Name: Mitochondrialer Transfer durch Tunneln von Nanoröhren zwischen mesenchymalen Stammzellen und retinalem Pigmentepithel in vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T13:55:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Erfahren Sie, wie bidirektionaler mitochondrialer Transfer zwischen mesenchymalen Stammzellen und retinalem Pigmentepithel über Tunnel-Nanoröhren funktioniert. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Zellkommunikation und Rettungsmechanismen in vitro.

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<meta charset="utf8"></head><body>Untersuchung des mitochondrialen Transfers in MSC- und ARPE19-Cokulturen

<ol><li>Caprara, C., Grimm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+oxygen+to+erythropoietin%3A+Relevance+of+hypoxia+for+retinal+development%2C+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">From oxygen to erythropoietin: Relevance of hypoxia for retinal development, health and disease.</a> Prog Retin Eye Res. 31 (1), 89-119 (2012).</li>
<li>Ferrington, D. A., Fisher, C. R., Kowluru, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+defects+drive+degenerative+retinal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial defects drive degenerative retinal diseases.</a> Trends Mol Med. 26 (1), 105-118 (2020).</li>
<li>Spees, J. L., Olson, S. D., Whitney, M. J., Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+between+cells+can+rescue+aerobic+respiration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer between cells can rescue aerobic respiration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (5), 1283-1288 (2006).</li>
<li>Wei, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+from+bone+mesenchymal+stem+cells+protects+against+tendinopathy+both+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer from bone mesenchymal stem cells protects against tendinopathy both in vitro and in vivo.</a> Stem Cell Res Ther. 14 (1), 104(2023).</li>
<li>Borcherding, N., Brestoff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+power+and+potential+of+mitochondria+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The power and potential of mitochondria transfer.</a> Nature. 623 (7986), 283-291 (2023).</li>
<li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+mitochondrial+transfer+as+a+means+of+tissue+revitalization%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Intercellular mitochondrial transfer as a means of tissue revitalization.</a> Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 65(2021).</li>
<li>Rustom, A., Saffrich, R., Markovic, I., Walther, P., Gerdes, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotubular+highways+for+intercellular+organelle+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Nanotubular highways for intercellular organelle transport.</a> Science. 303 (5660), 1007-1010 (2004).</li>
<li>Cordero Cervantes, D., Zurzolo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peering+into+tunneling+nanotubes-the+path+forward%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+j%22%5BJournal%5D)">Peering into tunneling nanotubes-the path forward.</a> Embo j. 40 (8), e105789(2021).</li>
<li>Qin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+functions%2C+methods%2C+and+mobility+of+mitochondrial+transfer+between+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">The functions, methods, and mobility of mitochondrial transfer between cells.</a> Front Oncol. 11, 672781(2021).</li>
<li>Jiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+crosstalk+between+mesenchymal+stem+cells+and+various+ocular+cells+through+the+intercellular+trafficking+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic crosstalk between mesenchymal stem cells and various ocular cells through the intercellular trafficking of mitochondria.</a> Theranostics. 10 (16), 7260-7272 (2020).</li>
<li>Domhan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+communication+by+exchange+of+cytoplasmic+material+via+tunneling+nano-tube+like+structures+in+primary+human+renal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intercellular communication by exchange of cytoplasmic material via tunneling nano-tube like structures in primary human renal epithelial cells.</a> PLoS One. 6 (6), e21283(2011).</li>
<li>Zhang, J., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+nanotubes%3A+Novel+communication+between+distant+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Membrane nanotubes: Novel communication between distant cells.</a> Sci China Life Sci. 56 (11), 994-999 (2013).</li>
<li>Cheng, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ipscs+derived+astrocytes+rescue+rotenone-induced+mitochondrial+dysfunction+and+dopaminergic+neurodegeneration+in+vitro+by+donating+functional+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Human ipscs derived astrocytes rescue rotenone-induced mitochondrial dysfunction and dopaminergic neurodegeneration in vitro by donating functional mitochondria.</a> Transl Neurodegener. 9 (1), 13(2020).</li>
<li>Ahmad, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miro1+regulates+intercellular+mitochondrial+transport+%26+enhances+mesenchymal+stem+cell+rescue+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">Miro1 regulates intercellular mitochondrial transport & enhances mesenchymal stem cell rescue efficacy.</a> Embo J. 33 (9), 994-1010 (2014).</li>
<li>Li, C. J., Chen, P. K., Sun, L. Y., Pang, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+mitochondrial+transfer+by+antioxidants+in+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Enhancement of mitochondrial transfer by antioxidants in human mesenchymal stem cells.</a> Oxid Med Cell Longev. 2017, 8510805(2017).</li>
<li>Paliwal, S., Chaudhuri, R., Agrawal, A., Mohanty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+abilities+of+mesenchymal+stem+cells+through+mitochondrial+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Regenerative abilities of mesenchymal stem cells through mitochondrial transfer.</a> J Biomed Sci. 25 (1), 31(2018).</li>
<li>Lin, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+of+wharton%27s+jelly+mesenchymal+stem+cells+eliminates+mutation+burden+and+rescues+mitochondrial+bioenergetics+in+rotenone-stressed+melas+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer of wharton's jelly mesenchymal stem cells eliminates mutation burden and rescues mitochondrial bioenergetics in rotenone-stressed melas fibroblasts.</a> Oxid Med Cell Longev. 2019, 9537504(2019).</li>
<li>Hu, X., Duan, T., Wu, Z., Xiong, Y., Cao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+mitochondria+transfer%3A+A+new+perspective+for+the+treatment+of+metabolic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochim+Biophys+Sin+%28Shanghai%29%22%5BJournal%5D)">Intercellular mitochondria transfer: A new perspective for the treatment of metabolic diseases.</a> Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 53 (7), 958-960 (2021).</li>
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<table><tbody><tr><td>0,25 % Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>4 % Paraformaldehyd</td><td>Solarbio</td><td>P1110</td><td></td></tr><tr><td>6-Well-Platte</td><td>NEST</td><td>703001</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Zentrifugenröhrchen</td><td>BD Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>24-Well-Platte</td><td>NEST</td><td>702001</td><td></td></tr><tr><td>ARPE19-Zellen</td><td>ATCC</td><td>CRL-2302</td><td>Zelllinien</td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA)</td><td>Beyotime</td><td>ST025</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace violett</td><td>Invitrogen</td><td>C34557</td><td></td></tr><tr><td>Deckfolie</td><td>NEST</td><td>801007</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>C141905005BT</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12-GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10565-042</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rind Serum (FBS)</td><td>VivaCell</td><td>C04002-500</td><td></td></tr><tr><td>FluorSave Reagenz</td><td>Millipore</td><td>345789</td><td></td></tr><tr><td>MSCs</td><td>Nuwacell</td><td>RC02003</td><td>Zelllinien</td></tr><tr><td>ncMission</td><td>Shownin</td><td>RP02010</td><td></td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>pCT-Mito-GFP</td><td>SBI</td><td>CYTO102-PA-1</td><td>Plasmid; Von&nbsp; https://www.systembio.com/mitochondria-cyto-tracer-pct-mito-gfp-cmv</td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>MCE</td><td>HY-B1743A</td><td></td></tr><tr><td>Pipette</td><td>Axygen</td><td>TF-1000-R-S</td><td></td></tr><tr><td>Phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A22287</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr><tr><td>Transwell-Platte</td><td>Corning</td><td>3470</td><td></td></tr></tbody></table>

mitochondrialer transfer durch tunneln von nanoröhren zwischen mesenchymalen stammzellen und retinalem pigmentepithel in vitro

Mitochondrial Transfer Via Tunneling Nanotubes Between Mesenchymal Stem Cells and Retinal Pigment Epithelium In Vitro

Das schematische Diagramm, das die direkte Co-Kultur von mesenchymalen Stammzellen (MSC) und ARPE19-Zellen veranschaulicht, ist in Abbildung 1 dargestellt. MSCs, die so konstruiert wurden, dass sie Mito-GFP exprimieren, wie die Spenderzellen, und ARPE19-Mito-RFP-Zellen mit violett markierten zytoplasmatischen Membranen als Empfängerzellen wurden in einem Verhältnis von 1:1 kokultiviert. Nach einer 24-stündigen Co-Kultur-Periode wurden die Zellen auf Phalloidin gefärbt und konfokalmikroskopisch untersucht. Die resultierenden Zellpopulationen umfassten MSC-mito-GFP-Zellen, ARPE19-mito-RFP-Zellen, ARPE19-mito-RFP-Zellen, die mito-GFP enthalten, und MSC-mito-GFP-Zellen, die mito-RFP enthalten. Bemerkenswert ist, dass das Vorhandensein von mito-GFP in ARPE19-Zellen und mito-RFP in MSCs auf einen mitochondrialen bidirektionalen Transfer hindeutet.
Spezifische Details der TNT-Bildung sind in Abbildung 2 dargestellt. Diese Strukturen können interzelluläre Verbindungen zwischen Zellen desselben Typs (Abbildung 2A-C) sowie zwischen Zellen verschiedener Typen (Abbildung 2D) herstellen. Tunnelnde Nanoröhren (TNTs) dienen als Kanäle, die benachbarte Zellen verbinden, und weisen eine charakteristische F-Aktin-reiche Membranstruktur mit offenen Enden auf, die die zytoplasmatische Kontinuität und den Transport von Mitochondrien erleichtern. Mit Hilfe der Z-Achsen-Bildgebung ist es offensichtlich, dass TNTs nicht fest an der extrazellulären Matrix verankert sind, sondern im Kulturmedium suspendiert sind, wodurch sie von herkömmlichen zellulären Vorsprüngen unterschieden werden. Der mitochondriale Transfer ist in Abbildung 3 zu sehen, wo violett-positive ARPE19-Zellen eine dispergierte, grün gepunktete Fluoreszenz aufweisen, die auf Mitochondrien hinweist, die von MSCs stammen (Abbildung 3A). Violett-negative MSCs, die rot gepunktete Fluoreszenz enthalten, stellen den mitochondrialen Transfer von ARPE19-Zellen dar (Abbildung 3B). Abbildung 4 zeigt die TNT-Bildung und den mitochondrialen Transfer unter superauflösender Bildgebung, aus der wir mehr Details des mitochondrialen Transfers über TNT sehen können. Video 1 zeigt die Dynamik des mitochondrialen Transports durch TNT.
Um weiter zu zeigen, dass die Voraussetzung für den mitochondrialen Transfer physischer Kontakt wie TNT und nicht die mitochondriale Sekretion und -aufnahme ist, verwendeten wir eine zuvor berichtete Co-Kultur-Methode10. Wie in Abbildung 5A gezeigt, wurden MSCs und ARPE19-Zellen in die obere bzw. untere Kammer einer Transwell-Platte ausgesät. Sie wurden durch einen Filter mit 0,4 μm Poren getrennt, der den direkten Kontakt zwischen MSCs und ARPE19-Zellen blockierte, aber den Durchgang von Mitochondrien ermöglichte. Nach 24 Stunden Co-Kultur wurden ARPE19-Zellen in der unteren Kammer untersucht und es wurde wenig Mito-GFP von MSCs in der oberen Kammer beobachtet (Abbildung 5B). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass der mitochondriale Transfer einen direkten Kontakt zwischen MSCs und ARPE19-Zellen erfordert.
Abschließend wurde die Quantifizierung der TNT-Bildung und des mitochondrialen Transfers durchgeführt, wobei die entsprechenden Ergebnisse in Abbildung 6 dargestellt sind. MSCs waren signifikant besser in der Lage, Mitochondrien zu spenden als ARPE19-Zellen (p = 0,0286). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass MSCs die Fähigkeit besitzen, Mitochondrien auf retinale Pigmentepithelzellen zu übertragen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig01.jpg"> Abbildung 1: Schematische Darstellung der Co-Kultur von MSCs und ARPE19-Zellen. MSCs, die mito-GFP- und ARPE19-mito-RFP-Zellen exprimieren und mit CellTrace Violet markiert sind, werden 24 Stunden lang in einem Verhältnis von 1:1 co-kultiviert. Mito-GFP in violett+ Zellen markiert den Transfer von Mitochondrien von MSCs zu ARPE19-Zellen, während Mito-RFP in violetten Zellen den Transfer von Mitochondrien von ARPE19-Zellen zu MSCs markiert. Abkürzungen: GFP = grün fluoreszierendes Protein; RFP = rot fluoreszierendes Protein; MSCs = mesenchymale Stammzellen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig02.jpg"> Abbildung 2: TNT-Bildung zwischen MSCs und ARPE19-Zellen. Weiße Pfeilspitzen zeigen die TNT-Bildung an, grüne Pfeilspitzen zeigen Mitochondrien mit Mito-GFP und rote Pfeilspitzen zeigen Mitochondrien mit Mito-RFP an. (A,B) TNT-Bildung zwischen ARPE19-Zellen. (C) TNT-Bildung zwischen MSCs. (D) TNT-Bildung zwischen MSCs und ARPE19-Zellen. Z-Achsen-Bildgebung mit TNTs, die in Kulturmedium suspendiert sind. Maßstabsleisten = 25 μm. Abkürzungen: MSCs = mesenchymale Stammzellen; TNTs = tunnelnde Nanoröhren. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig03.jpg"> Abbildung 3: Mitochondrialer Transfer von MSCs zu ARPE19-Zellen. (A) Der weiße gestrichelte Kreis zeigt den mitochondrialen (mito-GFP) Transfer von MSCs zu ARPE19-Zellen und (B) der gelbe gestrichelte Kreis zeigt den mitochondrialen (mito-RFP) Transfer von ARPE19-Zellen zu MSCs. Maßstabsbalken = 20 μm. Abkürzung: GFP = grün fluoreszierendes Protein; RFP = rot fluoreszierendes Protein; MSCs = mesenchymale Stammzellen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig04.jpg"> Abbildung 4: TNT-Bildung und mitochondrialer Transfer zwischen MSCs und ARPE19-Zellen mittels hochauflösender Mikroskopie. (A und B) Mitochondrialer Transport von MSCs zu ARPE19-Zellen. (C) Detail von TNTs unter superauflösender Bildgebung. (D) Grüne Mitochondrien von MSCs, die in ARPE19-Zellen unter superauflösender Bildgebung vorhanden sind. Maßstabsleiste = 5 μm. Abkürzungen: MSCs = mesenchymale Stammzellen; TNTs = tunnelnde Nanoröhren. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig05.jpg"> Abbildung 5: Nahezu nicht nachweisbarer mitochondrialer Transfer in indirekter Co-Kultur im Transwell-System von MSCs und ARPE19-Zellen. (A) Schematische Darstellung der Co-Kultur von MSCs und ARPE19-Zellen im Transwell-System. (B) Repräsentative Bilder von ARPE19-Zellen am Boden der Transwell-Platte nach indirekter Co-Kultur mit MSCs für 24 Stunden. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66917/66917fig06.jpg"> Abbildung 6: Quantifizierung der TNT-Bildung und des mitochondrialen Transfers. (A) TNT-Bildung, (B) mitochondrialer Transfer. Abkürzungen: M = MSCs = mesenchymale Stammzellen; A = ARPE19-Zellen; TNTs = tunnelnde Nanoröhren; M-A = TNT-Bildung zwischen MSCs und ARPE19-Zellen; M-M = TNT-Bildung zwischen MSCs; A-A = TNT-Bildung zwischen ARPE19-Zellen. n = 4, Mittelwert ± SD, Mann-Whitney U-Test, *p &lt; 0,05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917fig06large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Ergänzende Abbildung S1: Kartierung des Plasmids pCT-Mito-copGFP. Mito-GFP (CYTO102-PA-1) wurde gekauft. Der Mitochondria Cyto-Tracer, pCT-Mito-GFP (CMV), fusioniert über einen Cox8-Tag mit copGFP, was zur Markierung der Mitochondrien mit copGFP führt. Diese copGFP-Fusion wird durch den CMV-Promotor angetrieben und ermöglicht eine robuste Expression in Zelllinien wie HeLa, HEK293 und HT1080. Mito-RFP wurde von mito-GFP modifiziert, indem GFP durch RFP ersetzt wurde. Es trägt ein Puromycin-Resistenzgen. Die lentivirale Verpackung dieses Plasmids wird von spezialisierten Unternehmen durchgeführt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917_Supplementary%20figure.zip" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Video 1: TNT-vermittelter mitochondrialer Transport zwischen MSCs und ARPE19-Zellen. TNT wird durch die bidirektionale Bewegung von MSC- und ARPE19-Zellen erzeugt, was den Transfer von Mitochondrien von MSC-Zellen zu ARPE19-Zellen erleichtert. Abkürzungen: MSCs = mesenchymale Stammzellen; TNTs = tunnelnde Nanoröhren. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66917/66917_TNT_Video.zip" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um dieses Video herunterzuladen.</a>

Mitochondrialer Transfer durch Tunneln von Nanoröhren zwischen mesenchymalen Stammzellen und retinalem Pigmentepithel in vitro

Mitochondrial transfer is a normal physiological phenomenon that occurs widely among various types of cells. In the study to date, the most important ...

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Biologie

In diesem Video wird eine Methode demonstriert, die den Transfer von fluoreszenzmarkierten Mitochondrien in Glioblastom-Stammzellen (GSCs) durch Zentrifugation ermöglicht. Die erfolgreiche Aufnahme und funktionelle Integration der Donormitochondrien wird durch die Detektion der Fluoreszenz mittels konfokaler Mikroskopie bestätigt.

Zentrifugationsunterstützter mitochondrialer Transfer in Glioblastom-Stammzellen

Hier präsentieren wir ein von der Community akzeptiertes Protokoll im Multimedia-Format für die subretinale Injektion eines Bolus von RPE-Zellen in Ratten und Mäuse. Dieser Ansatz kann zur Bestimmung von Rettungspotenzialen, Sicherheitsprofilen und Überlebenskapazitäten von transplantierten RPE-Zellen nach Implantation in Tiermodellen der Netzhautdegeneration verwendet werden.

Darstellende Subretinale Injektionen in Nagetiere zu retinalen Pigmentepithelzellen in Suspension liefern

Hier wird ein Protokoll (MitoCeption) dargestellt Mitochondrien zu übertragen, isoliert aus humanen mesenchymalen Stammzellen (MSC), zu Glioblastom Stammzellen (GSC), mit dem Ziel, ihre biologischen Wirkungen auf Stoffwechsel und GSC Funktionen studieren. kann ein ähnliches Protokoll Mitochondrien zwischen anderen Zelltypen zu übertragen, angepasst werden.

MitoCeption: Übertragen von isolierten humanen MSC Mitochondrien an Glioblastom Stammzellen

Wir beschreiben eine Methode um eine netzhautgewebe bestehend aus retinalen Pigment epithelialen Zellen aus menschlichen pluripotenten Stammzellen gezüchtet auf menschliche amniotic Membranen und deren Vorbereitung für die Verpflanzung in Tiermodellen zu konstruieren.

Engineering-Transplantation geeignet retinalen Pigment Epithel Gewebe abgeleitet aus humanen embryonalen Stammzellen

Wir beschreiben ein detailliertes Protokoll für die Präparation von post-kryokonservierten hESC-abgeleiteten Photorezeptor-Vorläuferzellen und die subretinale Verabreichung dieser Zellen in rd10-Mäusen .

Subretinale Verabreichung von Photorezeptor-Vorläuferzellen aus humanen embryonalen Stammzellen in rd10-Mäusen

Hier wird ein standardisiertes Protokoll zur Visualisierung von Tunnel-Nanoröhren zwischen menschlichen epidermalen Keratinozyten und dermalen Fibroblasten unter Verwendung von Membran- und F-Actin-Markierung mit Z-Stack-Konfokalbildgebung gezeigt, mit optionaler α-Tubulin-Co-Coloring, die reproduzierbare Detektion und zytoskelettale Charakterisierung für Gewebetechnik-Anwendungen ermöglicht.

Standardisierte Methode zur Erkennung von Tunnel-Nanoröhren in menschlichen Hautzellen für Anwendungen in der Tissue Engineering

Ziel der Präsentation ist es, eine hohe Reproduzierbarkeit der Methode zur Matrix verbunden Stammzellen Implantate in Knorpeldefekte, die visualisiert werden MR-Bildgebung erzeugen kann demonstrieren. Stammzellen sind mit von der FDA zugelassene Ferumoxides mit Agarose, implantiert in Knorpeldefekte und abgebildet mit einem 7T MR-Scanner bezeichnet.

Die Implantation von Ferumoxides Labeled humanen mesenchymalen Stammzellen in Knorpeldefekte

Ein einfaches Verfahren ist für die Induktion von epithelialen mesenchymale Transition (EMT) in einer Vielzahl von Zelltypen beschrieben. Methoden zur Analyse von Zellen in EMT-Staaten durch Immunzytochemie sind enthalten.

Induktion und Analyse von epithelialen zu mesenchymalen Transition

Die microRNA (miRNA)-Profile der menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS-Zellen), retinale Pigmentepithel (RPE) aus menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS-Zellen) (iPS-RPE) und fetale RPE abgeleitet, wurden verglichen.

MicroRNA Expressionsprofile der Menschen iPS-Zellen, Retinapigmentepithel Abgeleitet aus iPS und Fetal Retinapigmentepithel

Retinalen Pigment Epithelzellen könnte als eine Zelle-Ersatz-Therapie für die fortgeschrittene Form der trockene altersbedingte Makuladegeneration dienen. Dieses Protokoll beschreibt die Erzeugung eines großen Augen Modells der geografischen Atrophie und die subretinale Transplantation von menschlichen embryonalen Stammzellen gewonnenen retinalen Pigment Epithelzellen auf dieses Modell der Krankheit.

Subretinale Transplantation von humanen embryonalen Stammzellen abgeleitet retinalen Pigment Epithelzellen zu einem großen Augen geographische Atrophie

Erfahren Sie, wie bidirektionaler mitochondrialer Transfer zwischen mesenchymalen Stammzellen und retinalem Pigmentepithel über Tunnel-Nanoröhren funktioniert. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Zellkommunikation und Rettungsmechanismen in vitro.

Mitochondrialer Transfer durch Tunneln von Nanoröhren zwischen mesenchymalen Stammzellen und retinalem Pigmentepithel in vitro

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