Name: Verfahren zur In-vitro-Kultivierung von Treponema pallidum, der Syphilis-Spirochäte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T12:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Lernen Sie die In-vitro-Kultivierung von Treponema pallidum in Ko-Kultur mit Sf1Ep-Zellen. Diese skalierbare Methode ermöglicht die Produktion großer Mengen des Syphilis-Erregers für Forschung und Antibiotika-Screening.

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<meta charset="utf8"></head><body>Skalierbare In-vitro-Kultivierung von T. pallidum mittels Co-Kultur von Säugetierzellen

<ol><li>Implementing the global health sector strategies on HIV, viral hepatitis and sexually transmitted infections, 2022-2030: Report on progress and gaps. World Health Organization. , Available from: 
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<li>Lumeij, J. T., Mikalová, L., Šmajs, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+there+a+difference+between+hare+syphilis+and+rabbit+syphilis%3F+Cross+infection+experiments+between+rabbits+and+hares%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Is there a difference between hare syphilis and rabbit syphilis? Cross infection experiments between rabbits and hares.</a> Vet Microbiol. 164 (1-2), 190-194 (2013).</li>
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<li>Edmondson, D. G., Wormser, G. P., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+to+doxycycline%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">In vitro susceptibility of Treponema pallidum subsp. pallidum to doxycycline.</a> Antimicrob Agents Chemother. 64 (10), e00979-e01020 (2020).</li>
<li>Leimer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+selective+antibiotic+for+Lyme+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A selective antibiotic for Lyme disease.</a> Cell. 184 (21), 5405-5418 (2021).</li>
<li>Haynes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+linezolid+on+Treponema+pallidum%2C+the+syphilis+agent%3A+A+preclinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Efficacy of linezolid on Treponema pallidum, the syphilis agent: A preclinical study.</a> EBioMedicine. 65, 103281(2021).</li>
<li>Houston, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+functional+characterization+of+peptides+with+antimicrobial+activity+From+the+syphilis+spirochete%2C+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Identification and functional characterization of peptides with antimicrobial activity From the syphilis spirochete, Treponema pallidum.</a> Front Microbiol. 13, 888525(2022).</li>
<li>Tantalo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subspecies+pallidum%3A+an+in-vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Microbe%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial susceptibility of Treponema pallidum subspecies pallidum: an in-vitro study.</a> Lancet Microbe. 4 (12), e994-e1004 (2023).</li>
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<li>Tantalo, L. C., Molini, B. J., Bose, M., Klausner, J. D., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+isolation+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+from+fresh+and+frozen+needle+aspirates+of+primary+experimental+syphilis+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">In vitro isolation of Treponema pallidum subsp. pallidum from fresh and frozen needle aspirates of primary experimental syphilis lesions.</a> Sex Transm Dis. 50 (3), 180-183 (2023).</li>
<li>Edmondson, D. G., De Lay, B. D., Hanson, B. M., Kowis, L. E., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+isolates+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+Nichols+provide+evidence+for+the+occurrence+of+microevolution+during+experimental+rabbit+infection+and+in+vitro+culture%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Clonal isolates of Treponema pallidum subsp. pallidum Nichols provide evidence for the occurrence of microevolution during experimental rabbit infection and in vitro culture.</a> PLoS One. 18 (3), e0281187(2023).</li>
<li>Lin, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+TprK+profiling+of+in+vivo+and+in+vitro-propagated+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+reveals+accumulation+of+antigenic+variants+in+absence+of+immune+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal TprK profiling of in vivo and in vitro-propagated Treponema pallidum subsp. pallidum reveals accumulation of antigenic variants in absence of immune pressure.</a> PLoS Negl Trop Dis. 15 (9), e0009753(2021).</li>
<li>De Lay, B. D., Cameron, T. A., De Lay, N. R., Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+transcriptional+profiles+of+Treponema+pallidum+during+experimental+infection+of+rabbits+and+in+vitro+culture%3A+Highly+similar%2C+yet+different%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Comparison of transcriptional profiles of Treponema pallidum during experimental infection of rabbits and in vitro culture: Highly similar, yet different.</a> PLoS Pathog. 17 (9), e1009949(2021).</li>
<li>Romeis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+engineering+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%2C+the+syphilis+spirochete%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Genetic engineering of Treponema pallidum subsp. pallidum, the syphilis spirochete.</a> PLoS Pathog. 17 (7), e1009612(2021).</li>
<li>Phan, A., Romeis, E., Tantalo, L., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+transformation+and+selection+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro transformation and selection of Treponema pallidum subsp. pallidum.</a> Curr Protoc. 2 (8), e507(2022).</li>
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<li>Fieldsteel, A. H., Becker, F. A., Stout, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+survival+of+virulent+Treponema+pallidum+%28Nichols+strain%29+in+cell-free+and+tissue+culture+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Prolonged survival of virulent Treponema pallidum (Nichols strain) in cell-free and tissue culture systems.</a> Infect Immun. 18, 173-182 (1977).</li>
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<li>Cox, C. D., Barber, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+uptake+by+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Oxygen uptake by Treponema pallidum.</a> Infect Immun. 10 (1), 123-127 (1974).</li>
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<li>Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+multiplication+and+subculture+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+in+a+tissue+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the multiplication and subculture of Treponema pallidum subsp. pallidum in a tissue culture system.</a> Infect Immun. 53, 534-539 (1987).</li>
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<li>Hanff, P. A., Norris, S. J., Lovett, M. A., Miller, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Treponema+pallidum%2C+Nichols+strain%2C+by+Percoll+density+gradient+centrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">Purification of Treponema pallidum, Nichols strain, by Percoll density gradient centrifugation.</a> Sex Transm Dis. 11, 275-286 (1984).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>10x Earle' s Ausgewogene Salze, ohne Mg2+, Ca2+</td><td>Gibco</td><td>14155063</td><td></td></tr><tr><td>konische sterile Einweg-Zentrifugenröhrchen mit 15 und 50 ml&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>2 mL kryogene Fläschchen&nbsp;</td><td>Corning</td><td>430659</td><td></td></tr><tr><td>6-Well-Zellkulturplatten für die Kultivierung von T. pallidum</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td>Die Platten müssen Deckel mit geringer Verdunstung haben.</td></tr><tr><td>70 % Ethanol</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>75 cm2 Gewebekulturkolben mit belüfteten Kappen</td><td>Corning</td><td>43061U</td><td></td></tr><tr><td>93,5 % Stickstoff, 5 % CO2 und 1,5 % Sauerstoff für Voräquilibrierungsmedien und -kulturen</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>95 % Stickstoff und 5 % CO2 für Voräquilibrierungsmedien und Kulturen</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Mikrotiterplatten mit geringer Verdampfung, mit Flachboden, die mit Gewebekulturen behandelt</td><td>wurden Corning Falcon 353072</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Einstellbare Mehrkanalpipette mit einer Kapazität von 200 μl&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Optional, aber sehr hilfreich für die Klonierung</td></tr><tr><td>Wasser in Zellkulturqualität</td><td>Sigma</td><td>W3500</td><td></td></tr><tr><td>CMRL 1066 ohne L-Glutamin oder Phenolrot</td><td>US Biological</td><td>C5900-03A</td><td></td></tr><tr><td>CO2 für Trigas- und Gewebekultur-Inkubatoren&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Lagertank für kryogene Flüssigstickstoff-Zellkulturen</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>Einweg-Filtereinheiten, 0,2 &; Mikro; m , > 100 mL Kapazität</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Einwegpipetten: 25 mL, 10 mL, 5 mL, aspirierend</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DL-Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>D-Mannitol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1902</td><td></td></tr><tr><td>DMSO (sterile Zellkulturqualität)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Eagle' s</td><td>MEM Sigma-Aldrich</td><td>M4655</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum, hitzeinaktiviert&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4135</td><td>Wir können dieses Produkt nur wärmstens empfehlen. Bei Verwendung einer anderen Marke oder Katalognummer muss eine Vorabprüfung auf T. pallidum Kulturkompatibilität durchgeführt werden.</td></tr><tr><td>Gefrierschrank mit der Fähigkeit, -70 & Grad zu halten; C oder -80 &deg; C</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Für die Lagerung von T. pallidum; Flüssigstickstoff kann anstelle der Lagerung verwendet werden</td></tr><tr><td>Gefriermedium (Sf1Ep Medium + 10% [v/v] DMSO)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Gasflaschen mit entsprechenden Anschlüssen</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>GasPak 150 belüftetes anaerobes Gefäß (Brewer Jar)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-816</td><td></td></tr><tr><td>Glycerin</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Helber Zählkammern mit Thoma-Ruolen</td><td>Hawksley Medizin- und Laborgeräte</td><td></td><td>Zur Quantifizierung von T. pallidum</td></tr><tr><td>Hämozytometer</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>&NBSP; Für die Sf1Ep-Zellquantifizierung</td></tr><tr><td>Inkubator-Tankschalter</td><td>NuAire&nbsp;</td><td>NU-1550 TankGuard Automatischer CO2-Inkubator-Tankschalter</td><td>Optional, aber sehr hilfreich bei der Aufrechterhaltung angemessener O2-Bedingungen.</td></tr><tr><td>Inverses Mikroskop mit Phasenkontrastoptik</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Zur Betrachtung von Sf1Ep-Zellkulturen</td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>L-Histidin&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>MEM Non-Essential Amino Acids</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop mit Dunkelfeldkondensator</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Das Mikroskop sollte ein 40x Objektiv und 15x Okulare haben.</td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3183</td><td></td></tr><tr><td>Mehrkanaladapter für Aspirator&nbsp;</td><td>Integra</td><td>155520</td><td>Optional, aber nützlich für die Klonierung von</td></tr><tr><td>NaHCO3 (7,5%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>Stickstoff für Tri-Gas-Inkubator</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7017</td><td></td></tr><tr><td>Sf1Ep (NBL-11) Zellen</td> American <td>Type Culture Collection</td><td>CCL-68</td><td></td></tr><tr><td>Natriumpyruvat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8636</td><td></td></tr><tr><td>Steriles PBS (ohne Calciumchlorid und Magnesiumchlorid)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Reagenzreservoire, 50 oder 100 mL, Größe</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>T. pallidum Probe, gefroren oder frisch&nbsp;</td><td></td><td></td><td>aus einer Kanincheninfektion oder einer In-vitro-Kultur</td></tr><tr><td>Gewebekultur-Inkubator, gehalten bei 37 μg; C, 5 % CO2</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Trigas-Gewebekultur-Inkubator, gehalten bei 34 μg; C, 5% CO2, 1,5% O2</td><td>Thermofisher</td><td>Heracell&trade; VIOS 160i Tri-Gas CO2-Inkubator</td><td>Optional; es können auch anaerobe Gläser verwendet werden (siehe Ref. 17)</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA-Lösung&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td></td></tr><tr><td>Vakuumquelle (z. B. Heimvakuum), Vakuumschlauch, Vakuummeter und Anschlüsse</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Wasser, geeignet für Zellkulturen, filtersterilisiert, gereinigt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W3500</td><td>Empfohlen für die Herstellung von Mediums; verringert die Variabilität der Kultur</td></tr></tbody></table>

verfahren zur in-vitro-kultivierung von treponema pallidum, der syphilis-spirochäte

Procedures for In Vitro Cultivation of Treponema pallidum, the Syphilis Spirochete

Unter den beschriebenen Bedingungen behält T. pallidum typischerweise eine Motilität von &gt;90 % bei und vermehrt sich logarithmisch mit einer Verdopplungszeit von 33 h bis 45 h für etwa 7 Tage, bevor es in die stationäre Phase eintritt (Abbildung 3). Im Laufe von 1 Woche durchlaufen die Spirochäten etwa 4-5 Verdopplungen (Abbildung 4). ). Darüber hinaus können verschiedene Stämme von T. pallidum unterschiedlich schnell wachsen. Stämme der SS14-Gruppe von T. pallidum neigen dazu, langsamere Verdopplungszeiten zu haben als die der Nichols-Gruppe17.
Die Fütterung von Kulturen kann die Kulturzeit um mehrere Tage verlängern, aber die Sf1Ep-Zellschicht versagt oft nach einer Woche Kultur. Darüber hinaus erreichen die Treponeme eine Obergrenze für Organismen von etwa 5 x 107/ml. Kulturen, die in Abständen von 7 Tagen übertragen werden, setzen in der Regel die logarithmische Multiplikation mit geringer oder keiner Verzögerungsphase fort. Organismen in der stationären Phase sind oft schwer zu passieren.
Die meisten T. pallidum sind an die Sf1Ep-Zellen gebunden. Es verbleibt jedoch so viel T. pallidum im Überstand, dass die Proben des Mediums regelmäßig entnommen werden können, um die Lebensfähigkeit und Vermehrung zu überprüfen. Wenn eine sorgfältige Quantifizierung erforderlich ist, sollte das Volumen des entnommenen Mediums gemessen, die Anzahl von T. pallidum quantifiziert und die Gesamtzahl der entfernten Organismen zu den endgültigen Zählungen bei der Ernte addiert werden.
In früheren Studien betrug die Klonierungseffizienz (Anzahl der positiven Kulturen pro geimpftem Organismus) 12,5 % für 2 T. pallidum , die pro Vertiefung geimpft wurden, und 6,7 % für 0,5 T. pallidum , die pro Vertiefung geimpft wurden27. Daher ist es wahrscheinlich, dass jede positive Vertiefung das Auswachsen eines einzelnen Organismus an einer dieser Inokula darstellt. Die Klonalität der resultierenden Populationen muss jedoch verifiziert werden, indem die Kultur an Stellen, die in der Elternkultur heterogen sind, auf Homogenität untersucht wird. Der eindeutigste Weg, um nachzuweisen, dass die Kultur isogen ist, ist die Sequenzierung des gesamten Genoms27.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig01.jpg"> Abbildung 1: Flussdiagramm des In-vitro-Kultivierungsverfahrens von T. pallidum . Diese Abbildung wurde mit Genehmigung von Edmondson und Norris (2021)19 nachgedruckt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig02.jpg"> Abbildung 2: Diagramm des Systems zur Äquilibrierung von Reagenzien der T . pallidum-Kultur in einer sauerstoffarmen Umgebung. Eine Entlüftung eines Brauerglases wird über ein T-Gelenk mit einer Vakuumquelle (z. B. einem Hausvakuum) und mit Gasflaschen verbunden, die kundenspezifische Gasgemische enthalten (5 % CO2, Balance Stickstoff und 1,5 % O2, 5 % CO2, Balance Stickstoff). Ein Inline-Vakuummeter misst das im Gefäß gezogene Vakuum. Das Vakuum wird im Gefäß auf ca. -58 kPa gezogen. Das evakuierte Gefäß wird dann langsam wieder mit den Gasgemischen befüllt. Das Brauglas wird dreimal mit 5 % CO2 nachgefüllt, vor einer abschließenden Evakuierung mit Stickstoff ausgeglichen und mit 95 % N2, 5 % CO2 und 1,5 % O2 aufgefüllt. Kulturen oder Medien werden dann aus dem Glas entnommen und schnell in den sauerstoffarmen Inkubator überführt. Alternativ kann der Schlauch zwischen dem Brewerglas und dem ersten T-Gelenk fest geklemmt, der Schlauch vom T-Gelenk getrennt und das gesamte Brewerglas in einen 34 °C heißen Inkubator überführt werden. Diese Abbildung wurde mit Genehmigung von Edmondson und Norris (2021)19 nachgedruckt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig03.jpg"> Abbildung 3: Wachstumskurven von T. pallidum , kultiviert mit Sf1Ep-Zellen mit TpCM-2-Medium. Parallele dreifache Kulturen wurden mit T. pallidum besiedelt. Zu jedem Zeitpunkt wurden Replikate geerntet; Die Ergebnisse stellen den Mittelwert + SEM für diese Kulturen dar. (A) Die Veränderungen von T. pallidum pro Kultur und (B) prozentuale Motilität sind dargestellt. Diese Abbildung wurde mit Genehmigung von Edmondson et al.18 angepasst. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig04.jpg"> Abbildung 4: Beispiel für die Passage einer In-vitro-Kultur von T. pallidum, Nichols-Stamm. Parallele dreifache Kulturen wurden mit T. pallidum besät und wöchentlich in einer Verdünnung von 1:20 verabreicht. Das Sägezahndiagramm zeigt die Anzahl von T. pallidum pro Kultur und die Anzahl, die zu jedem Zeitpunkt in neue Kulturen übertragen wurde. Die Ergebnisse stellen den Mittelwert ± SEM für drei biologische Replikate dar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Tabelle 1: Mittleres Volumen und Aussaatverhältnis für Kulturgefäße. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%201.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>
Tabelle 2: Medien für den Anbau von T. pallidum . Alle Medien sollten nach der Aufbereitung filtersterilisiert werden. Das Sf1Ep-Medium kann bis zu zwei Monate bei 4 °C gelagert werden. TpCM-2 wird in der Regel einen Tag vor der Anwendung hergestellt. Das Dissoziationsmedium sollte aliquotiert und eingefroren werden. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%202.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>

Verfahren zur In-vitro-Kultivierung von Treponema pallidum, der Syphilis-Spirochäte

For over a century, Treponema pallidum subsp. pallidum, the spiral-shaped bacterium that causes syphilis, could only be propagated by inoculation and ...

procedures-for-vitro-cultivation-treponema-pallidum-syphilis

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Quelle: Eggers, C. H. Phagen-vermittelte genetische Manipulation der Lyme-Borreliose Borrochäte Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022)Dieses Video zeigt die Herstellung einer genetisch veränderten Borrelia burgdorferi-Kultur , die mit ruhender Bakteriophagen-DNA hergestellt wurde, die ein Antibiotikaresistenzgen trägt. Nach der Auswahl und Inkubation von Antibiotika löst ein chemischer Induktor DNA-Schäden aus, die zur Exzision, Replikation und Assemblierung neuer Virionen führen, die das...

Präparation und Induktion von Borrelia burgdorferi-Kulturen für die Herstellung von Viruspartikeln

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

Eine schnelle und effiziente Quantifizierung des intrazellulären M . tuberculosis-Wachstums ist entscheidend für verbesserte Therapien gegen Tuberkulose (TB). Dieses Protokoll beschreibt einen brühebasierten kolorimetrischen Detektionsassay unter Verwendung eines automatisierten Flüssigkultursystems zur Quantifizierung des Mtb-Wachstums in Makrophagen, die mit Wirtstherapiekandidaten behandelt werden.

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Phagenvermittelte genetische Manipulation der Borreliose Spirochete Borrelia burgdorferi

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