplasma steht für Kohlenstoffpartikel. Die Tafeln (A-D) zeigen repräsentative Bilder von Atemwegsmakrophagen, die jeweils unterschiedliche CCAM-Niveaus aufweisen. Die CCAM-Werte für Makrophagen in (A-D) betrugen 0,00 %, 2,24 %, 6,64 % bzw. 34,61 %. Der höchste CCAM-Gehalt wurde in (D) beobachtet. Maßstabsbalken: 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66781/66781fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66781/66781fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Quantitative CCAM-Konzentrationen in der Bevölkerung. Fünfzig zytoplasmatisch intakte und gut gefärbte Makrophagen wurden nach dem Zufallsprinzip für die Analyse und Quantifizierung pro Studienteilnehmer ausgewählt. Die Daten wurden mit dem Student's t-Test analysiert: *P &lt; 0,05. CBP: Rußverpacker; Nicht-CBP: Kontrollgruppe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66781/66781fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Messung des Kohlenstoffgehalts in Makrophagen der Atemwege, die kohlenstoffhaltigen Partikeln ausgesetzt sind

Pulmonary macrophages exhibit a dose-dependent pattern in phagocytizing particles. Following engulfment, these macrophages are subsequently excreted with ...

measuring-carbon-content-airway-macrophages-exposed-to-carbon

Research

Forschung

JoVE Journal

Environment

Umwelt

Pulmonale Epithelzellen aus den Atemwegen von Mäusen isoliert und kultiviert bei Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche als ein Modell der differenzierten respiratorischen Epithels. Ein Protokoll ist für die Isolierung, Kultivierung und Freilegen dieser Zellen zu Mainstream Zigarettenrauch beschrieben, um molekulare Antworten zu diesem Umweltgift zu studieren.

Isolierung von Maus respiratorischen Epithelzellen und der Exposition gegenüber Experimental Zigarettenrauch bei Air Liquid-Interface

Hier beschreiben wir Protokolle zum Ernten von murinen Alveolarmakrophagen, die ihren Sitz angeborenen Immunsystems Zellen in der Lunge und Prüfung ihrer Aktivierung in Reaktion auf Co-Kultur mit Polyanhydrid Nanopartikel.

Ernte Murine Alveolarmakrophagen und Auswerten zelluläre Aktivierung von Polyanhydrid Nanopartikel Induced

Dieses Video zeigt die Immunmarkierung von Makrophagen extrazellulären Fallen, METs, in bronchoalveolären Makrophagen aus bronchoalveolärer Lavageflüssigkeit und deren Visualisierung mit einem konfokalen Mikroskop.

Visualisierung extrazellulärer Fallen in Makrophagen aus humanen bronchoalveolären Lavageflüssigkeiten

Ein Verfahren, um die Fähigkeit der isolierten Maus-Alveolarmakrophagen, um das Wachstum von phagozytierten Aspergillus-Sporen durch konfokale Mikroskopie Steuerung auszuwerten.

Beurteilung der Anti-Pilz-Aktivität von isolierten Alveolarmakrophagen durch konfokale Mikroskopie

Das Ziel dieses Protokolls ist es, automatisierte Methoden zur Quantifizierung chronischer Lungenpathologien in einem Mausmodell der COPD bereitzustellen. Das Protokoll umfasst die Exposition von Mäusen gegenüber Zigarettenrauch (CS), die Messung der Lungenfunktion, das Aufblasen der Lunge und die Verwendung morphometrischer Methoden zur Messung von Emphysem und Umbau kleiner Atemwege bei Mäusen.

Automatisierte Messung von Lungenemphysem und Klein Airway Remodeling im Zigarettenrauch ausgesetzten Mäuse

Dieses Protokoll beschreibt Techniken für die Quantifizierung und Charakterisierung von Chromosomenaberrationen in vitro in RAW264.7 Makrophagen der Maus nach der Behandlung mit der Umgebungsluft Feinstaub.

Die Analyse der Feinstaub in der Luft-induzierte Chromosomenaberrationen Mit Hilfe eines<em&gt; In Vitro</em&gt; System

Makrophagen extrazelluläre fallen sind eine neu beschriebene Einheit. Dieser Artikel konzentriert sich auf Methoden der konfokalen Mikroskopie und wie sie sind visualisiert in Vitro und in Vivo aus Lunge Proben.

Visualisierung von Makrophagen extrazelluläre fallen mit der konfokalen Mikroskopie

Wir beschreiben eine Methode zur Verarbeitung von bronchoalveolarer Spülflüssigkeit und abgestimmtem peripherem Blut von chronisch HIV-infizierten Personen auf antiretrovirale Therapie zur Beurteilung von lungenen HIV-Reservoirs. Diese Methoden führen zum Erwerb von hochreinen CD4-T-Zellen und Alveolar-Makrophagen, die anschließend zur Immunphenotypisierung und HIV-DNA/RNA-Quantifizierungen durch ultraempfindliche Polymerase-Kettenreaktion eingesetzt werden können.

Verarbeitung von Bronchoalveolar Lavage Fluid und Matched Blood für Alveolar Macrophage und CD4+ T-Zell Immunophenotypisierung und HIV Reservoir Assessment

Dieses Manuskript beschreibt ein Protokoll zur Bestimmung, ob die Exposition gegenüber Ozon, einem Kriterium des Luftschadstoffs, die Alveolarmakrophagen-Efferozytose in vivo beeinträchtigt. Dieses Protokoll verwendet häufig verwendete Reagenzien und Techniken und kann an mehrere Modelle von Lungenverletzungen angepasst werden, um Die Auswirkungen auf die Alveolar-Makrophagen-Efferozytose zu bestimmen.

In Vivo Bewertung der Alveolar Makrophagen-Efferozytose nach Ozon-Exposition

Beschrieben wird die Zellkultur und Expositionsmethode eines In-vitro-Bronchialmodells für eine realistische, wiederholte Inhalationsexposition gegenüber Partikeln für Toxizitätstests.

Ein Luft-Flüssig-Interface-Bronchial-Epithelmodell für realistische, wiederholte Inhalationsexposition gegenüber Luftpartikeln für Toxizitätstests

Erfahren Sie eine nicht-invasive Methode zur Messung des Kohlenstoffgehalts in Atemwegsmakrophagen als Biomarker für die Exposition gegenüber kohlenstoffhaltigen Partikeln. Dieses standardisierte Protokoll ermöglicht präzise individuelle Expositionsbewertungen.

Messung des Kohlenstoffgehalts in Makrophagen der Atemwege, die kohlenstoffhaltigen Partikeln ausgesetzt sind

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