Name: Generierung und Charakterisierung von Organoiden der Gebärmutter von Ratten aus endometrialen epithelialen Stammzellen der Ratte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-02T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Erfahren Sie die Kultivierung von Ratten-Endometrium-Organoiden aus epithelialen Stammzellen für reproduktionsbiologische Forschung. Diese Methode ermöglicht effektive Untersuchungen zu weiblichen Fortpflanzungserkrankungen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Jabbour, H. N., Kelly, R. W., Fraser, H. M., Critchley, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocrine+regulation+of+menstruation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Rev%22%5BJournal%5D)">Endocrine regulation of menstruation.</a> Endocr Rev. 27 (1), 17-46 (2006).</li>
<li>Garcia-Alonso, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+temporal+and+spatial+dynamics+of+the+human+endometrium+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Mapping the temporal and spatial dynamics of the human endometrium in vivo and in vitro.</a> Nat Genet. 53 (12), 1698-1711 (2021).</li>
<li>Li, M., Izpisua Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+-+preclinical+models+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Organoids - preclinical models of human disease.</a> N Engl J Med. 380 (6), 569-579 (2019).</li>
<li>Mulaudzi, P. E., Abrahamse, H., Crous, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+on+three+dimensional+organoid+studies+for+stem+cell+therapy+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev+Rep%22%5BJournal%5D)">Insights on three dimensional organoid studies for stem cell therapy in regenerative medicine.</a> Stem Cell Rev Rep. 20 (2), 509-523 (2024).</li>
<li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+organoids+from+mouse+and+human+endometrium+showing+endometrial+epithelium+physiology+and+long-term+expandability%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Development of organoids from mouse and human endometrium showing endometrial epithelium physiology and long-term expandability.</a> Development. 144 (10), 1775-1786 (2017).</li>
<li>Turco, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term%2C+hormone-responsive+organoid+cultures+of+human+endometrium+in+a+chemically+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Long-term, hormone-responsive organoid cultures of human endometrium in a chemically defined medium.</a> Nat Cell Biol. 19 (5), 568-577 (2017).</li>
<li>Tempest, N., Maclean, A., Hapangama, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+stem+cell+markers%3A+current+concepts+and+unresolved+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Endometrial stem cell markers: current concepts and unresolved questions.</a> Int J Mol Sci. 19 (10), 3240(2018).</li>
<li>He, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+maintenance+of+human+endometrial+epithelial+stem+cells+and+their+therapeutic+effects+on+intrauterine+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biosci%22%5BJournal%5D)">Long-term maintenance of human endometrial epithelial stem cells and their therapeutic effects on intrauterine adhesion.</a> Cell Biosci. 12 (1), 175(2022).</li>
<li>Katsuda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+terminally+committed+hepatocytes+to+culturable+bipotent+progenitor+cells+with+regenerative+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Conversion of terminally committed hepatocytes to culturable bipotent progenitor cells with regenerative capacity.</a> Cell Stem Cell. 20 (1), 41-55 (2017).</li>
<li>Murphy, A. R., Campo, H., Kim, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+modelling+endometrial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Strategies for modelling endometrial diseases.</a> Nat Rev Endocrinol. 18 (12), 727-743 (2022).</li>
<li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+from+endometrial+disease+capture+clinical+heterogeneity+and+are+amenable+to+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids from endometrial disease capture clinical heterogeneity and are amenable to drug screening.</a> Nat Cell Biol. 21 (8), 1041-1051 (2019).</li>
<li>Esfandiari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometriosis+organoids%3A+prospects+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Endometriosis organoids: prospects and challenges.</a> Reprod Biomed Online. 45 (1), 5-9 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anti-CD15 (SSEA-1)</td><td>Abcam</td><td>ab135377</td><td>Kaninchen, 1:200 (IHC)</td></tr><tr><td>Anti-Östrogenrezeptor alpha</td><td>Abcam</td><td>ab32063</td><td>Kaninchen, 1:200 (IHC)</td></tr><tr><td>Anti-Pan Cytokeratin</td><td>Abcam</td><td>ab7753</td><td>Maus, 1:250 (IHC)</td></tr><tr><td>Anti-Progesteronrezeptor</td><td>Abcam</td><td>ab101688</td><td>Kaninchen, 1:200 (IHC)</td></tr><tr><td>Anti-Ki67</td><td>Abcam</td><td>ab279653</td><td>Maus, 1:250 (IHC)</td></tr><tr><td>A8301</td><td>TargetMol</td><td>909910-43-6</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Estradiol</td><td>Merck</td><td>E8875</td><td></td></tr><tr><td>Zellzähl-Kit-8</td><td>Beyotime</td><td>C0038</td><td></td></tr><tr><td>CD9</td><td>BioLegend</td><td>109819</td><td>1:20 (FC), Pacific Blue</td></tr><tr><td>CD24</td><td>BioLegend</td><td>101806</td><td>1:20 (FC), FITC</td></tr><tr><td>CD31</td><td>BioLegend</td><td>303120</td><td>1:20 (FC), APC</td></tr><tr><td>CD45</td><td>BioLegend</td><td>301703</td><td>1:20 (FC), PE</td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>TargetMol</td><td>CT99021</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex Organoid Harvesting Solution</td><td>R& D Systems</td><td>3700-100-01</td><td></td></tr><tr><td>Cy3 TSA Fluoreszenzsystem Kit</td><td>APExBIO</td><td>K1051</td><td></td></tr><tr><td>Cy5 TSA Fluoreszenz System Kit</td><td>APExBIO</td><td>K1052</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>D9542</td><td>1 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Invitrogen</td><td>11330032</td><td></td></tr><tr><td>EpCAM</td><td>BioLegend</td><td>369803</td><td>1:20 (FC), PerCP</td></tr><tr><td>Fluorescein TSA Fluoreszenz System Kit</td><td>APExBIO</td><td>K1050</td><td></td></tr><tr><td>Ziege Anti-Kaninchen IgG, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A-11008</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus IgG, Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen</td><td>A-21422</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Ziege Anti-Kaninchen IgG/HRP Antikörper</td><td>APExBIO</td><td>bs-0295G-HRP</td><td></td></tr><tr><td>Knockout Serumersatz</td><td>Invitrogen</td><td>10828028</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>PrimeScript RT Master Mix</td><td>Takara</td><td>RR063A</td><td></td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Merck</td><td>57-83-0</td><td></td></tr><tr><td>Sprague-Dawley Ratte</td><td>Shanghai JieSiJie Laboratory Animals Co., LTD, China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SSEA-1</td><td>BioLegend</td><td>323047</td><td>1:20 (FC), APC</td></tr><tr><td>TB Green Fast qPCR Mix</td><td>Takara</td><td>RR820A</td><td></td></tr><tr><td>TriZOL</td><td>Invitrogen</td><td>15596026CN</td><td>RNA-Extraktion</td></tr><tr><td>u-Slide 8-Well-Platten</td><td>Ibidi</td><td>80827</td><td></td></tr><tr><td>Y27632</td><td>TargetMol</td><td>146986-50-7</td><td></td></tr><tr><td>qPCR-Primer von Zielgenen&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gene</td><td>Company<</td><td>strong>Sequences</td><td></td></tr><tr><td>rat GAPDH F</td><td>Sangon Biotech</td><td>GACATGCCGCCTGGAGAAAC</td><td></td></tr><tr><td>Ratte GAPDH R</td><td>Sangon Biotech</td><td>AGCCCAGGATGCCCTTTAGT</td><td></td></tr><tr><td>Ratte Nanog F</td><td>Sangon Biotech</td><td>GACTAGCAACGGCCTGACTCA</td><td></td></tr><tr><td>Ratte Nanog R&nbsp;</td><td>Sangon Biotech</td><td>CTGCAATGGATGCTGGGATA</td><td></td></tr><tr><td>Ratte Sox2 F</td><td>Sangon Biotech</td><td>ATTACCCGCAGCAAAATGAC</td><td></td></tr><tr><td>Ratte Sox2</td><td>R Sangon Biotech</td><td>ATCGCCGGAGTCTAGTTCT</td><td></td></tr><tr><td>Ratte Okt4 F</td><td>Sangon Biotech</td><td>CCCAGCGCCGTGAAGTTGGA</td><td></td></tr><tr><td>Ratte Okt4 R</td><td>Sangon Biotech</td><td>ACCTTTCCAAAGAGAACGCCCA GG</td><td></td></tr></tbody></table>

generierung und charakterisierung von organoiden der gebärmutter von ratten aus endometrialen epithelialen stammzellen der ratte

Generation and Characterization of Rat Uterus Organoids from Rat Endometrial Epithelial Stem Cells

Die reESCs und Uterusorganoide der Ratte wurden von sechs weiblichen Sprague-Dawley-Ratten mit einem Gewicht zwischen 200 g und 250 g gemäß dem in Abbildung 1 dargestellten Protokoll ermittelt. Aufbauend auf dem Erfolg der Langzeitkultur von humanen endometrialen epithelialen Stammzellen bestand die REEM-Formulierung überwiegend aus Y27632, A8301 und CHIR99021. Um die reESCs in vitro zu stabilisieren, isolierten wir zunächst Endometriumzellen aus dem Endometrium der Ratte mit enzyma...

Generierung und Charakterisierung von Organoiden der Gebärmutter von Ratten aus endometrialen epithelialen Stammzellen der Ratte

Endometrial organoids offer valuable insights into the development and pathophysiology of endometrial diseases and serve as platforms for drug testing. ...

generation-characterization-rat-uterus-organoids-from-rat-endometrial

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Ein Protokoll zur Erzeugung menschlicher primärer Endometrium-Organoide, die aus epithelialer und stromaler Zellen bestehen und Eigenschaften des nativen Endometriumgewebes beibehalten, wird vorgestellt. Dieses Protokoll beschreibt Methoden von der Erfassung des Gebärmuttergewebes bis zur histologischen Verarbeitung von Endometriumorganoiden.

Generierung von mehrzelligen humanen primären Endometrium-Organoiden

Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Etablierung von Endometrium-Epithel-Organoiden der Maus für die Genexpression und histologische Analysen.

Etablierung von 3D-Endometrium-Organoiden aus der Gebärmutter der Maus

Hier stellen wir ein Protokoll vor, um Darmorganoide von Ratten zu generieren und sie in verschiedenen Downstream-Anwendungen zu verwenden. Ratten sind oft ein bevorzugtes präklinisches Modell, und das robuste intestinale Organoidsystem erfüllt den Bedarf an einem In-vitro-System zur Begleitung von In-vivo-Studien.

Generierung und Manipulation von Ratten-Darm-Organoiden

Generation of Human CD40-aktivierten B-Zellen

Explantate der zentralen Region von Ratten Objektiv Epithelien synchron zu unterscheiden, wenn in Gegenwart von FGF-2 kultiviert. Immunfluoreszenzmikroskopie solcher Kulturen stellt neue Informationen über Genexpression und Signaltransduktion mit der terminalen Differenzierung verbunden.

Vorbereitung und Kultur der Rat Linsenepithelzellen Explantate für ein Studium der terminalen Differenzierung

Rat MSCs wurden aus Oberschenkel-und Unterschenkelknochen isoliert und dann durch magnetische Zellsortierung angereichert. Sortiert Zellen wurden für die Expression der Oberflächenmarker durchflusszytometrisch bestätigt. Diese Zellen wurden auch bei klonaler Dichte kultiviert werden, um einzelne Kolonien bilden, und dann dieser Kolonien wurden durch Klonen Zylinder getrennt.

Isolierung und Anreicherung von Rat mesenchymalen Stammzellen (MSCs) und Separation von Single-Kolonie Derived MSCs

Eine schnelle und robuste Lösung zur Isolierung von lebensfähigen Erwachsenen epithelialen Stammzellen aus menschlicher Haut beschrieben wird. Das Verfahren nutzt enzymatische Verdauung der Haut Kollagen-Matrix, durch Zupfen der Haarfollikel und Isolierung von einzelnen Zellsuspensionen oder Gewebestücke für die Zellkultur gefolgt.

Isolierung und Kultivierung von Adult epithelialen Stammzellen aus menschlicher Haut

Erzeugung induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS) Linien produziert Linien unterschiedlicher Entwicklungspotenzial, auch wenn sie Standard-Tests für Pluripotenz passieren. Hier beschreiben wir ein Protokoll, um Mäuse vollständig aus iPS, die die iPSC Linien definiert als die über volle Pluripotenz abgeleitet...

Generation der Mäuse aus induzierten pluripotenten Stammzellen

Ein einfaches Verfahren ist für die Induktion von epithelialen mesenchymale Transition (EMT) in einer Vielzahl von Zelltypen beschrieben. Methoden zur Analyse von Zellen in EMT-Staaten durch Immunzytochemie sind enthalten.

Induktion und Analyse von epithelialen zu mesenchymalen Transition

Das kontinuierlich wachsende Maus Schneidezahn stellt ein Modell für die Untersuchung Erneuerung der Zahngewebe aus Zahn epithelialen Stammzellen (DESC). Ein robustes System für konsistent und zuverlässig diese Zellen von den Schneide erhalten und in vitro expandiert sie hier berichtet wird.

Isolation und Kultur der Dental epithelialen Stammzellen aus dem erwachsenen Maus Schneidezahn

Erfahren Sie die Kultivierung von Ratten-Endometrium-Organoiden aus epithelialen Stammzellen für reproduktionsbiologische Forschung. Diese Methode ermöglicht effektive Untersuchungen zu weiblichen Fortpflanzungserkrankungen.

Generierung und Charakterisierung von Organoiden der Gebärmutter von Ratten aus endometrialen epithelialen Stammzellen der Ratte (Video) | JoVE Journal

Generierung und Charakterisierung von Organoiden der Gebärmutter von Ratten aus endometrialen epithelialen Stammzellen der Ratte

Weitere Videos entdecken